口服疫苗及其接种方法

专利名称：：口服疫苗及其接种方法
技术领域：
：本发明涉及用于制备油包水和水包油包水多重乳状液组合物和方法。更具体地说，本发明涉及制备可用于许多不同用途的稳定的油包水多重乳状液组合物和方法，所述用途包括但并不局限于辅助剂;疫苗，包括口服的和母体的(perental)免疫;口服的、局部的和非肠道的药物输送;以及化妆品。一种乳状液是至少由两种不溶混的液体组成的一种非均匀体系，一种液体以液滴的形式分散在另一种液体中。这种体系具有最小的稳定性1。乳状液的稳定性问题传统上一直是着眼于加入添加剂如添加乳化剂和细分的固体。乳状液由连续相和非连续相组成。非连续相广义地被称为分散相或内相，分散出现于其中的相被称为连续相或外相。乳状液的标准的组分是一种油相和一种水相。当水是连续相时，乳状液被称为水包油(O/W)，当油是连续相时，乳状液被称为油包水(W/O)。最近水包油包水(W/O/W)的多相乳状液已经变得重要。水包油乳状液是最常用的乳状液。然而油包水和多重乳状液对于许多应用场合是所希望的，如果不稳定的问题可以被克服的话，它们就会被更广泛地使用。《乳状液技术大全》上说“多重(或双重)乳状液被用作储存体系，并可以被认为是W/O型的一种变化。它们在药物输送中的潜在优点，可能被剂量形式和最佳配方与可接受的稳定性带来的问题的日益复杂性抵销”2。W/O是油包水的缩写。“尽管很早就说可以使用它们，但多重乳状液体系还没有被广泛地利用……如果需要高产率的多重微滴和良好的稳定性，用植物油制备多重乳状液是特别困难的。乳状液一般是由三个组分组成的。油相，水相，和一种乳化剂。每种组分和它们的制备和结合方法关系到乳状液的类型和稳定性。为了明确表示决定所制备的乳状液的类型的规律，已经进行了许多尝试3。一般来说，表面活性剂在其中最易溶的液体(油或水)，在最终的乳状液中是连续相。然而，表面活性剂、油和其它物料的性质之间的相互关系，和乳化作用是非常经验性的。即，这个规律适用于有限范围的物料，而且常常有例外4。混合组分的方式对于确定乳状液的性质是重要的。一般有三种乳化的方法1)机械的，2)相转化，和3)自然乳化5。利用剪切力将乳状液组分破碎成小颗粒的机械乳化是最常用的。相转化指的是用与相反类型水包油最稳定的组分制备一种油包水类型的乳状液的方法。然后乳状液自然地改变类型。制备这些乳状液的关键，取决于物料、盐的浓度、温度和其它因素。自然乳化指的是乳状液在最小的搅动下形成的情况6。这意味着热力学稳定性的程度是非常希望的，但几乎不能实现。表面活性剂是在同一分子里含有亲水部分和疏水部分。它们优选定位在油和水之间的界里，并在此降低了表面自由能。然而，在表面活性剂的领域里，化学结构和功能有很大的差异。人们努力研究亲水一亲脂平衡原理，以便为制备各种类型乳状液和为其它各种业务预测表面活性剂的功能。亲水-亲脂平衡是亲水和疏水成分的相对强度的半经验的测量7。它关系到与将两亲的分子定位在油水界面处相联系的自由能。各种应用所需的亲水-亲脂平衡值表示在下表中表Ⅰ亲水-亲脂平衡值范围和应用8在文献中这些值广泛指导为具体目的选择乳化剂。它们是为使用非离子乳化剂而设计的。虽然已经研究了用于阴离子或阳离子乳化剂的相似体系，但它们比用于非离子乳化剂的那些较少使用。用于许多非离子表面活性剂的亲水-亲脂平衡值已经公开9。另外，戴维思(Davies)设计了一种用于表面活性剂计算亲水-亲脂平衡值的方法，所述计算直接由利用经验导出值的公式进行10。这样，一组数被指定给乳化剂中的各种组分基，并且由下述关系计算亲水-亲脂平衡值(HLB)11HLB＝7+Σ(亲水基数)-Σ(亲脂基数)已经证明，HLB值对于选择乳化剂是有价值的指导，因为超出所述特定范围的乳化剂几乎是无效的。然而，一个恰当的HLB值并不能保证表明HLB以外的因素的性能也是重要的，而且必须考虑。应当注意到，对于表面活性剂的HLB小于3的没有列出应用。这样的试剂已经被用于将浴油(bathoil)分散到水的表面上，如疫苗辅助剂和用于一些其它场合。然而，它们几乎不被用作乳化剂。如上所述，大多数油包水乳状液使用HLB为3至6范围内的表面活性剂12。细分离的固体也可以用作乳化剂。文献已经记载油包水乳状液中的目标是产生具有稳定性且无电荷的界面膜13。常常可以通过增加乳化剂的浓度来增加乳状液的稳定性，但是对于生物学的应用这增加了毒性问题，而且对于其它的应用也可能是不太适宜的。当HLB和其它性质适度不同的表面活性剂混合到一起时，常常会提高乳状液的稳定性。然而，如果所述差别太大，所述结合几乎不起作用。人们一直企图通过将它们的HLB值平均来预测表面活性剂的混合作用，但公知的实际情况是，混合所产生的结果远远不同于组分平均的结果14。混合的表面活性剂可以在稳定乳状液方面产生协同效应。这被认为是与在油-水界面形成与液晶相似的结构配合体有关。已经将磷脂与Span80混合，以稳定植物油包水的乳状液15。最后，聚氧乙烯链长的不均匀性常常影响状液的稳定性，特别是在表面活性剂极易可溶的情况下。具有增加的链长度的不均匀性的制剂趋于产生具有较大稳定性的乳状液。正如在前面的讨论中可以看出的，根据化合物的物理性质很难预测化合物的任何结合的乳化性质。各种油与它们可以被其乳化的难易程度和所产生的乳状液的稳定性是明显不同的。一般来说，矿物油比植物油更易乳化16。对于制备特定类型的乳状液，每种油具有一种所需的HLB值。这就是如表Ⅰ所示的制备每种类型乳状液的HLB值范围的原因。为了制备最佳的乳状液，油相的极性越大，表面活性剂的极性也必须越大。油包水乳状液遵守与水包油乳状液相似的规律，但是HLB值较低。许多常用制备油包水和水包油乳状液所需的HLB值已经公开17。为制备油包水乳状液已经设计了一些方法。这些方法的大多数都包括在一个产生搅动或一种强剪切力的机器中将组分混合。所一直推荐的是在将这些相结合以前，将油溶性物料放于油相中和将水溶性物料放于水相中18。然而，这样制备的乳状液并不令人满意。这种情况的一个例外是通过将一种水溶性表面活性剂放入油相中就可以制备非常好的水包油乳状液19。对于油包水乳状液的这种相反类型还没有推荐。将疏水的表面活性剂放入乳状液的水相中，一般导致恶劣的乳化，通过相转化可以从油包水乳状液制备好的水包油乳液。