专利名称：新的胰岛素类似物的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及新的胰岛素类似物。
背景技术：
胰岛素是在人中参与调节血液葡萄糖浓度的胰腺激素，并且具有蛋白和脂类代谢作用。在20年代(20’iest)初发现胰岛素。通过从牛或猪胰腺中提取、而后纯化，得到早期的商业胰岛素(猪和牛胰岛素)。 在80年代(80’ iest)，市场上开始销售人胰岛素。制备人胰岛素的一种方法是重组DNA技术。很快，进一步开发了重组DNA技术，制备了许多不同的胰岛素类似物，并且其中一些现在在市场上出售。在上世纪，市场上具有许多不同的胰岛素产品，还包括胰岛素锌混悬液， 胰岛素复合物，例如与硫酸鱼精蛋白的复合物，和胰岛素衍生物，例如酰化的胰岛素。世上几乎每个社会都受糖尿病的影响，糖尿病是当今人类面对的最紧迫的健康危机。目前，在世界范围内，两亿四千六百万以上的人们患有该疾病，人们预计这个数字在19 年之内会突破三亿八千万。胰岛素受体(IR)表达为两个异构型=IR-IR-A和IR-B，来源于胰岛素受体 mRNA(与顶基因的外显子11有关)的可变剪接。IR-A α -亚型缺少外显子11编码的C
端氨基酸序列。胰岛素受体的两个异构型的表达有区别。B-异构型主要(90%)在肝中表达，但它另外普遍地在大部分组织中与A-异构型一起表达( 50/50)。在正常个体以及糖尿病个体中，肝产生葡萄糖，以免血糖过低。然而，在II型糖尿病患者中，肝葡萄糖排出量的调节得到很差的控制，并且排出量增加，在过夜禁食之后，可能加倍。此外，皮下给予胰岛素可以比肝更早地将胰岛素递送至外周组织中，而在正常生理条件下，胰岛素直接从胰腺输送至肝中，这样就可以使肝中胰岛素浓度比外周组织例如脂肪和肌肉中的胰岛素浓度高(higher than)3-4倍。糖尿病患者将会受益于肝脏优先的胰岛素类似物的治疗，由此有效地减少肝葡萄糖排出量，同时在外周组织中具有很小的影响， 导致葡萄糖控制得到改善，降低低血糖的危险，体重增加较小，更好的脂质特性和心脏保护作用。开发胰岛素受体的B-异构型优先的胰岛素类似物是寻求的一种方法。然而，这种类似物目前还不是已知的。据报道，与B-异构型相比，人胰岛素对于胰岛素受体A-异构型具有稍微更高的亲合性，参阅EMBO Journal 9 (1990)，2409-13o还存在一种表达胰岛素受体异构型的时间维度。IR-A主要在胎儿形成期间表达， 而后，分化细胞上调它们的IR-B的表达。在一些肿瘤和癌细胞系中，包括乳房和结肠癌， IR-A上调，其中它介导IGF-II的一些增殖效果，IGF-II对IR-A的亲合性比对IR-B的亲合性高40-50倍。按照TO 90/01038, Hise25 人胰岛素；HisB25，AspB28，desB30 人胰岛素和 HisB25 人胰岛素B30酰胺具有高生物活性。按照EP 837,072 A2，HisB25, desB26, desB30人胰岛素在溶液中结合的能力降低。在这些出版物中，没有提及肝活性。按照WO 2008/034881，一些 A14E，B25H和B25H，B27T胰岛素类似物针对蛋白酶显示出抗性。在WO 00/69901中，描述了“与人胰岛素相比较、带有具有至少大约1-20个氨基酸取代的氨基酸序列的IA蛋白”，具体地说，在图5A中的6个氨基酸。按照WO 00 / 69901中的权利要求9，氨基酸N(Asn)是 B25位的可能取代之一，由于权利要求9只引用权利要求8，B25N取代只是在包含至少5个取代的IA蛋白中顺便提及。在US 5，446，020中，描述了在氨基残基A12、A14、A15和A19处得到修饰的胰岛素类似物。WO 90/12814公开了肝特异性胰岛素类似物，其在A13、A14、A15、A19和B16位被取代。本发明的目的
本发明的目的是克服或改善现有技术的至少一个缺点，或提供有用的替代品。本发明的一个方面涉及提供胰岛素类似物，其对胰岛素受体的B-异构型的亲合性比对A-异构型的亲合性更高。本发明的另一个方面涉及提供能够改善葡萄糖控制的胰岛素类似物。本发明的另一个方面涉及提供能够降低低血糖危险的胰岛素类似物。本发明的另一个方面涉及提供能够使体重不增加或体重增加很少的胰岛素类似物。本发明的另一个方面涉及提供改善的脂质特性。本发明的另一个方面涉及提供心脏保护作用。本发明的另一个方面涉及提供胰岛素类似物，同与人胰岛素有关的癌危险相比较，该胰岛素类似物能够降低癌的危险。本发明的另一个方面涉及提供肝脏优先的胰岛素类似物。定义
