余甘子提取物在制备具有抗辐射和抗衰老功效的保健食品或化妆品中的应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了余甘子提取物在制备具有抗辐射、抗炎和抗衰老功效的保健食品和化妆品中的应用，本发明中的余甘子提取物具有抗UVA辐射作用，能显著降低UV辐射引起的细胞损伤，同时对巨噬细胞炎症因子表达具有明显的抑制作用，可发挥抗炎抗衰老作用；本发明还从细胞和分子水平阐明了余甘子提取物具有抗UV辐射和抗衰老作用。另外，本发明还公开了上述具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的一种优选的制备方法。
【专利说明】余甘子提取物在制备具有抗辐射和抗衰老功效的保健食品或化妆品中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于余甘子【技术领域】，具体涉及余甘子提取物在制备具有抗辐射和抗衰老功效的保健食品或化妆品中的应用。
技术背景
[0002]近年来，来源于植物的活性成分已越来越多的用于药物、治疗、美容目的的组合物。目前，植物余甘子提取物被用于各种医药和保健方面。
[0003]衰老是一种生理性现象，生理上表现就是各器官的功能衰退，导致各种老化疾病的产生。而最直观的证据即皮肤的老化。在分子水平表现为细胞的衰老，这是与机体老化相伴的一个渐进的事件。衰老不但导致机体的生理功能退化，机体的免疫体统也在逐渐退化。在人体衰老过程中不但由于自身的生理和免疫系统的原因，还有很多外因也会加速衰老，其中紫外的辐射就是引起衰老最为常见的原因，并且由于老化引起的慢性炎症也是免疫系统退化的一个表征。
[0004]紫外线照射是导致皮肤衰老最主要的环境因素，紫外线照射使皮肤组织内产生大量氧自由基，使组织抗氧化防御体系能力减弱，最终导致皮肤衰老。自由基极易侵害细胞膜中的不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化反应，形成过氧化脂质，脂质过氧化物的降解产物丙二醛(MDA)与氨基酸，核酸，蛋白质和磷脂等和游离氨基反应形成脂自由基，它广泛地参与机体的生理与病理过程。在正常生理状态下，体内氧自由基不易发生蓄积和过氧化损伤，其中SOD对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，当机体长期受紫外线辐射，体内超氧阴离子自由基的产生与清除便失去平衡，氧自由基产生过多时，会对机体产生毒害作用。并且紫外线的辐射还可以引起DNA的损伤。
[0005]衰老或老化是机体代谢过程中的一个必然阶段，主要表现为机体对环境的适应能力减弱以至丧失。衰老的机制颇为复杂，涉及到机体的各个系统的结构与功能的改变，有关老化的假说颇多。主要包括神经内分泌学说，自由基学说，免疫学说，体细胞突变学说，应激学说等。随着近现代免疫学的发展，人们开始认识到衰老和老年性疾病在许多方面与免疫功能的改变有密切关系。认为免疫系统与体内大多数器官和细胞保持持续接触，它的改变势必影响这些器官和组织细胞。随着年龄的增长，免疫机能减退，由此诱发出一些严重影响组织器官的疾病，加剧了机体各系统的衰老过程。阻止或逆转免疫功能的衰竭，可以延缓衰老，并改变衰老病变组织器官的严重程度。衰老的免疫学表现有免疫器官功能衰退，随着年龄增加，各免疫器官的功能日渐衰退，其中最明显的是胸腺，胸腺萎缩是老年人免疫功能下降的关键。细胞免疫和体液免疫功能也在衰老的过程中有所改变，细胞免疫是依赖胸腺分化成熟的T细胞发挥作用的，因此随着年老胸腺萎缩，T细胞的质和量都受到影响是无疑的。免疫和衰老的关系密切，从免疫的角度提高机体的免疫力来抗衰老和延缓衰老有着重要的意义。