通过改变温度，许多表面活性剂改变了它们的性质，并促进了从一种类型的乳状液向另一种的转换20。这种现象可以用于在某些条件下制备乳状液。用于油包水乳状液的稳定剂现有技术的油包水乳状液很难稳定。这严重损害了它们的在本来会很希望用的许多场合的应用。已经通过增加一个或多个相或界面的粘度来企望稳定。这可以通过加在大部分相或在界面处其它结构中形成胶体的聚合物稳定剂来实现。这些聚合物包括蛋白质、淀粉、树脂、纤维素、聚乙烯醇、聚丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮21。这些物料通过共价键或通过静电和疏水部分相互作用结合到界面上。它们形成一种“界面配合物”，该配合物定义为两个或多个表面活性分子在界面处以一种不存在于任何一个大部分相中的关系相连系。位于乳状液中的水包油界面处的某些配合物可以有效地稳定乳状液。一些低分子量的物料已经作为稳定剂相似地被使用。这些包括可以与某些非离子乳化剂形成配合物的胆固醇22。另外，二价阳离子的脂肪酸盐如硬脂酸铝在稳定油包水乳状液中是非常有效的。带有一份阳离子的相同脂肪酸的盐如硬脂酸钠是无效的。现有技术中油包水乳状液的问题有碍于增加油包水乳状液的用途的主要问题是制备、高粘度和差的稳定性方面的困难。植物油如花生油和豆油，或动物油如角鲨烯或角鲨烷，对于许多应用来说优于矿物油。然而，它们较难乳化，并会制成较不稳定的乳状液。植物油的油包水乳状液需要相对高浓度的一种疏水乳化剂如Span80和一种稳定剂。铝或镁的硬脂酸盐已经成功地被用作稳定剂。然而，它们增加了乳状液的复杂性和毒性。另一个问题是非离子表面活性剂的溶解度，以及它们制备稳定的乳状液的能力随温度而改变。在温度可能从低于凝固点到高于120°F变化，贮存乳状液时，会出现问题。为解决这些问题已经进行了许多尝试，包括乳状液的一些组分的聚合产生了增加的稳定性。人们已将聚合物加到水或油相中，然后进行化学聚合或通过辐射。使用X射线可将一些表面活性在油水界面处聚合。对于需要疏水表面活性剂的油包水乳状液这样做是无效的，因为这些表面活性剂趋于被X射线降解23。最后，为熔化或溶解乳状液的某些组分，需要加热到使蛋白质变性的温度24。这妨碍了将这样的乳状液用于需要天然的、未损坏的蛋白质的许多生物活性物。最后可能需要非常高浓度的乳化剂。在一个例子中，乳状液的油相高达82%，是由表面活性剂PluronicL121(poloxamer401)构成25。在同一专利中的其它例子中的其它例子需要加热至高温，以用嵌段共聚物表面活性剂制备油包水乳状液。所需要的是一种制备油包水乳状液的改进的方法，该方法不需要高温、有机溶剂、X射线或化学反应产生交联而形成所希望的乳状液。该法应当通过自然乳化最适宜地制备油包水乳状液。另外，该乳状液必须提高了稳定性。它们在高的温度范围内应当是稳定的。优选地，所述乳状液对于用于生物学应用应当具有较低毒性。为此，它们应当含有较少的组分，而且所存在的这些组分应当是低毒性的。稳定剂应当减少。油包水乳状液中的水的浓度应增至一较高值，优选超过80%。大部分油包水乳状液使用少于约50%的水。最后，油包水乳状液应当提供一种好的原料以便制备水包油包水的多重乳状液。多重乳状液水包油包水多重乳状液包括三个不同的相26。最内部的相是水相。它在油相中形成囊状物，该油相又被包封在第二水相内。在水包油包水乳状液中，每一个分散的油滴形成一种带有单个或多个或含水的小室的有小泡状物的结构，它们是通过一层油相组分与含水的悬浮液分开。这样的乳状液具有油包水乳状液的大部分优点，而且具有低得多的粘度。它们还与脂质体有许多相似之处，但具有大的含水室，而且可以不用无机溶剂制备。多重乳状液可以被认为是一种在油包水和水包油乳状液之间的一种相对不稳定性的中间相。分开所述的两个水相的油层可能变得非常薄，这与油相组分的量无关。这些乳状液的稳定性按现象学可被理解为大约是由油层的稳定性决定的27。稳定的油层或膜是与增加稳定性相联的。多重乳状液可以用于许多技术中，特别是用于药品和分离科学中。它们在潜在有生物药品应用中作为一种水相在另一种液滴内的分散的结果是独一无二的。这些包括作为疫苗辅助剂、药物输送体系、药物超剂量处理中的吸着剂贮存器和用作酶的固定。它们还可以被用于烃的分离和从废水中除去有害物料。按照本发明的多重乳状液可以被配制成化妆品和日常用品如蜡状抛光剂。它们已经被用于为贮存注射剂固定胰岛素和食品中。与多重乳状液相联系的主要问题是它们的不稳定性，在许多它们表示明显企望的应用场合，所述不稳定性严重地限制了它们的使用28。多重乳状液的制备多重乳状液已经通过在不同情况下具有优点的几种技术来制备。然而，它们中没有一个是最适宜的。一种方法包括制备油包水乳状液，然后通过增加水相的量直至超过油相的乳化能力而转变成多重乳状液。一种可供选择的方案是，将温度改变通过转换点，某些乳状液将会从油包水变为水包油，产生一过渡的多重乳状液相。具有两个不同的水相的多重乳状液必须用两个步骤来制备。这首先通过用任何标准技术来制备一种油包水乳状液来实现。然后将该油包水乳状液在一般含有表面活性剂的第二水相中再乳化。对于第二个步骤，非离子乳化剂通常优于离子乳化剂。在第一个步骤中，Span80一直是一种用于油包乳状液的成功的乳化剂。“然而，在液体石蜡中取大量的Span80是为开发的多重状液型分散体的必需的条件之一”29。Span80少于20%产生水包油乳状液(见表Ⅱ)。对于石蜡油最适宜的是近似30%。对于动物油或植物油的乳化，甚至需要更大量的Span80，约50%。油包水乳化剂总是加到乳状液的油相中。在外层水相中的亲水乳化剂的浓度也是关键的，因为该浓度必须大大小于油相中疏水的乳化剂的浓度。例如，为制备稳定的乳状液水相中的Tween80的浓度不能超过1%，而油相中的Span80必须超过30%30。表Ⅱ在油相中的Span80对于由机械搅动制备的水包液体石蜡包水乳状液的形成的影响;在所有例子中，水相中的SDS浓度固定在0.15M。多重乳状液指数是W/O/W的形成的计量31。在现有技术中，为了提高多重乳状液的稳定性已经使用了多种稳定剂和控制。浓度为8%的大豆卵磷脂允许Span80的量降至20%，同时保持乳状液的稳定性。