一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法
【专利摘要】本发明属于日用化学品【技术领域】，公开了一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法。所述假牙护理液由陈皮提取物、葡聚糖酶、P-葡聚糖酶、淀粉酶、食盐以及水组成；每lOOmL假牙护理液包括2.5?10mL的陈皮提取物、0.25?10mga-葡聚糖酶、0.25?10mgP-葡聚糖酶、0.25?10mga-淀粉酶以及lg食盐。本发明所制备的假牙护理液清除牙菌斑效果显著，能有效抑制需氧、厌氧菌生长，特别对链球菌的增殖有明显抑制作用；同时所述假牙护理液安全无毒、无刺激，假牙浸泡后可直接使用无需冲洗。
【专利说明】一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于日用化学品【技术领域】，具体涉及一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 正确有效地清洁和护理假牙可以延长假牙使用寿命，避免因假牙上的致龋菌大量 繁殖导致的假牙损伤、变形，甚至导致与假牙接触的周边自身牙的龋齿或牙龈炎。牙菌斑是 口腔菌群、特别是与龋齿密切相关的变形链球菌在牙齿和假牙上形成的生物膜群落，富含 葡聚糖和果聚糖等多糖成分，牙菌斑一旦大量形成，将有助于口腔致龋细菌的滋生，引发龋 齿、溃疡或其他口腔疾病，更甚者会增加罹患其他全身疾病的风险。目前有很多的假牙护理 产品，多添加消毒剂成分，尚未有针对清除牙菌斑的护理液。
【发明内容】
[0003] 为了克服现有技术的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种含酶与陈皮提取物 的假牙护理液。
[0004] 本发明的另一目的在于提供上述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法。
[0005] 本发明的目的通过以下技术方案实现：
[0006] -种含酶与陈皮提取物的假牙护理液，由陈皮提取物、α -葡聚糖酶（彡50U/mg)、 β -葡聚糖酶（彡50U/mg)、α -淀粉酶（彡50U/mg)、食盐以及水组成。
[0007] 所述假牙护理液中各物质的用量关系为每100mL的假牙护理液由2. 5?10mL的 陈皮提取物、〇. 25?10mg的α -葡聚糖酶、〇. 25?10mg的β -葡聚糖酶、0. 25?10mg的 α -淀粉酶、lg的食盐以及余量水组成。
[0008] 所述陈皮提取物的制备方法为将陈皮粉末加入乙醇溶液A中，均质，离心，取上清 液；向离心后的沉淀中再加入乙醇溶液B，继续均质、离心，取上清液，如此反复处理，最后 将各上清液合并、旋转蒸发浓缩，得到陈皮浓缩物；向陈皮浓缩物中加入水溶解，储存，得到 陈皮提取物。
[0009] 所述陈皮粉末与乙醇溶液A的质量体积比为2. Og :30mL ;所述乙醇溶液A与乙醇 溶液B浓度和用量相同；乙醇溶液A体积浓度为80?100%;所述乙醇溶液A与B为4°C预 冷的乙醇溶液。
[0010] 所述陈皮粉末与水的质量体积比为2. 0g :10mL。
[0011] 所述水为反渗透纯净水。
[0012] 所述均质采用高速均质机进行均质，均质的转速为10000?12000rpm，均质时间 为 5 ?10min ;
[0013] 所述离心转速为3000?5000rpm，离心时间为3?8min ;
[0014] 所述反复处理次数为3?6次；
[0015] 所述蒸发浓缩采用的仪器为旋转蒸发仪，于40°C下真空旋转蒸发浓缩至陈皮浓缩 物中没有流动的液体；
[0016] 所述储藏的温度为-40°c。
[0017] 所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法，包括以下步骤：
[0018] (1)将陈皮提取物、α-葡聚糖酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶以及食盐溶于水中， 得到混合液；
[0019] ⑵将步骤⑴中混合液离心，过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。
[0020] 步骤（1)中所述水为反渗透纯净水；
[0021] 步骤（2)中所述离心条件为离心转速为5000?lOOOOrpm，离心时间为5?lOmin， 离心温度为4?20°C ;
[0022] 步骤⑵中所述过滤采用灭菌的滤膜过滤，滤膜的孔径为0. 22 μ m。
[0023] α-葡聚糖酶作用于α-葡聚糖的1，6糖苷键；β-葡聚糖酶专一作用于β-葡聚 糖的1，3及1，4糖苷键；α -淀粉酶可作用于α -1，4-葡聚糖，无差别地随机切断糖链内部 的α - 1，4_糖苷键。这三种酶组合可以降解牙菌斑，破坏口腔细菌生长的基础。陈皮提 取物有良好地抑制口腔细菌形成牙菌斑的效果。
[0024] 与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果：
[0025] (1)本发明所制备的假牙护理液清除牙菌斑效果显著、有效抑制需氧、厌氧菌生 长，特别对链球菌的增殖有明显抑制作用；
[0026] (2)所述假牙护理液安全无毒、无刺激；
[0027] (3)假牙浸泡后可直接使用无需冲洗。
【专利附图】
【附图说明】
[0028] 图1为实施例1所制备的陈皮提取物的高效液相色谱分析（HPLC)谱图。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合实施例以及附图对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不 限于此。
[0030] 实施例1
[0031] (1)陈皮提取物的制备方法：
[0032] 向30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为80% )中加入2. 0g干燥的陈皮粉 末，得到分散液；以12000rpm的转速，在高速均质机中将分散液均质5min ;采用离心机以 3000rpm的转速离心3min,收集上清液；