本文使用的术语“胰岛素类似物”是指人胰岛素，其中一个或多个氨基酸残基已被其它氨基酸残基取代，和/或，其中一个或多个氨基酸残基已缺失，和/或，其中已加入一个或多个氨基酸残基。本文的术语例如Al、A2和A3等等分别表明胰岛素A链中的在位置1、2和3等等中的氨基酸残基(从N端计算)。同样，术语例如B1、B2和B3等等分别表明胰岛素B链中的在位置1、2和3等等中的氨基酸残基(从N端计算)。使用一个字母编码氨基酸残基，术语例如A21A、A21G和A21Q表示在A21位的氨基酸残基分别是A、G和Q。使用三个字母氨基酸残基编码，相应的表达分别是A21Ala、A21Gly和A21Gln。本文中，术语A(O)和B(O)分别表示相对于N-端Al和Bl的氨基酸残基位置。术语A(-l)和B(-l)分别表示相对于N-端A(O)和B(O)的第一个氨基酸残基的位置。由此， A (-2)和B (-2)分别表示相对于N-端A (-1)和B(-l)的氨基酸残基位置，A (-3)和B (-3) 分别表示相对于N-端A(-2)和B(-2)的氨基酸残基位置，如此等等。本文中，术语氨基酸残基是形式上从其中羧基上除去羟基的氨基酸，和/或，形式上从其中氨基上除去氢原子的氨基酸。本发明概述
简要地说，本发明涉及胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是His (H)或Asn (N)，条件是，如果B25氨基酸残基是His，则B27氨基酸残基是Asp (D)或Glu (E)，并且A14氨基酸残基不是Glu (E)。
本发明的说明书
通过对由BMPhe、B25Phe和B26Tyr以及边缘B23Gly和B27Thr残基组成的芳烃三重态进行分析，发现了全部新类型的受体异构型选择性类似物。与人胰岛素相比，在对于胰岛素受体的A或B异构型的相对结合亲合性方面具有2-4倍差别的一些类似物使得可以确定 B25位作为受体异构型选择性的关键决定因素。用任何Asn取代B25Phe产生对于B异构型具有2倍更高的相对结合亲合性(与受体的A异构型相比)的类似物，而当在此位置引入 Tyr残基时，观察到相反的结果。对于包含B25N突变的类似物，B27位的酸性氨基酸残基使对于受体B异构型的选择性额外增加2倍。另外，尽管相应单一突变的类似物在相对异构型结合亲合性方面没有显示出差别，但还发现B25H与B27D或B27E的组合可以产生B异构型选择性的类似物。该结果说明，在胰岛素分子中，B25位的单独一个突变或与B27位突变的组合可以赋予胰岛素受体异构型选择性。胰岛素类似物的制备
多肽(例如胰岛素)的制备方法在本领域为大家所熟知。本发明的胰岛素类似物可以例如通过传统的肽合成方法来制备，例如，使用t-Boc或Fmoc化学过程的固相肽合成方法或其它沿用己久的技术，参见，例如Greene and ffuts,"Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons，1999。本发明的胰岛素类似物还可以利用下列方法制备 在合适的营养培养基中，在能够表达该胰岛素类似物的条件下，将含有编码该类似物的DNA 顺序并且能够表达该胰岛素类似物的宿主细胞进行培养。由此，简要地说，按照类似于已知胰岛素类似物的制备方法，制备本发明的胰岛素类似物。适应症 糖尿病
术语“糖尿病”或“糖尿症”包括I型糖尿病、II型糖尿病、妊娠期糖尿病(在怀孕期间)及导致高血糖症的其它状态。该术语用于哺乳动物的代谢病，尤其是人，在这种病中， 胰腺产生数量不足的胰岛素，或身体的细胞不能对胰岛素恰当地响应，由此妨碍细胞吸收葡萄糖。结果，葡萄糖在血液中积聚。I型糖尿病，还称为胰岛素依赖性糖尿症(IDDM)和幼稚-发病型糖尿病，是由B细胞破坏所引起的，通常导致绝对的胰岛素缺乏。II型糖尿病，亦称非胰岛素-依赖性糖尿症(NIDDM)和成年-发病型糖尿病，与主要的胰岛素抗性有关，并由此是相对的胰岛素缺乏，和/或由于胰岛素抗性导致的主要是胰岛素分泌不足。其它适应症
在一个实施方案中，本发明的胰岛素类似物用于制备药物，该药物用于治疗或预防高血糖症，II型糖尿病，葡糖耐受性削弱，I型糖尿病，肥胖症，高血压症，综合症X，血脂异常， 认知病症，动脉粥样硬化，心肌梗塞，中风，冠心病及其它心血管病症，炎症性的肠综合症， 消化不良和胃溃疡。在另一个实施方案中，本发明的胰岛素类似物在II型糖尿病中用作延迟或预防疾病发展的药物。在另一个实施方案中，本发明的胰岛素类似物用作药物，该药物用于降低食物摄入，降低β -细胞程序死亡，增加β -细胞功能和β -细胞质量，和/或用于恢复对β -细胞的葡萄糖敏感性。在本发明的一个实施方案中，本发明的胰岛素类似物用作药物，该药物用于治疗或预防高血糖症，II型糖尿病，葡糖耐受性削弱，I型糖尿病，肥胖症，高血压症，综合症X， 血脂异常，认知病症，动脉粥样硬化，心肌梗塞，冠心病及其它心血管病症，中风，炎症性的肠综合症，消化不良和胃溃疡，或在II型糖尿病中用于延迟或预防疾病发展，或用于降低食物摄入，降低β-细胞程序死亡，增加β-细胞功能和β-细胞质量，和/或用于恢复对 β-细胞的葡萄糖敏感性。在本发明的进一步实施方案中，提供了治疗或预防下列疾病的方法高血糖症，II 型糖尿病，葡糖耐受性削弱，I型糖尿病，肥胖症，高血压症，综合症X，血脂异常，认知病症， 动脉粥样硬化，心肌梗塞，冠心病及其它心血管病症，中风，炎症性的肠综合症，消化不良和胃溃疡，或在II型糖尿病中用于延迟或预防疾病发展，或用于降低食物摄入，降低β -细胞程序死亡，增加β -细胞功能和β -细胞质量，和/或用于恢复对β -细胞的葡萄糖敏感性， 该方法包括给予需要这种治疗的患者对这种治疗有效量的本发明胰岛素类似物。糖尿病组合化合物
