专利名称：水飞蓟宾糖苷水溶液及皮肤外用组合物的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及水飞蓟宾的溶解技术及其溶液的利用技术。
背景技术：
已知水飞蓟素具有I型胶原蛋白产生促进作用、弹性硬蛋白产生促进作用(专利 文献1 :W02004/85429号公报)、表皮细胞分化抑制作用(专利文献2 日本特开2004-91397 号公报)、光老化防止作用(专利文献3 日本特开2006-265186号公报)、异常蛋白质除去 作用(专利文献4 日本特开2007-99650号公报)。另一方面，由于水飞蓟宾在水、油中几乎不溶解，存在难以配合成皮肤外用剂等组 合物的问题，已公开了 利用多元醇、界面活性剂、强碱进行分散的技术(专利文献5 日本 特开2006-89418号公报)、利用磷脂、聚甘油脂肪酸酯、甘油进行分散的技术(专利文献6 日本特开2006-282568号公报)。但是，使用这些技术的话存在处方设计上的制约。已知水飞蓟宾的葡萄糖糖苷、半乳糖糖苷、乳糖糖苷、麦芽糖糖苷与水飞蓟宾 相比有优异的水溶性。(参照非专利文献1 :Kosina P. et al.，Phytother. Res. 16， S33-S39(2002))。本申请人一直研究水飞蓟宾糖苷，申请了含有水飞蓟宾糖苷，具有皱纹形成抑制 效果、表皮角质分化细胞抑制效果、I型胶原蛋白产生促进效果的皮肤外用组合物的专利 (日本特愿 2008-14361)。本发明人要解决的问题是将水飞蓟宾糖苷配合于皮肤外用剂时，水飞蓟宾糖苷溶 液的经时褐变的问题。已有技术文献专利文献专利文献1 国际公开第2004/85429号公报专利文献2 日本特开2004-91397号公报专利文献3 日本特开2006-265186号公报专利文献4 日本特开2007-99650号公报专利文献5 日本特开2006-89418号公报专利文献6 日本特开2006-282568号公报非专利文献非专利文献1:Kosina P. et al.，Phytother. Res. 16，S33-S39 (2002)
发明内容
发明要解决的课题本发明以开发着色稳定性优异的水飞蓟宾糖苷溶液为课题。
课题的解决方案本发明的主要构成如下。 1. 一种水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是含有从聚氧亚烷基二甘油醚、二丙二醇、1， 2-己二醇、1，2_戊二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯甲基苷、1，3_ 丁二醇构成的组群中选出的一种 或两种以上的物质以及水飞蓟宾糖苷。2. 一种水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是将水飞蓟宾糖苷溶解在含有具有聚氧丙基 的化合物的水溶液中。3.根据2所述的水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是具有聚氧丙基的化合物是从聚氧 丙基二甘油醚、二丙二醇、聚丙二醇、聚氧丙基甲基苷、聚氧乙烯基聚氧丙基聚氧丁基甘油、 聚氧丙基甘油醚、聚氧乙烯聚氧丙基烷基醚、聚氧丙基山梨糖醇构成的组群中选出的一种 或两种以上的物质。4.根据1 3任一项所述的水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是水飞蓟宾糖苷是水飞
蓟宾麦芽苷。5. 一种含有1 4任一项所述的水飞蓟宾糖苷水溶液的皮肤外用剂。6. 一种含有1 4任一项所述的水飞蓟宾糖苷水溶液的皱纹形成抑制剂。发明效果通过聚氧亚烷基二甘油醚、二丙二醇、1，2-己二醇、1，2_戊二醇、聚乙二醇、聚氧 乙烯甲基苷、1，3_ 丁二醇的任意配合，能够实现可以抑制经时褐变的稳定的水飞蓟宾糖苷 水溶液。另外，通过配合聚氧丙基二甘油醚、二丙二醇、聚丙二醇、聚氧丙基甲基苷、聚氧乙 烯基聚氧丙基聚氧丁基甘油、聚氧丙基甘油醚、聚氧乙烯聚氧丙基烷基醚、聚氧丙基山梨糖 醇等的含有聚氧丙基化合物，能够实现可以抑制经时褐变的稳定的水飞蓟宾糖苷水溶液。因为可以实现长期保存稳定及透明性优异的水飞蓟宾高浓度水溶液，因此对于使 用水溶液的皮肤外用剂或化妆品等的剂型，可以扩大实用的适用范围。即，1.通过使用溶解性高的水飞蓟宾糖苷，可以提供使水飞蓟宾的作用机理提高的皮 肤外用组合物、皱纹形成抑制剂、表皮角质细胞分化抑制剂、老化防止用皮肤外用组合物、I 型胶原蛋白产生促进剂、日晒所致的皮肤粗糙改善剂。尤其是水溶性提高，安全性、低刺激 性改善，扩大了使用范围。2.作为水飞蓟宾糖苷，尤其化学式(1)所示的水飞蓟宾麦芽糖苷是有效的。3.本发明使用的水飞蓟宾糖苷水溶性高，可作为水溶液型的剂型利用。可制成化 妆水、膏状美容液、乳液、乳霜、面膜等皮肤外用组合物，化妆用基底乳、化妆用乳霜、乳液状 或乳霜状的粉底等化妆用皮肤外用组合物，护手霜、护腿霜、身体用乳液等身体用皮肤外用 组合物，入浴剂等。4.本发明中使用的水飞蓟宾糖苷，即使是乳液或乳霜等，水性部分也能高度配合。
