马甲子或其提取物在制备治疗痤疮的药物中的用图
【专利摘要】本发明属于医药领域，涉及马甲子或其提取物的新用途，具体是马甲子或其提取物在制备治疗痤疮的药物中的用途。外用马甲子及其提取物，可有效改善痤疮症状及组织病理，效果均优于临床常用对照药物，说明外用马甲子及其提取物治疗痤疮在疗效上优于现有常用药物。
【专利说明】
马甲子或其提取物在制备治疗瘦疮的药物中的用途
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，设及马甲子或其提取物的新用途，具体是马甲子或其提取 物在制备治疗瘦疮的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 马甲子（Paliurus ramosissimusiXour. )Poi;r)为落叶灌木，是一种常见药用植 物，据报道枝叶根花果均药用。性味苦、平，无毒。能除寒活血，发表解热，消肿，治跌打损伤 及屯、腹疼痛。但尚未见马甲子及其提取物可用于治疗瘦疮的报道。
[0003] 瘦疮是毛囊皮脂腺单位的一种慢性炎症性皮肤病，主要好发于青少年，对青少年 的屯、理和社交影响很大，临床表现W好发于面部的粉刺、丘疹、脈瘤、结节等多形性皮损为 特点。瘦疮的发生主要与皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管堵塞、细菌感染和炎症反应等因素 密切相关。进入青春期后人体内雄激素特别是睾酬的水平迅速升高，促进皮脂腺发育并产 生大量皮脂。同时毛囊皮脂腺导管的角化异常造成导管堵塞，皮脂排出障碍，形成角质栓即 微粉刺。毛囊中多种微生物尤其是瘦疮丙酸杆菌大量繁殖，瘦疮丙酸杆菌产生的脂酶分解 皮脂生成游离脂肪酸，同时趋化炎症细胞和介质，最终诱导并加重炎症反应。皮损好发于面 部及上胸背部。瘦疮的非炎症性皮损表现为开放性和闭合性粉刺。闭合性粉刺(又称白头） 的典型皮损是约1毫米大小的肤色丘疹，无明显毛囊开口。开放性粉刺(又称黑头)表现为圆 顶状丘疹伴显著扩张的毛囊开口。粉刺进一步发展会演变成各种炎症性皮损，表现为炎性 丘疹、脈瘤、结节和囊肿。炎性丘疹呈红色，直径1~5毫米不等;脈瘤大小一致，其中充满了 白色脈液;结节直径大于5毫米，触之有硬结和疼痛感;囊肿的位置更深，充满了脈液和血液 的混合物。运些皮损还可融合形成大的炎性斑块和窦道等。炎症性皮损消退后常常遗留色 素沉着、持久性红斑、凹陷性或肥厚性癒痕。临床上根据瘦疮皮损性质和严重程度将瘦疮分 为3度、4级：1级唯度）：仅有粉刺;2级（中度）：除粉刺外，还有一些炎性丘疹;3级（中度）：除 粉刺外，还有较多的炎性丘疹或脈瘤;4级(重度）：除有粉刺、炎性丘疹及脈瘤外，还有结节、 囊肿或癒痕。瘦疮治疗的局部外用药物主要包括维A酸类(维A酸乳膏、阿达帕林凝胶、他扎 罗汀凝胶）、过氧化苯甲酯、抗生素类(克林霉素、红霉素、氯霉素等）、壬二酸、硫横洗剂等。 运些药物临床有效，但维A酸等本身有一定毒副作用，而抗生素类对部分病例并无疗效，此 夕h运些药物治疗后的复发率也较高。因此，寻求安全有效的药物仍为研究重点。
[0004] 本发明的发明人在研究过程中发现马甲子及其提取物具有良好的治疗瘦疮作用。
【发明内容】
[0005] 本发明提供的马甲子及其提取物的新用途为马甲子或其提取物在制备治疗瘦疮 的药物中的应用。具体的，所述药物为外用药物。
[0006] 应用时，马甲子采用马甲子全株植物或其中任一部位的鲜品或干品；其中，药用部 位可为根、茎、叶、花、果任一部位或其混合。最优选的部位为叶。
[0007] 鉴于药材的采集期和保存便利性，为了便于临床用药，可W马甲子全株植物或其 中任一部位的鲜品或干品为原料药，粉碎后直接制备成适宜的制剂应用，也可w制成提取 物后制备成适宜的制剂应用。具体的，所述马甲子为鲜品或干品的粉碎品或提取物，粉碎品 W马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药，采用粉碎机或其他器械粉碎制 得;提取物W马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药，采用常规提取方法制 备而得。
[0008] 应用时，马甲子提取物是W马甲子全株植物或其中任一部位为原料药，采用常规 提取方法制备而得。本发明所得马甲子提取物主要成分包括黄酬类、祗类、生物碱类、香豆 素类;进一步还包括上述黄酬、祗、生物碱、香豆素的巧及其单体成分;还包括多糖类和纤维 素。
[0009] 本发明马甲子的粉碎品的制备方法如下：
[0010] A、W马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药；
[00川 B、粉碎，过筛，即得。
[0012] 所述粉碎包括粉碎机或其他器械粉碎。
[0013] 采用上述方法制备的粉碎品，称为马甲子粉碎品。
[0014] 本发明马甲子提取物的制备方法如下：
[001引制备方法一：