用本发明胰岛素类似物的治疗还可以与第二种或更多种药理学活性物质组合，例如， 选自抗糖尿病药剂、抗肥胖药剂、食欲调节剂、抗高血压药剂、用于治疗和/或预防由糖尿病产生或与其有关的并发症的药剂和用于治疗和/或预防由肥胖症产生或与其有关的并发症和病症的药剂。这些药理学活性物质的实例是GLP-I和GLP-I衍生物和类似物，GLP-2和GLP-2衍生物和类似物，Exendin-4和Exendin_4衍生物和类似物，糊精和糊精衍生物和类似物，磺酰基脲，双缩胍，氯茴苯酸类，葡糖苷酶抑制剂，胰高血糖素拮抗剂，DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制剂，参与刺激糖原异生和/或糖原分解的肝脏酶的抑制剂，葡萄糖吸收调节剂，改变脂类代谢的化合物作为HMG CoA抑制剂(他汀类)，例如抗高血脂药，降低食物摄入的化合物，R)(R激动剂和作用于细胞的ATP-依赖性钾通道的药剂；考来烯胺，考来替泊，氯贝特，吉非贝齐(gemfibrozil)，洛伐他汀，普伐他汀， 西伐他汀，普罗布考，右旋甲状腺素，neteglinide,瑞格列奈；β -阻断剂，例如阿普洛尔， 阿替洛尔，噻吗心安，吲哚洛尔，普奈洛尔和美托洛尔，ACE(血管紧张肽转化酶)抑制剂， 例如贝那普利，卡托普利，依那普利，福辛普利，赖诺普利，alatriopril,喹那普利和雷米普利，钙通道阻断剂，例如硝苯地平，非洛地平，尼卡地平，伊拉地平，尼莫地平，地尔硫 $和维拉帕米，和α -阻断剂，例如多沙唑嗪，呱胺甲尿啶，哌唑嗪和特拉唑嗪；CART (可卡因安非他明调节的转录产物)激动剂，ΝΡΥ(神经肽Y)拮抗剂，MC4(黑皮质素4)激动剂， 食欲素拮抗剂，TNF(肿瘤坏死因子)激动剂，CRF(促皮质素释放因子)激动剂，CRF BP (促皮质素释放因子结合蛋白)拮抗剂，优洛可定激动剂，β 3激动剂，MSH(促黑素细胞激素) 激动剂，MCH(黑素细胞-浓缩激素)拮抗剂，CCK(缩胆囊肽)激动剂，血清素再吸收抑制剂，血清素和去甲肾上腺素再吸收抑制剂，混合的血清素和去甲肾上腺素化合物，5ΗΤ (血清素)激动剂，韩蛙皮素激动剂，甘丙肽拮抗剂，生长激素，生长激素释放化合物，TRH (促甲状腺激素释放因子)激动剂，UCP2或3(未耦合蛋白2或幻调节剂，瘦素激动剂，DA激动剂 (溴隐亭，doprexin)，脂肪酶/淀粉酶抑制剂，RXR(类视黄醇X受体)调节剂，TR β激动剂；组胺Η3拮抗剂，胃泌素和胃泌素类似物和衍生物。应该理解，本发明胰岛素类似物与一或多种上述化合物和任选一或多种其它药理学活性物质的任何合适组合物都被认为包含在本发明范围之内。本发明化合物的使用
给药途径可以是将本发明胰岛素类似物有效输送至身体中所需要的或合适位置的任何途径，例如胃肠外，例如皮下、肌肉内或静脉内。或者，本发明的胰岛素类似物可以口服、 肺部或经鼻给予。对于胃肠外给药，用与已知胰岛素的制剂类似的方式配制本发明的化合物。此外， 对于胃肠外给药，利用与已知胰岛素的给药方式类似的方式来给予本发明的化合物，医生熟悉这种方式。肠胃外给药可以借助于注射器来进行，任选笔式注射器。或者，肠胃外给药可以借助于输液泵进行。含有本发明化合物的注射组合物可以使用制药工业的传统方法制备，该方法包括将组分溶解和混合(视情况而定)，得到目标最终产物。由此，按照一个方法，将本发明的化合物溶于适量的水中，水的体积稍微少于所制备的组合物的最终体积。根据需要，加入等渗试剂、防腐剂和缓冲剂，如果需要的话，使用酸(例如盐酸)或碱(例如氢氧化钠水溶液) (按照需要)调节溶液的PH值。最后，用水调节溶液的体积，得到组份的目标浓度。更确切地说，本发明的胰岛素制剂，例如，其溶液或悬浮液，可以如下制备在稍微酸性的条件下，将本发明的化合物溶解在水介质中，例如，浓度在大约240至大约1200 nmole/ml的范围。用例如氯化钠或甘油使水介质变成等渗介质。此外，水介质可以含有锌离子(每个胰岛素活性单位最多大约的Si++浓度)、缓冲剂(例如乙酸盐和柠檬酸盐) 和防腐剂(例如间甲酚或苯酚)。朝着中性的方向调节溶液的PH值，不用太接近本发明化合物的等电点，以免沉淀。最终胰岛素制剂的PH值取决于所使用的本发明化合物、锌离子浓度和本发明化合物的浓度。利用例如无菌过滤，使胰岛素制剂无菌。类似于已知胰岛素制剂的使用方法，使用本发明的胰岛素制剂。本发明化合物的给予数量、给予本发明化合物的频率的确定和所给予的本发明化合物的选择(任选与另一种抗糖尿病化合物一起)，应该咨询熟悉糖尿病治疗的医师来决定。由此，本发明还涉及治疗糖尿病的方法，该方法包括给予需要这种治疗的患者有效量(affective amount)的本发明的化合物。本发明的优选特征