象油包水乳状液，油相的体积分数并不是关键的。这被认为是由于乳状液组分是易动的，而且稳定性取决于当脂膜变薄时保持其完整性32。象油包水乳状液，植物油和动物油用于制造多重乳状液比矿物油更困难。例如，用橄榄油制备一种多相乳状液需要60%的Span8033。如果加入17%的大豆卵磷脂，该值减至43%。另外，可以用与表面活性剂用于W/O乳状液相同的方式，使用成对的表面活性剂来稳定多重乳状液。现有技术多重乳状液中的嵌段共聚物表面活性剂用作为疏水乳化剂的共聚物PluronicL101(poloxamer331)与作为亲水乳化剂的PluronicP123(poloxamer403)结合来制备水包油包水多重乳状液34，35。在矿物油中的5%的PluronicL101与含有2%牛血清白蛋白的盐水一起被乳化。一段时间后，牛血清白蛋白与PluronicL101在油水界面处形成一种配合体。该配合体被认为对于保持乳状液的油包水组成的稳定性是重要的。如果在该界面的配合体有时间形成以前制备多重乳状液，所得到的水包油包水乳状液是稳定性较小的。然后该乳状液在含有0.4%PluronicP123的盐水中再乳化。在该研究中，评价几种共聚物表面活性剂。发现PluronicL101和P123是最有效的。没有评价带有大于4000的疏水物的共聚物。物理稳定剂由于多重乳状液固有的不稳定性，人们已经尝试了几种通过制造物理稳定性而提高稳定性的方法36，37。一种方法是利用在内部水相中的亲水聚合物与表面活性剂的相互作用。上述的BSA-L101相互作用就是一个例子。其它例子使用具有高分子量的聚丙烯酸或聚电解质，分子量近似为3百万。另外，在界面处的表面活性剂已经由X射线或具有化学活性剂单体的聚合物交联38。这种情况已经发生在内部水相中、在油水界面处、在油相中、以及在外部水相中的聚合物料上。已经将油滴用凝胶体和其它材料封装以提供物理屏障。在某些条件下，虽然这些方法的每一种在一定程度提高了稳定性，但是这种乳状液一直是难得稳定、无毒和有促进广泛使用的功能。多重水包油包水乳状液的问题如上所述，水包油包水乳状液的重要问题是稳定性。多重乳状液的固有的不稳定性已经妨碍了大多数商业上使用。然而，已经有了一个些企图改进稳定性的报导。用于提高多重乳状液的稳定性的方法一直是相当经验性的，因为每种处理都趋于对于所评价的具体乳状高度专一的39。然而，某些原理可以被公式化。最重要的问题似乎是由在外层中的水乳化剂引起的不稳定性，所述外层逐渐溶解油层中的疏水乳化剂，并毁坏内部的乳状液40。带有初始的界面膜的用于第二乳化步骤中使用自由表面活性剂的几乎不可避免的相互作用表明，在多重乳状液中使用自由表面活性剂稳定剂的固有的不实用性。优选的是一种不允许稳定化组分扩散的更持久的界面膜。多重乳状液的评价根据油滴内部的水微滴的大小和数目，将多重乳状液分为A、B和C型。A型是在油滴内有单个水微滴，B型有少量的水微滴，和C型有较多的水微滴41。按照这种分类，如Freund′s完全的辅助剂制备的乳状液或本发明的多重乳状液甚至比C型乳状液细得多。已经报导，在某些条件下，多重乳状液可以比初始的油包水乳状液更稳定。在一个例子中，用一油酸甘油酯乳化的豆油在80℃下是稳定的42。据报导，用Freund′s辅助剂制备的多重乳状液能在4℃贮存比其前体的油包水乳状液更稳定。限制多重乳状液的使用的压倒一切的问题是稳定性。大多数报导关于稳定性的文章表明，甚至对于更稳定的制备也是处于不可接受的水平。对于生物产品，相对于装在冷藏室或冷冻室中的药物来说，乳状液应具有其货架寿命。另外，用于提高稳定性的许多组分也会增加毒性。多重乳状液通常使用高浓度的疏水表面活性剂和稳定剂，它们具有固有的毒性。另外，在内部水相中的小于50%的低浓度的水，使得用于输送内部水相的油的量增加。这之所以重要，是因为内部水相对于大多数活性成分来说是所选场所。最后，极其希望的是使用植物油如花生油或动物油(角鲨烯或角鲨烷)代替不可代谢的矿物油。然而，使用植物油的多重乳状液一直比使用矿物油的更难制备和保持稳定。本发明包括油包水和水包油包水多重乳状液和制备方法，本发明克服了先前的乳状液的许多局限，而且本发明的乳状液是可用于多种用途包括，但不局限于疫苗辅助剂，口服的，局部的和非肠道的药物输送，药物，化妆品，食品和各种日用和工业用途的优越的制剂。本发明是一种稳定的油包水乳状液，该乳状液包括在一连续油相内的分散的水相，该水相有一有效量的第一种表面活性剂;亲水-亲脂平衡值近似小于2，和连续的油相有一第二种表面活性剂。本发明还包括一种稳定的水包油包水多重乳状液，该乳状液包括一在一油相内的分散的内部水相，所述油相在一连续的外部水相中，内部水相有亲水-亲脂平衡值近似小于2的有效量的第一种表面活性剂，和有一第二种表面活性剂的油相。最适宜地，表面活性剂可以加到连续的外部水相中。加到内部水相中优选的化合物是一种有下述通式的有效量的表面活性共聚物其中a是一个整数，使得由(C3H6O)表示的疏水部分具有平均分子量近似3000至15000，优选范围在3000和9000之间，而且最优选的在近似5000至6000之间，b是一个整数，使得由(C2H4O)表示的亲水部分构成化合物重量的约2%至19%。共聚物Pluronic180.5是优选的表面活性剂。Pluronic180.5的分子式如下其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似为5200，而亲水部分(C2H4O)的重量百分比为近似在5%。另一种优选的表面活性剂是PluronicL141，其分子式如下其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似为4600，而亲水部分(C2H4O)的重量百分比近似为10%。乳状液典型地是通过将内部水相、油和外部水相混合来制备。如果嵌段共聚物表面活性剂被包含在内部水相中，在乳化前，它应通过冷冻和允许通过温热析出来溶解。用任何方便的方法制备油包水(W/O)乳状液。然后将其在外部的水相中再乳化以制备一种多重(W/O/W)乳状液。W/O乳状液可以通过将一样品放入水中来测试。W/O/W乳状液通过几种方法来评价。最简单的是显微镜法。