[0016] 所述马甲子的提取物的制备方法一：
[0017] A、W马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药；
[001引B、粉碎，过筛；
[0019] C、W水或有机溶剂提取、干燥、即得。
[0020] 上述技术方案中，步骤C所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酬、异丙醇、乙酸乙醋或 石油酸;优选乙醇。
[0021] 上述技术方案中，步骤C所述提取采用浸溃、回流、渗漉或其他常规方法提取；
[0022] 上述技术方案中，步骤C所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其 他常规干燥方法。
[0023] 制备方法二：
[0024] A、W马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药；
[00巧]B、粉碎，过筛；
[0026] C、W溶剂a提取，滤液浓缩，得浓缩液；
[0027] D、W溶剂b萃取步骤C所得浓缩液，得萃取液，干燥，即得；
[00%]或，干燥步骤C所得浓缩液得提取物1，W溶剂b固-液萃取，干燥，即得。
[0029] 上述技术方案中，步骤C所述提取方法采用浸溃、回流、渗漉或其他常规方法提取；
[0030] 上述技术方案中，步骤C所述溶剂a选自选自水和常规有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酬、 异丙醇、乙酸乙醋或石油酸）；优选乙醇。
[0031] 上述技术方案中，步骤D所述溶剂b选自乙酸乙醋、石油酸或正下醇；优选乙酸乙 醋。
[0032] 上述技术方案中，步骤DW溶剂b萃取步骤C所得浓缩液，得萃取液的方式属于液- 液萃取;W干燥步骤C所得浓缩液得提取物1，采用溶剂b萃取的方式属于固-液萃取。
[0033] 上述技术方案中，步骤D所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其 他常规干燥方法。
[0034] 制备方法二：
[0035] A、W马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药；
[0036] B、W水或有机溶剂提取、干燥、即得。
[0037] 上述技术方案中，步骤B所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酬、异丙醇、乙酸乙醋或 石油酸;优选乙醇。
[0038] 上述技术方案中，步骤B所述提取采用浸溃、回流、渗漉或其他常规方法提取；
[0039] 上述技术方案中，步骤B所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其 他常规干燥方法。
[0040] 制备方法四：
[0041] A、W马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药；
[0042] B、W溶剂a提取，滤液浓缩，得浓缩液；
[0043] C、W溶剂b萃取步骤B所得滤液，得液相，干燥，即得；
[0044] 或，浓缩并干燥步骤B所得滤液得提取物1，W溶剂b提取，干燥提取液，即得。
[0045] 上述技术方案中，步骤B所述提取方法采用浸溃、回流、渗漉或其他常规方法提取；
[0046] 上述技术方案中，步骤B所述溶剂a选自选自水和常规有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酬、 异丙醇、乙酸乙醋或石油酸）；优选乙醇。
[0047] 上述技术方案中，步骤C所述溶剂b选自乙酸乙醋、石油酸或正下醇；优选乙酸乙 醋。
[0048] 上述技术方案中，步骤CW溶剂b萃取步骤B所得浓缩液，得萃取液的方式属于液- 液萃取;W干燥步骤B所得浓缩液得提取物1，采用溶剂b萃取的方式属于固-液萃取。
[0049] 上述技术方案中，步骤C所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其 他常规干燥方法。
[0050] 采用上述方法制备的提取物，如W方法一和Ξ制备所得，W方法一的步骤C或方法 Ξ的步骤B所用溶剂命名为对应的提取物，如马甲子乙醇提取物，马甲子甲醇提取物、马甲 子异丙醇提取物、马甲子乙酸乙醋提取物、马甲子石油酸提取物。如按方法二和四制备所 得，则W方法二的步骤D或方法四的步骤C所用溶剂b命名为对应的提取物，如马甲子石油酸 提取物，马甲子乙酸乙醋提取物;而方法二步骤D和方法四步骤C所得提取物1则W方法二步 骤C和方法四步骤B所用溶剂a命名对应的提取物，如马甲子乙醇提取物，马甲子甲醇提取 物、马甲子异丙醇提取物。
