具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明公开了具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法与应用。该制备方法先将辣木干叶粉加入乙醇溶液进行超声提取；依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对提取浓缩液进行分级萃取；将萃取液进行减压浓缩、真空冷冻干燥得到粉末A；将粉末A溶于乙醇中，过聚酰胺树脂层析柱，采用乙醇溶液依次进行梯度洗脱，冷冻干燥得粉末B；将粉末B溶于甲醇中，过葡聚糖凝胶LH‐20层析柱，甲醇洗脱，收集合并洗脱液，浓缩、冷冻干燥得粉末C；将粉末C溶于甲醇中，用制备液相反相C18柱进行梯度洗脱，收集30％～35％甲醇洗脱出来的化合物峰，浓缩、冷冻干燥。所得黄酮粉末纯度达99％以上，具有较强的抗补体和α‐葡萄糖苷酶抑制活性。
【专利说明】
具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种辣木叶黄酮，特别是涉及一种具有抗补体和降血糖活性的辣木叶 黄酮及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 辣木(Moringa oleifera Lam.)，又称鼓槌树、马萝卜、不死树、萝卜树等，为辣木科 辣木属热带落叶木本蔬菜及油料作物。原产于印度北部喜马拉雅山麓及非洲，在亚洲、非洲 的热带和亚热带地区有较长的种植历史，共14个品种，目前供食用栽培的只有印度传统辣 木、印度改良种辣木和非洲辣木三个品种。近年来，辣木在我国云南、广东、福建、台湾等地 得到了广泛的引种栽培，其产品的开发也成为了热点。
[0003] 辣木含有丰富的蛋白质、维生素、氨基酸、脂肪、碳水化合物等，是传统的食物和药 物来源。在非洲的一些农村地区也常用辣木粉做净水剂，得到纯净的饮用水。辣木叶被广泛 食用，特别是在印度、菲律宾群岛、夏威夷及部分非洲国家，将其作为高营养蔬菜的补充。古 印度的传统医学认为辣木叶有护肝、利尿、消炎、止痛、降压、强心、催欲等功效，常用来预防 和治疗糖尿病、高血压、肥胖症、免疫力弱、消化器官肿瘤等疾病。2012年11月，我国卫生部 批准辣木叶作为新资源食品。
[0004]辣木叶极高的营养价值使其成为当今国际社会普遍关注的焦点。近几年的研究发 现，辣木叶含有较高的多糖、黄酮、多酚等生物活性物质，具有抗动脉粥样硬化、免疫调节、 抗肿瘤、抗氧化、抑菌、抗炎、抗病毒、降血糖、降血脂等作用。因此，辣木叶具有很好的开发 前景，值得进一步的研究和利用。
[0005] 专利号为201410178030.1的中国发明专利公开了"从辣木叶中提取辣木黄酮的方 法"，该方法包括如下步骤:1)将辣木叶片干燥装入滤筐中，投入亚临界萃取釜中，密闭萃取 釜;然后加入有机萃取剂，升温至亚临界萃取釜中萃取液处于亚临界状态;提取萃取液投入 溶剂回收釜，减压回收溶剂，得到黑绿色浸膏；2)向浸膏中加入用水饱和的正丁醇萃取;使 用离心机离心，收集萃取相;将萃取相用旋转蒸发仪减压浓缩至棕黄色浸膏;3)将棕黄色浸 膏上大孔树脂柱，然后用洗脱液按洗脱液的极性由小到大，梯度洗脱，检测，取黄酮含量大 于97%的馏分浓缩至干粉，用甲醇或乙醇重结晶，得纯度为98%以上的黄酮类产品，但未对 该黄酮类产品进行结构鉴定。由于黄酮类化合物种类多样，故不同的提取分离方法得到的 黄酮单体化合物也不尽相同。
