一种二色波罗蜜提取物的提取方法、检测方法和应用
【专利摘要】本发明公开了一种二色波罗蜜提取物的提取方法，取干燥的二色波罗蜜粉碎后采用乙醇提取1?3次后浓缩干燥得到含有活血化瘀活性部位的二色波罗蜜提取物；其中，半枫荷根和乙醇的比例为1g:30?90ml；每次用乙醇提取时间为0.5?2h。该提取方法提取准确性高、提取物活性高；此外本发明还提供一种二色波罗蜜提取物的提取方法和检测方法，上述提取方法提取准确且效率高，上述检测方法检测精度高。同时，本发明还公开了上述二色波罗蜜提取物用于制备抗抑郁药物。
【专利说明】
_种二色波罗蜜提取物的提取方法、检测方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种二色波罗蜜提取物的提取方法和检 测方法以及应用。
【背景技术】
[0002] 二色波罗蜜为桑科波罗蜜属植物，又名红楓荷、红山梅、半楓荷等，盛产于广东、海 南、广西、云南等地，以根入药，具有祛风除湿、舒筋活血的功效。用于治疗风湿性关节炎，腰 肌劳损，慢性腰腿痛，半身不遂等疾病。任刚等人先后研究了二色波罗蜜根皮的化学成分研 究、二色波罗蜜叶挥发油化学成分的气相色谱-质谱联用分析，进一步认识和利用该植物资 源提供依据。卢海啸等人研究了二色波罗蜜茎的化学成分，并分离得到9个化合物，其中有7 个化合物首次从该植物中分离得到。从以上研究进一步的证实了二色波罗蜜具有很大的药 用价值，其研发前景可观。
[0003] 我国二色波罗蜜的资源丰富，尤其主产广西，分布广西玉林、平南、苍梧等地。充分 利用二色波罗蜜的各种成分，深度开发二色波罗蜜，获得具有市场竞争力的高附加值产品， 使二色波罗蜜的地方资源优势转化为产业和经济优势，对增加收入，调动生态建设的积极 性具有重大意义。
[0004] 中药的药效不是来自于任何单一的活性成分，而基本上是多种活性成分，甚至与 非活性成分的协同作用或生克作用。而化学成分组的建立不仅具备个体的绝对的唯一性， 更强调的是物种特征的唯一性与同种个体之间的相似性。基于化学成分组的分析技术的中 药提取工艺稳定性评价方法。以化学成分组峰面积为评价指标，定量考察提取液色谱指纹 图谱和溶剂倍数、溶剂浓度、提取时间、提取次数等工艺参数的关系。较好地表征中药提取 过程中工艺参数波动导致的提取物整体质量变化情况，可用于指导工艺参数的调整及优 化，建立科学的生产工艺稳定性评价方法，阐明工艺参数与产品有效组分的内在关系，对指 导工艺参数的调整，进而保证中药产品质量稳定具有重要意义。
[0005] 中药提取工艺现主要以药材浸出物总量、单一化学成分含量、大类组分提取率或 处方内指标成分在提取物中的量等为指标评价工艺状况的优劣，但此类指标未能较全面地 表征出样品的组成特征，未能直观表现样品中化学成分组的综合提取效率以及对应的化学 成分。现有技术对中药的提取多为单一化学成分和多种化学成分的含量为评价指标，但由 于中药中化学成分多数不明确，这样的检测方法仅能精确标示某个成分含量，而不能反映 药物的活性，难与功效相关。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种二色波罗蜜提取物的提取方法和检测方法，上述提取方 法提取准确且效率高，上述检测方法检测精度高。同时，本发明还公开了上述二色波罗蜜提 取物用于制备抗抑郁药物。
[0007] 本发明的技术方案为:一种二色波罗蜜提取物的提取方法，取干燥的二色波罗蜜 粉碎后采用乙醇提取1-3次后浓缩干燥得到含有活血化瘀活性部位的二色波罗蜜提取物；
[0008] 其中，半楓荷根和乙醇的比例为1 g: 30-90ml;每次用乙醇提取时间为0.5-2h。
[0009] 在上述的二色波罗蜜提取物的提取方法中，所述的提取温度为80-100°C。
[0010] 在上述的二色波罗蜜提取物的提取方法中，所述的乙醇的体积百分比为80%，每 次加入的料液比为1 g: 60ml，在90°C下提取2次，每次提取时间为lh。
[0011] 同时，本发明还公开了一种二色波罗蜜提取物的检测方法，包括以下步骤：
[0012] 步骤1:采用上述的方法提取lg干燥的二色波罗蜜，得到二色波罗蜜提取物，用色 谱甲醇溶解样品定容至2ml，过0.45μπι的滤头，得供试品溶液；
[0013] 步骤2:对步骤1制备的供试品溶液进行高效液相色谱测定，色谱条件为:色谱柱： ZORBAX SB-C18 5μπι 4.6x150mm;流动相：乙腈-体积比为0.2%乙酸，流动相临用前经超声 波脱气处理;检测波长:290nm;流速：lml/min;柱温:30°C ;进样量:20yL;
[0014] 流动相采用梯度洗脱的方式加入，0-10min乙腈-0.2%乙酸的体积比为2:8;
[0015] l〇-45min乙腈-0 · 2%乙酸的体积比为3:7;
[0016] 45min后乙腈-0.2%乙酸的体积比为83:17
[0017] 进一步地，本发明还公开了了上述的提取方法得到的二色波罗蜜提取物用于制备 抗抑郁药物。