为了总结和补充上面的陈述，本发明的特征如下
1.胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是His (H)或Asn (N)，条件是，如果B25氨基酸残基是His、B27氨基酸残基是Asp (D)或Glu (E)，则A14氨基酸残基不是Glu (E)，进一步的条件是，所述胰岛素类似物在多于4个位置上与人胰岛素没有不同。2.胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是His (H)或Asn (N)，条件是，如果B25氨基酸残基是His，则B27氨基酸残基是Asp (D)或Glu (E)，并且A14氨基酸残基不是Glu (E)。3.按照前款的胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是His(H)，B27氨基酸残基是 Asp (D)或Glu (E)，并且A14氨基酸残基不是Glu (E)。4.按照两个前述条款的胰岛素类似物，其中至多5个氨基酸残基与存在于人胰岛素相同位置上的氨基酸残基不同。
5.按照条款1的胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是Asn (N)。6.按照前款的胰岛素类似物，其中至多5个氨基酸残基与存在于人胰岛素相同位置上的氨基酸残基不同。7.按照前述条款的任一项的胰岛素类似物，其中所述类似物不同于A14Q，A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；和A14D, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素。8.按照前述条款的任一项的胰岛素类似物，其中所述类似物不同于B25N，B27E, desB30 人胰岛素；A8H, B25N, B27E, desB30 人胰岛素；B25H, B27E, desB30 人胰岛素； ΒΙΕ, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, ΒΙΕ, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；B25N, B27D, desB30 人胰岛素；A8H, B25N, B27D, desB30 人胰岛素；B25H, B27D, desB309 人胰岛素；和 A8H, B25H, B27D, desB30 人胰岛素。9.按照前述条款的任一项的胰岛素类似物，其中所述类似物不同于B25N，desB30 人胰岛素和A21G，B25N, desB30人胰岛素。10.按照前述条款的任一项的胰岛素类似物，其中所述类似物不同于A14Q， A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；B25N, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, B25N, B27E, desB30 人胰岛素；B25H, B27E, desB30 人胰岛素；ΒΙΕ, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, ΒΙΕ, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；B25N, B27D, desB30 人胰岛素；A8H, B25N, B27D, desB30 人胰岛素；B25H, B27D, desB309 人胰岛素；A8H, B25H, B27D, desB30 人胰岛素；B25N, desB30 人胰岛素和 A21G, B25N, desB30-人胰岛素。11.按照条款1或3的胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是Asn(N)，B27氨基酸残基不同于Lys (K)和Cys (C)。12.按照前述条款的任一项的胰岛素类似物，其中A8氨基酸残基是His (H)。13.按照前述条款的任一项的胰岛素类似物，其中A14氨基酸残基是Tyr(Y)