[0006]另外，衰老和炎症之间也有着密切的联系，炎性衰老受到越来越多的关注，炎症衰老是指随着年龄的增长机体出现一个慢性炎症的过程。炎症是宿主系统对病原体感染以及各种组织损伤等产生的一系列复杂的应答事件，它通过影响机体微环境中多种细胞与因子的相互作用，调控机体多种生理与病理信号网络的平衡走向，表现出了高度的两面性:在一般情况下当致炎因素如感染或组织损伤消除后，炎症反应随即终结，之后转变成为一种高度活跃、精细调控的平衡状态，这种炎症被称为可控性炎症。但是在某些不确定因素的作用下，如持续的或低强度的刺激，靶组织处于长期或过度反应时，炎症无法从抗感染组织损伤模式下转变成为平衡稳定的状态，导致炎症反应的持续进行表现为非可控性炎症状态。炎性衰老的炎症具有非可控炎症的特征。炎症如同免疫反应一样是机体的正常生理功能，适度的炎症反应对机体有利，反之则有害。炎症细胞因子网络包括促炎症细胞因子网络和抗炎症细胞因子网络。这两个既相互对立又相互依存的子网络的变化控制着炎症的有利或有害作用的方向。正常情况下他们之间处于一个动态平衡的关系，炎性衰老中的病理性炎症是炎症细胞因子网络失衡所致，还与炎症介质的异常密切相关。
[0007]免疫衰老与炎性衰老相伴而行，炎性衰老的机制可以归纳成如下:应激学说，应激是机体在各种内外环境因素及社会心理因素刺激时所出现的全身性非特异性适应反应。应激是一把双刃剑，对机体有利也有害。炎性衰老进程中机体长期处在应激原所形成的环境中。应激原是导致和维持慢性促炎性反应状态存在的原因。氧化炎症学说，氧化应激、炎性衰老与免疫衰老三者密切相关。细胞因子学说，促炎症细胞因子在慢性炎症所致机体的炎性衰老中发挥着重要的作用。
[0008]目前，关于将余甘子提取物在制备具有抗辐射和抗衰老功效的保健食品或化妆品中的应用方面的研究，还未见公开。
【发明内容】
[0009]本发明所要解决的技术问题是提供余甘子提取物在制备具有抗辐射和抗衰老功效的保健食品和化妆品中的应用。
[0010]本发明对余甘子提取物进行了抗辐射、抗炎和抗衰老的功效细胞生物学验证，由于辐射引起炎症，而炎症可以引起衰老，因此 申请人:研究了余甘子提取物抵抗UVA辐射作用，并且目前关于此类的应用很少。本申请提供的余甘子提取物具有抗UVA辐射作用，显著降低UVA辐射引起的真皮细胞和表皮细胞损伤，另外，衰老与炎症之间也有密切的联系， 申请人:同时研究了余甘子提取物在体外的抗炎效果，发现其能有效地抑制巨噬细胞炎症因子表达。促炎细胞因子能诱导细胞衰老，促炎细胞因子(如TNF-a，IFN-Y，IFN-β )等通过产生活性氧和激活ΑΤΜ/Ρ53/Ρ21信号通路诱导上皮细胞衰老，趋化因子受体CXCR2通过Ρ53通路诱导成纤维细胞衰老，DNA损伤激活NF-KB等信号通路产生促炎细胞因子(IL-1，IL-6，IL-8等)，从而阻滞细胞周期，诱导和维持细胞衰老表型。DNA损伤学说，由于DNA损伤积累使得干细胞和基质成纤维细胞分化为促炎症细胞因子过表达细胞，使多层状细胞因子网络崩溃，导致炎性而导致衰老。
[0011]优选的，本发明所述的余甘子提取物中诃黎勒酸的质量百分含量在70%以上。
[0012]本发明中上述具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物，可以使市售产品，也可以是采用下述本发明提供的优选的方法制备的余甘子提取物。
[0013]本发明提供的上述具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，含以下步骤:
[0014](1)前处理:将原料余甘子洗净，粉碎；
[0015](2)提取:采用甲醇超声室温提取后，过滤，将滤液真空减压处理回收甲醇，得到B
浸膏；
[0016](3)萃取:将B浸膏采用正丁醇超声萃取后，过滤，得到C萃取液；
[0017](4)上样分离:将C萃取液用水稀释后，过滤，上样于两根相串联的装有PIP0-02分离材料的分离柱中，用甲酸水溶液洗脱后，将两根分离柱分开，第二根分离柱先用水洗，再用甲醇洗，得到目标段D馏分；
[0018](5)浓缩干燥:将D馏分经真空减压浓缩后，真空干燥得到余甘子提取物。
[0019]在上述步骤中:
[0020]本发明步骤(1)中粉碎后优选过筛至30~60目。