[0018] 本发明的有益效果如下：
[0019] (1)本发明利用高效液相色谱，以化学成分组为评价指标优化二色波罗蜜的提取 工艺，利用该方法高效、简便的提取了二色波罗蜜中的中药成分，最大化的利用了二色波罗 蜜的药用价值，使得二色波罗蜜具有更加广阔的市场。
[0020] (2)提高了二色波罗蜜有效成分的提取率，对二色波罗蜜有效成分的综合提取工 艺进行研究，以期为该植物各有效成分进一步的化学及药理研究打下基础。以便充分利用 二色波罗蜜的各种成分，深度开发二色波罗蜜，获得具有市场竞争力的高附加值产品，使二 色波罗蜜的地方资源优势转化为产业和经济优势。
[0021] (3)利于对二色波罗蜜各有效成分的提取，为二色波罗蜜的进一步深入研究提供 数据。
[0022] (4)二色波罗蜜具有较为广泛的药用价值，为相关药物产品的生产提供优化的工 艺流程，提高产品有效成分得率，减少杂质，降低成本。
[0023] (5)本发明的方法可以应用于中药提取工艺的参数优化，利用高效液相色谱，以化 学成分组作为指标，高效、简便的提取中药综合有效成分，最大化的利用中药的要用价值， 提尚利用率。
[0024] (6)本发明的二色波罗蜜的提取物具有显著的抗抑郁作用，有效部位明确，药理作 用强，具有良好的药用前景。
【附图说明】
[0025]附图1为本发明的实施例1的序号18的测试图谱。
【具体实施方式】
[0026]下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0027] 实施例1、二色波罗蜜提取物的制备
[0028] 根据单因素试验，提取方法、提取溶剂、溶剂浓度、料液比、提取时间、提取次数、提 取温度等对半楓荷提取率具有重要影响，采用七因素三水平正交试验表，以化学成分组为 评价指标选用最佳提取参数。每个重复提取3个平行量，分别进样。将3个平行量的色谱图经 过积分后，将13个主峰对应峰面积的各平均值。通过对比不同提取方法所得的色谱图中13 个主峰对应峰面积的平均值，筛选出最优提取方法。
[0029] 色谱柱:Z0RBAX SB-C18(5ym 4.6x 150mm);流动相：乙腈-0.2%乙酸.临用前经超 声波脱气处理;检测波长:290nm;流速：lml/min;柱温:30°C ;进样量:20yL。色谱条件如表1 所示。
[0030]表1色谱条件
[0032] 从表3和表4中数据可以判断出序号18的提取方法明显优于其他。
[0033] 表2为序号1~18的提取条件及每个条件三个平行量的得率和平均得率。
[0034] 表 2
[0035]
[0036]
[0037] 因此可以得出结论:提取方法为热回流提取，提取溶剂为80%乙醇溶液，料液比1: 60，提取时间lh，提取温度90°C，提取次数2次。
[0038] 表3和4为序号1~18提取液(三个平行量)的各色谱图中13个主要峰的峰面积平均 值。
[0039] 表 3
[0042]表 4
[0044] 方法学考察：
[0045] 进行重现性试验、稳定性试验、精密度试验对样品重现性、稳定性，仪器精密度的 评价。
[0046] (1)重现性：
[0047]取同一批供试品5份，按"步骤（1)"项下的制备方法，分别制成供试品溶液进行分 析，检测指纹图谱，计算主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。
[0048] 表5重现性相对保留时间
[0050] 表6重现性相对峰面积比
[0053] (2)稳定性；
[0054] 取同一批供试品溶液，分别在0、8、12、16、2处进样，检测指纹图谱，计算主要色谱 峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。
[0055]表7稳定性相对保留时间
[0058] 表8稳定性相对峰面积比 [0060] (3)精密度：
[0061]取同一批供试品溶液，连续进样5次，检测指纹图谱，计算主要色谱峰的相对保留 时间和相对峰面积的RSD。
[0062]表9精密度相对保留时间
[0065] 表10精密度相对峰面积比
[0067] 实施例2、二色波罗蜜提取物对抗抑郁活性作用
[0068] 试验用测试样品二色波罗蜜提物的制备 [0069]提取物制备
[0070]取二色波罗蜜干燥药材粉末适量，用80 %乙醇热回流，料液比1:60，提取时间lh， 提取温度90°C，提取次数2次，过滤，得到二色波罗蜜提取液，减压浓缩至干，得二色波罗蜜 提取物，取部分二色波罗蜜提取物用水溶解成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃 取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取液和水萃取液，分别减压浓缩得到石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇和水部位提取物，备用。