14.按照前述合适条款的任一项的胰岛素类似物，其中B27基酸残基是E(Glu)或 D(Asp)。15.按照前述合适条款的任一项的胰岛素类似物，其在B30位置没有氨基酸残基 (即是desB30人胰岛素类似物)。16.按照前述合适条款的任一项的胰岛素类似物，其在B^和B30位置没有氨基酸残基(即是desB29, desB30人胰岛素类似物)。17.按照前述合适条款的任一项的胰岛素类似物，其在B28、B29和B30位置没有氨基酸残基(即是desB^，desB29, desB30人胰岛素类似物)。18按照前述合适条款的任一项的胰岛素类似物，其在B27、B^、B^和B30位置没有氨基酸残基(即是desB27，desB28, desB29, desB30人胰岛素类似物)。19.按照前述合适条款的任一项的胰岛素类似物，其中B链的沈、27或28位的氨基酸是Asp或Glu。20.按照前述条款的任一项合适扩展的胰岛素类似物，其选自以下构成的组 [A8H, B25N, B27D]人胰岛素；[A8H，B25N, B27E]人胰岛素；[A8H，B25N]人胰岛素； [A8H, B25H, B27D]人胰岛素；[A8H，B25H, B27E]人胰岛素；[B25H，B27D]人胰岛素； [B25H, B27E]人胰岛素；[B25H]人胰岛素；[B25N，B27D]人胰岛素；[B25N，B27E]人胰岛素；[B25N]人胰岛素；[A8H, B25N, B27D, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27E, desB30] 人胰岛素；[A8H, B25N, desB30]人胰岛素；[A8H, B25H, B27D, desB30]人胰岛素；[A8H, B25H, B27E, desB30]人胰岛素；[B25H, B27D, desB30]人胰岛素；[B25H, B27E, desB30] 人胰岛素；[B25H, desB30]人胰岛素；[B25N, B27D, desB30]人胰岛素；[B25N, B27E, desB30]人胰岛素；和[B25N，desB30]人胰岛素。21.按照前款的胰岛素类似物，其是[A8H，B25N, B27D, desB30]人胰岛素； [A8H, B25N, B27E, desB30]人胰岛素；[A8H, B25H, B27D, desB30]人胰岛素；[A8H, B25H, B27E, desB30]人胰岛素；[B25H, B27D, desB30]人胰岛素；[B25H, B27E, desB30] 人胰岛素；[B25N, B27D, desB30]人胰岛素；[B25N, B27E, desB30]人胰岛素；和[B25N, desB30]人胰岛素。22.按照前述条款的任一项的合适扩展胰岛素类似物，其是[A8H，B25H]人胰岛素或[A8H，B25H, desB30]人胰岛素。23.按照前述条款的任一项合适扩展的胰岛素类似物，其选自[A8H，B25N, B27A, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27R, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27N, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27D, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27Q, desB30] 人胰岛素；[A8H, B25N, B27E, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27G, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27H, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27I, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27L, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27M, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27F, ClesB3O]人胰岛素；[ASH, B25N, B27P, desB30]人胰岛素；[ASH, B25N, B27S, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27W, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27Y, desB30] 人胰岛素和[A8H, B25N, B27V, desB30]人胰岛素。24.按照前述条款的任一项合适扩展的胰岛素类似物，其不是任何下列化合物 [A8H, B25N, B27D, desB30]人胰岛素和[A8H, B25N, B27E, desB30]人胰岛素。25.按照前述条款的任一项的胰岛素类似物，其中至多5个氨基酸残基与存在于人胰岛素相同位置上的氨基酸残基不同。