图1是表示实施例1在50°C 5个月保存实验的颜色变化的图表。图2是表示实施例2的50°C保存的颜色变化在30天内推移的图表。图3是表示实施例3在50°C 3个月保存实验的颜色变化的图表。
图4是表示表皮角质细胞增殖维持实验结果的图表。图5是表示I型胶原蛋白产生促进实验结果的图表。
具体实施例方式本发明的水飞蓟宾糖苷水溶液是将水飞蓟宾糖苷溶解在含有聚氧亚烷基二甘油 醚、二丙二醇、1，2-己二醇、1，2_戊二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯甲基苷、1，3_ 丁二醇中任一种 的水溶液中的溶液。 另外，本发明的水飞蓟宾糖苷水溶液是将水飞蓟宾溶解在含有具有聚氧丙基化合 物的水溶液中的溶液。作为具有聚氧丙基的化合物，例如可以例举有聚氧丙基二甘油醚、 二丙二醇、聚丙二醇、聚氧丙基甲基苷、聚氧乙烯基聚氧丙基聚氧丁基甘油、聚氧丙基甘油 醚、聚氧乙烯聚氧丙基烷基醚、聚氧丙基山梨糖醇。水飞蓟宾(Silybin ;CAS No. 22888-70-6)是从菊科水飞蓟(学名 Silibummarianum Gaertn,别名大蓟，大翅蓟、乳蓟CAS No. 84604-20-6)中提取的 黄酮木脂素的一种，从水飞蓟中提取的黄酮木脂素总称为水飞蓟素(Silymarin5CAS No. 65666-07-1)，除水飞蓟宾之外，还含有水飞蓟宁(Silydianin =CAS No. 29782-68-1)、 水飞蓟亭(Silychristin :CAS No.33889-69-9)、异水飞蓟宾(Isosilybin :CAS No. 72581-71-6)等。水飞蓟宾，可使用色谱法从水飞蓟素中分离，此外也可通过购买试剂而获得。本发明中使用的水飞蓟宾糖苷，可按照文献(Kren V. et al. , J. Chem. Soc., Perkin Trans 1，2467-2474 (1997))，以路易斯酸为催化剂，通过在水飞蓟宾上结合用乙酰 基保护羟基的糖，进行脱乙酰化而制备。在该反应体系中，糖选择性地与水飞蓟素的伯醇的 羟基形成糖苷键。以路易斯酸为催化剂，通过使水飞蓟宾和全乙酰化麦芽糖反应生成糖苷键，脱乙 酰化，获得式(1)的水飞蓟宾麦芽糖苷。化学式1
OH
H o^Uoh
J^OH
C.尸 ^tVho
-OH
A O /CH2 HO
Π γ
OH式(1)具体地，可以按以下程序合成水飞蓟宾麦芽糖苷。[水飞蓟宾麦芽糖苷的合成]
根据Helferich的方法合成水飞蓟宾麦芽糖苷。使水飞蓟宾(3.0g、6. 2mol)和辛 _0_ 乙酰基-D-麦芽糖(6. 3g、9. 2mol)在 180ml 的二氯甲烷-乙腈(1 l、v/v)的溶剂中，在氮气存在下，与三氟化硼二甲基醚复合物 (1. 14ml、12. 4mmol)在室温下搅拌反应19小时。反应结束后用冰冷却的同时，加入饱和碳 酸氢钠水溶液，用150ml 二氯甲烷提取处理2次，在无水硫酸钠处理后用蒸发器除去提取溶 剂。 使三乙胺-甲醇-水(1 8 1)在35°C反应30小时，然后用蒸发器除去溶剂。 使用BONDESIL-ClS(Varian)进行纯化，获得水飞蓟宾麦芽糖苷(1. 0g、收率20% )。获得的 水飞蓟宾麦芽糖苷用MS图谱确认，检测出[M+H]+ 807. 5的质谱峰。以路易斯酸为催化剂，通过使水飞蓟宾和全乙酰化乳糖反应生成糖苷键，脱乙酰 化，获得式(2)的水飞蓟宾乳糖苷。化学式2
式(2)具体地，可以按以下程序合成水飞蓟宾乳糖苷。[水飞蓟宾乳糖苷的合成]根据Helferich的方法合成水飞蓟宾乳糖苷。使水飞蓟宾(3.Og,6. 2mol)和辛 _0_ 乙酰基-D-乳糖(6. 3g、9. 2mol)在 180ml 的二氯甲烷-乙腈(1 l、v/v)的溶剂中，在氮气存在下，与三氟化硼二甲基醚复合物 (1. 14ml、12. 4mmol)在室温下搅拌反应19小时。反应结束后用冰冷却的同时，加入饱和碳 酸氢钠水溶液，用150ml 二氯甲烷提取处理2次，在无水硫酸钠处理后用蒸发器除去提取溶 剂。使三乙胺-甲醇-水(1 8 1)在35°C反应30小时，然后用蒸发器除去溶剂。 使用B0NDESIL-C IS(Varian)进行纯化，获得水飞蓟宾乳糖苷(l.Og，收率20%)。获得的 水飞蓟宾乳糖苷用MS图谱确认，检测出[M+H]+ 807. 5的质谱峰。作为以本发明的水飞蓟宾糖苷为有效成分的皱纹形成抑制剂，可例举化妆水、乳 液、乳霜、面膜等皱纹改善用皮肤外用组合物，皱纹改善用医药外用品、皱纹改善用医药品 等。即使是乳液或乳霜，也可在水性部分高浓度配合水飞蓟宾糖苷。以本发明的水飞蓟宾糖苷为有效成分的表皮角质细胞分化抑制剂，可抑制表皮角 质细胞的分化，维持增殖，预防、防止、改善代谢更新的延缓，防止因年龄增长或紫外线照射引起的表皮扁平化，具有使老化皮肤再生的作用，因此可以作为老化防止用皮肤外用组合物使用。