[0021]本发明步骤(2)中甲醇的用量优选为余甘子原料总重量的8-10倍。
[0022]本发明步骤(2)中甲醇超声室温提取优选2次，每次优选20-40分钟，优选500-800目滤布过滤，合并滤液，真空减压回收甲醇，得到B浸膏，B浸膏的重量占余甘子原料总重量的20-30%。
[0023]本发明步骤(3)中正丁醇的用量与B浸膏的质量相同，超声萃取时间优选为30-50分钟。
[0024]本发明步骤(4)中将C萃取液优选用占其总质量15-20倍的水稀释。
[0025]本发明步骤(4)中优选用甲酸水溶液洗脱10-15倍余甘子原料重洗脱液，甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量优选为0.2% ;第二根分离柱优选用水洗3-5倍余甘子原料重洗脱液，再优选用甲醇洗2-3倍余甘子原料重洗脱液。
[0026]本发明步骤(5 )中将D馏分优选在40-70 V经真空减压浓缩后，真空干燥获得的余甘子提取物，余甘子提取物中经HPLC检测诃黎勒酸的质量百分含量为70%以上。
[0027]以上是本发明优选的余甘子提取物的制备方法。
[0028]本发明具有如下优点:
[0029](1)采用本发明方法提取的余甘子提取物，其中诃黎勒酸成分占到70% (质量百分含量)以上，诃黎勒酸通常在保健品或化妆品中应用量小，含量明确容易质量控制；
[0030](2)采用本发明方法制备获得的余甘子提取物色泽浅谈，适合化妆品中应用，不影响化妆品的原有色泽；
[0031](3)采用本发明方法提取余甘子提取物的提取效率高，能充分利用资源；
[0032](4)本发明的余甘子提取物生产制备成本低，宜于在保健品或化妆品中应用，具有市场竞争力；
[0033](5)本发明经试验发现，余甘子提取物能显著降低UV辐射引起的细胞损伤，同时对巨噬细胞炎症因子表达具有明显的抑制作用，因而发挥抗衰老作用，从细胞和分子水平阐明了本发明中的余甘子提取物产品具有抗UV辐射、保护细胞和抗衰老作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0034]图1是本发明实施例4中(1.2)余甘子提取物对UVA照射下的3T3细胞保护作用；
[0035]图2是本发明实施例4中(1.3)彗星电泳检测细胞DNA损伤的实验结果，其中左图为无UVA照射的3T3细胞、中图为有UVA照射的3T3细胞、右图为加入了余甘子提取物的3T3细胞的细胞DNA产生彗星拖尾率，其中横标依次为未UVA照射的3T3细胞，有UVA照射的3T3细胞，加入了余甘子提取物的3T3细胞；纵标为细胞DNA产生彗星拖尾；
[0036]图3是本发明实施例4中(1.4)流式细胞仪检测余甘子提取物对UVA辐射3T3细胞周期的保护作用；
[0037]图4是本发明实施例4中(1.5) MTT法检测余甘子提取物对RAW264.7细胞毒性；
[0038]图5是本发明实施例4 (1.5)中PCR检测余甘子提取物在转录水平抑制或降低炎症因子IL-6的产生；
[0039]图6是本发明实施例4 (1.5)中PCR检测余甘子提取物在转录水平抑制或降低炎症因子IL-1的产生；
[0040]图7是本发明实施例4 (1.5)中PCR检测余甘子提取物在转录水平抑制或降低炎症因子TNF-alpha的产生；
[0041]图8是本发明实施例4 (1.5)中PCR检测余甘子提取物在转录水平抑制或降低炎症因子MCP-1的产生；
[0042]图9是本发明实施例4 (1.5)中PCR检测余甘子提取物在转录水平抑制或降低炎症因子MCP-1的产生。
【具体实施方式】
[0043]下面是结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0044](—)本发明优选的余甘 子提取物的提取方法
[0045]实施例1
[0046]本发明提供的余甘子提取物的优选的制备方法，含以下步骤:
[0047]A前处理:将原料余甘子用水洗净，粉碎，过筛至30-60目，称重I千克；
