专利名称：一种制备苦杏仁提取物的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备苦杏仁提取物的方法。
背景技术：
苦杏仁为常用中药，始载于《神农本草经》，为蔷薇科樱桃属植物杏O^unus armeniaca)、山杏(P. armeniacaL Var. ansu)禾口野杏(Armeniaca. Sibirica Lam.)的干燥成熟种子。苦杏仁资源在我国十分丰富，主产于东北、华北、西北、内蒙古、新疆、辽宁、吉林及长江流域(程黎晖.苦杏仁炮制的历史沿革探讨[J].海峡药学，2009 :21(4) :84-86) 0苦杏仁的主要成分包括苦杏仁苷(3% -4% )、苦杏仁油(35% -50% )和苦杏仁蛋白(对％-30%)。苦杏仁苷具有镇咳平喘、抗肿瘤、降血糖以及抗凝血等作用，迄今它已成为医药上常用的祛痰止咳剂、辅助性抗癌药物，另外，临床上用其治疗气滞、肠燥便秘、水肿胀满、支气管哮喘、水肿、脚气、小便不利等也取得了很好的效果。苦杏仁油中的不饱和脂肪酸含量达95%以上，这些不饱和脂肪酸在人体内不仅不会产生脂肪积累，并且可以降低低密度脂蛋白和血清胆固醇的水平，有利于血管的软化，具有防治高血压、高血脂等心血管疾病的疗效(Andrea R. Josse, Cyril W. C. Kendall, Livia S. A. Augustin, et al. Almonds and postprandial glycemia-adose-response study[J]. Metabolism,2007, 56(3) :400-404)。苦杏仁油凝固点很低(_20°C )，在_10°C时仍能保持清亮的液态，_20°C时才凝结。因此，苦杏仁油不仅是世界著名的优质食用油，而且还是制作高级化妆品、高级润滑油和高级塑料溶剂的原料，具有十分重要的利用价值和经济价值。苦杏仁蛋白由易消化的代谢蛋白组成，主要组分为清蛋白，占总蛋白的77% 84%，其次为球蛋白和谷蛋白，醇溶蛋白含量较低(宋日钦，王建中，赵云霞.苦杏仁蛋白开发利用的前景[J].中国农学通报，2006，22(1) 68-70 ；Abd El-Aal M H，Hamza M A,Rahma E H. In vitro digestibility, physico-chemical and functional properties of apricot kernel proteins[J]. Food Chemistry, 1986，19 (3) : 197 211)，具有很高的营养价值和开发利用价值，可用于制备蛋白粉、浓缩蛋白、分离蛋白以及苦杏仁蛋白的深度加工产品。苦杏仁苷的提取可采用水提取法或乙醇回流法。苦杏仁中含有的苦杏仁苷酶可将苦杏仁苷水解，因此苦杏仁苷的分离提取需要有“灭酶保苷”的工艺。闾肖波等将苦杏仁经灭酶、脱脂、萃取、重结晶等处理，制得98%纯度的苦杏仁苷，并比较了不同溶剂的脱脂效果以及不同浓度和用量乙醇对重结晶的影响(闾肖波，苏宝根，杨亦文等.纯苦杏仁苷的制备 [J].中国医药工业杂志，2006，37 (3) :165-167)，结果表明，70 80°C水浴中用石油醚提取 3次所得的脱脂粕用无水乙醇回流提取3次，所得粗品用无水乙醇重结晶3次，得到苦杏苷的纯度为98%。崔国庭等研究了用大孔吸附树脂分离纯化苦杏仁苷的工艺，结果表明，大孔树脂LSA-30比较适合吸附和分离苦杏仁苷，其在室温条件下，pH值在6-9时吸附能力较强， 被吸附的苦杏仁苷用PH值为6或pH值为8的质量百分浓度为60%的乙醇水溶液在40°C条件下，以流速1-anl/min洗脱，得到的产品为白色晶体，纯度为93.6% (崔国庭，田呈瑞.大孔吸附树脂分离纯化苦杏仁苷的研究[J].食品工业科技，2005，:89-92)。崔国庭等研究了苦杏仁苷的乙醇提取条件，即用60%乙醇在80°C条件下提取3次，每次45min (崔国庭，田呈瑞.苦杏仁苷乙醇提取技术研究[J].食品工业科技，2005，沈(3) :118-119).吴迪分别采用超声波提取和乙醇回流提取苦杏仁苷，原料经灭酶、脱脂后，回流提取的最佳条件为提取温度70°C、料液比1 18、时间40min，超声提取的最佳操作条件为提取温度 80°C，功率90W，料液比1 18，时间30min。超声提取在保证提取率的前提下，缩短了提取时间，提高了效率(吴迪.山杏仁中苦杏仁苷的提取工艺研究[D].北京北京林业大学， 2006)。苦杏仁油的工业化生产多采用机械压榨法和溶剂萃取法。机械压榨法油脂得率较低、饼粕残油率高达8% 10% ；有机溶剂萃取油脂回收率虽大有提高，但存在溶剂回收困难和产品有机溶剂残留问题。超临界(X)2萃取技术克服了溶剂法有机溶剂残留以及压榨法产率低、精制工艺烦琐、油品色泽不佳的缺陷。0zkal对苦杏仁油超临界CO2萃取进行了一系列研究，得出CO2流速48/1^11、压力451^￡1、温度601和乙醇浓度3(%时萃取301^11，苦杏仁油萃取率的最大预测值为0. 371g/g杏仁，且超临界(X)2萃取的苦杏仁油与用己烷提取的油脂在脂肪酸组成上没有显著差别(Ozkal S. G.，Yener Μ. E.