26.按照前款的胰岛素类似物，其中至多4个氨基酸残基与存在于人胰岛素相同位置上的氨基酸残基不同。27.按照前款的胰岛素类似物，其中至多3个氨基酸残基与存在于人胰岛素相同位置上的氨基酸残基不同。28.按照前款的胰岛素类似物，其中至多2个氨基酸残基与存在于人胰岛素相同位置上的氨基酸残基不同。29.按照前款的胰岛素类似物，其中至多1个氨基酸残基与存在于人胰岛素相同位置上的氨基酸残基不同。30.胰岛素类似物，其对胰岛素受体的IR-B异构型的亲合性至少是对胰岛素受体的IR-A异构型的亲合性的1. 5倍。31.按照前款的胰岛素类似物，其对胰岛素受体的IR-B异构型的亲合性至少是对胰岛素受体的IR-A异构型的亲合性的2倍。32.按照前款的胰岛素类似物，其对胰岛素受体的IR-B异构型的亲合性至少是对胰岛素受体的IR-A异构型的亲合性的2. 5倍。
33.按照前款的胰岛素类似物，其对胰岛素受体的IR-B异构型的亲合性至少是对胰岛素受体的IR-A异构型的亲合性的3倍。34.按照前款的胰岛素类似物，其对胰岛素受体的IR-B异构型的亲合性至少是对胰岛素受体的IR-A异构型的亲合性的3. 5倍。35.按照前款的胰岛素类似物，其对胰岛素受体的IR-B异构型的亲合性至少是对胰岛素受体的IR-A异构型的亲合性的4倍。36.评价胰岛素类似物是否是异构型选择性的胰岛素类似物的方法，其特征在于相对于人胰岛素的IR-B亲合性，测定该胰岛素类似物的顶-B亲合性，并且相对于人胰岛素的IR-A亲合性，测定该胰岛素类似物的顶-A亲合性，并计算这两个相对亲合性之间的比例。37.评价胰岛素类似物是否是肝脏选择性的胰岛素类似物的方法，其特征在于 相对于人胰岛素的IR-B亲合性，测定该胰岛素类似物的IR-B亲合性，并且相对于人胰岛素的IR-A亲合性，测定该胰岛素类似物的IR-A亲合性，计算两个相对亲合性之间的比例。38.按照前述产品条款的任一项的化合物，其是在上述说明书例如在具体实施例中具体提到的任一项化合物，尤其是在上面实施例1-4的任一项中具体提到的任一项化合物。39.按照前述产品条款的任一项的化合物，其是B25N，desB30人胰岛素和B25H， B27E, deB30人胰岛素。40.按照前述产品条款的任一项的化合物用作药物或用于药物中。41.按照前述产品条款的任一项的化合物用于治疗糖尿病，或按照前述产品条款的任一项的化合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗糖尿病。42.按照前述产品条款的任一项(最后一个除外)的化合物用于制备药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗糖尿病。43.治疗糖尿病的方法，该方法包括给予需要其的患者治疗有效量的按照前述产品条款的任一项的化合物。44.治疗糖尿病和同时使形成癌的危险比与人胰岛素有关的形成癌的危险降低的方法，该方法包括给予需要其的患者治疗有效量的按照前述条款的任一项的胰岛素类似物。45.按照前款的方法，其中胰岛素类似物不同于上面条款10中提到的任何胰岛素类似物。46.在本说明书中提到的任何新的特征或特征的组合。常规注释
一项或多项本文所描述实施方案和/或条款的组合，任选还与一个或多个下面的权利要求组合，产生进一步的实施方案，并且本发明涉及所述实施方案和权利要求的所有可能的组合。将本文中引用的所有参考文献(包括出版物，专利申请和专利)以其整体引入本文作为参考，其程度如同每个参考文献是单独和具体注明地引入作为参考那样，并且本文以其整体列出(法律所允许的最大程度)。只为方便起见，本文使用所有标题和副标题，并且不应该将其理解为以任何方式对本发明进行限制。本文提供的任何和所有实施例或示范性术语(例如，“例如”)仅仅是为了更好地说明本发明，不造成对本发明范围的限制，除非另外要求。在说明书中没有文辞应该被视为指示任何非权利要求的要素为实践本发明所必需的。本文引用和引入的专利文件仅仅为方便起见，并不反映这种专利文件的有效性、 专利性和/或可实施性的任何观点。本文提到参考文献并不承认它们构成现有技术。本文中，单词“由...组成”广泛地是指“包括”、“包含”或“涵盖” (EPO guidelines C, 111,4. 13)。本发明包括本文所附加权利要求中所列举主题的所有变体和等效内容，其是为适用的法律所允许的。以说明方式提供下列实施例，不作为限制使用。实施例1人胰岛素
实施例2人胰岛素
h-FVNQH LCGSH LVEA L YLVCGERGFN YEPK^H
使用的所有化学制品和试剂具有可获得的最高纯度。固定的无色杆菌 (Achromobachter lyticus)蛋白酶得自于 Novo Nordisk A/S。
胰岛素类似物的纯化和消化可以如下进行