[0048]B提取:用8-10千克甲醇超声室温提取2次，每次20_40分钟，500-800目滤布过滤，合并滤液，真空减压回收甲醇，得到0.2-0.3千克原料重量的B浸膏；
[0049]C萃取:用B浸膏重量等量的正丁醇超声萃取30-50分钟，过滤，得到0.3-0.5千克C萃取液；
[0050]D上样分离:C萃取液用4.5-10千克水稀释，过滤，上样于两根装有PIP0-02分离材料的柱子中，用0.2% (体积百分含量，下同)甲酸水洗脱10-15千克，分开两根分离柱，第二根柱用水洗3-5千克，再用甲醇洗2-3千克，得到目标段D流分；
[0051]E浓缩干燥:真空减压在40-70°C浓缩D流分，并真空干燥得到余甘子提取物，用HPLC诃黎勒酸对照品测试发现，其中诃黎勒酸的质量百分含量在70%以上，称重为50-80克。
[0052]实施例2
[0053]本发明提供的余甘子提取物的优选的制备方法，含以下步骤:
[0054]A前处理:将原料余甘子用水洗净，粉碎，过筛至30-60目，称重10千克；
[0055]B提取:用80-100千克甲醇超声室温提取2次，每次20-40分钟，500-800目滤布过滤，合并滤液，真空减压回收甲醇，得到2-3千克原料重量的B浸膏；
[0056]C萃取:用B浸膏重量等量的正丁醇超声萃取30-50分钟，过滤，得到3-5千克C萃取液；
[0057]D上样分离:C萃取液用45-100千克水稀释，过滤，上样于两根装有PIP0-02分离材料的柱子中，用0.2%甲酸水洗脱100-150千克，分开两根分尚柱，第二根柱用水洗30-50千克，再用甲醇洗20-30千克，得到目标段D流分；
[0058]E浓缩干燥:真空减压在40-70°C浓缩D流分，并真空干燥得到余甘子提取物，用HPLC诃黎勒酸对照品测试发现，其中诃黎勒酸的质量百分含量在70%以上，称重为500-800克。
[0059]实施例3
[0060]本发明提供的余甘子提取物的优选的制备方法，含以下步骤:
[0061]A前处理:将原料余甘子用水洗净，粉碎，过筛至30-60目，称重100千克；
[0062]B提取:用800-1000千克甲醇超声室温提取2次，每次20_40分钟，500-800目滤布过滤，合并滤液，真空减压回收甲醇，得到20-30千克原料重量的B浸膏；
[0063]C萃取:用B浸膏重量等量的正丁醇超声萃取30-50分钟，过滤，得到30_50千克C萃取液；
[0064]D上样分离:C萃取液用450-1000千克水稀释，过滤，上样于两根装有PIP0-02分离材料的柱子中，用0.2%甲酸水洗脱1000-1500千克，分开两根分离柱，第二根柱用水洗300-500千克，再用甲醇洗200-300千克，得到目标段D流分；
[0065]E浓缩干燥:真空减压在40-70°C浓缩D流分，并真空干燥得到余甘子提取物，用HPLC诃黎勒酸对照品测试发现，其中诃黎勒酸的质量百分含量在70%以上，称重为5-8kg。
[0066](一)余甘子提取物的功效试验
[0067]实施例4余甘子提取物抗辐射和抗衰老功效验证
[0068]4.1实验原料
[0069]以下采用本发明实施例1中制备获得余甘子提取物，进行抗辐射和抗衰老功效验证。
[0070]4.2抗辐射功效验证实验
[0071]采用本发明实施例1中制备得余甘子提取物对UVA辐射3T3细胞的防护作用，方法如下:
[0072]通过MTT法检测细胞增殖情况来测定化合物对UVA辐射3T3细胞的防护作用。
[0073](I)收集对数期3T3细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100 μ L，铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔；
[0074](2)2.5%C02，37°C孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，梯度浓度依次为:200 μ g/mL , 100 μ g/mL , 50 μ g/mL , 25 μ g/mL , 12.5 μ g/mL , 6.25 μ g/mL,每个梯度设置3个复孔，每组设置3个空白孔，对照组不作处理5%C02，37°C孵育16-24小时；