因此，本发明的一个目的是提供用于制备油包水和水包油包水乳状液的组合物和方法，所述乳状液是稳定的，并且可用于广泛的应用领域。本发明的另一个目的是提供制备优良的疫苗辅助剂的组合物和方法。本发明的另一个目的是提供用于制备可以被用作非肠胃的，局部的，粘膜的或口服的药物输送赋形剂的乳状液的组合物和方法。本发明的另一个目的是提供可以用于制备在配制化妆品制剂中有用的乳状液的组合物和方法。本发明的另一个目的是提供可以用于制备在制备食品中有用的乳状液的组合物和方法。本发明的另一个目的是提供可以用于制备在分离科学中有用的乳状液的组合物和方法。本发明的这些和其它目的、特征和优点在重看下面所公开的实施例的详细说明和附带的权利要求后会显得更清楚。图1是表示各种poloxamer化合物之间的关系的方块(grid)图。图2表示口服了在水包油包水乳状液中的TNP-HEA免疫剂后在肠液中分泌的IgA的滴定度。图3表示在口服水包油包水乳状液中的TNP-HEA免疫剂后IgG和IgA的血清滴定度。本发明的新颖的乳状液包括将一种亲水-亲脂平衡值近似小于2的不可溶的表面活性剂放入内部水相中。这与现有技术教导的疏水乳化剂应放入油相中相矛盾。以最终分散的形式放入水相中的非常疏水的乳化剂提供了优越的乳状液稳定性，这可能是由于在油/水界面形成了一种稳定的界面屏障的缘故。加入到内部水相中的优选的化合物是具有下列通式的有效量的表面活性共聚物其中a是一个整数，使得由(C3H6O)代表的疏水部分具有近似3000至15，000的平均分子量，优选5000和10，000，以及b是一个整数，使得由(C2H4O)表示的亲水部分构成化合物重量的约2%至19%。通过PluronicL180.5的凝胶渗透分离制备共聚物L310。计算L310的式如下其中疏水部分(C3H5O)的平均分子量为近似10，000，而亲水部分(C2H4O)的重量百分比为近似为4%。共聚物PluronicL180.5是优选的表面活性剂。PluronicL180.5的分子式如下其中疏水部分(C3H5O)的平均分子量近似为5200，以及亲水部分(C2H4O)的重量百分比为近似5%。另一种优选的表面活性剂是PluronicL141，它具有下述分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量为近似4600，而亲水部分(C2H4O)的重量百分比为近似10%。Pluronic或poloxamer共聚物嵌段是在碱性催化剂的存在下，在升高的温度和压力下，通过环氧乙烷和环氧丙烷缩合生成的。在单体单元的数目上有一些统计上的变化，所述单体单元结合形成每个共聚物的聚合物链。给出的平均分子量是每种制剂中共聚物分子的平均重量的近似值。应当理解，环氧丙烷和环氧乙烷的嵌段不必是纯的。只要总的物理化学性质基本上不改变，可以掺入少量的其它物料。制备这些产品的更详细的讨论可在U.S.2，674，619中找到，该专利在此结合参考。poloxamer化合物的命名法是基于一种poloxamer方块(图1)。这种poloxamer方块是命名和各种聚合物节的组成之间的关系。所给出的疏水(聚氧丙烯)平均分子量是其范围的近似中点。方块上的poloxamer数的前两位数乘以100，就是所述疏水部分的近似平均分子量。后面的数字乘以10就是表面活性剂的亲水部分(聚氧乙烯)含量的近似重量百分比44。例如，poloxamer407，示于方块(图1)的右上四分之一中，导自一种具有平均分子量为4000的疏水部分和占共聚物总平均分子量70%的亲水部分。另一个例子是poloxamer760.5，它具有一个平均分子量为7600道尔顿的疏水部分和具有一个占共聚物总的平均分子量5%的亲水部分。本发明的乳状液具有高度的稳定性，而且可以被制备成在内部水相中有高达近似90%至95%水。所述乳状液随着油滴的部分凝聚结成乳化的奶油状物而不破坏内部的油包水乳状液。亲水的乳化剂使疏水的乳化剂加溶，在很大程度上消除了。多重乳状液的共同问题是在外部水相中的亲水的表面活性剂将疏水的表面活性剂吸出油相并在外部水相中使之加溶，这损害了油相的乳化能力。通过将一种疏水的表面活性剂放入内部水相中，使它与外部水相保持分开。油相的乳化能力并没有被接触外部水相表面活性剂损害。即使本发明的乳状液的油相微滴可能结合和熔合，内部和外部水相有很少或没有混合。其结果是，仅通过摇动该制剂，所述多层乳状液可以被重新形成。油包水乳状液可以自然地形成带有高达90%的水。通过适当的搅动，新的乳状液在完全毁坏后可以重新形成。这与大多数普通的具有大比例水的油包水乳状液不同，它不能在毁坏后再形成，除非将所述组分分开并且重新开始所有步骤。本发明的乳状液除了矿物油外，还可以容易地用各种植物或动物油特别是花生油和角鲨烯制备，而且是稳定的。它们可以被制成在内部水相中有10%至95%的水，然而，对于大多数目的，最适宜的水浓度在60%和80%(体积/体积)之间。内部水相很有特点地具有非常细小的微滴尺寸。该制剂与现有技术的制剂相比可在大得多的程度下稳定地冷冻、冷藏，在室温和升高温度下也是稳定的。它们具有异常低的毒性。本发明的乳状液可以用各种不同类型的油，油相中的疏水表面活性剂，和外部水相中的亲水表面活性剂形成。本发明可以使用的油包括但并不局限于，动物油，如角鲨烯或角鲨烷，植物油，例如花生油，矿物油，例如drakeol，和合成油如十四酸异丙酯。这些油以及表面活性剂的结合对于本领域中的技术人员来说是公知的。乳状液还可利用其它稳定剂如硅石，硬脂酸铝，牛血清白蛋白，其它蛋白质，以及其它本领域的技术人员知道的聚合剂和稳定剂。重要的是避免使用去乳化剂。本发明的多重乳状液的一般制备包括，首先用亲水-亲脂平衡值近似小于2的表面活性剂的混合或均化，将形成乳状液的内部水相的物料。其它物料可以被混合或溶于内部水相中。例如，如果该乳状液要被用作辅助剂，可以将抗原放入水相中。优选的表面活性剂是这里讨论的嵌段共聚物，但要理解，可以使用其它表面活性剂，只要这些其它表面活性剂亲水-亲脂平衡值小于2。然后将混合物与一种油一起均化形成油包水混合物。可以通过迅速将流体在两个注射器间转移来进行均化。还可以在一小型掺合机中通过声波处理或通过本领域中普通技术人员公知的许多方法中的任何一种方法来进行均化。