[0006] 黄酮类化合物具有很好的抗氧化、抗肿瘤、降血压等功效。专利号为 201310531168.0的中国发明专利从啤酒花中分离得到纯度较高的芦丁、异槲皮苷单体化合 物，并检测发现其有很好的抗氧化与抗过敏功效;然而目前没有涉及从辣木叶中分离纯化 出具有较好抗补体和降血糖活性，且活性成分较纯的黄酮产品的报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法， 整个工艺流程简单，加工制备的成本低，收率和纯度高。
[0008] 本发明采用活性向导逐级分离纯化方法，首次从辣木叶中分离、纯化、鉴定出一种 具有抗补体和降血糖活性的高纯度的黄酮物质。
[0009] 本发明的具体技术方案如下：
[0010] -种具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，以辣木叶为原料，经过 提取、离心浓缩、聚酰胺树脂、葡聚糖凝胶LH-20及制备液相等工艺纯化后得到。
[0011] -种具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，包括以下步骤：
[0012] (1)将辣木叶粉末与浸提溶剂按料液比混合搅拌均匀，进行超声提取，得提取液， 离心得到上清液，将滤渣进行二次提取，离心，合并上清液;分别以克和毫升作为单位，所述 料液比为1:25~1:45;以体积百分比计，所述浸提溶剂为60~80%乙醇；
[0013] (2)取上清液进行旋转蒸发浓缩，得到浓缩液；
[0014] (3)将浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，再用正丁醇进行萃取，得到正丁 醇萃取液，将正丁醇萃取液进行旋转蒸发浓缩、冷冻干燥得到粉末A;
[0015] (4)利用聚酰胺树脂层析柱纯化步骤(3)得到的粉末A，洗脱溶剂为乙醇水溶液，以 体积百分比计，薄层色谱进行跟踪，收集30 %乙醇的第3~7倍柱体积的洗脱液，旋转蒸发浓 缩、冷冻干燥得粉末B;
[0016] (5)利用葡聚糖凝胶LH-20柱层析纯化步骤(4)得到的粉末B，洗脱溶剂为甲醇水溶 液，以体积百分比计，薄层色谱进行跟踪，收集60~80 %甲醇洗脱液，旋转蒸发浓缩、冷冻干 燥，得到粉末C;
[0017] (6)将粉末C溶于甲醇中，控制粉末C在溶液中的浓度为3~5mg/mL;用制备液相反 相C18柱进行梯度洗脱，收集30%~35%甲醇洗脱出来的化合物峰，HPLC进行跟踪，合并相 同组分，旋转蒸发浓缩、冷冻干燥，得辣木叶黄酮固体粉末产品D。
[0018] 为进一步实现本发明目的，优选地，所述辣木叶粉末是过40~60目筛得到。
[0019]优选地，步骤（1)的超声提取条件为：提取温度为40~70°C，提取时间为30~ 70min，超声功率为100~300W。
[0020] 优选地，步骤(1)的离心的转速为4000~5000r/min，时间为5~20min。
[0021]优选地，步骤(2)~(6)的旋转蒸发都为真空旋转蒸发，温度为45~65 °C。
[0022]优选地，步骤(4)的聚酰胺树脂纯化中所用的聚酰胺型号为30~60目，洗脱梯度依 次为6~8倍柱体积水、8~10倍柱体积10 %乙醇、8~10倍柱体积30 %乙醇、8~10倍柱体积 50 %乙醇和8~10倍柱体积70 %乙醇。
[0023]优选地，步骤(5)的葡聚糖凝胶LH-20柱层析纯化中所用的甲醇洗脱梯度依次为3 ~4倍柱体积20~30%甲醇和5~6倍柱体积60~80%甲醇。
[0024] 优选地，步骤(6)的制备液相反相C18柱纯化中所用的洗脱程序为0~60min采用 30%~35%甲醇；60~105min采用35%~75%甲醇；105~115min采用75%~100%甲醇； 115~145min采用100%甲醇；紫外检测器波长为250~280nm。