[0051] 上述技术方案中，提取物的制备方法一的步骤C和制备方法Ξ的步骤B所使用的溶 剂与马甲子的用量关系为，溶剂添加量为马甲子质量的1-40倍;优选的，溶剂添加量为马甲 子质量的2-20倍;更进一步的，溶剂添加量为马甲子质量的4-12倍。
[0052] 上述技术方案中，提取物的制备方法二的步骤C和制备方法四的步骤B所使用的溶 剂a与马甲子的用量关系为，溶剂a添加量为马甲子质量的1-40倍;优选的，溶剂a添加量为 马甲子质量的2-20倍;更进一步的，溶剂a添加量为马甲子质量的4-12倍。
[0053] 优选的，溶剂a采用乙醇时，乙醇添加量为马甲子质量的1-40倍;优选的，乙醇添加 量为马甲子质量的2-20倍;更进一步的，优选甲醇或乙醇添加量为马甲子质量的4-12倍。
[0054] 其中，所述乙醇的浓度为10-95%。优选的，采用乙醇浓度为40-95%。最优选的，采 用乙醇浓度为60-95 %。
[0055] 本发明所述的药物为外用制剂。W马甲子或其提取物作为活性成分，加入药剂学 中可接受的辅料，按常规方法制备而得的外用制剂;包括软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、涂膜剂、 搔剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、糊剂或己布剂。
[0056] 其中，W马甲子为活性成分时，是鲜品或干品植物直接粉碎，加入药剂学中可接受 的辅料，按常规方法制备而得的外用制剂。
[0057] 其中，W马甲子提取物为活性成分时，是采用前述提取方法制备得到提取物，加入 药剂学中可接受的辅料，按常规方法制备而得的外用制剂。
[0058] 综上，外用马甲子及其提取物，可有效改善瘦疮症状及组织病理，效果均优于临床 常用对照药物，说明外用马甲子及其提取物治疗瘦疮在疗效上优于现有常用药物。
【具体实施方式】
[0059] W下通过对本发明【具体实施方式】的描述说明但不限制本发明。
[0060] 本发明的技术方案如下：
[0061] 用于治疗瘦疮的马甲子药材原粉或马甲子提取物，取马甲子叶、马甲子茎叶、马甲 子全株植物粉碎，或取马甲子叶、马甲子茎叶、马甲子全株植物，加入马甲子质量1-40倍的 水或常规有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酬、异丙醇、乙酸乙醋或石油酸)提取;或者进一步将提取 物进一步用乙酸乙醋或石油酸提取;提取液浓缩后干燥，制得马甲子提取物；马甲子提取物 或马甲子药材原粉，成分包括祗类、黄酬类、生物碱类、香豆素类、多糖类和纤维素类W及 祗、黄酬、生物碱、香豆素的巧类和单体。
[0062] 所述的马甲子提取物或马甲子药材原粉，为马甲子用水或常规有机溶媒提取，或 将马甲子鲜品或干品直接粉碎入药;有机溶媒包括甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙醋、石油酸或 其他常规溶剂;所述提取方法包括浸溃、回流或渗漉或其他常规提取方法;所述干燥方法包 括减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其他常规干燥方法。
[0063] 所述的马甲子提取物或马甲子药材原粉的制剂，包括软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、涂 膜剂、搔剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、糊剂或己布剂。
[0064] 所述的马甲子提取物或马甲子药材原粉的应用，为用于制备治疗瘦疮的外用药。
[0065] -、马甲子提取物或马甲子药材原粉的制备方法
[0066] 1.全株水提取物的制备
[0067] 取马甲子全株化g粉碎，加入8倍量的水煎煮提取3次，收集提取液，减压浓缩并干 燥即得马甲子水提取物。
[0068] 2.全株乙醇提取物的制备
[0069] 取马甲子全株化g粉碎，加入8倍量的95%乙醇浸溃提取数次，收集提取液，减压回 收乙醇至无醇味，干燥即得马甲子乙醇提取物。
[0070] 3.茎叶乙醇、石油酸和乙酸乙醋提取物的制备
[007。 取马甲子茎叶5kg粉碎，加入10倍量的95 %乙醇回流提取数次，收集提取液，60°C 减压回收乙醇至无醇味，干燥即得马甲子乙醇提取物。将马甲子乙醇提取物加水分散后，依 次用石油酸、乙酸乙醋萃取，得到马甲子石油酸提取物和乙酸乙醋提取物。
[0072] 4.全株石油酸和乙酸乙醋提取物的制备
[0073] 取马甲子全株化g粉碎，加入10倍量的甲醇浸溃提取数次，收集提取液，40°C下减 压回收甲醇，干燥即得马甲子甲醇提取物，将马甲子甲醇提取物加水分散后，依次用石油 酸、乙酸乙醋萃取，得到马甲子石油酸提取物和乙酸乙醋提取物。
[0074] 5.取马甲子全株化g，干燥，粉碎，过80目药筛。
[0075] 6.取马甲子全株鲜品化g，粉碎，过60目药筛。
[0076] 二、马甲子提取物的成分研究
[0077] (一)成分的定性研究