为制备水包油包水多重乳状液，将油包水乳状液用一第二种水相均化。本发明的一种应用是制备有效的抗感染疫苗，该疫苗可以用于任何种类的动物。油包水乳状液如Freund的完全辅助剂和辅助剂65已知是在产生抗许多种抗原的强的免疫感应中非常有效。辅助剂65是一种花生油包水的乳状液，它使用二缩甘露醇-油酸酯作为乳化剂和硬脂酸铝作为稳定剂。辅助剂65已经在许多动物和人体的研究中被评价45，46。按照本发明制备的乳状液是优良的，因为它们具有较低的毒性，可以使用低剂量的油和表面活性剂，并且产生等效的或较高的免疫感应。对制备单一剂量的抗破伤风和B型肝炎的疫苗，它们是特别有效的。复合剂量的疫苗向单一剂量的疫苗的转化是世界卫生组织的重点目标。所述配方还用作疫苗辅助剂，用于各种其它情况包括疟疾、爱滋病(AIDS)、流行性感冒和双球菌肺炎。作为疫苗，所述配方具有允许降低抗原剂量的优点，抗原以更有效的方式使用。相对于矿物油乳状液来说，它们较少发生对抗原的变性。这样制备较高比例的有效抗体，抵抗正在感染的生物体的天然定子。按本发明制备的乳状液除了利用嵌段共聚物的乳化性质外，还利用了它们的辅助效果。(见U.S.App.NO.07/544，831，该专利在此作为参考)。当与抗原一起使用时，所述乳状液鼓励对在寄生抗原上的较大数目的抗原目标或抗原决定基的抗体的制备。这些乳状液是相对无毒的，因为油、表面活性剂和稳定物料减少了剂量。它们可以与脂多糖、胞壁酰基二肽衍生物或其它免疫调节剂混合，以调节适应不同地区生活的动、植物或抗体和细胞免疫之间的平衡。这样，疫苗可以被调节以产生特殊类型的免疫响应，该响应对于抵抗特殊的疾病是特别有效的。由于免疫调节剂被含于乳状液的内部相中，它们可以使用较低的剂量而具有较小的体系毒性。当按本发明制备的乳状液用作辅助剂时，它们可以通过任何方便途径静脉、肌肉或皮下注射，口服或通过粘膜或鼻的途径施用。该乳状液在冷冻室中是无限期稳定的，这对于必须被冷藏的明矾辅助疫苗是一个主要优点。在世界的许多地方需要冷藏，“经受寒冷”，是使用疫苗的主要障碍。按照本发明的油包水或多重乳状液，可以被用作口服的、局部的或粘膜的使用的药物输送载体。它们具有含有容易变性的物料，如盐水或其它在经过胃和上部胃肠道的转移期间不变性的流体中的蛋白质的不寻常的性质。所述物料未受损伤地并具有高效能地输送到下部胃肠道里。寻找保护物料在经过上部胃肠道期间不被消化的方法长期以来一直是药物输送研究的容易被忘记的目标。按照本发明的多重乳状液可以被用于非肠道注射，以产生药物的持久释放或把药物作为目标输送至身体的具体部位，特别是具有高浓度的巨噬细胞的部位。由于多重乳状液有许多脂质体的性质，它们可以被用作于任何使用或考虑用脂质体的场合。它们具有有大的水相内部室的附加优点，并且可以不用有机溶剂制备47。这样的乳状液可以用于药物的口服咽下以促进持久释放和/或保护药物在胃中不会由于酸和分解蛋白酶而消化。按本发明的乳状液也可以促进吸收。另外，使用共聚物抑制脂肪酶并保持乳状液完整和药物输送到胃肠道的较低部分。多重乳状液还可以用于通过鼻、直肠、阴道或其它粘液膜输送药物。多重乳状液的扩散到相容表面的趋势促进药物的通过任何外部的或内部的人体表面的输送和吸收。一种现有技术的油包水乳状液，Freund的完全辅助剂，一直是最广泛使用的用于使动物免疫的免疫辅助剂。然而对用于人类是很毒的。一种没有分枝菌的变体，Freund的不完全辅助剂，被用于临床疫苗中，但由于毒性原因被放弃了48.49.50.51。一种花生油的油包水乳状液含有ArlacelA(-油酸二缩甘露醇酯)和硬脂酸铝，这种乳状液在本世纪六十年代被评作辅助剂用于人类疫苗52，53，54。它显示出了一线希望，但后来被抛弃了。这些油包水乳状液疫苗的问题之一是1/4至1/2ml剂量导致了过分多的油的注射，该油一直与严重的局部和偶尔全身的毒性反应相关。具有高含量的水和适当稳定性的多重乳状液具有在食品、化妆品、分离科学、化学反应的催化和许多其它领域中有潜在的用途。具有非常高含量的水乳状液以及没有刺激性的稳定剂的多重乳状液的制剂用在化妆品中是特别有利的。已经建议多重乳状液用于多种食品和调味汁中。共聚物的低毒性和含有食用油的组成为食品提供了良好的机会。由本发明制备的多重乳状液可以被用于已经制备其它油包水或水包油包水乳状液的分离科学的任何场合。该多重乳状液为物料通过半透膜(油层)扩散提供了一种方便的载体。在适当的场合，这可以被用于促进物料的分离。已经建议这样的乳状液可以被用于溶剂萃取和用作一种处理用药过量的方法。多重乳状液缩写以及所得代码31R1Meroxapol(PluronicR31R1)AlSt硬脂酸铝ALSt-110mg/ml硬脂酸铝ALSt-440mg/ml硬脂酸铝Arlacel186一和二脂酰甘油酯的非离子表面活性剂混合物BSA-33mg/ml含牛血清白蛋白的盐水BSA-1010mg/ml含牛血清白蛋白的盐水DDA二甲基二(十八烷基)溴化铵Drakeol6VR轻矿物油egglec蛋卵磷脂F68poloxamer188(PuronicF68)isomyris十四酸异丙酯CEF鸡胚成纤维细胞培养细胞和流体L101poloxamer331(PluronicL101)L121poloxamer401(PluronicL121)L141poloxamer461(PluronicL141)L180.5poloxamer520.5(PluronicL180.5)nd未做Octadecyl十八烷基胺O/W水包油乳状液P123poloxamer403(PluronicP123)Palmiacid十八(烷)酸Plurocol2010聚氧化丙烯(MW∽2000)(ⅸ)特征(A)名称/键CDS(B)位置889..1410(ⅹⅰ)序列描述SEQIDNO8由下面的实施例进一步阐明本发明，实施例并不以任何方式解释成对本发明的范围施加限制。相反，应当清楚地理解，在阅读本说明书后，本领域的技术人员可以采取各种其它实例、改进和等同物，都不脱离本发明的实质和/或附带的权利要求的范围。实施例1使用表示在表1至8中的物料和比例制备油包水和多重乳状液(水包油包水)。首先，通过按所示比例混合组分来制备三相(内部水相、油相和外部水相)。