，Bayindirli L. · Mass Transfer modeling of apricot kernel oil extraction with supercritical carbon dioxide[J]. J. of Supercritical Fluids, 2005, 35 :119 127)。但与冷榨法相比，超临界萃取的油脂容易氧化，并且超临界萃取设备一次性投入和能源消耗较大，还未被用于大规模的工业化生产。与超临界萃取法相比，水酶法提取油脂质量高且操作设备简单。国外水酶法提取油脂已得到广泛应用，国内也已有对大豆、玉米胚芽、油菜籽和花生等油料进行水酶法提油的报道 (李淑芳.杏仁油酶法提取工艺的研究[D].太谷山西农业大学，200 ，但仍限于研究阶段。用于水解的酶包括纤维素酶(CE)、半纤维素酶(HE)、果胶酶(PE)、蛋白酶(PR)、α -淀粉酶(α-AM)、α -聚半乳糖醛酸酶(α-PG)和β -葡聚糖酶(β _GL)等。李淑芳用“1398” 中性蛋白酶提取杏仁油，提油率可达到81. 38% (马凯，王继勋，卢春生.新疆地区低糖杏脯加工技术[J].保鲜与加工，2007，7(1) :48 49)。水酶法提油的缺点是易引起乳化问题，而利用蛋白酶将大分子蛋白质水解成小分子肽则可以明显改善乳化现象，增加游离油得率。为进一步提高水酶法油脂提取率，研究者用超声技术辅助提取杏仁油，可使萃取率提高20%，同时缩短萃取时间、降低能耗(Riera E,Golds Y,Blanco A，et al. Mass transfer enhancement in supercritical fluids extraction by means of power ultrasound[J]· Ultrasonics Sonochemistry,2004,11(3-4) :214-244 ；Aparna S, Gupta M N. Ultrasonic pre-irradiation effect upon aqueous enzymatic oil extraction from almond and apricot seeds [J]. Ultrasonics Sonochemistry, 2006,13 (6) :529 534)。但是超声辅助提取易引起油脂氧化，产生不良风味(Chemat F,Grondin I. Deterioration of edible oil during food processing by ultrasound[J]. Ultrasonics Sonochemistry,2004 (11) 13 15)。通常采用碱溶酸沉法或酒精水溶液分离提取苦杏仁蛋白。由于碱溶酸沉法易造成蛋白质变性和有害物质的生成，不利于蛋白质的后续加工。而水酶法具有提取温度较低、提取时间短、提取率高等优点，能避免传统分离方法中蛋白质容易变性的弊端，具有很好的应用前景。反胶束法也可制备高品质的杏仁蛋白，是提取杏仁蛋白和杏仁油比较好的方法，不仅可以改进传统工艺制油得粕再脱溶的复杂冗长流程，而且反应条件温和。杨潞芳研究了用AOT/异辛烷反胶束体系萃取分离杏仁蛋白质和油脂，蛋白质得率达70.3%，油脂萃取率 79.4% (杨潞芳，反胶束法分离杏仁蛋白和油脂的研究[D].太古山西农业大学，2004。)如上所述，人们对苦杏仁中苦杏仁苷、苦杏仁油和杏苦仁蛋白的分离提取进行了一些研究。但以上研究均未实现苦杏仁苷、苦杏仁油和苦杏仁蛋白三种成分的全利用，仅仅能利用其中的两种成分要么利用苦杏仁油和苦杏仁蛋白(苦杏仁粉碎前不经高温处理)， 要么利用苦杏仁苷和苦杏仁油(苦杏仁粉碎前需经高温处理)。这是由于苦杏仁中含有苦杏仁苷酶，在苦杏仁形态完整的情况下，由于细胞膜及细胞器膜等的分工分室功能，苦杏仁苷酶不会发生作用。一旦苦杏仁破碎，苦杏仁苷酶即可与底物苦杏仁苷相接触，将其水解为葡萄糖、苯甲醛和氢氰酸，如图1所示。为了提取苦杏仁苷，苦杏仁在粉碎前需要进行高温处理，以达到“灭酶保苷”的目的。但高温处理又导致苦杏仁蛋白的严重变性，影响了苦杏仁蛋白的深度开发与利用。因此，如何开发一条科学合理、简便易行的工艺技术路线，实现苦杏仁油、苦杏仁蛋白和苦杏仁苷的全利用，已成为苦杏仁精深加工与综合利用中亟需解决的难题。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备苦杏仁提取物的方法。本发明提供的一种制备苦杏仁提取物的方法，包括如下步骤1)将苦杏仁进行干燥，使所述苦杏仁的水分活度为0. 10-0. 70，得到干燥后的苦杏仁；2)在保持所述干燥后的苦杏仁的水分活度为0. 10-0. 70的条件下，将所述干燥后的苦杏仁粉碎至10-120目，得到粉碎后的苦杏仁；3)在保持所述粉碎后的苦杏仁的水分活度为0. 10-0. 70的条件下，提取所述粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到所述苦杏仁油和苦杏仁粕；4)用质量百分浓度为50% -95%的乙醇水溶液对所述苦杏仁粕进行分离提取，得到苦杏仁苷和苦杏仁蛋白；所述提取步骤中，温度为5-60°C ；所述苦杏仁提取物选自a、b和c中的三种、任意两种或任意一种，其中，所述a为所述步骤幻所得苦杏仁油，所述b为所述步骤4)所得苦杏仁苷，所述c为所述步骤4)所得苦杏仁蛋白。该方法的步骤1)干燥步骤中，干燥方式选自晒干、风干、烘干、冻干和脱水剂干燥中的至少一种。