以本发明的水飞蓟宾糖苷为有效成分的I型胶原蛋白产生促进剂，使皮肤的张 力、弹性提高，可期待预防、防止、改善皱纹、松弛的效果，因此可以作为老化防止用皮肤外 用组合物进行使用。本发明中使用的聚氧亚烷基二甘油醚，是在二甘油中加成聚合氧化亚烷基而得到 的化合物。作为聚氧亚烷基二甘油醚，可以例举在二甘油中加成聚合环氧丙烷的聚氧丙基二 甘油醚，在二甘油中加成聚合环氧乙烷的聚氧乙基二甘油醚。聚氧丙基二甘油醚可以使用市售品，作为市售品可以例举阪本药品工业株式会社 制SY-DP4 (表示名称PPG-4 二甘油二甘油的环氧丙基平均加成摩尔数为4)，SY-DP9 (表示 名称PPG-9 二甘油二甘油的环氧丙基平均加成摩尔数为9)，SY-DP14T(表示名称PPG-14 二甘油二甘油的环氧丙基平均加成摩尔数为14)，SC-P400，SC-P750，SC-P1000，日油株式 会社制UNILUB DGP-700(表示名称PPG-9二甘油二甘油的环氧丙基平均加成摩尔数为9)， DGP-950(表示名称PPG-14 二甘油二甘油的环氧丙基平均加成摩尔数为14)。聚氧乙基二甘油醚，可以使用市售品，作为市售品可以例举阪本药品工业株式会 社制 SC-E450，SC-E750, SC-E1000 等。本发明中使用的聚氧丙基甲基苷是甲基苷的聚氧丙基二醇酯。可以用CH3 (C6H10O5) (OC(CH3)HCH2)nOH表示。聚氧丙基甲基苷可以使用市售品，例如日油制MAC BIO BRIDE MG-10P(P0P(10)甲基苷表示名称PPG-10甲基葡萄糖结合醚的聚丙基二醇的平均链长η 为10)，MAC BIO BRIDEMG-20P(P0P(20)甲基苷表示名称PPG-20甲基葡萄糖结合醚的聚丙 基二醇的平均链长η为20)，NOVEON制GLUCAM P-IO (POP (10)甲基苷表示名称PPG-10甲基 葡萄糖)，GLUCAM P-20 (POP (20)甲基苷表示名称PPG-20甲基葡萄糖)。本发明使用的聚氧乙烯基聚氧丙基聚氧丁基甘油是在甘油的全部羟基上加合 聚氧乙基、聚氧丙基、聚氧丁基得到的化合物，可以使用市售品，例如日油制WILBRIDE S-753 (表示名称 PEG/PPG/ 聚丁基二醇-8/5/3 二醇)。本发明使用的聚氧丙基甘油醚是甘油的聚丙基二醇醚，可以用C3H7O2(C)C(CH3) HCH2)nOH表示。聚氧丙基甘油醚可以使用市售品，例如日油制UNI0LTG-1000 (表示名称 PPG-16甘油结合酯的聚丙基二醇的平均链长η为16)，UNI0LSGP-65 (表示名称PPG-8甘 油结合酯的聚丙基二醇的平均链长η为8)，UNI0LTG-1500(表示名称PPG-24甘油结合 酯的聚丙基二醇的平均链长η为24)。本发明使用的聚氧乙烯聚氧丙基烷基醚是在高级醇上加合乙氧基和丙氧基 的醚，可以用R- (0C (CH3) CH2) x (OCH2CH2) Υ0Η表示。可以使用市售品。例如日光化学公 司制ΡΕΝ-4620 (Ρ0Ε (20) POP (6)癸基十四烷基醚表示名称PPG-6癸基十四烯_20 在 癸基十四酰基上加成聚合平均6摩尔的丙氧基与平均20摩尔的乙氧基而成的化合 物)，PEN-4612(P0E(12)P0P(6)癸基十四烷基醚表示名称PPG-6癸基十四烯-12 在癸 基十四酰基上加成聚合平均6摩尔的丙氧基与平均12摩尔的乙氧基而成的化合物)， ΡΕΝ-4630 (Ρ0Ε (30) POP (6)癸基十四烷基醚表示名称PPG-6癸基十四烯-30 在癸基十四 酰基上加成聚合平均6摩尔的丙氧基与平均30摩尔的乙氧基而成的化合物)，日油制UNILUB50MT-2200B (POE (24)POP (13)癸基十四烷基醚表示名称PPG-13癸基十四烯24 在 癸基十四酰基上加成聚合平均13摩尔的丙氧基与平均24摩尔的乙氧基而成的化合物)， UNILUB50MT-2000B (POE (10)POP (20)癸基十四烷基醚表示名称PPG-20癸基十四烯_10 在 癸基十四酰基上加成聚合平均20摩尔的丙氧基与平均10摩尔的乙氧基而成的化合物)。本发明使用的聚氧丙基山梨糖醇是山梨糖醇的聚丙基二醇酯。可以使用市售品， 例如日油制UNI0LHS-1600D(P0P(25)山梨糖醇表示名称PPG-25山梨糖醇丙氧基的平均加 合摩尔数为25)。本发明使用的二丙二醇(DPG)、1，2_己二醇(1，2-HD)、1，2_戊二醇(1，2_PD)、聚乙 二醇(PEG1540，PEG4000)、聚氧乙烯甲基苷(甲基苷-10)、1，3-丁二醇都是作为化妆品原 料通用的。作为市售品，例如1，2-己二醇可以使用株式会社感光社制KM0-6等。1，2_戊二醇 可以使用symrise K. K株式会社制Hydr0-Light_5。聚乙二醇可以使用东邦化学工业株式 会社制PEG1540、PEG4000等。聚氧乙烯甲基苷可以使用日本LUBRIZ0L株式会社制GLUCAM E-10、日油株式会社制MACBIO BRIDE MG-10E等。含有本发明的水飞蓟宾糖苷水溶液的皮肤外用剂可以作为化妆原料、医药部外用 品、医药品使用。