专利名称：白血病诊疗的基因芯片的利记博彩app
技术领域：
本领域属于临床诊断领域，特别涉及基因诊断芯片的点阵排列。
背景技术：
基因芯片技术具体是指将许多特定的基因片段有规律地排列固定于支持物(如膜玻片)上，然后通过与待测的标记样品按碱基配对原理进行杂交，再通过检测系统对其进行扫描，并用相应软件对信号进行比较和检测，得到所需的大量信息，进行基因高通量、大规模、平行化、集约化的信息处理和功能研究。实际上这是一个具体而微的的印迹技术，其关键就在于精确而微小的点样固定和灵敏准确的扫描测定。基因芯片技术综合了分子生物学、半导体微电子、激光、化学染料、生物信息学等领域各项技术。基因芯片技术应用于血液病分型，具有快速、简便和高特异性等优点。DNA芯片能 成功地自动分析出AML和ALL两种急性白血病，为人类的肿瘤疾病分型及早期诊断奠定基础。分型技术的发展将会大大加强临床治疗癌症的特异性和有效性。解决临床上治疗中存在的一些问题，例如治疗的非特异性，治疗的副作用大等。急性白血病的临床症状复杂，临床诊断和临床治疗有相当的难度，分型面临两大难题亚型的发现和分类，即找出未知的亚型和将一些特殊的病例归入到已发现的类型中。基因芯片系统为DNA矩阵检测技术，在这个DNA矩阵上点有上千个与白血病有关的基因，将其应用于白血病的分型。采用来自病人的骨髓样本，抽提RNA并经过分离、纯化、标记，根据碱基配对的原则进行杂交反应，通过图象矩阵扫描检测基因表达图谱和AML及ALL的相关性，测定后得到大量相关检测数据，建立一个AML和ALL的数据库，通过对数据的分析来进行分型。根据基因芯片的分型结果，对不同分型的病人采用不同的治疗方法，对于提高治疗效果、节省医疗费用都具有极大的作用。
发明内容本实用新型的目的在于提供一种基因芯片，其可以用于白血病的早期检测和预后分析。为实现上述目的，本实用新型的技术方案为白血病诊疗的基因芯片，包括芯片载体和固定于芯片载体上的至少一个微阵列区，每个微阵列区由融合基因阵列区和表达基因阵列区组成。进一步，所述融合基因阵列区有不少于35个探针，分别为BCR/ABL探针、TEL/ABL探针、TEL/PDGFR 探针、E2A/PBX1 探针、TCF3-PBX1 探针、E2A/HLF 探针、ETV6-RUNX1 探针、TEL-AMLl 探针、SIL/TAL1 探针、AMLl-EAP 探针、CBF P-MYHll 探针、MLL-AFX 探针、MLL-AF6探针、MLL-ELL 探针、MLL-AFlp 探针、MLL-AF17 探针、MLL-AFlO 探针、MLL-MLL 探针、MLL-AF4探针、MLL-ENL 探针、MLL-AF9 探针、MLL-AFlq 探针、AML-ET0 探针、AMLI-MDSI 探针、TLS-ERG探针、PLZF/RARa 探针、PML/RARa 探针、NPM1/ALK 探针、NPM/RAR 探针、NPM/MLF1 探针、dup/MLL 探针、DEK/CAN 探针、SET/CAN 探针、NUP214-ABL1 探针、MYST3-CREBBP 探针中的任一种或多种。进一步，表达基因阵列区有不少于54个探针，分别为MDRl探针、MRPl探针、LRP探针、BCRP探针、GST- JI探针、NPMl探针、c-myb探针、HOXll探针、EVIl探针、FLT3探针、IKZFl 探针、IKAROS 探针、H0XA9 探针、H0XA10 探针、GATAl 探针、ATA2 探针、MYC 探针、NotchI探针、CEBPA探针、CD 19探针、CD79a探针、CD3探针、CD7探针、CD2探针、CD5探针、CD8探针、⑶Ia探针、⑶4探针、⑶20探针、⑶23探针、⑶64探针、⑶34探针、⑶13探针、⑶33探针、CD30探针、CD38探针、CD56探针、⑶117探针、CD41探针、CD61探针、CDla探针、CD96探针、GPA探针、T-I探针、T-II探针、T-III探针、T-IV探针、MPO探针、T a / 0探针、Ty/6探针、IgH探针、TCR S探针、TCR Y探针和IgG探针中的任一种或多种。进一步，所述微阵列区的探针之间的距离为2-4毫米。 进一步，每个融合基因阵列区的形状相同。进一步，每个表达基因阵列区的形状相同。