所述烘干可为常压或真空烘干，所述常压烘干温度可为50°C、时间可为48 小时，所述真空烘干的真空度可为0. 09MPa，温度可为40°C，时间可为2小时；各种常用的冻干方法均适用。所述脱水剂干燥方法中，脱水剂选自甲醇、乙醇、甘油、葡萄糖和食盐中的至少一种，优选乙醇。该步骤中，苦杏仁的水分活度可为0. 40-0. 60,0. 40-0. 53,0. 40-0. 50、 0. 50-0. 60,0. 50-0. 53 或 0. 53-0. 60。所述步骤幻中，所述干燥后的苦杏仁的水分活度可为0.40-0. 60、0. 40-0. 53、 0. 40-0. 50,0. 50-0. 60,0. 50-0. 53 或 0. 53-0. 60。所述步骤幻提取步骤中，提取方法选自有机溶剂萃取、超临界(X)2流体萃取和压榨提取中的至少一种。所述有机溶剂萃取方法中，所述有机溶剂选自正己烷、环己烷和植物油抽提溶剂中的至少一种，优选植物油抽提溶剂，该植物油抽提溶剂是按照国家标准GB16629-2008制备所得溶剂。所述粉碎后的苦杏仁与所述有机溶剂的用量比为IKg 1-8L， 优选IKg 3-4L。所述超临界CO2流体萃取中，CO2的压力为25-50MPa，优选35MPa，温度为35-60°C，优选42°C，时间为20-200min，优选140min。所述压榨萃取方法中，压力为 20-60MPa,优选45MPa，温度为20_65°C，优选55°C。该步骤中，粉碎后的苦杏仁的水分活度可为 0. 40-0. 60,0. 40-0. 53,0. 40-0. 50,0. 50-0. 60,0. 50-0. 53 或 0. 53-0. 60。所述步骤4)中，提取温度优选为45°C，时间为70-110min，具体可为70-80min、 70-90min、80-90min、90-110min或80_110min ；该步骤中，所用乙醇水溶液的质量百分浓度可为 50-80%,50-70%,50-65%,50-60%,60-80%,60-70%,60-65%,65-80%,65-70%^； 70-80% ；所述分离提取的步骤为a)将所述苦杏仁粕于质量百分浓度为50% -95%的乙醇水溶液中进 行回流提取， 收集提取液；b)将所述步骤a)得到的提取液减压浓缩后，于无水乙醇中进行重结晶，干燥后得到所述苦杏仁苷和提取完苦杏仁苷的粗品，再将所述提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥后得到所述苦杏仁蛋白。该分离提取的步骤b)减压浓缩步骤中，压力为20_100kPa，时间为20-120min，温度为20-80°C;所述干燥步骤中，温度为80-140°C，时间为l_4h ；所述真空干燥步骤中，真空度为 50-120kPa，优选 75-80kPa，时间为 40_180min，优选 90_120min，温度为 20_80°C，优选 50-60 "C。由于苦杏仁苷易被苦杏仁苷酶分解，因此，降低苦杏仁油、苦杏仁苷和苦杏仁蛋白分离提取过程中的苦杏仁苷酶活性是实现三者全利用的关键。在苦杏仁粉碎和杏仁油萃取时，通过控制水分活度以降低苦杏仁苷酶的活性，适宜的水分活度为0. 10-0. 70 ；继而在苦杏仁苷和苦杏仁蛋白分离提取时，通过控制乙醇浓度和操作温度来降低苦杏仁苷酶活性并防止苦杏仁蛋白过度变性，乙醇浓度以50%-95%、操作温度不超过60°C为适宜。本发明提供的方法，实现了苦杏仁苷、苦杏仁油和苦杏仁蛋白的全利用，为苦杏仁精深加工与综合利用奠定了基础。
图1为苦杏仁苷酶的水解催化作用。图2为苦杏仁苷的HPLC谱图，其中，a为苦杏仁苷标准样品的HPLC谱图，b为实施例1制备所得苦杏仁苷的HPLC谱图。图3为用HPLC方法测定苦杏仁苷纯度时所用标准曲线。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。下述方法如无特别说明，均为常规方法。所述测定方法如无特别说明，均为常规方法。下述实施例中，苦杏仁油均采用索氏抽提法测定，苦杏仁苷均采用高效液相色谱法测定，苦杏仁蛋白均采用凯氏定氮法测定。其中，测定苦杏仁苷时所用高效液相色谱的检测条件均如下所示色谱柱SunfireTMC18(250mmX4. 6mm，5ym)；流动相甲醇和水以体积比30 70混勻而得的混合液；流速lml/min ；检测波长210nm ；柱温30°C ；进样量10μ 1 ；分离度 1. 2nm，所用标准曲线如图3所示，回归方程为y = 8946. 4x_30118，y为峰面积，χ为苦杏仁苷浓度，单位为yg/ml，相关系数R2 = 0.9998。实施例1、1)将苦杏仁IOOg用晒干的方法进行干燥，使该苦杏仁的水分活度为0.70，得到干燥后的苦杏仁；按照索氏抽提法对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁油进行测定，采用高效液相色谱法测定对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的苦杏仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步骤1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度为0. 