利用阳离子交换，将得自于酵母上清液的胰岛素前体进行纯化并浓缩(Kjeldsen等人，(1998)，Prot. Expr. Pur. 14，309-316)。通过用赖氨酸特异性固定的无色杆菌 {Achromobachter lyticus)蛋白酶(以后称为ALP)进行消化，使单链胰岛素前体成长为两个链的胰岛素 Kristensen 等人，(1997)，J. Biol. Chem. 20, 12978-12983) 将得自于阳离子交换层析步骤的洗脱物(含有胰岛素前体)用水稀释至15-20%的乙醇浓度。加入谷氨酸钠，达到15 mM,并用NaOH将pH值调节至9. 7。以1 100的比例(体积体积)加入固定的ALP G克/升)，并在室温下、在温和搅拌下进行消化过夜。利用分析LC (在Waters Acquity Ultra-Performance液相色谱系统上，使用C18柱)分析该消化反应，用基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱(Bruker Daltonics Autoflex II T0F/T0F)确定分子量。用0.2Mm过滤器过滤除去固定的无色杆菌(A. lyticus)蛋白酶。用反相HPLC (Waters600系统)(在C18柱上，使用乙腈梯度)纯化两个链的胰岛素分子。通过冷冻干燥回收所需要的 A8H，B25N, B27E, desB30 人胰岛素(5. 11 g)。利用分析 LC(在 Waters Acquity Ultra-Performance液相色谱系统上，使用C18柱)测定纯度，用基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱确定分子量。
实施例3人胰岛素
权利要求
1.胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是His(H)或Asn (N)，条件是，如果B25氨基酸残基是His,则B27氨基酸残基是Asp (D)或Glu (E)，并且A14氨基酸残基不同于Glu (E)。
2.按照前述权利要求的胰岛素类似物，其中所述类似物不同于A14Q，A22K,B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14Q, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14P, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B27E, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, B29R, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16E, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；A14D, A22K, B16H, B25H, B26G, B27E, B28G, desB30 人胰岛素；B25N, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, B25N, B27E, desB30 人胰岛素；B25H, B27E, desB30 人胰岛素；ΒΙΕ, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, ΒΙΕ, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；A8H, B25H, B27E, desB30 人胰岛素；B25N, B27D, desB30 人胰岛素；A8H, B25N, B27D, desB30 人胰岛素；B25H, B27D, desB309 人胰岛素；A8H, B25H, B27D, desB30 人胰岛素；B25N, desB30人胰岛素和A21G, B25N, desB30-人胰岛素。
3.按照权利要求1或2的胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是His(H)，B27氨基酸残基是Asp (D)或Glu (E)，并且A14氨基酸残基不同于Glu (E)。
4.按照权利要求1或2的胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是Asn(N)。
5.按照前述合适权利要求的任一项的胰岛素类似物，其在B^和B30位置没有氨基酸残基(即是desB29, desB30人胰岛素类似物)。
6.按照前述合适权利要求的任一项的胰岛素类似物，其在B^、B^和B30位置没有氨基酸残基(即是desB28, desB29, desB30人胰岛素类似物)。
