专利名称：一种胚胎素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种胚胎素的制备方法，尤其是涉及一种具有较高生物活性的鸡胚胎素的制备方法。
二.
背景技术：
鸡胚胎素是一组具有高生物活性的生长刺激因子、神经生长因子、活性多肽、活性多糖、多种氨基酸和丰富的其它营养物质的小分子混合物，它们具有促进生长和活化生理功能的精华成分，能激活人体组织细胞，活化组织器官功能，调节人体各种免疫力，提高人体抵抗疾病的能力，并可延缓衰老，其中所含的生长刺激因子可以增加皮肤含水量、促进上皮细胞的新陈代谢，经过一定时间的应用，可延缓真皮层衰老、萎缩，使皮肤真皮层饱满，并可增加含水量，使表皮光滑滋润。在鸡受精卵孵化的短短过程中，发生了巨大的变化，在此变化过程中伴随产生大量的生长刺激因子、神经生长因子、活性多糖、活性多肽、多种氨基 酸和丰富的其他营养物质，具有极高的营养价值和美容药用价值。在现有技术中，人们提取胚胎素的材料均为鸡胚胎，虽能提取具有较高活性的鸡胚胎素，但是过程复杂，耗时长，仪器设备要求也比较高。本发明中选用孵育7 11天的鸡受精卵，去除蛋壳，鸡胚胎，蛋黄，将其剩余物包括尿囊液、羊水、尿囊液绒毛尿囊膜血管网在内的鸡胚成分做为材料提取鸡胚胎素，制备过程简易，耗时短，同样也提取出了具有较高活性的鸡胚胎素。
三.
发明内容
本发明的目的是在现有的理论技术基础上有所改进，取材和以往不同，以孵育7 11天的鸡受精卵为材，将蛋壳、蛋黄、鸡胚胎去除，将剩余物包括尿囊液、羊水、尿囊液绒毛尿囊膜血管网在内的等物质经过简单加工提取了含有高效生物活性的鸡胚胎素，为生产胚胎素提供了一种简便快速的方案。本发明的技术方案是一种胚胎素的制备方法，包括精选受精卵和孵化，包括下列具体步骤a :精选鸡受精卵，表面常规去污，常规孵化7 11天。b :将粉碎后的鸡胚成分进行打浆，打浆时在鸡胚中加入4 6倍鸡胚成分体积预冷至O 4°C的无菌生理盐水,在50 80转/分的搅拌速度下搅拌6 10分钟。c :将打成浆的鸡胚成分进行4 6次反复冻融，冰冻温度为-20 _30°C，每次冰冻时间为I 4小时，室温条件下融化。d :将反复冻融的鸡胚成分经20目絹布过滤。过滤后再加入4 6倍体积预冷的生理盐水经3 μ过滤器再次进行过滤，获得的滤液即为鸡胚胎素溶液。e :将滤液冷冻干燥后得到的疏松团块状物质即为所述的鸡胚胎素。f :在相对湿度小于30%的环境中，将所得到的鸡胚胎素置于密闭容器中进行避光保存，以备用。
所述常规孵化方法中的孵化参数是①孵化温度36 38°C ;②孵化湿度相对湿度为40 60%左右③通风换气保持鮮蛋箱空气中的氧含量在21%以上；④翻蛋每I 2小时翻蛋I次； 孵化至7 11天，取出孵化蛋后弃去蛋壳、鸡胚胎、蛋黄。所述鸡胚成分粉碎的方法是将去除蛋壳、鸡胚胎、蛋黄后的鸡胚成分，主要成分包括尿囊液、羊水、尿囊液绒毛尿囊膜血管网在内的物质，置于低温冰柜中-20 -30°C冰冻，冰冻I 10小时后用粉碎机械将其粉碎至50 90目。所述的反复冻融是将打浆后的鸡胚成分置于低温冰柜中，将样品冷冻至-20 -30°C后，冰冻I 4小时，然后置于室温条件下自然融化至冰水共存时，再置于低温冰柜中，将样品冷冻至-20 -30°C，冰冻I 4小时，如此反复冻融3 5次。所述的过滤方法是将反复冻融后的鸡胚成分经过20目絹布过滤，然后再经过3 μ过滤器过滤。