本发明的皮肤外用剂不只是溶液，也可以是乳化组合物。乳化组合物则水 中油型、油中水型都可以适用。具体地说可以作为化妆水、乳液、乳霜、美容液、面膜等的剂 型使用。本发明的皮肤外用剂中可以含有油剂、界面活性剂、防腐剂、多元醇、乙醇、糖类、 金属离子封锁剂、水溶性高分子类高分子、增粘剂、粉体成分、紫外线吸收剂、紫外线遮断 齐U、保湿剂、香料、PH调整剂等。另外，也可以含有维生素类、皮肤赋活剂、血流促进剂、常驻 菌控制剂、活性氧清除剂、抗炎症剂、美白剂、杀菌剂等其他药效成分、生理活性成分。实施例1将1. 0% (质量)相当量的水飞蓟宾麦芽糖苷(岩城制药社制)在50% (质量) 相当量的下述16种亲水性溶剂(甘油、二甘油、聚甘油四聚体、聚甘油十聚体、聚甘油六聚 体、1，3-丙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇、POE (10)甲基苷(聚氧乙基甲基苷)、PEG1540(聚乙 二醇)、PEG4000 (聚乙二醇)、1，2-戊二醇、1，2-己二醇、二丙二醇、SY-DP14T (PPG-14 二甘 油聚氧乙基二甘油醚在二甘油的环氧丙基上共加成聚合14摩尔的氧化丙基得到的化合 物)、SY-DP9(PPG-9二甘油聚氧乙基二甘油醚在二甘油的环氧丙基上共加成聚合9摩尔的 氧化丙基得到的化合物))中分散后，在纯净水中溶解，以KOH水溶液调节pH值至5. 5， 作为100% (质量)。使用KONICA MINOLTA制分光光度计CM_3500d，在厚度为2mm的玻璃槽内(CM-A97) 加入16种的水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液，以透过法测色。将16种的水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液在50°C保存5个月，用同样方法测色，求得与 在50°C保存之前的色差。另外，以下述标准，目视评价50°C保存5个月后的褐变程度。目视评价的标准〇极少的黄变，几乎无变化Δ 稍微黄变X 褐变
结果如表1所示。将表1的结果制作成图1的图表。表1水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液的分光光度计测定结果 实施例2将1. 0% (质量)相当量的水飞蓟宾麦芽糖苷(岩城制药社制)在50% (质量) 相当量的下述5种亲水性溶剂(二甘油、SY-DP4(PPG-4 二甘油在二甘油的环氧丙基上共 加成聚合4摩尔的氧化丙基得到的化合物)、SY-DP9(PPG-9 二甘油在二甘油的环氧丙基上 共加成聚合9摩尔的氧化丙基得到的化合物)、SY-DP14T(PPG-14 二甘油在二甘油的环氧 丙基上共加成聚合14摩尔的氧化丙基得到的化合物)、SC-E750 (在二甘油的环氧丙基上共 加成聚合13摩尔的氧化乙基得到的化合物))中分散后，在纯净水中溶解，以KOH水溶 液调节PH值至5. 5，作为100% (质量)。使用KONICA MINOLTA制分光光度计CM_3500d，在厚度为2mm的玻璃槽内(CM-A97) 加入5种的水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液，以透过法测色。将5种水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液在50°C保存7天、14天、28天后，同样方法测色， 求得与在50°C保存之前的色差。将结果制作成图2的图表。实施例3将1. 0% (质量)相当量的水飞蓟宾麦芽糖苷(岩城制药社制)在50% (质量) 相当量的下述7种亲水性溶剂(POP(IO)甲基苷(聚氧丙基甲基苷日油制MACBIO BRIDE MG-10P)、PPG-14 二甘油(聚氧乙基二甘油醚阪本药品工业制SY-DP14T在二甘油的环氧丙 基上共加成聚合14摩尔的氧化丙基得到的化合物)、PEG/PPG/聚丁基二醇-8/5/3 二醇(聚氧乙烯基聚氧丙基聚氧丁基甘油(醚)日油制WILBRIDES-753)、PPG-16甘油(聚氧丙基甘油醚日油制UNI0LTG-1000)、PPG-9 二甘油(聚氧乙基二甘油醚阪本药品工业制SY-DP9在 二甘油的环氧丙基上共加成聚合9摩尔的氧化丙基得到的化合物)、P0E(20)P0P(16)癸基 十四烷基醚(聚氧乙烯聚氧丙基烷基醚日光化学公司制PEN-4620)、PPG-25山梨糖醇(聚 氧丙基山梨糖醇日油制UNIOL HS-1600D))中分散后，在纯净水中溶解，以1 % KOH水溶液调 节PH值至5. 5，作为100% (质量)。使用KONICA MINOLTA制分光光度计CM_3500d，在厚度为2mm的玻璃槽内(CM-A97) 加入7种的水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液，以透过法测色。