[0078] 样品供试液的配制：取全株乙醇提取物样品Ig，溶于25ml无水乙醇中，离屯、。取上 清液2ml，无水乙醇稀释5倍，至终浓度为0.008g/ml。
[00巧]1、Ξ祗类成分的检识
[0080] (1 化-Β 反应
[0081] 将样品溶于乙酸酢中，加浓硫酸一乙酸酢（1:20)数滴，可产生黄^红^紫^蓝等 颜色变化，最后稱色，表明含有Ξ祗类化合物。
[0082] (2 化址 lenbe;rg 反应
[0083] 将样品的氯仿或醇溶液点于滤纸上，喷20%五氯化錬的氯仿溶液(或Ξ氯化錬饱 和的氯仿溶液），干燥后60-70°C加热，显蓝色，表明含有Ξ祗类化合物。
[0084] (3)R-H 反应
[00化]将样品供试液滴在滤纸上，喷出25%Ξ氯乙酸乙醇溶液，加热至100°C，显红色，逐 渐变为紫色，表明含有Ξ祗类化合物。
[0086] (4)Salkowki 反应
[0087] 将样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在硫酸层呈现红色或蓝色，氯仿层有绿色巧光出 现，表明含有Ξ祗类化合物。
[0088] (5)Tschugaeff 反应
[0089] 将样品溶于冰乙酸中，加乙酷氯数滴及氯化锋结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或 紫红色，表明含有Ξ祗类化合物。
[0090] 2、黄酬类成分的检识
[0091] (1)盐酸一儀粉还原反应(还原反应显色）
[0092] 取少量样品溶于ImL乙醇中，加入少许儀粉及浓盐酸，振荡片刻，观察反应颜色呈 紫红色，表明含有黄酬类化合物。
[0093] (2)Ξ氯化侣反应(金属离子的络合反应显色）
[0094] 用玻璃棒薩取样品供试液涂于滤纸上，吹干，喷1 %的Ξ氯化侣乙醇溶液，吹干，观 察现象。置紫外灯下显鲜黄色，表明含有黄酬类化合物。
[00Μ] (3)Ξ氯化铁反应(金属离子的络合反应显色）
[0096] 用玻璃棒薩取供试液涂于滤纸上，吹干，在紫外灯下观察巧光后，喷3 %的Ξ氯化 铁乙醇溶液，吹干，出现暗蓝色巧光斑点，再经氨熏后转变为栋色巧光斑点，表明含有黄酬 类化合物。
[0097] (4)碱性试剂显色
[0098] 用玻璃棒薩取供试液涂于滤纸上，干燥后，喷W氨氧化钢水溶液或暴露于氨蒸汽 中，在日光灯下观察时，氨蒸汽能使样品色点转变为亮黄色，表明含有黄酬类化合物。
[0099] 3、生物碱类成分的检识
[0100] (1)改良舰化祕钟(Dragendorf f)法
[0101] ①次硝酸祕〇.85g溶于10ml冰醋酸与40ml水中；②舰化钟8g溶于20ml水中。试液① 与试液②等量混合置栋色瓶内保存作胆备液。用前将1ml胆备液、4ml冰醋酸与12ml水混合。 将样品供试液加入上述试剂中，呈红栋色溶液，加蒸馈水一摇即有沉淀产生，表明含有生物 碱类化合物。
[0102] (2)舰-舰化钟(Wagner)法
[0103] 舰Ig与舰化钟lOg溶于50ml水，加2ml乙酸，加水至100ml。取上述试剂适量，加入 1ml样品供试液即显栋褐色，表明含有生物碱类化合物。
[0104] (3)娃鹤酸（Bertrand)法
[01化]5g娃鹤酸溶于100ml水中，加浓盐酸少量调至pH=2左右。取上述试剂适量，加入 1ml样品供试液即显栋褐色，表明含有生物碱类化合物。
[0106] 4、香豆素类成分的检识
[0107] (1)异径朽酸铁反应
[0108] ① a.盐酸径胺20g溶于50ml水，用乙醇稀释至200ml，冷处保存;b.氨氧化钟50g溶 于少许水中，加500ml乙醇。②氯化铁(FeC13 ·細20)lOg溶于20ml 36%盐酸溶液中，加乙酸 200ml摇匀，置密闭容器内保存。使用时将试液① a.与① b.按1:2混合，滤去沉淀，滤液放冰 箱保存。用玻璃棒薩取样品供试液涂于滤纸上，先喷ab混合试液，稍干，再喷试液②，即显红 色，表明含有香豆素类化合物。
[0109] (2)重氮化试剂反应
[0110] ①对硝基苯胺0.35g，溶于浓盐酸5ml中，加水至50ml;②亚硝酸钢5g，加水50ml。取 ①、②液等量在冰水浴中混合后使用。取少量样品供试液滴加重氮化试剂，即显澄红色，表 明含有香豆素类化合物。
[011。（二)成分定量分析
[0112] 1、取马甲子茎叶乙酸乙醋提取物0.1 g，Ξ份，加入10ml容量瓶内，加乙酸乙醋至刻 度，再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内，挥干溶剂后，加入5%香草醒-冰醋酸 0.4ml、高氯酸1.6ml，混匀，并由乙酸乙醋稀释至刻度，置70°C恒溫水浴中加热15min，冷却 至室溫，并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀释至刻度，摇匀，在540nm波长处测定吸收度， 计算供试品溶液中总Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸计）。经计算Ig马甲子提取物中Ξ祗类成 分含418mg。