[0075](3)辐射组各组细胞按UVA辐射剂量条件摸索实验的得到的紫外条件进行紫外辐射:辐照时间45min ;辐射剂量1.4J/cm2，对照组不作处理，5%C02，37°C孵育16-24小时；
[0076](4)每孔加入10 μ LMTT溶液，继续培养4h，终止培养，小心吸去孔内培养液；
[0077](5)每孔加入100 μ L 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪0D570nm处测量各孔的吸光值；
[0078]结果如图1中所示，试验结果表明，采用本发明实施例1中提取的余甘子提取物对UVA辐射3T3细胞具有防护的活性(≥90%cell viability)。
[0079]4.3抗炎抗衰老作用功效验证实验
[0080]采用彗星电泳检测本发明实施例1中制备得余甘子提取物对UVA辐射3T3细胞DNA的保护作用，方法如下:DNA损伤越严重，导致DNA超螺旋结构越松散，产生的断裂点越多，DNA片段越小，从而在彗星尾部出现的DNA断片越多，则慧尾的长度、面积和荧光强度越大。通过测量彗星尾部的长度、面积或荧光强度等指标，可以对DNA的损伤程度进行定量分析。
[0081](I) 3T3细胞预12孔板，细胞密度为70% ；
[0082](2)化合物处理:将上述实验筛选出的化合物稀释至200μ g/mL (我们采用有效最大浓度作为该实验的药物工作浓度)，吸弃培养基，加入稀释的化合物稀释液，每孔lmL，37度，5%C02的培养箱培养24h ；
[0083](3)将处理的细胞UVA辐照lh，60uff/cm2, 37°C，5%C02的培养箱培养24h ；
[0084](4)胰酶消化细胞，含血清的培养基终止消化，将细胞液转入15mL离心管内，1000rpm/min,离心5min,弃上清,加入适量PBS重悬细胞，同上离心5min,弃PBS,加入适量的PBS重悬细胞，调细胞浓度至106cells/mL ；
[0085](5)制胶:溶解0.7%浓度的正常熔点琼脂糖，快速滴加70 μ L至干净的载玻片，快速用盖玻片压胶，4°C凝胶20min，轻轻剥离盖玻片，将细胞悬液和0.8%低熔点琼脂糖混匀，快速滴加至第一层胶上，快速盖玻片压胶，4°C凝胶20min ；
[0086](6)轻轻剥离第二层胶上的盖玻片，将胶放入碱性裂解液中，4°C裂解1.5~2h ;
[0087](7)轻轻取出载玻片，用单蒸水洗胶2次；
[0088](8)将胶放入碱性电泳液中，静置20min，25V，电泳15min，pH7.5的Tris-HCl中和三次，每次5min ；
[0089](9) PI染色镜检，拍照。
[0090]彗星电泳检测细胞DNA损伤的实验结果如图2中所示，本发明实施例1中制备得余甘子提取物对UVA辐射引起的DNA损伤具有显著地抑制作用。
[0091]4.4抗炎抗衰老作用功效验证实验
[0092]流式细胞仪检测药物本发明实施例1中制备得余甘子提取物对UVA辐射3T3细胞周期的保护作用，方法如下:细胞DNA损伤，发动细胞基因组修复机制，调节细胞周期进而完成基因组的损伤修复，保证细胞基因组的完整。UV辐射对细胞的基因组DNA造成断裂损伤，必将导致细胞周期发生变化。因此利用细胞流式仪来检测化合物对变化的细胞周期是否具有调节抑制作用。
[0093](I) 3T3细胞预12孔板，培养过夜；
[0094](2)细胞药物处理:将药物做浓度稀释，加入细胞，24h后UVA辐射lh，60 μ ff/cm2,细胞培养箱培养24h后收样品；
[0095](3)胰酶消化细胞,转至1.5mL离心管，1000rpm/min离心5min,弃上清，PBS洗两遍，离心条件同上，弃PBS，加入500 μ L的70%乙醇4度固定过夜；
[0096](4)弃PBS，加入500 μ L的70%乙醇4°C固定过夜；