将7种的水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液在50°C保存3个月，同样方法测色，求得与在 50°C保存之前的色差。另外，以下述标准，目视评价50°C保存3个月后的褐变程度。目视评价的标准〇极少的黄变，几乎无变化Δ 稍微黄变X 褐变结果如表5所示。将表5的结果制作成图3的图表。表 5水飞蓟宾麦芽糖苷水溶液的分光光度计测定结果 在实施例1中，PPG-14 二甘油在50°C保存5个月后的色差是10. 8，但是在实施例 3中，50°C保存3个月后的色差是14. 5。另一方面，在实施例1中PPG-9甘油在50°C保存5 个月后的色差是9. 1，但是在实施例3中，50°C保存3个月后的色差是7. 3。产生这样的差异是因为在不同时期以不同批次的水飞蓟宾麦芽糖苷进行实验造 成的。如实施例1以及实施例3所示，PPG-14 二甘油与PPG-9 二甘油抑制水飞蓟宾麦芽 糖苷水溶液经时褐变的效果最优异，但是同样具有聚氧乙基的POP(IO)甲基苷(聚氧丙基 甲基苷)、PEG/PPG/聚丁基二醇-8/5/3 二醇(聚氧乙烯基聚氧丙基聚氧丁基甘油)、PPG_16 甘油(聚氧丙基甘油醚)、P0E(20)P0P(16)癸基十四烷基醚(聚氧乙烯聚氧丙基烷基醚)、 PPG-25山梨糖醇(聚氧丙基山梨糖醇)等，可以看到都具有优异的抑制水飞蓟宾麦芽糖苷 水溶液经时褐变的效果。
[试验例1]表皮角质细胞分化抑制试验、增殖维持作用1.实验材料1. 1人体正常表皮角质细胞将人体正常表皮角质细胞NHEK (Asahi Techno Glass)在表皮角质细胞用培养基KGM(Asahi Techno Glass)中用37°C_5% CO2培养箱进行培养。本实验使用继代数为3 5代的细胞。1. 2KGM(表皮角质细胞用培养基)KGM是在表皮角质细胞基础培养基上添加人体上皮细胞增殖因子(0. lng/ml)、胰 岛素(S.Oyg/ml)、氢化可的松(0. Syg/ml)、庆大霉素(50 μ g/ml)、两性霉素B(50 μ g/ ml)、牛脑下垂体提取液(2ml)后的培养基。将以水飞蓟宾糖苷为代表的试样添加在细胞中 时，使用仅除去牛脑下垂体提取液的KGM培养基进行实验。1.3添加试样将水飞蓟宾(SB)、水飞蓟宾麦芽糖苷(SBM)、水飞蓟宾乳糖苷(SBL)溶解在 DMSO(二甲亚砜和光纯药)中，以各种浓度添加。2.实验方法2. 1表皮角质细胞分化抑制试验将NHEK悬浮于KGM中使其为5X 104/ml，以4ml/孔接种于6孔培养板上，培养24 小时，使细胞粘结在培养板上。用除去牛脑下垂体提取液的添加各化合物的KGM以4ml/孔 进行处理，每2天更换培养基，培养8 10天。每天用显微镜观察形态，在DMSO处理的对 照细胞显示出分化迹象的形态变化(扁平化)时，进行照相，结束培养。2. 2表皮角质细胞增殖维持试验将上述实验中获得的细胞通过胰蛋白酶处理从培养板上剥下后，悬浮于KGM中 使其为2. 5XlOVml0将细胞悬浮液以2ml/孔接种于24孔培养板上，每2天更换培 养基，培养8天。培养后，将NHEK通过胰蛋白酶处理从培养板上剥下，用库尔特计数器 (Beckman-Coulter)测定细胞数。3.实验结果3. 1表皮角质细胞分化抑制试验DMSO处理的比较对照组Control以及SB 3 μ M(在添加水飞蓟宾3 μ M的培养基 中培养)中，表皮角质细胞发生扁平化，显示出分化迹象的形态变化。与此相对，SBM3yM、 SBL3 μ M中没有出现分化迹象的形态。在分别添加10 μ M的SB、SBL、SBM的培养基中培养 时，表皮角质细胞的分化全部受到抑制。SB、SBL、SBM均具有表皮角质细胞的分化抑制作用， 但与SB相比，SBM、SBL的表皮角质细胞分化抑制效果优异。3. 2表皮角质细胞增殖维持试验在上述表皮角质细胞分化抑制试验中，如果分化得到抑制，则细胞应维持增殖能 力，通过继代操作可依次增殖。被诱导分化的细胞，因为分化是不可逆的反应，所以不能增殖。于是将上述试验获得的细胞进行继代培养，通过测定增殖的细胞数量来检验维持 的增殖能力。
其结果如图4所示，试样浓度为3 μ M时，添加SB后的细胞增殖能力几乎没有被维 持，SBM与不添加试样相比，细胞数增加到1. 8倍，SBL与不添加试样相比，细胞数增加到1. 4 倍，确认有细胞增殖能力的维持效果。试样浓度为ΙΟμΜ时，SB、SBM、SBL的细胞数量均增 力口，SB与不添加试样相比，细胞数增加到1. 5倍，SBM与不添加试样相比，细胞数增加到2. 1 倍，SBL与不添加试样相比，细胞数增加到1. 8倍，确认有细胞增殖能力的维持效果。与SB 相比，可知SBM、SBL的细胞增殖能力的维持效果高。[实验例2]