[0025] -种具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮，由上述制备方法制备。
[0026]本发明黄酮固体粉末D主要为槲皮素-3-〇-i3_D-葡萄糖苷，纯度达99%以上，其化 学式为：
[0028] 所述的化合物在制备抗补体和降血糖药物和保健品中的应用。所制得的黄酮单体 化合物具体涉及具有绵羊红细胞溶血抑制活性及a_葡萄糖苷酶抑制活性，可用于制备抗补 体和降血糖类药物或保健品。
[0029] 本发明具有如下优点和效果：
[0030] 本发明首次从辣木叶中分离、纯化、鉴定出一种具有抗补体和降血糖活性的黄酮 化合物。
[0031] 该化合物对绵羊红细胞的溶血抑制作用与肝素钠相当，高浓度时甚至高于肝素 钠；
[0032] 对α-葡萄糖苷酶抑制作用与阿卡波糖相当，可用于具有抗补体和降血糖功效的保 健食品或辅助治疗药物。
【附图说明】
[0033]图1为实施例1化合物的MS图谱。
[0034] 图2为实施例1化合物的1H-NMR图谱。
[0035] 图3为实施例1化合物的13C_NMR图谱。
[0036] 图4为实施例1化合物对绵羊红细胞的溶血抑制作用效果图。
[0037] 图5为实施例1化合物对α_葡萄糖苷酶的抑制作用效果图。 具体实施方案
[0038] 为更好地理解本发明，下面结合附图和实施例对发明的具体实施作进一步说明， 但本发明的实施方式不限如此。
[0039] 实施例1
[0040] (1)辣木干叶经粉碎机粉碎，过40目筛得辣木叶粉末；
[0041 ] (2)(2)将辣木叶粉末与浸提溶剂按料液比1: 25(单位分别为g和mL)混合搅拌均 匀，进行超声提取（乙醇体积浓度70 %，提取温度50°C，提取时间55min，超声功率100W)，得 提取液，离心得到上清液，将滤渣进行二次提取，离心，合并上清液;取上清液于50°C下进行 真空旋转蒸发浓缩得到浓缩液。
[0042] (3)将浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，依次除去叶绿素等脂溶性成分， 小极性及中等极性的物质;再用正丁醇进行萃取，得到正丁醇萃取液，将正丁醇萃取液经真 空旋蒸浓缩、冷冻干燥得到粉末A。
[0043] (4)利用聚酰胺树脂层析柱纯化步骤(3)得到的粉末A，洗脱溶剂为乙醇水溶液，以 体积百分比计，洗脱梯度依次为6倍柱体积水、8倍柱体积10%乙醇、10倍柱体积30 %乙醇、 10倍柱体积50 %乙醇和8倍柱体积70 %乙醇，薄层色谱(TLC)进行跟踪，收集30 %乙醇的第3 ~7倍柱体积的洗脱液，浓缩、冷冻干燥得到粉末B;
[0044] (5)利用葡聚糖凝胶LH-20柱层析纯化步骤(4)得到的粉末B，洗脱溶剂为甲醇水溶 液，以体积百分比计，洗脱梯度依次为3倍柱体积20%甲醇和5倍柱体积60%甲醇，薄层色谱 (TLC)进行跟踪，收集60 %甲醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥得到粉末C;
[0045] (6)将粉末C溶于甲醇中，使其浓度为3mg/mL，用制备液相反相C18柱进行梯度洗 脱，所用的洗脱程序为〇~60min采用30%~35%甲醇；60~105min采用35%~75%甲醇； 105~115min采用75%~100%甲醇；115~145min采用100%甲醇；紫外检测器波长为 254nm。收集31 %甲醇洗脱出来的化合物峰，HPLC进行跟踪，紫外检测器的检测波长为 254nm，合并相同组分，真空旋蒸浓缩、冷冻干燥得辣木叶黄酮固体粉末产品D。
[0046] 实施例2
[0047] (1)辣木干叶经粉碎机粉碎，过60目筛得辣木叶粉末；