进一步，所述融合基因阵列区含有35个探针，为7列5行排列，按由左到右由上至下的顺序依次排列有BCR/ABL探针、TEL/ABL探针、TEL/PDGFR探针、E2A/PBX1探针、TCF3-PBX1 探针、E2A/HLF 探针、ETV6-RUNX1 探针、TEL-AMLI 探针、SIL/TAL1 探针、AMLI-EAP探针、CBF P -MYHll 探针、MLL-AFX 探针、MLL-AF6 探针、MLL-ELL 探针、MLL-AFlp 探针、MLL-AF17 探针、MLL-AFlO 探针、MLL-MLL 探针、MLL-AF4 探针、MLL-ENL 探针、MLL-AF9 探针、MLL-AFIq 探针、AML-ETO 探针、AMLI-MDSI 探针、TLS-ERG 探针、PLZF/RAR a 探针、PML/RARa探针、NPM1/ALK 探针、NPM/RAR 探针、NPM/MLF1 探针、dup/MLL 探针、DEK/CAN 探针、SET/CAN探针、NUP214-ABL1 探针和 MYST3-CREBBP 探针。进一步，表达基因阵列区有54个探针，含有9列7行，按由左到右由上至下的顺序依次排列有MDR1探针、MRPl探针、LRP探针、BCRP探针、GST-探针、NPMl探针、c_myb探针、HOXl I探针、EVII探针、FLT3探针、IKZFl探针、IKAROS探针、H0XA9探针、H0XA10探针、GATAl探针、ATA2探针、MYC探针、Notch I探针、CEBPA探针、CD19探针、CD79a探针、CD3探针、CD7探针、CD2探针、CD5探针、CD8探针、CDla探针、CD4探针、CD20探针、CD23探针、⑶64探针、⑶34探针、⑶13探针、⑶33探针、⑶30探针、⑶38探针、⑶56探针、⑶117探针、⑶41探针、⑶61探针、⑶Ia探针、⑶96探针、GPA探针、T-I探针、T-II探针、T-III探针、T-IV探针、MPO探针、T a / 0探针、Ty/5探针、IgH探针、TCR 8探针、TCR y探针和IgG探针。本实用新型的有益效果在于本芯片不仅可以用于白血病常规的MICM分型，而且还具有提示治疗预后的潜在价值，即在初诊时就可获得对治疗预后情况的信息，用以指导临床危险度分型和合理的分层治疗。本芯片除了为疾病的分类提供了有力的工具，也可准确分析出白血病的最初状态、监控病人治疗后的结果、药物反应和存活率，使临床医生能更快、更早的预测病情发展，从而提高了病人的存活率。所以，采用基因芯片技术对白血病进行诊断和随访，可有效的进行病情预测，提供诊断信息，预测病情的发展阶段。
图I为白血病诊疗的基因芯片的不意图。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，进一步阐述发明。应当理解的是，这些实施例仅用于说明本发明而不限于本发明的范围。下述实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。白血病诊疗的基因芯片，如图I所示，包括芯片载体I和固定于芯片载体上的两个微阵列区，每个微阵列区由两个融合基因阵列区2和两 个表达基因阵列区3组成，其中每个融合基因阵列区2有三十五个探针，以图I为主视图，从左到右，从上到下依次排列有BCR/ABL、TEL/ABL、TEL/PDGFR、E2A/PBXI、TCF3-PBXI、E2A/HLF、ETV6-RUNXI、TEL-AMLUSIL/TALUAMLl-EAP、CBF^ -MYH11、MLL-AFX、MLL-AF6、MLL-ELL、MLL-AFIp、MLL-AF17、MLL-AF10、MLL-MLL、MLL-AF4、MLL-ENL, MLL-AF9、MLL-AFlq, AML-ETO, AMLI-MDSI、TLS-ERG, PLZF/RAR a、PML/RARa、NPMl/ALK、NPM/RAR、NPM/MLFl、dupMLL、DEK/CAN、SET/CAN、NUP214-ABLl和MYST3-CREBBP基因中的多种寡核苷酸片段作为探针；每个表达基因阵列区3有五十四个探针，以图I为主视图，从左到右，从上到下依次排列有]\ 1 1、]\ 1儿1^、80^、651'-31、册]\11、c-myb、HOXlUEVIUFLT3、IKZFl、IKAROS、H0XA9、H0XA10、GATAl、ATA2、MYC、Notchl、CEBPA,CD19、CD79a、CD3、CD7、CD2、CD5、CD8、CDla、CD4、CD20、CD23、CD64、CD34、CD13、CD33、CD30、CD38、CD56、CD117、CD41、CD61、CDla、CD96、GPA、T-I、T-II、T-III、T-IV、MP0、Ta / p ,Ty/8, IgH, TCR 6 ,TCR y和IgG的多种寡核苷酸片段作为探针。