70的条件下，将该干燥后的苦杏仁粉碎至10目，得到粉碎后的苦杏仁96. Sg;3)在保持步骤2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度为0. 70的条件下，在50°C下用有机溶剂提取该粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油42. 4g和苦杏仁粕51. Sg ； 所用有机溶剂为正己烷；该步骤2)所得粉碎后的苦杏仁与有机溶剂正己烷的用量比为 IKg 3L ；按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油脂过氧化值测定，对精炼后的苦杏仁油进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁油澄清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0. 08%，不溶性杂质的质量百分含量为0.05%，酸值(KOH)为 0. 32mg/g，过氧化值为 0. 27mmol/kg。4)用质量百分浓度为60%的乙醇水溶液对步骤3)所得苦杏仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2. 68g和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)47. 58g，完成苦杏仁的提取；该分离提取步骤中，温度为45°C，时间为80min。该分离提取的具体步骤为a)将步骤3)所得苦杏仁粕于质量百分浓度为60%的乙醇水溶液中进行回流提取，收集提取液；该回流提取步骤中，温度为45°C，时间为SOmin ；b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为20kPa，时间为120min，温度为20°C ) 后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10°C用无水乙醇进行重结晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为IKg 20L)，并用无水乙醇洗涤后，再于120°C干燥2小时后得到苦杏仁苷2. 68g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为80kPa，干燥时间为120min，温度为60°C)后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)47. 58g。由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得苦杏仁油、步骤4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)。由上可知，按照该实施例提供的方法进行苦杏仁的提取，苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分别为92. 6%和82. 46%。对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得结果如图2所示，该苦杏仁苷的纯度为95.6%。按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的测定方法，分别对步骤4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白 )中蛋白的质量百分含量为65.5%，脂肪的质量百分含量为0.8%，水分的质量百分含量为7.5%。实施例2、1)将苦杏仁IOOg用20mL脱水剂乙醇进行脱水，使苦杏仁的水分活度为0. 53，得到干燥后的苦杏仁；按照索氏抽提法对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁油进行测定，采用高效液相色谱法测定对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的苦杏仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步骤1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度为0. 53的条件下，将该干燥后的苦杏仁粉碎至120目，得到粉碎后的苦杏仁94. 52g ；3)在保持步骤2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度为0.53的条件下，在42°C下用超临界CO2流体萃取的方法提取该粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油43. 7g和苦杏仁粕50. 96g ；该超临界CO2流体萃取步骤中，CO2的压力为35MPa，温度为42°C，时间为 140min。