[0048] (2)将辣木叶粉末与浸提溶剂按料液比（1: 35，单位分别为g和mL)混合搅拌均匀， 进行超声提取（乙醇浓度80%，提取温度40°C，提取时间70min，超声功率150W)，得提取液， 离心得到上清液，将滤渣进行二次提取，离心，合并上清液;取上清液于50°C下进行旋转蒸 发浓缩得到浓缩液。
[0049] (3)将浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，依次除去叶绿素等脂溶性成分、 小极性及中等极性的物质;再用正丁醇进行萃取，得到正丁醇萃取液，将正丁醇萃取液经真 空旋蒸浓缩、冷冻干燥得到粉末A。
[0050] (4)利用聚酰胺树脂层析柱纯化步骤(3)得到的粉末A，洗脱溶剂为乙醇水溶液，以 体积百分比计，洗脱梯度依次为8倍柱体积水、8倍柱体积10 %乙醇、10倍柱体积30 %乙醇、8 倍柱体积50%乙醇和10倍柱体积70%乙醇，薄层色谱(TLC)进行跟踪，收集30%乙醇的第3 ~7倍柱体积的洗脱液，浓缩、冷冻干燥得到粉末B;
[0051] (5)利用葡聚糖凝胶LH-20柱层析纯化步骤(4)得到的粉末B，洗脱溶剂为甲醇水溶 液，以体积百分比计，洗脱梯度依次为3倍体积30 %甲醇和5倍体积80 %甲醇，薄层色谱 (TLC)进行跟踪，收集80 %甲醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥得到粉末C;
[0052] (6)将粉末C溶于甲醇中，使其浓度为4mg/mL，用制备液相反相C18柱进行梯度洗 脱，所用的洗脱程序为〇~60min采用35%甲醇；60~105min采用35%~75%甲醇；105~ 115min采用75%~100%甲醇；115~145min采用100%甲醇；紫外检测器波长为265nm。 [0053]收集32%甲醇洗脱出来的化合物峰，HPLC进行跟踪，紫外检测器的检测波长为 265nm，合并相同组分，旋蒸浓缩、冷冻干燥得辣木叶黄酮固体粉末产品D。
[0054] 实施例3
[0055] (1)辣木干叶经粉碎机粉碎，过60目筛得辣木叶粉末；
[0056] (2) (2)将辣木叶粉末与浸提溶剂按料液比（1:45，单位分别为g和mL)混合搅拌均 匀，进行超声提取（乙醇浓度60%，提取温度70°C，提取时间30min，超声功率300W)，得提取 液，离心得到上清液，将滤渣进行二次提取，离心，合并上清液;取上清液于50°C下进行旋转 蒸发浓缩得到浓缩液。
[0057] (3)将浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，依次除去叶绿素等脂溶性成分、 小极性及中等极性的物质;再用正丁醇进行萃取，得到正丁醇萃取液，将正丁醇萃取液经真 空旋蒸浓缩、冷冻干燥得到粉末A。
[0058] (4)利用聚酰胺树脂层析柱纯化步骤(3)得到的粉末A，洗脱溶剂为乙醇水溶液，以 体积百分比计，洗脱梯度依次为8倍柱体积水、8倍柱体积10 %乙醇、10倍柱体积30 %乙醇、8 倍柱体积50 %乙醇和8倍柱体积70 %乙醇，薄层色谱(TLC)进行跟踪，收集30 %乙醇的第3~ 7倍柱体积的洗脱液，浓缩、冷冻干燥得到粉末B;
[0059] (5)利用葡聚糖凝胶LH-20柱层析纯化步骤(4)得到的粉末B，洗脱溶剂为甲醇水溶 液，以体积百分比计，洗脱梯度依次为6倍体积20 %甲醇和5倍体积70 %甲醇，薄层色谱 (TLC)进行跟踪，收集70 %甲醇洗脱液，浓缩、冷冻干燥得到粉末C;