所述的冷冻干燥方法是将所得到的超滤液置于无菌不锈钢托盘中，装料厚度< I. 5厘米，放入预先消毒、预冷后的冻干机冻干舱内，调节冻干参数，将上述超滤液均匀冷冻至-40°C以下，然后依次开动冻干机真空系统中的真空泵和罗茨泵，调节真空度在
6.5 13Pa以下，保持2 3小时，然后开动冻干机中的加热系统，加热过程中注意并保持真空度在6. 5 13Pa以外，加热时物料最高温度不得超过35°C，当加热至物料温度稳定在35°C，真空度稳定在SPa以下时，保持I 3小时，即关机、出料，所得到的疏松团块状物即为鸡胚胎素。本发明的积极有益效果是I.本发明利用简单的制浆、多次过滤技术制备了鸡胚胎素，操作简单，节省成本。2.本发明的鸡胚胎素的制备方法，保持了鸡胚胎中的各种生物活性物质。所生产的鸡胚胎素不但营养机体，还能促进机体组织的代谢，对机体的免疫起到调节作用。3.本发明鸡胚胎素的制备方法所获得的鸡胚胎素是一组具有高生物活性的生长刺激因子、神经生长因子、活性多糖、活性多肽、多种氨基酸和丰富的其他营养物质的小分子混合物，它们具有促生长和活化生理功能的精华成分，能激活人体组织细胞，活化组织器官功能，调节人体各种免疫力，提高人体抵抗疾病的能力，并可延缓衰老，其中所含的“尿囊素”和生长刺激因子可以增加皮肤含水量、促进上皮细胞的新陈代谢，经过一定时间的应用，可延缓衰老、萎缩，使皮肤真皮层饱满，并可增加表皮含水量，使表皮光滑滋润。所获得的高生物活性鸡胚胎素可以被广泛用于制备高活性生物药品、功能性食品和化妆品等行业。4.本发明鸡胚胎素的制备方法所获得的鸡胚胎素具有较好的抗氧化能力，能显著地提高D-半乳糖亚急性衰老模型小鼠血液中SOD的活性，降低血清中MDA浓度。5.本发明鸡胚胎素的制备方法所获得的鸡胚胎素能显著改善或调整衰老细胞的新陈代谢，提高细胞的生命力，延缓机体和皮肤衰老的进程。
四.
具体实施例方式实施例一精选鸡受精卵，表面常规去污，常规孵化9天，所选鸡受精卵为产后3 7天内，外形规则，无损伤。常规孵化方法中的孵化参数是①孵化温度37°C、孵化湿度60%左右；③通风换气保持鮮蛋箱空气中的氧含量在21 %以上；④翻蛋每2小时翻蛋I次； 孵化至9天，取出孵化蛋后弃去蛋壳、鸡胚胎、蛋黄。将粉碎后的鸡胚成分进行打浆，打浆时在鸡胚中加入4倍鸡胚成分体积预冷至4°C的无菌生理盐水，在80转/分的搅拌速度下搅拌10分钟，制成浆。将打成浆的鸡胚成分进行6次反复冻融，冰冻温度为-20 -30°C，每次冰冻时间为4小时，室温条件下融化。反复冻融后20目絹布过滤。过滤后加入6倍体积预冷的生理盐水经3 μ过滤器再次进行过滤，获得的滤液即为鸡胚胎素溶液。将所得到的超滤液置于无菌不锈钢托盘中，装料厚度I. 