[0113] 2、取马甲子叶鲜品粉碎品0.1g，S份，加入10ml容量瓶内，加乙酸乙醋适量，超声 提取30分钟，冷却后定容至刻度，再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内，挥干溶剂后， 加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混匀，并由乙酸乙醋稀释至刻度，置70°C恒溫 水浴中加热15min，冷却至室溫，并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀释至刻度，摇匀，在 540nm波长处测定吸收度，计算供试品溶液中总Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸计）。经计算Ig 马甲子提取物中Ξ祗类成分含46mg。
[0114] 3、取马甲子茎叶干品粉碎品0.1g，S份，加入10ml容量瓶内，加乙酸乙醋适量，超 声提取30分钟，冷却后定容至刻度，再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内，挥干溶剂 后，加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混匀，并由乙酸乙醋稀释至刻度，置70°C恒 溫水浴中加热15min，冷却至室溫，并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀释至刻度，摇匀，在 540nm波长处测定吸收度，计算供试品溶液中总Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸计）。经计算Ig 马甲子提取物中Ξ祗类成分含85mg。
[0115] 4、取马甲子全株乙醇提取物0.1g，S份，加入10ml容量瓶内，加乙酸乙醋适量，超 声提取30分钟，冷却后定容至刻度，再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内，挥干溶剂 后，加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混匀，并由乙酸乙醋稀释至刻度，置70°C恒 溫水浴中加热15min，冷却至室溫，并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀释至刻度，摇匀，在 540nm波长处测定吸收度，计算供试品溶液中总Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸计）。经计算Ig 马甲子提取物中Ξ祗类成分含132mg。
[0116] 5、取马甲子全株水提取物0.1g，S份，加入10ml容量瓶内，加乙酸乙醋适量，超声 提取30分钟，冷却后定容至刻度，再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内，挥干溶剂后， 加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混匀，并由乙酸乙醋稀释至刻度，置70°C恒溫 水浴中加热15min，冷却至室溫，并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀释至刻度，摇匀，在 540nm波长处测定吸收度，计算供试品溶液中总Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸计）。经计算Ig 马甲子提取物中Ξ祗类成分含22mg。
[0117] Ξ、马甲子制剂的制备 [011引1.软膏剂的制备
[0119] 取马甲子茎叶石油酸提取物，加入适宜辅料，如：十八醇、单硬脂酸甘油脂、甘油、 硬脂酸等制成软膏剂。
[0120] 称取115g十八醇、115g白凡±林、70g单硬脂酸甘油醋，加热融化，得到油相，加入 4〇g马甲子甲醇提取物；另取lOOg甘油、15g十二烷基硫酸钢、O.Olg盐酸半脫氨酸，加入 650ml水溶解，得到水相;分别加热至75°C~80°C，揽拌下将水相缓缓加入油相，然后继续揽 拌15分钟，得到马甲子甲醇提取物软膏剂。
[0121] 2.马甲子乙醇提取物凝胶剂的制备
[0122] 取lOg卡波姆撒入420ml纯化水中，揽拌使溶胀，加入100ml丙二醇揽拌溶解，揽拌 下滴加18gS乙醇胺，制成凝胶基质；另取lOOg马甲子乙醇提取物与2g径苯乙醋溶解于 350ml乙醇中，揽拌下加入凝胶基质中，揽匀即得。
[0123] 3.马甲子乙醇提取物涂膜剂的制备
[0124] 取40g聚乙締醇124溶胀于400ml纯化水中；另取lOOg马甲子乙醇提取物溶于400ml 乙醇中，再加入100ml甘油，揽拌均匀后缓缓加入聚乙締醇溶液中，揽匀后过滤，再自滤器上 加乙醇至1000ml，即得。