所述微阵列区的探针之间的距离为2毫米。且每个融合基因阵列区2的形状相同，每个表达基因阵列区3也的形状相同。所述融合基因阵列区3含有的三十五个探针，以7列5行的方式排列；表达基因阵列区3有五十四个探针，以9列7行的方式排列。本基因芯片的制备按照本领域的常规方式进行，详见李瑶出版的《基因芯片与功能基因组》。在Genebank里找到上述基因序列，利用软件进行探针设计，标记，合成，验证合格后，溶解，稀释，备用。杂交芯片用激光共聚焦芯片扫描仪系统(ScanArray⑩5000)进行扫描，首先在分辨率50 y m下进行初步扫描以得到一个快速显示的图像，然后对目标图像在分辨率为5 u m下进行精确扫描。激发光源为绿色HeNe或HeNe激光(分别用荧光素Cy3或cy5)，荧光素所发射的荧光由光电倍增管在570nm(Cy3)或670nm(Cy5)进行探测。对于灵敏度实验和样品的检测激光强度和光电倍增率均为100%。对于其他芯片杂交实验激光强度均为95 %，光电倍增率均为90 %。扫描获得的图像被储存为16位TIFF文件，然后用计算机软件ImaGene 3. 0版对每一个杂交点的光素密度(或强度)进行定量分析。一个用来定义阵列中每一个DNA斑点圆圈的方格叠加在图像上，用以确定每一个需要定量的荧光斑点。分析获得每一斑点的平均信号强度，数据文件输出到Excel软件进一步分析。局部背景信号被自动地从每一单独的斑点杂交信号中减去。每一个杂交信号的最后定量值中减去5个阴性对照的平均荧光强度值。用计算机软件SPSS进行统计分析。应用实例在检测所做11例样本中，共有8例ALL患者，3例AML患者(均为M3型)。11例患者芯片结果显示，均有不同程度MLL基因缺失，MLL基因的异常可能产生多种形式的融合基因，可能与多种白血病的发生具有密切联系，可将次指标作为儿童白血病检测的一个重要标志物；从治疗方案可见，有三例ALL患者对药物左旋门冬酰胺酶的耐药性远较其余患儿高，芯片结果比较发现，这三例患儿均有ABL、AF9和IKZF这三个基因不同程度的缺失。除AF9基因外，ABL和IKZF基因均与预后不良有关；一例ALL患者无明显耐药性，但其治疗期间病情反复，芯片结果发现，其具有FLT3基因的高表达。同时，患儿冉娇也具有这一基因的闻表达，但因其疗效较差，尚未表现出反复。本发明除了为疾病的分类提供了有力的工具，也可准确分析出白血病的最初状态、监控病人治疗后的结果、药物反应和存活率，使临床医生能更快、更早的预测病情发展，从而提高了病人的存活率。采用基因芯片技术对白血病进行诊断和随访，可有效的进行病情预测，提供诊断信息，预测病情的发展阶段。 最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
权利要求1.白血病早期检测及预后分析的基因芯片，包括芯片载体(I)和固定于芯片载体上的至少一个微阵列区，每个微阵列区由融合基因阵列区(2 )和表达基因阵列区(3 )组成。
2.根据权利要求I所述的白血病早期检测及预后分析的基因芯片，其特征在于所述微阵列区的探针之间的距离为2-4毫米。
3.根据权利要求2所述的白血病早期检测及预后分析的基因芯片，其特征在于每个融合基因阵列区(2)的形状相同。
4.根据权利要求2所述的白血病早期检测及预后分析的基因芯片，其特征在于每个表达基因阵列区(3)的形状相同。
专利摘要属于临床诊断领域，特别涉及白血病诊疗的基因芯片，包括芯片载体和固定于芯片载体上的至少一个微阵列区，每个微阵列区由包含融合基因阵列区和表达基因阵列区组成，其中融合基因阵列区有不少于35个探针，所述探针为白血病诊疗相关基因的寡聚核苷酸片段；本芯片不仅可以用于白血病常规的MICM分型，而且还具有提示治疗预后的潜在价值；除了为疾病的分类提供了有力的工具，也可准确分析出白血病的最初状态、监控病人治疗后的结果、药物反应和存活率，使临床医生能更快、更早的预测病情发展，从而提高了病人的存活率。
文档编号C40B40/06GK202558869SQ20122006125
公开日2012年11月28日 申请日期2012年2月23日 优先权日2012年2月23日
发明者邹琳, 谭俊杰, 张鹏辉 申请人:重庆医科大学附属儿童医院