[0060] (6)将粉末C溶于甲醇中，使其浓度为5mg/mL，用制备液相反相C18柱进行梯度洗 脱，所用的洗脱程序为〇~60min采用30%~35%甲醇；60~105min采用35%~75%甲醇； 105~115min采用75%~100%甲醇；115~145min采用100%甲醇；紫外检测器波长为 280nm。收集32%甲醇洗脱出来的化合物峰，HPLC进行跟踪，紫外检测器的检测波长为 280nm，合并相同组分，旋蒸浓缩、冷冻干燥得辣木叶黄酮固体粉末产品D。
[0061] 按以上实施例1制得的黄酮固体粉末产品通过以下方法进行结构鉴定，该化合物 为槲皮素-3-(H3-D-葡萄糖苷，实施例2和3的结果与实施例1类似，图1为实施例1所得化合 物的MS图谱，由图可知[M-H] -= 463, [2M-H] -= 927,确定分子量为464。根据图2和图3的1H-NMR和13C-NMR可知该化合物有21个碳原子，确定其分子式为C 21H2Q〇12.
[0062] 图 2 为实施例 1所得化合物的h-NMR图谱，iH-NMRWOOMHz，DMS0-d6)Sl2.65( 1H, s， 5-OH)，10·90(lH，s，lAr-OH)，9.76(lH，s，lAr-OH)，9.25(lH，s，lAr-OH)，7.59((1, J = 2.0Hz， H-2'），6.42((1, J = 2.0Hz，H-8)，6.22((1, J = 2.0Hz，H-5'），5.48((1, J = 7.4Hz，H-l'），5· 31 (d，J = 3.7Hz，0H)，5.10(d，J=1.9Hz，0H)，4.98(lH，s，0H)，4.29(s，6，-OH)，3.59(d，J = 4.0Hz，6H)，3.47(s，4H)，3.44(s，52H)，3.24(dd，J=78.4,69.7Hz，41H)，2.55-2.48(m，4H)， 1.21(d，J = 19.8Hz，lH)〇
[0063] 图 3 为实施例 1 所得化合物的 13C-NMR 图谱，13C-NMR(151MHz，DMS0)S177.92
[0064] (C-4)，164.57(07)，161.71(05)，156.79(09)，156.66(02)，148.92(04'）， 145.27(03'），133.79(03)，122.07(06'），121.64(01'），116.68(05'），115.68(02'）， 104.46(010)，101.33(C-r)，99.12(C-6)，93.97(C-8)，78.02(C-3"），76.97(C-5"），74.56 (C-2"），70.40(C-4"），61.44(C-6"）。由此确定该化合物为槲皮素-3-〇-i3-D-葡萄糖苷。 [0065]可见，本发明得到黄酮固体粉末D为槲皮素-3-〇-i3_D-葡萄糖苷，纯度达99%以上， 其化学式为：
[0067]本发明实施例可见，整个制备工艺流程简单，制备成本低，收率和纯度高。
[0068] 应用实例1
[0069] 4% (v/v)绵阳红细胞及豚鼠血清购自广州蕊特生物科技有限公司，兔抗绵阳红细 胞溶血素购自玉环县南方试剂厂。
[0070] 以经典途径的红细胞溶血实验进行化合物抗补体活性的测定。用明胶巴比妥缓冲 溶液(GVB2+)将溶血素（1:4000)稀释10倍，将稀释好的溶血素缓慢注入等体积的2%(v/v)绵 羊红细胞中，轻轻混合均匀，37 °C水浴30min，即为致敏绵羊红细胞。取200yL稀释5倍的豚鼠 血清与200yL各浓度槲皮素-3-〇-i3-D-葡萄糖苷溶液混匀，37°C水浴lOmin，加入200yL致敏 绵羊红细胞，轻轻混匀，于37°C水浴中反应30min后，在2500r/min下离心10min，取上清液 150yL于96空板中，405nm测吸光值，同时设置样品对照组(200yL各浓度槲皮素-3-〇-i3-D-葡 萄糖苷溶液+400yLGVB)、补体组(200yL豚鼠血清+200yL致敏绵羊红细胞+200yLGVB)和全溶 血组（lOOyL 2%绵羊红细胞+500yL超纯水），用相同浓度的肝素钠作为阳性对照（200yL豚 鼠血清+200yL致敏绵羊红细胞+200yL肝素钠）。