I型胶原蛋白产生促进作用1.实验材料1.1人体皮肤纤维芽细胞将人体皮肤纤维芽细胞(XD1074SK (大日本住友制药)在D-MEM中用37°C ~5% CO2 培养箱培养。在本实验中利用继代数为10 15代的细胞。1.2D-MEMD-MEM，在D-MEM基础培养基(GIBCO)中添加牛胎儿血清(Hyclone)为10%并使 用。此外，在处理试样时，使用不添加牛胎儿血清的D-MEM进行实验。2.实验方法将人体皮肤纤维芽细胞(XD1074SK悬浮于含有10%牛胎儿血清的D-MEM培养基 中，使其为3 X 105/ml，接种Iml于IOcm培养皿中，培养24小时，使细胞粘结在培养板上。将 培养基更换为将在DMSO中溶解的各试样以各浓度添加而不添加牛胎儿血清的D-MEM培养 基。在更换培养基48小时后回收细胞培养液，使用超滤装置浓缩培养液。浓缩为约500ml 以下后，进行蛋白质定量，收集蛋白质后，作为细胞培养液浓缩试样，用于Western印迹分 析。使用每1泳道IOyg的蛋白质，用SDS-PAGE分离后，转印到硝酸纤维素膜上。将 转印后的硝酸纤维素膜浸渍在封闭溶液(在含有0. 聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯 的PBS中溶解脱脂奶粉为5%浓度的溶液)中，4°C封闭一昼夜。用洗涤液(含有0. 聚氧 乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯的PBS)洗涤后，浸渍于一次抗体[用洗涤液制备成500ng/ ml的I型胶原蛋白的多克隆抗体(Rockland)]中，室温下反应1小时。洗涤后，浸渍于二次 抗体(用洗涤液制备成250ng/ml的辣根过氧化物酶标记抗免疫球蛋白G)中，室温下反应 1小时。洗涤后，使用ECL Plus蛋白质印迹检测试剂(Amersham Biosciences公司)进行 检测。实验结果实验结果，确认与SB相同，SBL、SBM两者均有I型胶原蛋白产生促进作用。实验 结果如图5所示。将获得的条带的强度通过程序软件Image J进行数字化的结果及将DMSO处理时 的I型胶原蛋白产生量作为1时的比较产生量如表2所示。表2
表明SB、SBM、SBL均具有I型胶原蛋白产生促进作用。与SB相比，SBM、SBL的I 型胶原蛋白产生促进效果强。特别是试样浓度为1(^11时，3811、381^的作用效果大，确认高 浓度时有显著的作用效果。[实验例3]紫外线照射所致的水分蒸散的抑制作用皱纹的形成抑制作用1.实验材料、器具实验动物无毛小鼠Hos ;HR1早5周龄(星野实验材料)1.2紫外线照射装置紫外线A 波(FL32SBL/DMR (株式会社)clinicalsupply 制)紫外线B 波(FL32SE/DMR (株式会社)clinicalsupply 制)1. 3经皮水分蒸散量测定装置Vapometer (k-science 公司制)1. 4复制品采集器具及复制品分析系统(有)Asahibiomed公司制的反射型复制品采集套盒及复制品分析系统ASA-03RXD2.实验方法2.1饲养环境在25°C 士2°C、湿度50%土 5%、可分别自由摄取作为食饵的饲料MR、自来水的常
规饲养环境下饲养。将每一组分为5只，在同一笼中饲养。日照为上午7点 下午7点，每12小时设定昼夜。2. 2紫外线照射将无毛小鼠Hos ；HRl驯化1周时间后开始照射紫外线。紫外线照射时将无毛小鼠 移到专用笼子内，每1组各照射UVB20mJ/cm2及UVAlOJ/cm2的紫外线。照射在星期一、星期三、星期五，每周3天循环，实施10周时间，共照射30次紫外线。2. 3组设定
紫外线照射后，30分钟以内在小鼠背部皮肤的全部表面上用IOOyL的SB、SBL、 SBM甲醇溶液或溶剂(甲醇)进行处理。将SB、SBL、SBM涂布的浓度分别设定为1. 0%、 0.3%,0. 这3种，对于所有组进行紫外线照射。对于仅涂布溶剂甲醇的小鼠，设为紫外 线未照射组及紫外线照射组。使用甲醇作溶剂是为了溶解SB。在甲醇中SBM、SBL为浓 度时也完全溶解，但SB仅在0. 1 %时才完全溶解，为0. 3 %时有若干析出，为1 %时发现有不 溶物。即使SB甲醇溶液中发现有不溶物时，也直接用于实验。2. 4经皮水分蒸散量的测定经皮水分蒸散量的测定，使用VapoMeter (Keystone Scientific公司制)，对于从 背部的尾根延向头部方向2cm、从腰椎向右侧0. 5cm的部位测定3次，求出平均值。测定端 末的开口部使用Nail模型(使开口部变窄，对应小鼠皮肤窄的范围)，每1次测定时间需要 约19秒。测定日在紫外线照射10周后进行。2. 5复制品图像分析为了正确把握皱纹的形成，采集复制品。复制品图像分析使用反射用复制品分析 系统ASA-03RXD((有)Asahibiomed制)进行。使用ASA-03RXD，通过从27度的角度向采集 的复制品上照射平行光(LED光源)，将与获得的皱纹形状相应的阴影图像通过CCD照相机 摄像，输入到计算机中并进行图像处理，计测复制品表面的皱纹体积率(ym3/mm2/100)。2. 6统计分析试验结果用平均值士标准偏差(S. D.)表示，显著性差异检验是通过Bartlett检 验法进行同方差性检验。没有拒绝同方差性假设时，进行Durmett多重检验，拒绝同方差性 假设时作为参考数据进行Durmett多重检验。3.