3厘米，放入预先消毒、预冷后的冻干机冻干舱内，调节冻干参数，将上述超滤液均匀冷冻至_40°C以下，然后依次开动冻干机真空系统中的真空泵和罗茨泵，调节真空度在13Pa以下，保持3小时，然后开动冻干机中的加热系统，加热过程中注意并保持真空度在13Pa以外，加热时物料最高温度不得超过35°C，当加热至物料温度稳定在35°C，真空度稳定在8Pa以下时，保持3小时，即关机、出料，所得到的疏松团块状物即为鸡胚胎素。在相对湿度小于30%的环境中，将所得到的鸡胚胎素置于密闭容器中进行避光保存，以备用。实施例二 精选鸡受精卵，表面常规去污，常规孵化8天，所选鸡受精卵为产后3 7天内，外形规则，无损伤。常规孵化方法中的孵化参数是①孵化温度38°C ;孵化相对 湿度50%左右；③通风换气保持鮮蛋箱空气中的氧含量在21 %以上；④翻蛋每I小时翻蛋I次孵化至8天，取出孵化蛋后弃去蛋壳、鸡胚胎、蛋黄。将粉碎后的鸡胚成分进行打浆，打浆时在鸡胚中加入4倍鸡胚成分体积预冷至0°C的无菌生理盐水，在50转/分的搅拌速度下搅拌6分钟制成浆。将打成浆的鸡胚成分进行4次得反复冻融，冰冻温度为-20 -30°C，每次冰冻时间为3小时，室温条件下融化。将反复冻融的鸡胚成分经20目絹布过滤。过滤后加入5倍体积预冷的生理盐水经3 μ过滤器再次进行过滤，获得的滤液即为鸡胚胎素溶液。将所得到的超滤液置于无菌不锈钢托盘中，装料厚度I. I厘米，放入预先消毒、预冷后的冻干机冻干舱内，调节冻干参数，将上述超滤液均匀冷冻至40°C以下，然后依次开动冻干机真空系统中的真空泵和罗茨泵，调节真空度在12Pa以下，保持2小时，然后开动冻干机中的加热系统，加热过程中注意并保持真空度在12Pa以下，加热时物料最高温度不得超过35°C，当加热至物料温度稳定在35°C，真空度稳定在8Pa以下时，保持2小时，即关机、出料，所得到的疏松团块状物即为鸡胚胎素。在相对湿度小于30%的环境中，将所得到的鸡胚胎素置于密闭容器中进行避光保存，以备用。鸡胚胎素活性测定实验如下I.实验材料I. I.药物与试剂鸡胚胎素，符合研究者提出的质量标准D-半乳糖(D-gal)及其余试剂均为市售国产生化试剂或分析纯化学试剂；S0D，MDA测定试剂盒，南京建成生物工程研究所提供；四乙氧基丙烷(TAP)，瑞士 FluKa产品。1.2.动物健康昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半，由天津医科大学动物实验中心提供。2.方法与结果2. I.对血虚模型小鼠红细胞及血红蛋白的影响取昆明种小鼠16只，体重17 20g，雌雄各半，随机分为二组，先测出各鼠给药前红细胞(RBC)和血红蛋白(Hb)值，然后尾部放血发法造成失血性血虚模型(RBC、Hb均明显低于正常值)后，分别每天灌胃鸡胚胎素或生理盐水，连续给药15天，末次给鸡胚胎素2时后，尾部采血测RBC、Hb值，详细结果参见表I :表I鸡胚胎素对血虚模型小鼠红细胞和血红蛋白的影响(X土s)
权利要求
1.一种胚胎素的制备方法，包括精选受精卵和孵化，其特征是，包括下列具体步骤 a :精选鸡受精卵，表面常规去污，常规孵化7 11天，所选鸡受精卵为产后3 7天内，外形规则，无损伤。将孵化好的受精卵表面进行常规消毒，去除蛋壳、胚体和蛋黄，将剩余物质放入冰柜中，在< _20°C的温度条件下，冰冻I 10小时，然后对鸡胚成分进行粉碎。