[0033] 向离心后的沉淀中加入30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为80% )继续均 质（转速为12000rpm，均质时间为5min)、离心（离心转速为3000rpm，离心时间为3min), 取上清液，如此反复5次，合并上清液。
[0034] 将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓缩 物，用10mL反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于-40°C储存备用。所制备的陈皮提取物 的高效液相色谱分析如图1所示。
[0035] (2)含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备：
[0036] 将陈皮提取物2. 5mL，α -葡聚糖酶（彡50U/mg) 0· 25mg ; β -葡聚糖酶（彡50U/ mg)0. 25mg ; α -淀粉酶（彡50U/mg)0. 25mg ;食盐lg加入到反渗透纯净水中，使得混合液至 lOOmL ；
[0037] 将混合液进行离心（离心转速为5000rpm，离心时间为lOmin，温度20 °C )， 0. 22 μ m滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。
[0038] 实施例2
[0039] (1)陈皮提取物的制备方法：
[0040] 向30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为90% )中加入2. Og干燥的陈皮粉 末，得到分散液；以12000rpm的转速，在高速均质机中将分散液均质8min ;采用离心机以 4000rpm的转速离心5min，收集上清液；
[0041] 向离心后的沉淀中加入30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为90% )继续均 质（转速为llOOOrpm，均质时间为8min)、离心（离心转速为4000rpm，离心时间为5min)， 取上清液，如此反复6次，合并上清液。
[0042] 将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至所得浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓 缩物，用10mL反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于-40°C储存备用。
[0043] (2)含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备：
[0044] 将陈皮提取物5mL，α -葡聚糖酶（彡50U/mg) 5mg ; β -葡聚糖酶（彡50U/mg) 5mg ; α -淀粉酶（彡50U/mg) 5mg ;食盐lg加入到反渗透纯净水中，使得混合液至lOOmL ;
[0045] 将混合液进行离心（离心转速为8000rpm，离心时间为8min，温度10°C )，0. 22 μ m 滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。
[0046] 实施例3
[0047] (1)陈皮提取物的制备方法：
[0048] 向30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为100% )中加入2. Og干燥的陈皮粉 末，得到分散液；以lOOOOrpm的转速，在高速均质机中将分散液均质lOmin ;采用离心机以 5000rpm的转速离心3min，收集上清液；
[0049] 向离心后的沉淀中加入30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为100% )继续均 质（转速为lOOOOrpm,均质时间为lOmin)、离心（离心转速为5000rpm，离心时间为3min)， 取上清液，如此反复3次，合并上清液。
[0050] 将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至所得浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓 缩物，用10mL反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于_40°C储存备用。
[0051] (2)含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备：
[0052] 将陈皮提取物10mL，α-葡聚糖酶（彡50U/mg)10mg ;β-葡聚糖酶（彡50U/ mg) 10mg ; α -淀粉酶（彡50U/mg) 10mg ;食盐lg加入到反渗透纯净水中，使得混合液至 lOOmL ；
[0053] 将混合液进行离心（离心转速为lOOOOrpm，离心时间为5min，温度4*? )，0· 22 μ m 滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。
[0054] 对比例
[0055] (1)陈皮提取物的制备方法：
[0056] 向30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为80% )中加入2. Og干燥的陈皮粉 末，得到分散液；以12000rpm的转速，在高速均质机中将分散液均质5min ;采用离心机以 3000rpm的转速离心3min,收集上清液；
[0057] 向离心后的沉淀中加入30mL预冷的乙醇溶液（质量百分比浓度为80% )继续均 质（转速为12000rpm，均质时间为5min)、离心（离心转速为3000rpm，离心时间为3min), 取上清液，如此反复3次，合并上清液。
[0058] 将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至所得浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓 缩物，用10mL反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于_40°C储存备用。