按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油脂过氧化值测定，对精炼后的苦杏仁油进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁油澄清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.06%，不溶性杂质的质量百分含量为0.04%，酸值(KOH)为 0. 80mg/g，过氧化值为 0. 38mmol/kg。4)用质量百分浓度为80%的乙醇水溶液对步骤3)所得苦杏仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2. 45g和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)49. 27g，完成苦杏仁的提取；该分离提取的具体步骤为a)将步骤3)所得苦杏仁粕于质量百分浓度为80%的乙醇水溶液中进行回流提取，收集提取液；该提取步骤中，温度为45°C，时间为llOmin。b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为IOOkPa,时间为20min，温度为50°C ) 后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10°C用无水乙醇进行重结晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为IKg 20L)，并用无水乙醇洗涤后，再于120°C干燥2小时后得到苦杏仁苷2. 45g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为50kPa，，干燥时间为180min，温度为80°C)后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)49. 27g。由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得苦杏仁油、步骤4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)。由上可知，按照该实施例提供的方法进行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分别为95. 42%和75. 38%。
对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差另Ij，可知该苦杏仁苷的纯度为96. 1%。按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的测定方法，分别对步骤4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示该苦 杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为65.9%，脂肪的质量百分含量为0.71%， 水分的质量百分含量为8. 2%。实施例3、1)将苦杏仁IOOg用冻干的方法进行干燥，使苦杏仁的水分活度为0.40，得到干燥后的苦杏仁；该冻干步骤中，先使物料预冻至-40°C，然后开启真空泵，使真空度在20-40Pa 进行真空冻干操作，当物料温度接近室温时冻干完成。按照索氏抽提法对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁油进行测定，采用高效液相色谱法测定对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的苦杏仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步骤1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度为0. 40的条件下，将干燥后的苦杏仁粉碎至60目，得到粉碎后的苦杏仁93. 78g；3)在保持步骤2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度为0.40的条件下，在55°C下用压榨的方法提取该粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油40. 85g和苦杏仁粕 58. 96g ；该压榨萃取步骤中，压力为45Mpa，时间为55min。按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油脂过氧化值测定，对精炼后的苦杏仁油进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁油澄清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.04%，不溶性杂质的质量百分含量为0.06%，酸值(KOH)为 0. 55mg/g，过氧化值为 0. 32mmol/kg。4)用质量百分浓度为70%的乙醇水溶液对步骤3)所得苦杏仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2. 