b :将粉碎后的鸡胚成分进行打浆，打浆时在鸡胚中加入4 6倍鸡胚成分体积预冷至O 4°C的无菌生理盐水,在50 80转/分的搅拌速度下搅拌6 10分钟。
c :将打成浆的鸡胚成分进行4 6次反复冻融，冰冻温度为-20 -30°C，每次冰冻时间为I 4小时，室温条件下融化。
d:将反复冻融的鸡胚成分经20目絹布过滤。
过滤后再加入4 6倍体积预冷的生理盐水经3 μ过滤器再次进行过滤，获得的滤液即为鸡胚胎素溶液。
e :将滤液冷冻干燥后得到的疏松团块状物质即为所述的鸡胚胎素。
f:在相对湿度小于30%的环境中，将所得到的鸡胚胎素置于密闭容器中进行避光保存，以备用。
2.根据权利要求书I所述的鸡胚胎素制备方法，其特征是所述常规孵化方法中的孵化参数是 ①孵化温度36 38°C ;②孵化湿度相对湿度为40 60% ;③通风换气保持孵蛋箱空气中的氧含量在21%以上；④翻蛋每I 2小时翻蛋I次； 孵化至7 11天，取出孵化蛋后弃去蛋壳、鸡胚胎、蛋黄。
3.根据权利要求书I所述的鸡胚胎素制备方法，其特征是所述鸡胚成分粉碎的方法是将去除蛋壳、鸡胚胎、蛋黄后的鸡胚成分，主要成分包括尿囊液、羊水、尿囊液绒毛尿囊膜血管网在内的物质，置于低温冰柜中-20 -30°C冰冻，冰冻I 10小时后用粉碎机械将其粉碎至50 90目。
4.根据权利要求书I所述的鸡胚胎素制备方法，其特征是所述的反复冻融是将打浆后的鸡胚成分置于低温冰柜中，将样品冷冻至-20 -30°C后，冰冻I 4小时，然后置于室温条件下自然融化至冰水共存时，再置于低温冰柜中，将样品冷冻至-20 -30°C，冰冻I 4小时，如此反复冻融3 5次。
5.根据权利要求书I所述的鸡胚胎素制备方法，其特征是所述的过滤方法是将反复冻融后的鸡胚成分经过20目絹布过滤，然后再经过3μ过滤器过滤。
6.根据权利要求书I所述的鸡胚胎素制备方法，其特征是所述的冷冻干燥方法是将所得到的超滤液置于无菌不锈钢托盘中，装料厚度< I. 5厘米，放入预先消毒、预冷后的冻干机冻干舱内，调节冻干参数，将上述超滤液均匀冷冻至_40°C以下，然后依次开动冻干机真空系统中的真空泵和罗茨泵，调节真空度在6. 5 13Pa以下，保持2 3小时，然后开动冻干机中的加热系统，加热过程中注意并保持真空度在6. 5 13Pa以下，加热时物料最高温度不得超过35°C，当加热至物料温度稳定在35°C，真空度稳定在8Pa以下时，保持I 3小时，即关机、出料，所得到的疏松团块状物即为鸡胚胎素。
全文摘要
本发明涉及了一种胚胎素的制备方法，首先是选取鸡受精卵，将其表面进行消毒，去除蛋壳、弃去卵黄和鸡胚，将剩余物质即鸡胚成分冰冻粉碎，然后加入预冷的生理盐水制浆，经20目绢布和3μ过滤器过滤后，得到的滤液即为鸡胚胎素溶液。此胚胎素含有氨基酸、小分子多肽、生长调节因子、核酸衍生物等多种生物活性物质，具有较高的营养价值，美容价值与药用价值等。该方法的优点在于能够简便快速大量地提取具有较高生物活性的胚胎素。
文档编号A61Q19/08GK102908365SQ20111021937
公开日2013年2月6日 申请日期2011年8月2日 优先权日2011年8月2日
发明者李婷 申请人:天津泽世德生物医药有限公司