[0059] (2)含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备：
[0060] 将陈皮提取物1. 25mL，α -葡聚糖酶（彡50U/mg) 0· 25mg ; β -葡聚糖酶（彡50U/ mg)0. 25mg ; α -淀粉酶（彡50U/mg)0. 25mg ;食盐lg加入到反渗透纯净水中，使得混合液至 100mL ；
[0061] 将混合液进行离心（离心转速为5000rpm，离心时间为lOmin，温度20°C )， 0. 22 μ m滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。
[0062] 效果测试：
[0063] 采用羟基磷灰石圆片模拟假牙，与新鲜唾液培养后有口腔细菌附着在羟基磷灰石 圆片上。考察所制备的假牙护理液对稳固附着在羟基磷灰石圆片上的细菌的清除和抑制生 长的效果。
[0064] 采集志愿者人群（20人）的新鲜唾液（每人2ml)，并在采集后20分钟内充分混 匀并分装到无菌的48孔组织培养板的孔中（每孔0.5ml)。将羟基磷灰石圆片（96-Well Compatible HA Disc,购自美国3D Bioteck公司）通过高压蒸汽灭菌后无菌转移入48孔组 织培养板上分装有唾液的孔中。将接种后的培养板室温下置于频率为200次/min的摇床上 摇晃20min以使唾液混合均匀，羟基磷灰石圆片充分浸润在新鲜唾液中。之后将培养板在 厌氧培养箱中（37°C，75% N2,25% C02)培养14h左右。去除唾液，添加0. 5ml对比例与实 施例1-3中制备的假牙护理液，以不含酶和陈皮提取物的食盐水（质量体积比为lg: 100mL) 为空白对照组，在200次/min的摇床上室温摇晃30min。取出羟基磷灰石圆片，轻柔地浸泡 在无菌磷酸盐缓冲液中一小时，以去除蓬松的细菌。再次用无菌磷酸盐缓冲液温和冲洗羟 基磷灰石圆片，此时留在羟基磷灰石圆片上的细菌即为较为稳固附着生长的细菌，类似牙 菌斑菌群。
[0065] 将羟基磷灰石圆片上的细菌群落通过剧烈漩涡振荡分散到硫乙醇酸盐液体培养 基中，稀释接种到各种培养基：营养琼脂培养基（NA培养基，适合需氧菌和兼性厌氧菌）， Wilkins-Chalgren琼脂培养基（WC培养基，适合厌氧菌），链球菌培养基（KF培养基，适合 链球菌）。除营养琼脂培养基外另外两种培养基通过覆盖一层较稀的琼脂层以营造厌氧环 境。将接种好的培养基于37°C培养数天后进行菌落计数，统计得出经假牙护理液处理后仍 稳固附着在羟基磷灰石圆片上的活菌数，从而评价假牙护理液降解牙菌斑、杀菌抑菌的效 果。测试结果如表1所不。
[0066] 表1假牙护理液对各种细菌的清除效果 [0067]
【权利要求】
1. 一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于：由陈皮提取物、α-葡聚糖酶、 β -葡聚糖酶、α -淀粉酶、食盐以及水组成。
2. 根据权利要求1所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于：所述假牙护理 液中各物质的用量关系为每l〇〇mL的假牙护理液由2. 5?10mL的陈皮提取物、0. 25?10mg 的ct-葡聚糖酶、0.25?10mg的β-葡聚糖酶、0.25?10mg的α-淀粉酶、lg的食盐以及 余量水组成。
3. 根据权利要求1所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于：所述陈皮提取 物的制备方法为将陈皮粉末加入乙醇溶液A中，均质，离心，取上清液；向离心后的沉淀中 再加入乙醇溶液B，继续均质、离心，取上清液，如此反复处理，最后将各上清液合并、旋转蒸 发浓缩，得到陈皮浓缩物；向陈皮浓缩物中加入水溶解，储存，得到陈皮提取物。
4. 根据权利要求3所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于：所述陈皮粉末 与乙醇溶液A的质量体积比为2. Og :30mL ;所述乙醇溶液A与乙醇溶液B浓度和用量相同； 乙醇溶液A体积浓度为80?100%。
5. 根据权利要求3所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于：所述陈皮粉末 与水的质量体积比为2. 0g :10mL ; 所述水为反渗透纯净水。
6. 根据权利要求3所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于：所述均质采用 高速均质机进行均质，均质的转速为10000?12000rpm，均质时间为5?10min ; 所述离心转速为3000?5000rpm，离心时间为3?8min ; 所述反复处理次数为3?6次。
7. 根据权利要求3所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于：所述蒸发浓缩 采用的仪器为旋转蒸发仪，真空旋转蒸发浓缩至陈皮浓缩物中没有流动的液体。
8. 根据权利要求1所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法，其特征在于：包 括以下步骤： (1) 将陈皮提取物、α-葡聚糖酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶以及食盐溶于水中，得到 混合液； (2) 将步骤（1)中混合液离心，过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。
9. 根据权利要求8所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法，其特征在于：步 骤（1)中所述水为反渗透纯净水； 步骤（2)中所述离心条件为离心转速为5000?lOOOOrpm，离心时间为5?lOmin，离 心温度为4?20°C ; 步骤（2)中所述过滤采用灭菌的滤膜过滤，滤膜的孔径为0.22 μ m。
【文档编号】A61Q11/02GK104207983SQ201410424736
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年8月26日 优先权日:2014年8月26日
【发明者】陈谷, 王宏 申请人:华南理工大学