例如，在表1的第35行，通过将共聚物L180.5以20%(V/V)与含3mg/mlBSA的生理盐水溶液混合来制备内部水相。将该混合物放入4℃的冷藏室中以允许共聚物进入溶液。然后在使用前，将其变热以使聚合物析出。由角鲨烯与含20%(体积)的Span80的混合物制备油相。不使用稳定剂。如果使用硅石作为稳定剂，它就会在与油结合以前，与油相表面活性剂混合。如果使用硬脂酸铝作稳定剂，为溶解它油相得加热至50℃到80℃。外部水相是含0.5%的Tween80和0.5%的F68的生理盐水的混合物。首先，通过使用本领域的技术人员熟习的任何适合的均化装置均化制备油包水乳状液。在该例中，1份(1ml)油相与1ml内部水相均化来制备油包水乳状液。可以通过将一液滴乳状液放在水的表面上来进行测试。该液滴应保持它的形状并不分散。然后，油包水乳状液在6份(6ml)外部水相中二级乳化以制备水包油包水乳状液。已发现该乳状液(表1的35行)在室温下24小时高度稳定。表示在表1至8中的每种其它乳状液用相似的步骤来制备。Florence建议了一种将多重乳状液分为A、B和C型的方案。C型是最好的。内部水相有许多小的水微滴。B型是一种较不令人满意的乳状液，其中内部水相有几个不连续的水微滴。A型，是最差的一种，它的内部水相有一单个的大液滴。本实施例的乳状液比Florence所描述的任何一种都好55。内部水微滴小得用光显微镜不能看到单独液微滴。而且，由于内部水相的无数的非常细小的水微滴，该乳状液呈现出磨过的玻璃的外观。实施例2含10%至20%Span80的角鲨烯能制备稳定的油包水乳状液，但不能制备稳定的水包油包水多重乳状液(表1，25-26行)。实施例3将共聚物L121、L141或L180.5加入到含10%Span80的角鲨烯中，减少了形成稳定的油包水乳状液的能力(表1，1-12行)。需要20%的L141时，共聚物L121和L180.5使乳状液在含8%浓度的角鲨烯情况下不稳定。实施例4将Span80的浓度增至油相的20%，克服了L141的去稳定能力，并促进稳定的油包水乳状液的制备。而且，在这种情况下的L141促进了形成稳定的多重乳状液(表1，26和27行)。实施例51或4%的硬脂酸铝作为一种在油相中的稳定剂，克服了共聚物L141的去稳定性能力，而且还促进了稳定的多重乳状液(表1，28-31行)的形成。实施例6加入到乳状液内部水相中的共聚物L141或L180.5，促进了形成稳定的多重乳状液。由于文献教导说，疏水的表面活性剂应放入油相中，这是令人惊奇的。而且，这些共聚物的HLB低于报导的用于有效的油包水乳化剂的那些(表1，32-35行和25-26行)。实施例7F68是比Tween80更有效的用于制备多重乳状液的外部水相的表面活性剂(表2，1-9行)。实施例8如果Span80和共聚物L180.5在油相中结合，Span80的浓度从10%增加到40%，所得到的多重乳状液的稳定性就会降低，这与文献所说的多重乳状液需要高浓度的Span80相矛盾(表2，20-27行)。实施例9内部水相中的共聚物L180.5对于稳定多重乳状液来说优于L141或更小的共聚物。当内部水相中的水的浓度升至油包水乳状液中的水的80%时，这一点可以清楚地表明(表3，1-6行)。实施例10共聚物L180.5有效地稳定了在内部水相中有80%水的多重乳状液。正如贮存在37℃，4℃，冷冻成-20℃以及在几周的期间融化用光学显微镜看到的，这些乳状液保持稳定。(表3，1-6行)。实施例11在内部水相中含80%水的多重乳状液可以用大量的外部水相制备，而没有危及稳定性，这与文献所教导的限制外部水相的量的重要性相反(表3，1-3行和19-21行)。实施例12含有角鲨烯的油包水乳状液的内部水相中的共聚物L180.5，增加了油包水乳状液的稳定性，而且非常显著地增加了多重乳状液的稳定性。多重乳状液的稳定性取决于外部水相中的表面活性剂的类型。在内部水相中含有共聚物L180.5的制剂中，可以在外部水相中使用非常广泛的表面活性剂(表4，7-12行和19-24行)。实施例13一种在内部水相中含有10%共聚物L180.5和0.25%的P123作为外部水相表面活性剂的多重乳状液由在内部的油包水乳状液中的80%的水所构成，而且外部水相占总体积的80%，使油相只构成总乳状液的4%。这样制备了高稳定的多重乳状液，它能在17天的期间内，经受冷冻和融化4次，贮藏在冷藏室、室温或37℃，另外一段时间，甚至没有微小的变坏迹象(表4，24行)。实施例14聚合物L180.5促进油包水和水包油包水多重乳状液的稳定性的能力，用几种油，疏水的油相表面活性剂和稳定剂来测试。内部水相中的L180.5共聚物增加了油包水和多重乳状液的稳定性，所述乳状液是用Span80、Arlacel186或Span80加上硬脂酸铝制备的花生油乳状液(表5，11-20行)。它与矿物油(Drakeol6VR)有相似的效果(表5，21-30行)。在这些有很大的外部水相体积条件下，内部水相中的共聚物L180.5并没有增加含有十四酸异丙酯或Plurocol的乳状液的稳定性。实施例15一直常常报导，用植物油制备稳定的油包水或水包油包水多重乳状液是困难的。内部水相中的L180.5共聚物显示了促进这样的乳状液的稳定的能力。含有花生油的Span80制备了一种甚至仅含50%水的水包油乳状液(表16A，16行)。如果将共聚物L180.5加入内部水相，制得含50%、70%或90%水的高度稳定的油包水乳状液。然后，该油包乳状液形成一稳定的多重乳状液(表6，10-12行)。将该乳状液贮存在冷冻或4℃的条件下进一步测试，发现在这些条件下也是稳定的。其它的稳定剂，如硬脂酸铝单独使用时是很少有效的，但当与共聚物L180.5结合使用时，可制备非常稳定的乳状液(表6A，22-24行，28-30行和31-36行)。当内部水相含有在一用于疫苗的制剂的鸡胚成纤维细胞和它们的培养基时可观察到相似的结果(表6B，37-72行)。实施例16将几种疏水的表面活性剂加到角鲨烯、花生油、矿物油和十四酸异丙酯的油包水和多重乳状液的内部水相中。共聚物L180.5显著地增加了有这些油的每一种的油包水和多重乳状液的稳定性(表7，1-2行，13-14行，25-26行和37-38行)。