7.按照前述合适权利要求的任一项的胰岛素类似物，其在B27、B^、B^和B30位置没有氨基酸残基(即是desB27，desB28, desB29, desB30人胰岛素类似物)。
8.按照前述合适权利要求的任一项的胰岛素类似物，其在B27、B^、B^和B30位置没有氨基酸残基(即是desB27，desB28, desB29, desB30人胰岛素类似物)，优选，按照前述合适权利要求的任一项的胰岛素类似物，其中在B链的沈、27或观位是Asp或Glu。
9.按照前述权利要求的任一项合适扩展的胰岛素类似物，其选自[A8H，B25N,B27D] 人胰岛素；[A8H，B25N, B27E]人胰岛素；[A8H，B25N]人胰岛素；[A8H，B25H, B27D]人胰岛素；[A8H, B25H, B27E]人胰岛素；[B25H, B27D]人胰岛素；[B25H, B27E]人胰岛素； [B25H]人胰岛素；[B25N，B27D]人胰岛素；[B25N，B27E]人胰岛素；[B25N]人胰岛素； [A8H, B25N, B27D, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27E, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, desB30]人胰岛素；[A8H, B25H, B27D, desB30]人胰岛素；[A8H, B25H, B27E, desB30]人胰岛素；[B25H, B27D, desB30]人胰岛素；[B25H, B27E, desB30]人胰岛素； [B25H, desB30]人胰岛素；[B25N, B27D, desB30]人胰岛素；[B25N, B27E, desB30]人胰岛素；和[B25N，desB30]人胰岛素。
10.按照前述权利要求的任一项合适扩展的胰岛素类似物，最后一个权利要求除外，该类似物是[A8H，B25H]人胰岛素或[A8H，B25H, desB30]人胰岛素。
11.按照前述权利要求的任一项合适扩展的胰岛素类似物，其选自[A8H，B25N,B27A, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27R, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27N, desB30] 人胰岛素；[A8H, B25N, B27D, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27Q, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27E, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27G, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27H, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27I, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27L, ClesB3O]人胰岛素；[ASH, B25N, B27M, desB30]人胰岛素；[ASH, B25N, B27F, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27P, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27S, desB30] 人胰岛素；[A8H, B25N, B27W, desB30]人胰岛素；[A8H, B25N, B27Y, desB30]人胰岛素和[A8H, B25N, B27V, desB30]人胰岛素。
12.治疗糖尿病的方法，该方法包括给予需要其的患者治疗有效量的按照前述产品权利要求的任一项的化合物。
13.治疗糖尿病和同时使形成癌的危险比与人胰岛素有关的形成癌的危险降低的方法，该方法包括给予需要其的患者治疗有效量的按照前述产品权利要求的任一项的胰岛素类似物。
14.按照前述方法权利要求的任一项的方法，其中按照前述产品权利要求的化合物不同于在权利要求2中提到的化合物。
15.本文中描述的任何新的特征或特征的组合。
全文摘要
胰岛素类似物，其中B25氨基酸残基是His或Asn，条件是，如果B25氨基酸残基是His，则B27氨基酸残基是Asp或Glu，并且A14氨基酸残基不同于Glu，其具有肝脏优先的作用。
文档编号C07K14/62GK102245633SQ200980149419
公开日2011年11月16日 申请日期2009年12月3日 优先权日2008年12月9日
发明者E. 施蒂德森 C., B. 克尔德森 T., 格伦多夫 T. 申请人:诺沃—诺迪斯克有限公司