试验结果3. 1体重变化、外观观察10周时间照射结束后，各组间在体重变化方面没有明显差别。也没有显示严重病 变的小鼠。对小鼠皮肤的外观进行观察的结果，发现组2的紫外线照射甲醇处理组有皱纹形 成，而组4的0. 3%水飞蓟宾涂布组、组6 组8的全部SBM涂布组、组9 组11的全部SBL 涂布组中，均有皱纹抑制作用。3. 2经皮水分蒸散量作为皮肤粗糙的指标，在紫外线照射10周时间后使用Vap0Meter测定各组的水分 蒸散量。结果如表3所示。与组1紫外线未照射组相比，组2的紫外线照射组的经皮水分蒸散量增高。组3 组11的水飞蓟宾(SB)、水飞蓟宾糖苷(SBM、SBL)涂布组，显著性水平以下显著抑制了 经皮水分蒸散量的上升。将1组(紫外线非照射、甲醇涂布)的水分蒸散量作为0%，将2组(紫外线照射、 甲醇涂布)的水分蒸散量作为100%时，3 5组(紫外线照射、SB 0.1 涂布)的水分 蒸散量为26 76%，6 8组(紫外线照射、SBM 0. 1 涂布)的水分量为11 21%， 9 11组(紫外线照射、SBL 0. 1 涂布)的水分量为24 27%，通过添加SB、SBM、SBL，抑制了水分蒸散量的上升。特别是水飞蓟宾糖苷的SBM、SBL的抑制水分蒸散量上升的 效果高。总之具有改善日晒所致的皮肤粗糙的效果。表3 3. 3皱纹体积率10周时间照射结束后，为了正确把握皱纹的形成，收集复制品，通过图像分析计测 复制品表面的皱纹体积率(μ m3/mm2/100)。结果如表4所示。实施Durmett的显著性差异检验的结果，相对于组2 (紫外线照射甲醇涂布)，组 1(紫外线未照射甲醇涂布)、组4(紫外线照射SB 0.3%涂布)、组7(紫外线照射SBM 0.3% 涂布)、组11 (紫外线照射SBL 1. 0%涂布)，分别在显著性水平5%以下皱纹体积得到显著 抑制。表 4 [处方例1化妆水]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷0.32. SY_DP9(在二甘油的环氧丙基上共加成聚合9摩尔的 5.0氧化丙基得到的化合物)3. 二丙二醇5.04.氢氧化钾适量5.柠檬酸适量6.纯净水剩余(制法)在6中溶解1 5。[处方例2乳液]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷3. 02.氢化大豆磷脂0. 7
3.十聚甘油硬脂酸酯(HLB 12)2. 0 4. SY_DP9(在二甘油的环氧丙基上共加成聚合9摩尔的8.0氧化丙基得到的化合物)5.橄榄油8. 06.山箭醇1.07. 二丙二醇8.08.聚羧乙烯0.19.黄原胶0.210.氢氧化钾适量11.柠檬酸适量12.纯净水剩余(制法)将1 4及7 12在80°C下加温溶解。在其中加入已加温至约80°C的5、6，用均 质器搅拌混合，冷却至30°C，获得乳液。[处方例3保湿美容液]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷0. 22.氢化大豆磷脂0.63.十聚甘油单油酸酯(HLB 12)1. 54. 二丙二醇7.05.1，3-丁二醇5.06.聚乙二醇 40000.17.角鲨烷5.08.硅酮0. 59. 二(植物留醇/辛基十二醇)月桂酰谷氨酸酯0. 210.黄原胶0. 311.氢氧化钾适量12.柠檬酸适量13.纯净水剩余(制法)将1及11 13搅拌溶解，添加4 6、10后加温至80°C溶解。在其中加入已加温 至约80°C的2、3、7 9，冷却至30°C，获得保湿美容液。[处方例4润肤霜]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷0. 52.SY_DP9(在二甘油的环氧丙基上共加成聚合9摩尔10.的氧化丙基得到的化合物)3. 二丙二醇8.04.1，2-戊二醇0.5
5. L-丝氨酸0.016.十聚甘油二硬脂酸酯(HLB9. 5)0. 57.十聚甘油单肉豆蔻酸酯(HLB14)1.58.橄榄油10.09.澳洲坚果油1. 010.山箭醇1. 511.硅酮2.012.荷荷巴油3.013.维生素 E0.001
14. SIMULGEL NS (SEPPIC 公司制)2.015.黄原胶0. 116.氢氧化钾适量17.柠檬酸适量18.纯净水剩余(制法)将1及16 18搅拌溶解，添加2 5后加温至约80°C溶解。在其中添加已加温 至约80°C的6 14，冷却至30°C，获得润肤霜。[処方例5身体用乳液]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷0. 22.PEG-60 氢化蓖麻油(HLB14)1.53. SY-DP14T (在二甘油的环氧丙基上共加成聚合9. 014摩尔的氧化丙基得到的化合物)4. 二丙二醇7.05.透明质酸钠0.0016.流体石蜡10. 07.硅酮3.08.辛基十二烷醇4.09.(丙烯酸/丙烯酸烷基(C10-30))酯共聚物0. 210.氢氧化钾适量11.柠檬酸适量12.纯净水剩余13.乙醇2. 5(制法)将1及10 12搅拌溶解，添加2 5、9后加温至约80°C溶解。在其中加入已加温至约80°C的6 8，冷却至30°C，添加13，获得身体用乳液。[处方例6按摩霜]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷0. 05