[0125] 4.马甲子石油酸提取物搔剂的制备
[0126] 取lOOg马甲子石油酸提取物细粉置于研鉢中，加入500ml花生油研匀，再缓缓加入 饱和氨氧化巧水溶液至1000ml，研磨至均匀白色乳状物即得。
[0127] 5.马甲子乙醇提取物洗剂的制备
[01%]取lOOg马甲子水提取物细粉置于研鉢中，加入50ml甘油和适量纯化水，研磨成糊 状，逐渐加入纯化水至全量混匀即得。
[0129] 6.马甲子乙醇提取物软膏剂的制备
[0130] 取马甲子乙醇提取物，粉碎成极细粉，加至经灭菌、滤过后放冷的液体石蜡20g中， 揽匀，再加至已干热灭菌、滤过并冷至约50°C的凡±林900邑和羊毛脂50g中，揽匀，使凝固， 制成lOOOg，即得。
[0131] 7.马甲子糊剂的制备
[0132] 取羊毛脂250g、白凡±林250肖置水浴加溫融化并放置保持溫度在60°C左右备用； 将300g马甲子粉碎品加入上述基质中，不断揽拌使其混匀，再加入已过筛的淀粉125g及氧 化锋细粉125g揽拌形成糊状放冷，即得。
[0133] 8.己布剂的制备
[0134] W聚丙締酸钢200g、明胶150g、聚乙締醇250g为粘着剂，溶于蒸馈水100ml中，加热 揽拌至完全溶解静置待用。将马甲子乙醇提取物30g、甘油350g、氧化锋20g混合后一起加入 到粘着剂中，加热揽拌lOmin后静置脱气，待气泡赶净后均匀涂布于200mmX25mm的无纺布 基材上，静置至凝胶化，即得。
[0135] 四、马甲子提取物对实验性兔耳瘦疮模型的影响
[0136] 1试验方法
[0137] 健康日本大耳白兔72只，体重2.0~2.化g，全雄。动物适应性饲养1周后按体重随 机选取8只作为正常对照组，剩余64只家兔于耳道口外2cm处2X2cm2范围，每日涂煤焦油一 次，厚度约为0.5mm。（涂前先将煤焦油水浴加热融化，每次涂煤焦油前先将上次涂的煤焦油 焦壳取下；正常对照组涂橄揽油，方法同前。）造模3周后，64只家兔按皮损程度轻重随机分 为8组，分别为马甲子乙酸乙醋提取物组、马甲子乙醇提取物组、马甲子石油酸提取物组、马 甲子水提取物组、马甲子鲜叶粉碎品组、马甲子干叶粉碎品组、模型对照组、阳性对照组(维 胺醋维E乳膏），每组8只。分组后，各剂量组每日上午继续涂煤焦油，下午去除煤焦油后在病 损局部涂抹受试药物1ml/只（鲜叶及干叶粉碎组按Ig鲜叶/只涂抹)或对照药物(维胺醋维E 乳膏，8mg原药/lOg膏，按Ig膏/只涂抹），1次/日，连续2周(模型对照组和正常对照组涂等量 基质）。上述提取物均W鲜叶提取，剂量按鲜叶量计算，浓度相当于Ig鲜叶/ml,下同。
[0138] 末次给药后24小时，空气栓塞处死动物，取耳部给药处皮肤(全层），4%多聚甲醒 溶液固定，肥染色，进行常规病理观察。同时免疫组化方法观察皮肤雄激素受体表达情况。
[0139] 2试验结果
[0140] 2.1对实验性兔耳瘦疮模型角质层厚度的影响
[0141] 由表1可见，除石油酸组外，马甲子干、鲜叶及其余各提取物组兔耳角质层厚度减 小，与模型对照组比较，统计差异显著(P<〇.05)。表明本品能减轻实验性兔耳瘦疮模型角质 层厚度，且呈一定量效关系。
[0142] 表1马甲子及提取物对实验性兔耳瘦疮模型角质层厚度的影响（*±s》
[0143]
[0144] 注:与模型对照组相比，冲<0.05*冲<0.01。
[0145] 2.2对实验性兔耳瘦疮模型表皮厚度的影响
[0146] 由表2可见，马甲子干、鲜叶及各马甲子提取物组兔耳表皮厚度无明显减少，与模 型对照组比较，统计学差异不显著(P〉〇.05)。结果表明本品对实验性兔耳瘦疮模型表皮厚 度影响不明显，但有降低作用趋势。
[0147] 表2马甲子及提取物对实验性兔耳瘦疮模型表皮层厚度的影响（i±s)
[014 引
[0149] 注:与模型对照组相比，冲<0.05。
[0150] 2.3对实验性兔耳瘦疮模型毛囊扩张程度的影响
[0151] 由表3可见，马甲子乙酸乙醋提取物组、鲜叶粉碎品组兔耳毛囊扩张减轻，与模型 对照组比较，统计差异显著(P<〇.05)。其余各组有降低作用趋势。结果表明本品能减轻实验 性兔耳瘦疮模型毛囊扩张程度。
[0152] 表3马甲子及提取物对实验性兔耳瘦疮模型毛囊扩张程度的影响fx±s)
[0153]
[0154] 注:与模型对照组相比，冲<0.05*冲<0.01。
[01W] 2.4对实验性兔耳瘦疮模型皮脂腺增生的影响
[0156] 由表4可见，马甲子干、鲜叶及各马甲子提取物组兔耳皮脂腺大小均减小，与模型 对照组相比，统计差异显著(P<〇.05)。表明马甲子干、鲜叶及提取物能减轻实验性兔耳瘦疮 模型皮脂腺增生程度。
[0157] 表4马甲子及提取物对实验性兔耳瘦疮模型皮脂腺增生的影响 [015 引
[0159] 注:与模型对照组相比，*冲<0.01。
[0160] 2.5对实验性兔耳瘦疮模型角化物的影响