结果如图4所示，中低样品浓度(0.25~3mg/ mL)范围内，槲皮素-3-〇-i3-D-葡萄糖苷的红细胞溶血抑制率低于肝素钠，当样品浓度增大 到4mg/mL时，其抗补体活性明显高于阳性对照，且有继续上升的趋势。由此可知，该化合物 具有很好的抗补体活性，且呈明显的剂量依赖关系，其CH 5Q值为1.75mg/mL。
[0071] 应用实例2
[0072]降血糖活性的测定：取各浓度槲皮素-3-〇-i3-D-葡萄糖苷溶液50yL，加入200yL 0.35U/mLa-葡萄糖苷酶（lOOmM pH6.9的PBS配制），混匀，37°C水浴中孵育lOmin，加入100yL 1.5mM pNPG(100mM ρΗ6·9的PBS配制），混匀，37°C水浴反应20min，加入lmL 1M Na2C03终止 反应，混匀，于400nm处测定吸光值，同时用相同浓度的阿卡波糖作为阳性对照组。结果如图 5所示，与阳性对照阿卡波糖相比，槲皮素-3-〇-i3_D-葡萄糖苷具有很好的α-葡萄糖苷酶抑 制活性，并且随着样品浓度的增加对酶的抑制率迅速增大，在〇.2mg/mL时抑制率(95.02 土 1 · 10 % )略低于阿卡波糖(99 · 61 ± 0 · 79 % )，其EC5q值为0 · 039mg/mL。
[0073]由图4和图5可知，槲皮素-3-〇-i3_D-葡萄糖苷具有较强的抗补体和α-葡萄糖苷酶 抑制活性，高浓度(>3.5mg/mL)时甚至高于肝素钠;对α -葡萄糖苷酶抑制作用与阿卡波糖相 当，可用于具有抗补体和降血糖功效的辅助治疗药物，也可作为食品添加物掺入到特定保 健用食品、特殊营养食物、营养辅助食物、健康食品、功能性食品和病人用食品等饮食品中。 [0074] 应用实例3
[0075]将槲皮素-3 - O-β- D-葡萄糖苷、木糖醇、甘露醇、5 %聚乙二醇乙醇液与硬脂酸镁混 合均匀，以质量百分比计，其中槲皮素-3-〇-i3-D-葡萄糖苷含量为10%，木糖醇含量为10%， 甘露醇65 %，5 %聚乙二醇乙醇液含量为10 %，硬脂酸镁含量为5 %，压片，每片0.5g，一次1 片，一日3次。功能与主治:可用于胰岛素依赖型或非胰岛素依赖型的糖尿病，18岁以下青少 年、儿童以及孕妇和哺乳妇女避免使用。
[0076] 应用实例4
[0077]将槲皮素-3-〇-i3_D-葡萄糖苷、木糖醇、山梨醇、5%聚乙二醇乙醇液与硬脂酸镁混 合均匀，以质量百分比计，其中槲皮素-3-〇-i3-D-葡萄糖苷含量为5%，木糖醇含量为10%， 山梨醇70%，5%聚乙二醇乙醇液含量为10%，硬脂酸镁含量为5%，压片，每片0.5g，每日每 千克体重1~1.5mg，分3次饭后服用。功能与主治:可用于免疫性疾病，18岁以下青少年、儿 童以及孕妇和哺乳妇女避免使用。
[0078]本发明的应用方式不仅限于此，也可作为食品添加物掺入到特定保健用食品、特 殊营养食物、营养辅助食物、健康食品、功能性食品和病人用食品等饮食品中。
【主权项】