06g和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)48. 64g，完成苦杏仁的提取；该分离提取的具体步骤为a)将步骤3)所得苦杏仁粕于质量百分浓度为70%的乙醇水溶液中进行回流提取，收集提取液；该提取步骤中，温度为45°C，时间为80min。b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为60kPa，时间为70min，温度为70°C ) 后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10°C用无水乙醇进行重结晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为IKg 20L)，并用无水乙醇洗涤后，再于120°C干燥2小时后得到苦杏仁苷2. 06g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为120kPa，干燥时间为40min，温度为20°C )后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)48. 64g。由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得苦杏仁油、步骤4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)。由上可知，按照该实施例提供的方法进行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷提取率分别为89. 19%和62. 38%。 对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差另U，可知该苦杏仁苷的纯度为95. 7%。按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的测定方法，分别对步骤4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为66.2%，脂肪的质量百分含量为0.85%， 水分的质量百分含量为7.9%。实施例4、1)将苦杏仁IOOg用烘干的方法进行干燥，使该苦杏仁的水分活度为0.60，得到干燥后的苦杏仁；该烘干步骤中，温度为50°C，时间为48h ；按照索氏抽提法对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁油进行测定，采用高效液相色谱法测定对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的苦杏仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步骤1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度为0. 60的条件下，将该干燥后的苦杏仁粉碎至80目，得到粉碎后的苦杏仁95. 42g ；3)在保持步骤2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度为0.60的条件下，在42°C下用超临界CO2流体萃取的方法提取该粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油43. Sg和苦杏仁粕55. 12g ；该超临界CO2流体萃取步骤中，CO2的压力为35MPa，温度为42°C，时间为 140min。按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油脂过氧化值测定，对精炼后的苦杏仁油进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁油澄清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.05%，不溶性杂质的质量百分含量为0.04%，酸值(KOH)为 0. 76mg/g，过氧化值为 0. 35mmol/kg。4)用质量百分浓度为50%的乙醇水溶液对步骤3)所得苦杏仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2. 26g和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)50. 08g，完成苦杏仁的提取；该分离提取的具体步骤为a)将步骤3)所得苦杏仁粕于质量百分浓度为50%的乙醇水溶液中进行回流提取，收集提取液；该提取步骤中，温度为45°C，时间为70min。b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为IOOkPa,时间为20min，温度为20°C ) 后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10°C用无水乙醇进行重结晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为IKg 20L)，并用无水乙醇洗涤后，再于120°C干燥2小时后得到苦杏仁苷2. 26g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为SOkPa ；干燥时间为120min，温度为60°C )后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)50. 08g。由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得苦杏仁油、步骤4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)。