[0161] 由表5可见，各马甲子提取物组兔耳毛囊内角化物有减少作用趋势，与模型对照组 比较，统计差异不显著(P〉〇.05)。表明马甲子提取物对减轻实验性兔耳瘦疮模型毛囊内角 化物作用不明显。
[0162] 表5马甲子及提取物对实验性兔耳瘦疮模型角化物的影响（S±S)
[0163]
[0164] 注:与模型对照组相比，*冲<0.01。
[0165] 2.6对实验性兔耳瘦疮模型真皮炎性浸润程度的影响
[0166] 由表6可见，马机子干、鲜叶及各马甲子提取物组兔耳真皮炎性浸润程度有减少作 用趋势，与模型对照组比较，统计差异不显著(P〉〇.05)。表明马甲子提取物组对减轻实验性 兔耳瘦疮模型真皮炎性浸润抑制作用不明显。
[0167] 表6马甲子及提取物对实验性兔耳瘦疮模型真皮炎性浸润程度的影响 [016 引
[0169] 注:与模型对照组相比，*冲<0.01。
[0170] 2.7对雄激素受体表达的影响
[0171 ]表7马甲子及提取物对实验性兔耳瘦疮模型A郎日性表达的影响（
[0172]
[0173] 注:与模型对照组相比，冲<0.05*冲<0.01。
[0174] 模型对照组雄激素受体主要表达在兔耳表皮的棘层细胞核，基底层细胞核有少量 阳性表达，毛囊细胞核也可见较多阳性表达。各给药组阳性表达位置与模型对照组相似，但 表达强度及面积较模型对照组均有不同程度的减少。空白对照组仅见极少量阳性表达。由 表7可见，各组与模型对照组相比，雄激素受体表达强度（I0D)减少，统计差异显著（P< 0.05)，乙酸乙醋组和干、鲜叶组面积(Area)减少。表明马甲子提取物对瘦疮动物模型的雄 激素受体表达具有抑制作用。
[0175] 3试验结论
[0176] 本次实验结果表明，马甲子干、鲜叶及提取物对实验性兔耳瘦疮具有不同程度治 疗作用。能减轻毛囊角化性丘疹，减少局部毛囊角栓。能减轻病理损伤，抑制角质层及皮脂 腺增生，抑制毛囊扩张，对炎性细胞浸润也有一定的抑制作用。其作用机理可能与其抑制雄 激素受体表达有关。
[0177] 五、抗菌作用
[0178] 采用四种标准菌株进行试验:金色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脈杆菌、白色念珠菌。实 验细菌的浓度为105~lOeCRJ/mLW乙酸乙醋提取物、乙醇提取物和水提取物为受试物，W 甲硝挫为阳性对照，用TSB(化yptiC Soy化oth)稀释受试物，使成二倍递减的系列提取物 浓度。在96孔微量U形板上，每孔加稀释后的受试物和实验菌液各50μ1，在微型震荡器上震 荡混匀后培养4她测定MIC值，结果见表8。
[0179] 表8马甲子提取物对常见细菌的抑制作用
[0180]
[0181] 实验结果:本发明提取物具有较好的抑菌效果，表明其有助于对抗烧烫伤后的细 菌感染。
[0182] 六、抗炎作用
[0183] 1.试验方法
[0184] KM小鼠100只，按体重分层随机均分为10组，分别为模型对照组、阳性对照组(醋酸 可的松软膏）、乙酸乙醋提取物小剂量组、乙酸乙醋提取物大剂量组、乙醇提取物小剂量组、 乙醇提取物大剂量组、马甲子石油酸提取物组、马甲子水提物组、马甲子鲜叶粉碎品组、马 甲子干叶粉碎品组。实验当天，动物称重，于小鼠右耳两面仔细涂抹受试物（提取物按 0.05ml/只涂抹，鲜叶或干叶按O.lg鲜叶/只涂抹)或对照物(醋酸可的松软膏，lOmg原药/g 膏，O.lg膏/只）溶剂。药后40min，擦除药物，于小鼠右耳两面仔细涂抹二甲苯(30ul)，造型 20minW后处死小鼠，沿小鼠耳廓基沿剪取左右两耳，称重，计算肿胀度(两耳差值）。
[01化]2.试验结果
[0186] 结果如表9。马甲子提取物各组对二甲苯刺激所致耳肿胀均有明显抑制作用，且大 剂量组优于小剂量组，乙酸乙醋提取物大剂量组效果与醋酸可的松相近。
[0187] 表9马甲子及提取物对小鼠二甲苯所致耳肿胀的影响(n = 10,壬±8)
[018 引
[0189] 与模型对照组比较，冲<0.05，*冲<0.01
[0190] 3.试验结论
[0191] 结果如表9所示。马甲子干、鲜叶及各种提取物对直接化学刺激所致炎症有明确的 抗炎作用。
【主权项】
1. 马甲子或其提取物在制备治疗痤疮的药物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于:所述马甲子采用马甲子全株植物或其中任 一部位的鲜品或干品； 优选的，所述部位为根、茎、叶、花、果任一部位或其混合； 最优选的，所述部位为叶。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于:所述马甲子为鲜品或干品的粉碎品或 提取物，粉碎品以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药，采用粉碎机或其 他器械粉碎制得;提取物以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药，采用常 规提取方法制备而得。4. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于:所述马甲子提取物的制备方法包括： 所述马甲子的粉碎品的制备方法如下： A、 以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药； B、 以粉碎机或其他器械粉碎，过筛，即得； 所述马甲子的提取物的制备方法包括以下至少四种方法： 所述马甲子的提取物的制备方法一： A、 以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药； B、 粉碎，过筛； C、 以水或有机溶剂提取、干燥、即得； 所述马甲子的提取物的制备方法二： A、 以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药； B、 粉碎，过筛； C、 以溶剂a提取，滤液浓缩，得浓缩液； D、 以溶剂b萃取步骤C所得浓缩液，得萃取液，干燥，即得； 或，干燥步骤C所得浓缩液得提取物1，以溶剂b固-液萃取，干燥，即得； 所述马甲子的提取物的制备方法三： A、 以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药； B、 以水或有机溶剂提取、干燥、即得； 所述马甲子的提取物的制备方法四 A、 以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药； B、 以溶剂a提取，滤液浓缩，得浓缩液； C、 以溶剂b萃取步骤B所得浓缩液，得萃取液，干燥，即得； 或，干燥步骤B所得浓缩液得提取物1，以溶剂b固-液萃取，干燥，即得。5. 根据权利要求4所述的提取物的制备方法，其特征在于:满足以下任意一项： 所述马甲子的粉碎品的制备方法和马甲子的提取物的制备方法一和制备方法二中，步 骤B所述粉碎包括粉碎机或其他器械粉碎； 所述马甲子的提取物的制备方法一和制备方法二中的步骤C，以及所述马甲子的提取 物的制备方法三和制备方法四中的步骤B，所述提取方法采用浸渍、回流、渗漉或其他常规 方法提取； 所述马甲子的提取物的制备方法一的步骤C、马甲子的提取物的制备方法二的步骤D、 马甲子的提取物的制备方法三的步骤B、马甲子的提取物的制备方法四的步骤C所述干燥方 法采用减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥或微波等常规干燥方法； 所述马甲子的提取物的制备方法一的步骤C，以及马甲子的提取物的制备方法三的步 骤B所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇;优选乙醇;所述马甲子的提取物的制备方 法二的步骤C，以及马甲子的提取物的制备方法四的步骤B所述溶剂a包括水和有机溶剂;所 述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇;所述的有机溶剂优选乙醇； 所述马甲子的提取物的制备方法二的步骤D以及马甲子的提取物的制备方法四的步骤 C所述溶剂b包括乙酸乙酯、石油醚或正丁醇，优选乙酸乙酯； 所述马甲子的提取物的制备方法一的步骤C，以及马甲子的提取物的制备方法三的步 骤B所使用的溶剂与马甲子的用量关系为，溶剂添加量为马甲子质量的1-40倍； 优选的，溶剂添加量为马甲子质量的2-20倍； 进一步优选的，溶剂添加量为马甲子质量的4-12倍； 优选的，溶剂采用乙醇时，乙醇添加量为马甲子质量的2-20倍； 所述马甲子的提取物的制备方法二的步骤C，以及马甲子的提取物的制备方法四的步 骤B所使用的溶剂a与马甲子的用量关系为，溶剂a添加量为马甲子质量的1-40倍； 优选的，溶剂a添加量为马甲子质量的2-20倍； 进一步优选的，溶剂a添加量为马甲子质量的4-12倍； 溶剂a为乙醇时，所述乙醇的浓度为10-95 % ; 优选的，采用乙醇浓度为40-95 % ; 最优选的，采用乙醇浓度为60-95 %。6. 根据权利要求1-5任一项所述的用途，其特征在于：以马甲子全株植物或其中任一部 位的鲜品/干品的粉碎品或提取物为原料，加入药剂学可接受的辅料按常规方法制备而得 的外用制剂。7. 根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述外用制剂包括软膏剂、乳膏剂、凝胶 剂、涂膜剂、搽剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、糊剂或巴布剂。
【文档编号】A61K36/72GK105998232SQ201610343646
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月23日
【发明人】徐超群, 李东晓, 吴亚梅, 詹雁, 阮佳, 谭镭
【申请人】四川省中医药科学院