一种可控药物释放的纳米药物载体粒子及制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种可控药物释放的纳米药物载体粒子，所述粒子具有核壳型结构，最内层为表面介孔并且中空结构的金纳米笼(1)，所述金纳米笼(1)表面修饰一层带有正电的聚合物PAH层(2)，所述聚合物PAH层(2)的外表面包裹层具有pH敏感型的脂质体层(3)。当在pH、光照的外界激励触发下，门控由“关”转为“开”的状态，从而释放出药物分子。这种载体粒子能有效地提高癌症化疗的效率。
【专利说明】
一种可控药物释放的纳米药物载体粒子及制备方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种可控药物释放的纳米药物载体粒子及其制备方法，属于纳米材料制备领域。
【背景技术】
[0002]目前，如何提高癌症化学治疗过程的效率、减小其副作用等是亟待解决的难题。因此近年来，使用纳米胶囊作为抗肿瘤药物载体正在成为医学界研究的焦点之一。由于现有的抗肿瘤药物特异性普遍不高，因此如何在不损伤正常细胞的情况下把药物定向输送到癌症细胞内成为了目前癌症药物研究的关键问题之一。
[0003]金纳米笼作为一种新型的具有中空、表面介孔结构以及等离子体激元特性的金属纳米粒子已经被广泛的应用于纳米药物载体的研究之中。这种纳米粒子在近红外光区域良好的光散射和吸收能力以及其独特的LSPR峰使其被广泛应用于光相干断层扫描、光声波成像以及光热治疗的研究中。由于金纳米笼具有良好的中空结构，在其内部可以载入大量的药物分子，然而，仅通过物理吸附的方式装载的药物在进入病变组织细胞之前会产生严重的药物泄露，从而对正常组织细胞造成伤害。这一方面降低了肿瘤部位的给药量，另一方面也对正常生理组织产生较大毒副作用。解决的方法是在这类药物载体粒子中加入可控释放部件，使其只在目标细胞处释放药物。常用的控制手段包括温度、光照、PH值变化、酶作用以及氧化还原作用等。
[0004]脂质体或纳米胶囊作为药物载体可增加药物的水溶性，使药物获得靶向功能，延长药物在肿瘤内的存留时间以及患肿瘤动物的存活时间。将脂质体包裹在金纳米笼表面，可以对装载入金纳米笼内部的药物分子进行良好的封装作用，有效减少药物在输送过程中的释放。并且，在其内部载入具有荧光信号的药物分子，可以实现对药物载体的示踪。
[0005 ]综上所述，利用金纳米笼，脂质体等，可构筑一种可控释放药物的纳米药物载体粒子。这种载体粒子能有效提尚癌症化疗的效率。
【发明内容】
[0006]发明目的:为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种可控药物释放的纳米药物载体粒子及制备方法，本发明能够减少其在运输过程中药物的泄露，具有较好的生物相容性以及更小的细胞毒副作用。并且可以通过外界条件刺激，达到药物可控释放的效果。本发明的纳米药物载体粒子制备方法简单且可重复性高。该纳米药物载体粒子的可控释放特性较好。
[0007]技术方案:为实现上述目的，本发明采用的技术方案为:
[0008]—种可控药物释放的纳米药物载体粒子，所述粒子具有核壳型结构，最内层为表面介孔并且中空结构的金纳米笼(I)，所述金纳米笼(I)表面修饰一层带有正电的聚合物PAH层(2)，所述聚合物PAH层(2)的外表面包裹层具有pH敏感型的脂质体层(3)。
[0009 ]进一步地:所述金纳米笼(I)将药物通过物理吸附的方式装载到内部。
[0010]进一步地:所述脂质体层(3)设置有连接细胞靶向材料的转铁蛋白层(4)。
[0011]优选的:所述聚合物PAH层(2)的厚度在0.5-5nm。脂质体层(3)采用天然磷脂制成。
[0012]—种可控药物释放的纳米药物载体粒子的制备方法，包括以下步骤:
[0013]步骤I，采用硫化物调停法制备银立方体纳米粒子。
[0014]步骤2，对步骤I得到的银立方体纳米粒子采用氯金酸还原法制备得到金纳米笼纳米粒子。
[0015]步骤3，采用薄膜蒸发法制备具有pH敏感型脂质体。
[0016]步骤4，在步骤2中制备的金纳米笼中载入药物分子:
[00? 7]步骤5，在步骤4制备的金纳米笼表面修饰一层厚度在0.5_5nm带正电的聚合物分子PAH，形成表面带有正电的金纳米笼粒子。
[0018]步骤6，在步骤5得到的纳米粒子表面包裹一层在步骤3中制备的pH敏感型脂质体，形成表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子。
[0019]步骤7，在步骤6得到的粒子表面修饰细胞靶向性材料转铁蛋白，形成所要制备的纳米药物载体粒子。