1. 具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 将辣木叶粉末与浸提溶剂按料液比混合搅拌均匀，进行超声提取，得提取液，离心 得到上清液，将滤渣进行二次提取，离心，合并上清液;分别以克和毫升作为单位，所述料液 比为1:25~1:45;以体积百分比计，所述浸提溶剂为60~80%乙醇； (2) 取上清液进行旋转蒸发浓缩，得到浓缩液； (3) 将浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯进行萃取，再用正丁醇进行萃取，得到正丁醇萃 取液，将正丁醇萃取液进行旋转蒸发浓缩、冷冻干燥得到粉末A; (4) 利用聚酰胺树脂层析柱纯化步骤(3)得到的粉末A，洗脱溶剂为乙醇水溶液，以体积 百分比计，薄层色谱进行跟踪，收集30%乙醇的第3~7倍柱体积的洗脱液，旋转蒸发浓缩、 冷冻干燥得粉末B; (5) 利用葡聚糖凝胶LH-20柱层析纯化步骤(4)得到的粉末B，洗脱溶剂为甲醇水溶液， 以体积百分比计，薄层色谱进行跟踪，收集60~80 %甲醇洗脱液，旋转蒸发浓缩、冷冻干燥， 得到粉末C; (6) 将粉末C溶于甲醇中，控制粉末C在溶液中的浓度为3~5mg/mL;用制备液相反相Cl8 柱进行梯度洗脱，收集30%~35%甲醇洗脱出来的化合物峰，HPLC进行跟踪，合并相同组 分，旋转蒸发浓缩、冷冻干燥，得辣木叶黄酮固体粉末产品D。2. 根据权利要求1所述的具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征 在于:所述辣木叶粉末是过40~60目筛得到。3. 根据权利要求1所述的具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征 在于:步骤（1)的超声提取条件为:提取温度为40~70°C，提取时间为30~70min，超声功率 为100~300W。4. 根据权利要求1所述的具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征 在于:步骤(1)的离心的转速为4000~5000r/min，时间为5~20min。5. 根据权利要求1所述的具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征 在于:步骤(2)~(6)的旋转蒸发都为真空旋转蒸发，温度为45~65°C。6. 根据权利要求1所述的具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征 在于:步骤(4)的聚酰胺树脂纯化中所用的聚酰胺型号为30~60目，洗脱梯度依次为6~8倍 柱体积水、8~10倍柱体积10 %乙醇、8~10倍柱体积30 %乙醇、8~10倍柱体积50 %乙醇和8 ~10倍柱体积70 %乙醇。7. 根据权利要求1所述的具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征 在于:步骤(5)的葡聚糖凝胶LH-20柱层析纯化中所用的甲醇洗脱梯度依次为3~4倍柱体积 20~30%甲醇和5~6倍柱体积60~80%甲醇。8. 根据权利要求1所述的具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮的制备方法，其特征 在于:步骤(6)的制备液相反相C18柱纯化中所用的洗脱程序为0~60min采用30%~35%甲 醇；60~105min采用35%~75%甲醇；105~115min采用75%~100%甲醇；115~145min采 用100 %甲醇；紫外检测器波长为250~280nm〇9. 一种具有抗补体和降血糖活性的辣木叶黄酮，其特征在于其由权利要求1-8任一项 所述制备方法制备。10. 权利要求1所述的化合物在制备抗补体和降血糖药物和保健品中的应用。
【文档编号】A61P3/10GK105902584SQ201610378444
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年5月31日
【发明人】扶雄, 岳秀洁, 李超, 黄强
【申请人】华南理工大学, 广州粤糖食品科技有限公司