2. SY-DP4 (在二甘油的环氧丙基上共加成聚合4摩尔的10. 0氧化丙基得到的化合物)3. POE(IO)甲基苷2.04. 二丙二醇7.05.十聚甘油单硬脂酸酯(HLB12)1. 06.乙基己酸十六醇酯12.0 7.山嵛醇2.08.硬脂酸0. 59. Sepinov EMTIO (SEPPIC 公司制)0. 510.香料适量11.苯氧基乙醇0.312.氢氧化钾适量13.柠檬酸适量14.纯净水剩余(制法)将1及11 14搅拌溶解，添加2 4后加温至80°C溶解。在其中加入已加温至 约80°C的5 9，冷却至30°C，添加10，获得按摩霜。[处方例7乳化型粉底]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷0. 12. SY-DP9 (在二甘油的环氧丙基上共加成聚合9摩尔的氧化丙基得到的化合物)10. 03. 二丙二醇8.04.1，2-戊二醇1.05.黄原胶0. 36.聚甘油-2三异硬脂酸酯1. 07.环甲硅月旨(Cyclomethicone)8.08.硅酮5.09.异硬脂醇新戊酸酯5. 010.异硬脂酸1. 511.山箭醇0.512.糊精棕榈酸酯1. 013.滑石3.014. 二氧化钛5.015.氧化铁红0.516.氧化铁黄1.417.氧化铁黑0. 118.氢氧化钾适量19.柠檬酸适量
20.纯净水剩余(制法)将1及18 20搅拌溶解，添加2 5后加温至约70°C溶解。接着添加充分粉碎的13 17并搅拌混合。在其中加入已加温至约80°C的6 12，冷却至30°C，获得乳化型 粉底。[处方例8膏状美容液]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷1. 02. UNILUB DGP—7005. 03.1，3-丁二醇7.04.甜菜碱2. 05.透明质酸钠(1%水溶液)1.06.小菌核胶0. 17.聚羧乙烯0.28.氢氧化钾适量9.纯净水剩余(制法)使7在9中溶解，搅拌溶解1 6。添加8，获得膏状美容液。[处方例9薄面罩]质量 ％1.水飞蓟宾麦芽糖苷0. 52. UNILUB DGP—7005. 03. 二丙二醇8.04. WILBRIDE S-7531.05.异硬脂醇新戊酸酯5. 06.维生素 A 油0.0017.氢化大豆磷脂1.08.聚山梨醇酯600.29.产碱杆菌产生多醣体0. 110.聚羧乙烯0.211.氢氧化钾适量12.纯净水剩余(制法)将5 8加温至80°C溶解，添加加温溶解的1 4及9、10/12，搅拌混合。加入11 中和后冷却至30°C。之后，将其渗透于无纺布中，获得薄面罩。
权利要求
一种水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是含有从聚氧亚烷基二甘油醚、二丙二醇、1，2-己二醇、1，2-戊二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯甲基苷、1，3-丁二醇构成的组群中选出的一种或两种以上的物质以及水飞蓟宾糖苷。
2.一种水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是将水飞蓟宾糖苷溶解在含有具有聚氧丙基的化 合物的水溶液中。
3.根据权利要求2所述的水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是具有聚氧丙基的化合物是从 聚氧丙基二甘油醚、二丙二醇、聚丙二醇、聚氧丙基甲基苷、聚氧乙烯基聚氧丙基聚氧丁基 甘油、聚氧丙基甘油醚、聚氧乙烯聚氧丙基烷基醚、聚氧丙基山梨糖醇构成的组群中选出的 一种或两种以上的物质。
4.根据权利要求1 3中任一项所述的水飞蓟宾糖苷水溶液，其特征是水飞蓟宾糖苷 是水飞蓟宾麦芽苷。
5.一种含有权利要求1 4中任一项所述的水飞蓟宾糖苷水溶液的皮肤外用剂。
6.一种含有权利要求1 4中任一项所述的水飞蓟宾糖苷水溶液的皱纹形成抑制剂。
全文摘要
本发明的课题是开发着色稳定性优异的水飞蓟宾糖苷溶液。具体地说本发明涉及含有从聚氧亚烷基二甘油醚、二丙二醇、1，2-己二醇、1，2-戊二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯甲基苷、1，3-丁二醇构成的组群中选出的一种或两种以上的物质以及水飞蓟宾糖苷的水飞蓟宾糖苷水溶液。
文档编号A61Q19/08GK101869573SQ20101015400
公开日2010年10月27日 申请日期2010年4月22日 优先权日2009年4月24日
发明者小鹰晶 申请人:株式会社芳珂