共聚物T1501具有相似的组较小的效果(表7，4行，16行，28行和40行)。DDA、大豆卵磷脂、硬脂酸铝和十八烷基胺加入到内部水相时都增加了一种或多种油包水乳状液的稳定性。(表7)实施例17内部水相中的蛋白质的效果和共聚物L180.5的浓度的研究评价表示在表8中。共聚物L180.5在稳定多重乳状液中的最大效果需要浓度为5%或更大(1-2行，11-12行;表8)。然而，在使用0.01%这一最低浓度时，观察到了影响(表8，9行，19行)。内部水相中蛋白质的存在对结果没有影响。这些制剂都是在室温和4℃下测试的，且具有相似的结果。进行了进一步的研究以评价盐浓度对乳状液的稳定性的影响。内部水相中用蒸馏水制成的乳状液比那些用普通状态的盐水制成的较不稳定。相似地，两倍于生理盐水的浓度的盐浓度制成较低稳定性的乳状液。这与先前的其它情况的结果一致，所述结果表明，盐浓度的类型和量对于决定油包水和多重乳状液的稳定性是重要的。实施例18以5%(V/V)加入到十四酸异丙酯的油相中的L101不能与含BSA的盐水形成一种80%的油包水乳状液(表5，6行)。它还不能与含有P123作为外部水相的盐水形成一种多重乳状液(表5，6行)。这与Law等人的报导相反，他们用这些物料制备油包水和W/O/W两种乳状液56。然而，他们的工作和本发明有几个基本的不同。首先，Law等人只描述了一种含50%油的油包水乳状液。本发明可以用各种油包括十四酸异丙酯制备超过70%的乳状液(表7，3行)。第二，他们的乳化是在一机械搅拌中以1200±200RPM的速度乳化30分钟来形成一种油包水乳状液。本发明的乳化一般是使用结合的注射器以一般用于制备免疫学的辅助剂乳状液的方式进行5分钟或更短时间来完成的57.58.59。这表明本发明的优越之处在于油包水乳状液的制备容易得多。第三，Law等人教导表面活性剂如Span80加入到他们的乳状液的油中会引起大量的凝聚。在本发明的许多实施例中对于各种油包括十四酸异丙酯，Span80是一种有效的油相乳化剂。(表7，37-38行)第四，Law等人教导，使用这些物料的多重乳状液的形成，需要在制备W/O/W乳状液之前，将油包水乳状液放置过夜老化。这使得蛋白质和共聚物L101相互作用。他们的论文“由大分子和非离子表面活性剂的界面复合作用稳定W/O/W多重乳状液”，表明他们的乳状液的稳定性需要这一现象60。Law等人清楚地表明，保持表面活性剂分开的穿过油层是稳定W/O/W乳状液的一个重要因素，但他们所针对的溶液是与本发明完全不同的。本发明的乳状液是在温和得多的搅拌条件下制备的，含有较高比例的水，是更稳定的，而且在制备油包水乳状液后不需等待一段时间。实施例19目前的用于B型肝炎感染的疫苗是安全和有效的，但对大多数人来说，在几个月的期间内需要至少三次注射以实现10mlU/ml的保护抗体滴定度61。制备并测试一种作为疫苗用于B型肝炎病毒的表面抗原的多重乳状液。由共聚物L180.5(10mg)与含于0.1ml盐水中的130μg的由B型肝炎表面抗原取得的血浆混合构成内部水相并冷却以溶解所述共聚物。油相是由0.08ml的含有90%角鲨烯和10%Span80的一种混合物构成。将内部水相和油相放入一个1ml园锥形塑料管中，并重复地吸取该混合物经过一个钝的18号标准针进入一个1ml的塑料注射器。在少于30秒内形成了稠的油包水乳状液。加入含0.25%PluronicP103(poloxamer404)的盐水0.22ml作为外部水相，所述乳状液转化为油包水多重乳状液。该混合物经18号标准针吸入。将油包水乳状液分散成一种多重乳状液。所得到的多重乳状液由具有平均大小为10微米左右的油包水乳状液微滴组成，而且内部水滴到要用光学显微镜分辨。在室温下稳定期超过4个月。相似的制剂经过五个冷冻-融化循环仍然稳定的。将该乳状液通过皮下注射到ICR远系繁殖的老鼠的胁肉内，注射量为0.05ml，其中含有1.23mg共聚物L180.5、1.03mgSpan80、16μg抗原和9.25mg角鲨烯。所有老鼠在14天内产生的滴定大于10mlU/ml。在28天时，平均滴定度为20，815mlU/ml。局部炎症响应是最小的。实施例20实施例23至25表明按照本发明的一种油包水乳状液如何可以被用于输送作为一局部治疗的活性组分。用一种油包水乳状液(75%水)处理一个40岁的白人妇女，所述乳状液使用在水相中的PluronicL180.5和作为油相的角鲨烯和10%的Span80，带有最后浓度为5%的硫酸皮肤素(科学蛋白质实验室，Waunakee，WS)以用于头部的严重辐射烧伤。该病人接受了15剂量的全脑辐射，用于在她的左太阳穴脑叶中一个转移的腺癌。该病人失去了她的全部头发。对她进行了传统疗法，该疗法包括用芦荟凝胶和羊毛脂局部处理她头部烧伤。在她前额上的烧伤是特别严重的。该病人遭受了极度痛和痒。该病人的头顶皮被红的发炎的条状物盖满。该病人的耳朵后面的肿块受到大剂量的辐射，此处皮肤破裂、发红、肿胀而且非常干燥。油包水乳状液施加到她的整个头顶和前额。病人立即解除了发痒。首次处理后12小时，在她头部的所有的红的发炎的条状物完全消失了。她前额的皮肤变软且柔和。使用该油包水乳状液，病人基本上12小时不痒。数周内病人能睡眠而不用第一次药物处理。实施例21将50ml含5%硫酸皮肤素的70%的油包水乳状液施加到一位61岁的白人男子身上，该人患严重的“接触性”皮炎已5年以上。该病人的最严重问题是他的手而且特别是在冷天。病人的手指间，皮肤破裂出血而且他的整个手具有鳞状的烫伤外观。该病人的痒得他在睡眠时将手抓伤直到流血。病人一天两次施用W/O乳状液，早晚各一次。第一次处理后几个小时内，解除了痛和痒。病人使用该乳状液一周后，皮肤变柔软而且有正常的皮肤外观。实施例22处理一位有严重的覆盖整个背部的晒斑的30岁的白人男子。该病人将其背部暴露于太阳下达近似7小时，有最少的遮阳物。第二天，痛苦严重得使病人作呕。该病人在遭受目炙后用在实施例23中所用的油包水乳状液处理48小时。在近似30分钟内，解除了痛和痒。该制剂一天施用两次。第一次施用后24小时，所有发红、发炎全部消失。他继续使用该制剂三天，皮肤完全治愈。