[0071] 2、二色波罗蜜不同提取物对小鼠强迫游泳和悬尾不动时间的影响
[0072] 实验分组之前均用相应仪器对小鼠进行神经行为学测试和筛选，剔除差异较大 的，再将差异较小的小鼠随机分组，每组10只。小鼠随机分为空白组、氟西汀组（50mg · kg <)、二色波罗蜜粗提物组、二色波罗蜜石油醚部位组、二色波罗蜜乙酸乙酯部位组、二色波 罗蜜正丁醇部位组和二色波罗蜜水部位组(均为200mg · kg4)，ig给药，其中空白对照组ig 等容积生理盐水，1次/d，连续10d，于第10天给药后30min测定小鼠悬尾不动时间（小鼠倒位 6min，记录后4min内累计不动时间）；测定小鼠强迫游泳不动时间（小鼠放入水中6min，记录 后4min内累计不动时间）。二色波罗蜜5种提取物均具有缩短小鼠悬尾和强迫游泳的不动时 间（P<0.05)。在二色波罗蜜的4种不同极性提取物中，乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物作 用较为明显(PC0.01)。
[0073] 表11二色菠萝蜜不同提取物对小鼠强迫游泳和悬尾不动时间的影响(n = 10)
[0075] 注:与空白对照组比较:^40.05^^40.01。
[0076] 3、二色波罗蜜正丁醇提取物对利血平诱导小鼠抑郁症模型的影响
[0077]小鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组(50mg · kg-Ι)、正丁醇提取物高、中、低剂 量组(300，200，100mg · kg"1，ig)，其中空白对照组、模型组ig等容积生理盐水，1次/d，连续 10d。末次给药同时，除空白对照组外，各组ip利血平5mg · kg<。此后将小鼠竖起，根据眼睑 下垂情况评分，评分标准为:眼闭1/4为1分，眼闭2/4为2分，眼闭3/4为3分，全闭为4分;2h后 测定小鼠肛温。模型组由于利血平的作用出现了体温下降和眼睑下垂的症状(P<〇.01)。而 二色波罗蜜正丁醇提取物能拮抗利血平所引起的体温下降和眼睑下垂（P<〇.〇5SP< 0.01)。其中二色桂木正丁醇提取物的中、高剂量组尤其显著(P<0.01)。
[0078]表12二色菠萝蜜正丁醇提取物对利血平诱导小鼠抑郁症模型的影响(n = 10)
[0080] 注:与空白对照组比较^^〈o.oi'pso.os。
[00811 实验结果:二色波罗蜜提物及石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位均 可不同程度地缩短小鼠游泳和悬尾的不动时间，其中正丁醇部位的作用最显著(P〈0.05或P 〈0.01)，并能显著拮抗利血平引起的体温下降和眼睑下垂等生理变化(P〈0.05或P〈0.01)， 显著提高。二色波罗蜜提物具有抗抑郁作用，其活性成分主要分布在正丁醇部位。
[0082]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种二色波罗蜜提取物的提取方法，其特征在于:取干燥的二色波罗蜜粉碎后采用 乙醇提取1-3次后浓缩干燥得到含有活血化瘀活性部位的二色波罗蜜提取物； 其中，半楓荷根和乙醇的比例为lg:30-90ml;每次用乙醇提取时间为0.5-2h。2. 根据权利要求1所述的二色波罗蜜提取物的提取方法，其特征在于，所述的提取温度 为80-100°C。3. 根据权利要求1所述的二色波罗蜜提取物的提取方法，其特征在于，所述的乙醇的体 积百分比为80%，每次加入的料液比为lg:60ml，在90°C下提取2次，每次提取时间为lh。4. 一种二色波罗蜜提取物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:采用权利要求1-3任一的方法提取Ig干燥的二色波罗蜜，得到二色波罗蜜提取 物，用色谱甲醇溶解样品定容至2ml，过0.45μπι的滤头，得供试品溶液； 步骤2:对步骤1制备的供试品溶液进行高效液相色谱测定，色谱条件为：色谱柱： ZORBAX SB-C18 5μπι 4.6x 150mm;流动相：乙腈-体积比为0.2%乙酸，流动相临用前经超声 波脱气处理;检测波长:290nm;流速：lml/min;柱温:30°C ;进样量:20yL; 流动相采用梯度洗脱的方式加入，〇-1 Omin乙腈-0.2 %乙酸的体积比为2:8; 10-45min乙腈-0.2 %乙酸的体积比为3:7; 45min后乙腈-0.2 %乙酸的体积比为83:17。5. -种如权利要求1-3提取得到的二色波罗蜜提取物的应用，其特征在于，所述的二色 波罗蜜提取物用于制备抗抑郁药物。
【文档编号】A61K36/60GK105902616SQ201610389879
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年6月6日
【发明人】卢海啸
【申请人】玉林师范学院