[0097](5) 1000rpm/min, 4°C,离心5min,弃乙醇,加入PBS重悬，同上离心；
[0098](6)弃PBS，加入含有DNA酶I和PI染料的PBS中，200目的筛网过滤；[0099](7)上细胞流式仪测周期；
[0100]流式细胞仪检测细胞周期，结果如图3中所示，其中Gl是DNA合成前期，细胞静止期；S为DNA复制时期；G2是DNA合成后期，为增殖期的细胞。如果Gl加药前>G1加药后，S期和G2期的细胞比例増加，细胞则表现增殖活跃。
[0101]图3中的流式结果表明:本发明实施例1中制备得余甘子提取物与UVA组数据相比，余甘子提取物具有保护作用。
[0102]4.5抗炎抗衰老作用机理验证实验
[0103]MTT法检测筛选的本发明实施例1中制备得余甘子提取物对RAW264.7细胞毒性，方法如下:
[0104](I)收集对数期RAW264.7细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入IOOy L，铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔；
[0105](2)2.5%C02，37°C孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，随机分为60组，每个药物一組，每组加入浓度梯度的余甘子提取物，梯度浓度依次为:200 u g/mL、100 u g/mL、50 u g/mL , 25 u g/mL , 12.5 u g/mL , 6.25 ii g/mL,姆个梯度设置 3 个复孔,姆组设置3个空白孔，5%C02，37°C孵育16-48小时；
[0106](3)每孔加入10 u LMTT溶液，继续培养4h，终止培养，小心吸去孔内培养液；
[0107](4)每孔加入IOOii L 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪0D570nm处测量各孔的吸光值；
[0108]本发明实施例1中制备得余甘子提取物对RAW264.7细胞的毒性如图4中所示，从图4中可以看出，余甘子提取物对细胞无毒害的最大无毒浓度。
[0109]4.6抗炎抗衰老作用功效验证实验
[0110]PCR检测本发明实施例1中制备得余甘子提取物在转录水平抑制或降低炎症因子的产生，方法如下:对筛选得到的具有抗UVA辐射的化合物余甘子提取物在巨噬细胞RAW264.7细胞模型进行抗炎活性实验。
[0111](I)取对数期RAW264.7细胞，预24孔板，铺板调整细胞密度为3X 105cellS/mL ；
[0112](2)加入50ng/mL的PMA，培养48h，在显微镜下观察细胞形态；
[0113](3)小心吸去孔内培养基，用PBS冲洗2遍后，加入无血清的1640培养基，培养24h ；
[0114](4)加入100ng/mL的LPS以及余甘子提取物，培养18~24h ；
[0115](5)抽提给药组细胞的RNA，使用real-time PCR法对IL-6和IL-1 (Interleukin-6, nterleukin-1，白细胞介素 6 白细胞介素 I)，TNF- a (tumor necrosisfactor-alpha,肿瘤坏死因子)，MCP-1 (monocyte chemotactic protein-1,巨卩遼细胞趋化蛋白I)、和iNOS进行定性定量分析，观察活性物对炎性因子表达的影响，本发明实施例1中制备得余甘子提取物对炎症因子的表达的抑制作用。
[0116]IL-6 和 IL-1 (Interleukin-6, nterleukin-1,白细胞介素 6 白细胞介素 I)的结果如图5和6中所不,TNF-a (tumor necrosis factor-alpha,肿瘤坏死因子)的结果如图7中所不，MCP-1 (monocyte chemotactic protein-1,巨卩遼细胞趋化蛋白I)和iNOS结果如图8和9中所示。