由上可知，按照该实施例提供的方法进行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分别为95. 6%和69. 53%。对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差另U，可知该苦杏仁苷的纯度为96. 2%。按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的测定方法，分别对步骤4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为67.2%，脂肪的质量百分含量为0.71%， 水分的质量百分含量为8.9%。实施例5、
1)将苦杏仁IOOg用真空烘干的方法进行干燥，使该苦杏仁的水分活度为0.50，得到干燥后的苦杏仁；该真空烘干步骤中，真空度为0. 09Mpa，温度为40°C，时间为2h ；按照索氏抽提法对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁油进行测定，采用高效液相色谱法测定对作为原料的苦杏仁中的苦杏仁苷进行测定，按照凯氏定氮法对作为原料的苦杏仁中的蛋白进行测定，可知，其中油脂、苦杏仁苷和蛋白的质量百分含量分别为45.8%、 3. 25%禾口 22. 6% ；2)在保持步骤1)所得干燥后的苦杏仁的水分活度为0. 50的条件下，将该干燥后的苦杏仁粉碎至50目，得到粉碎后的苦杏仁94. 09g ；3)在保持步骤2)所得粉碎后的苦杏仁的水分活度为0. 50的条件下，在50°C下用有机溶剂提取该粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到苦杏仁油44. 4g和苦杏仁粕52. 19g ； 所用有机溶剂为植物油抽提溶剂；该步骤2)所得粉碎后的苦杏仁与有机溶剂植物油抽提溶剂的用量比为IKg 4L；按照GB/T 5525-2008植物油脂的透明度、气味、滋味鉴定法、GB/T 5528-2005 植物油脂水分及挥发物含量测定法、GB/T 5530-2005动植物油脂酸值和酸度测定、GB/T 15688-2008动植物油脂中不溶性杂质含量的测定以及GB/T5538-2005动植物油脂过氧化值测定，对精炼后的苦杏仁油进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁油澄清透明，水分及挥发物的质量百分含量为0.07%，不溶性杂质的质量百分含量为0.05%，酸值(KOH)为 0. 65mg/g，过氧化值为 0. 29mmol/kg。4)用质量百分浓度为65%的乙醇水溶液对步骤3)所得苦杏仁粕进行分离提取， 得到苦杏仁苷2. 44g和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)47. 75g，完成苦杏仁的提取；该分离提取的具体步骤为a)将步骤3)所得苦杏仁粕于质量百分浓度为65%的乙醇水溶液中进行回流提取，收集提取液；该提取步骤中，温度为45°C，时间为80min。b)将步骤a)得到的提取液减压浓缩(压力为60kPa，时间为70min，温度为50°C ) 后，添加适量无水乙醇，室温静置析晶24h后，再在10°C用无水乙醇进行重结晶(室温静置析晶步骤所得晶体与无水乙醇的用量比为IKg 20L)，并用无水乙醇洗涤后，再于120°C干燥2小时后得到苦杏仁苷2. 44g和提取完苦杏仁苷的粗品，再将该提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥(真空度为80kPa，干燥时间为120min，温度为60°C )后得到苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)47. 75g。由上可知，该方法所得苦杏仁提取物为步骤3)所得苦杏仁油、步骤4)所得苦杏仁苷和苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)。
由上可知，按照该实施例提供的方法进行苦杏仁的提取，其中苦杏仁油和苦杏仁苷的提取率分别为96. 9%和75. 0%。对步骤4)所得苦杏仁苷用高效液相色谱进行检测，所得谱图与图2无实质性差另IJ，可知该苦杏仁苷的纯度为95.9%。按照凯氏定氮法、索氏提取法和GB/T 5009. 3-2010食品中水分的测定方法，分别对步骤4)所得苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)进行检测，所得结果如下所示该苦杏仁蛋白(苦杏仁浓缩蛋白)中蛋白的质量百分含量为65.2%，脂肪的质量百分含量为0.61%， 水分的质量百分含量为7. 5%。