实施例23制备一种水包油包水多重乳状液，它包括50%(V/V)的含0.25%的共聚物P123的盐水的外部水相。另外50%(V/V)是由72%盐水，18%角鲨烯，2%Span80和32mg共聚物L310和每0.5ml乳状液0.5mgTNP-HEA组成的分散的油包水相。该乳状液给OCR远系繁殖的老鼠口服，剂量为每支老鼠0.5ml。在一个放大200倍的显微镜下检查该多重乳状液。乳状液在显微镜下表示出油包水乳状液的粒子直径为1.0至20μ。透射显示了老鼠的回肠末端，胃服乳状液后6小时，显示乳状液粒子与一种PeyersPatch(P)的圆顶状物结合。因为蛋白质抗原悬浮在乳状液的盐水中，该实验暗示油包水乳状液能够将天然抗原输送到与肠联合的淋巴腺组织。该乳状液肉眼可见的，而且是由完整的油包水显微粒子组成。一个内含物试样在口服后六小时被取出，由Ouchterlony分析测试发现含有抗原性的完整的TNP-HEA。在口服含有抗原的油包水乳状液后测试出分泌的IgA值。内部水相中含有TNP-HEA的油包水乳状液(0.5ml)在0，14，34天注入6个一组的远系繁殖ICR老鼠的胃中。其它组接受同样的乳状液试验，所述乳状液含有100μg已解毒的RaLPS，皂草苷或硅石作为辅助剂。口服后，IgG和IgA抗体循环，测量滴定度。在收集老鼠的肠液的同时收集血样。结果表示在图2和3中。在大多数情况下，单独服用TNP-HEA抗原乳状液在肠液和血浆中都得到了最高的滴定值。当口服含有TNP-HEA的盐水，在肠液或血浆中都没有免疫响应。当然，应当理解，前面所述只与本发明的优选实施例有关，而且许多可以做出的改进和选择都不脱离本发明的实质和范围，本发明的实质和范围表示在附带的权利要求中。相关文献1BecherP.Macroemulsions.NonionicSurfactantsPhysicalChemistry.EditedbyMartinJ.Schick.MarcelDecker，1987.pp435-4922Becher，P.MedicalandPharmaceuticalApplicationsofEmulsions.Chapter3ofEncyclopediaofEmulsionTechnology，volume2.MarcelDekker，NY.1985.ISBN0-8247-1877-1(v.2)atpage1603MyersD.Surfaces，InterfacesandColloids.VCHPublishers，Inc.1990.atpage2324Myers，D.Supraatpage2325Myers，D.Supraatpage222.6SchulmanJHandCockbainEG.Molecularinteractionsatoil/waterinterfaces.PartI.Molecularcomplexformationandthestabilityofoilinwateremulsions.Trans.FaradaySoc.，36651-661，661-668，1940.7MarszallL.HLBofnonionicsurfactantsPITandEIPmethods.NonionicSurfactantsPhysicalChemistry.EditedbyMartinJ.Schick.MarcelDecker，1987.pp493-548.8BecherP.Macroemulsions.NonionicSurfactantsPhysicalChemistry.EditedbyMartinJ.Schick.MarcelDecker，1987.pp435-492，atpage4409BecherP.Supraatpg44310BecherP.Supraatpg44111BecherP.Supraatpg44112BecherP.Supraatpg44013SchulmanJHetal.Molecularinteractionsatoil/waterinterfaces.PartI.Molecularcomplexformationandthestabilityofoilinwateremulsions.Trans.FaradaySoc.，36651-661，661-668，1940.14MatsumotoS.W/O/W-typemultipleemulsions.NonionicSurfactantsPhysic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C3H6O)的平均分子量近似为10，000，而亲水部分(C2H4O)的重量百分比近似为4%。18.按权利要求12的口服疫苗，其中第一种表面活性剂有下列分子式其中疏水部分(C3H6O)的平均分子量近似为5200，而亲水部分(C2H4O)的重量百分比近似为5%。19.按权利要求12的口服疫苗，其中油选自由植物油、动物油和矿物油组成的组。20.按权利要求19的口服疫苗，其中植物油是花生油。21.按权利要求19的口服疫苗，其中矿物油选自由drakeol6VR、十四酸异丙酯和聚氧丙烯组成的组。22.按权利要求19的口服疫苗，其中动物油选自由角鲨烯和角鲨烷组成的组。23.按权利要求12的口服疫苗，其中第二种表面活性剂选自由poloxamer331、poloxamer461、poloxamer520.5、Span80、一油酸脱水山梨(糖)醇酯、三硬脂酸脱水山梨(糖)醇酯和Ar-lacel186组成的组。24.按权利要求12的口服疫苗，还含有一种无菌药物可接受的载体。25.一种给哺乳动物接种疫苗的方法，包括口服一种有效量的权利要求12的疫苗。全文摘要公开了一种口服疫苗及其口服接种方法。该疫苗包括一种稳定的油包水乳状液或多重乳状液，含有在一连续的油相内的分散的水相，水相含有一种有效量的抗原、一种亲水-亲脂平衡值近似小于2的有效量的第一种表面活性剂，及含有第二种表面活性剂的连续的油相。文档编号A61Q19/00GK1096224SQ9311723公开日1994年12月14日申请日期1993年8月20日优先权日1991年6月27日发明者R·L·亨特,C·E·莱尼特申请人:埃默里大学