[0117]从图5-9中可以看出:检测本发明实施例1中制备的余甘子提取物表现出不同的抑炎作用，本发明实施例1中制备的余甘子提取物对IL-6的抑制作用显著。
[0118]实际上，本发明 申请人:还同时对其他来源的余甘子提取物如市售的余甘子提取物或以其它方法制备的余甘子提取物进行上述试验，结果表明，也具有上述试验效果，具有抗福射和抗衰老功效。
[0119]上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置換方式，都包含在本发明的保护范围。
【权利要求】
1.余甘子提取物在制备具有抗辐射和抗衰老功效的保健食品或化妆品中的应用。
2.根据权利要求1所述的余甘子提取物在制备具有抗辐射和抗衰老功效的保健食品或化妆品中的应用，其特征是:所述的余甘子提取物中诃黎勒酸的质量百分含量在70%以上。
3.一种具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:含以下步骤: (1)前处理:将原料余甘子洗净，粉碎； (2)提取:采用甲醇超声室温提取后，过滤，将滤液真空减压处理回收甲醇，得到B浸膏； (3)萃取:将B浸膏采用正丁醇超声萃取后，过滤，得到C萃取液； (4)上样分离:将C萃取液用水稀释后，过滤，上样于两根相串联的装有PIP0-02分离材料的分离柱中，用甲酸水溶液洗脱后，将两根分离柱分开，第二根分离柱先用水洗，再用甲醇洗，得到目标段D馏分； (5)浓缩干燥:将D馏分经真空减压浓缩后，真空干燥得到余甘子提取物。
4.根据权利要求3所述的具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:步骤(1)中粉碎后过筛至30-60目。
5.根据权利要求3所述的具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:步骤(2)中甲醇的用量为余甘子原料总重量的8-10倍。
6.根据权利要求3所述的具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:步骤(2)中甲醇超声室温提取2次，每次20-40分钟，500-800目滤布过滤，合并滤液，真空减压回收甲醇，得到B浸膏，B浸膏的重量占余甘子原料总重量的20-30%。
7.根据权利要求3所述的具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:步骤(3)中正丁醇的用量与B浸膏的质量相同，超声萃取时间为30-50分钟。
8.根据权利要求3所述的具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:步骤(4)中将C萃取液用占其总质量15-20倍的水稀释。
9.根据权利要求3所述的具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:步骤(4)中用甲酸水溶液洗脱10-15倍余甘子原料重洗脱液，甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量为0.2% ;第二根分离柱用水洗3-5倍余甘子原料重洗脱液，再用甲醇洗2-3倍余甘子原料重洗脱液。
10.根据权利要求3所述的具有抗辐射和抗衰老功效的余甘子提取物的制备方法，其特征是:步骤(5)中将D馏分在40-70°C经真空减压浓缩后，真空干燥获得的余甘子提取物，余甘子提取物中经HPLC检测诃黎勒酸的质量百分含量为70%以上。
【文档编号】A61Q19/08GK103585052SQ201310526465
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月30日 优先权日:2013年10月30日
【发明者】赵宏伟, 王一飞, 吴志韻, 袁晓, 唐青涛, 马忠华 申请人:无限极（中国）有限公司