权利要求
1.一种制备苦杏仁提取物的方法，包括如下步骤1)将苦杏仁进行干燥，使所述苦杏仁的水分活度为0.10-0. 70，得到干燥后的苦杏仁；2)在保持所述干燥脱水后的苦杏仁的水分活度为0.10-0. 70的条件下，将所述干燥后的苦杏仁粉碎至10-120目，得到粉碎后的苦杏仁；3)在保持所述粉碎后的苦杏仁的水分活度为0.10-0. 70的条件下，提取所述粉碎后的苦杏仁中的苦杏仁油，得到所述苦杏仁油和苦杏仁粕；4)用质量百分浓度为50%-95%的乙醇水溶液对所述苦杏仁粕进行分离提取，得到苦杏仁苷和苦杏仁蛋白；所述提取步骤中，温度为5-60°C ；所述苦杏仁提取物选自a、b和c中的三种、任意两种或任意一种，其中，所述a为所述步骤幻所得苦杏仁油，所述b为所述步骤4)所得苦杏仁苷，所述c为所述步骤4)所得苦杏仁蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤1)干燥步骤中，干燥方式选自晒干、风干、烘干、真空烘干、冻干和脱水剂干燥中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述脱水剂干燥中，脱水剂选自甲醇、乙醇、甘油、葡萄糖和食盐中的至少一种；所述脱水剂与所述苦杏仁的用量比为 0.05-0. 5L IKg0
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述脱水剂为乙醇；所述脱水剂与所述苦杏仁的用量比为0.2L IKgo
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述步骤幻中，提取选自有机溶剂萃取、超临界(X)2流体萃取和压榨萃取中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述步骤幻有机溶剂萃取中，所述有机溶剂选自正己烷、环己烷和植物油抽提溶剂中的至少一种，所述粉碎后的苦杏仁与所述有机溶剂的用量比为IKg 1-8L；所述步骤3)超临界(X)2流体萃取中，(X)2的压力为25-50MPa，温度为35_60°C，时间为 20-200min ；所述步骤3)压榨萃取中，压力为20-60MPa，温度为20-65°C ；所述步骤4)中，所述乙醇水溶液的质量百分浓度为60%，所述回流提取步骤中，温度为 45°C，时间为 70-1 IOmin。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述步骤幻有机溶剂萃取中，所述有机溶剂为植物油抽提溶剂，所述粉碎后的苦杏仁与所述有机溶剂的用量比为IKg 3-4L；所述步骤3)超临界(X)2流体萃取中，(X)2的压力为35MPa，温度为42°C，时间为140min ；所述步骤3)压榨萃取中，压力为45MPa，温度为55°C。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于所述步骤4)中，所述分离提取的步骤为a)将所述苦杏仁粕于质量百分浓度为50%-95%的乙醇水溶液中进行回流提取，收集提取液；b)将所述步骤a)得到的提取液减压浓缩后，于无水乙醇中进行重结晶，干燥后得到所述苦杏仁苷和提取完苦杏仁苷的粗品，再将所述提取完苦杏仁苷的粗品真空干燥后得到所述苦杏仁蛋白。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述步骤b)减压浓缩步骤中，压力为 20-100kPa,时间为20-120min，温度为20_80°C ；所述干燥步骤中，温度为80_140°C，时间为 1-4小时；所述真空干燥步骤中，真空度为50-120kPa，时间为40-180min，温度为20_80°C。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述步骤b)真空干燥步骤中，真空度为 75-80kPa，时间为 90_120min，温度为 50_60°C。
全文摘要
本发明公开了一种制备苦杏仁提取物的方法。该方法，包括如下步骤1)将苦杏仁进行干燥，使所述苦杏仁的水分活度为0.10-0.70；2)粉碎至10目-120目；3)在保持水分活度不变的条件下，提取苦杏仁油；4)用质量百分浓度为50％-95％的乙醇水溶液对苦杏仁粕进行分离提取，得到苦杏仁苷和苦杏仁蛋白。该方法在苦杏仁粉碎和苦杏仁油萃取时，通过控制水分活度以降低苦杏仁苷酶的活性；继而在苦杏仁苷和苦杏仁蛋白分离提取时，通过控制乙醇浓度和操作温度来降低苦杏仁苷酶活性并防止苦杏仁蛋白过度变性，实现了苦杏仁油、苦杏仁蛋白和苦杏仁苷的全利用，为苦杏仁精深加工与综合利用奠定了基础。
文档编号C11B1/00GK102399622SQ201010278859
公开日2012年4月4日 申请日期2010年9月9日 优先权日2010年9月9日
发明者兰彦平, 周家华, 周连第, 常虹, 王波, 田金强 申请人:北京市农林科学院