[0020]所述步骤I制备银立方体纳米粒子的方法，将2-8份的乙二醇置于反应容器中，加入洁净的磁子。将反应容器置入预先加热到140-160°C的油浴锅中，调节磁子转速至260-350rpm，加热确保反应容器内部温度达到140-160 °C。之后加入0.03-0.09份的3mM的NaSH乙二醇溶液。2分钟后注入0.2-0.8份的3mM的HCl，然后立即加入1-1.5份的20mg/mL分子量为58000的PVP乙二醇溶液。2分钟后加入0.1-0.7份的282mM三氟乙酸银乙二醇溶液开始引发反应，15分钟后停止加热搅拌。反应结束后，将溶液冷却离心，离心后去除上清得到的溶液在通过去离子水离心清洗，清洗完成后保存于1-3份的去离子水中，得到制备好的银立方体纳米粒子溶液。
[0021]所述步骤2中制备金纳米笼纳米粒子的方法，取2-8份9mM的分子量为58000的PVP水溶液至反应容器中，加入0.05-0.2份步骤I中的银立方体纳米粒子溶液并加热至微沸。缓慢滴加0.1mM的HAuC14，观察溶液颜色，到蓝色时停止滴加。记录HAuC14用量，继续反应10分钟后，取出溶液冷却，并用去离子水离心清洗。之后加入NaCl至饱和以去除生成的AgCl，得到金纳米笼纳米粒子溶液。
[0022]所述步骤3中制备具有pH敏感型脂质体的方法:取1-4份的三氯甲烷和0.25-1份甲醇，将三氯甲烷与甲醇按4:1比例混合放入反应容器中，向反应容器中依次加入0.1-1份浓度为25mg/mL的二油酰磷脂酰乙醇胺，0.1-0.3份浓度为20mg/mL的油酸，0.3-1.2份浓度为10mg/mL的胆固醇，将溶液超声使其完全溶解。置于40°C下旋蒸4小时后再水化2小时以上，即得到脂质体纳米材料，将产物浓度稀释到5mg/ mL，得到5mg/ mL的脂质体纳米材料溶液。
[0023]所述步骤4中在金纳米笼中载入药物分子的方法，将步骤2得到的金纳米笼纳米粒子溶液分散至1-3份去离子水中，加入0.02-0.2份浓度为5mg/mL的药物分子水溶液，避光过夜搅拌，过量的药物分子通过离心分离，得到载入药物分子的金纳米笼溶液。
[0024]所述步骤5中形成表面带有正电的金纳米笼粒子的方法:将1-3份步骤4制备的载入药物分子的金纳米笼溶液加入到lmg/mL的PAH溶液中，静置反应I小时后，离心清洗，得到表面带有正电的金纳米笼粒子溶液。
[0025]所述步骤6中形成表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子的方法:将步骤5得到的表面带有正电的金纳米笼粒子溶液与步骤3中得到的5mg/mL的脂质体纳米材料溶液混合，反应两小时后离心，得到表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子的溶液。
[0026]所述步骤7中表面修饰细胞靶向性材料转铁蛋白的方法:将步骤6得到的表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子的溶液中加入0.01-0.1份二氯乙烷和0.01-0.08份NHS，搅拌两小时后加入0.01-0.1份lmg/mL的转铁蛋白，混合2小时后离心，得到的产物即为所要制备的纳米药物载体粒子。
[0027]有益效果:本发明提供的可控药物释放的纳米药物载体粒子及制备方法，相比现有技术，具有以下有益效果:
[0028]1、本发明所述纳米材料相比于单纯的金纳米笼具有更好的药物封装能力，有效减少药物分子在运输过程中的泄露；
[0029]2、本发明所述纳米粒子通过pH刺激实现外层脂质体控制的药物释放，与其他可控释放方式相比，该方法十分简便且可控释放效果好；
[0030]3、本发明所述纳米药物载体以金纳米笼作为内核，具有很好的近红外光吸收能力，可用于光控增加药物释放速率；
[0031]4、本发明所述纳米药物载体具有细胞靶向性，有效增加了肿瘤细胞部位的给药量，减少对正常细胞组织造成的损害；
[0032]5、本发明制备的脂质体所采用的磷脂是天然磷脂，相比人工合成磷脂二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，成本低；
[0033]6、本发明的纳米药物载体粒子制备方法简单、可重复性高，可控释放特性较好。
【附图说明】
[0034]图1为可控药物释放的纳米药物载体粒子的结构示意图。
[0035]图2为纳米载体粒子在不同pH触发下的药物释放曲线。
[0036]其中，I为金纳米笼，2为带有正电的聚合物PAH层，3为脂质体层，4为转铁蛋白层，5为药物。
【具体实施方式】
[0037]下面结合附图和具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
[0038]—种可控药物释放的纳米药物载体粒子，如图1所示，所述粒子具有核壳型结构，最内层为表面介孔并且中空结构的金纳米笼I，所述金纳米笼I表面修饰一层带有正电的聚合物PAH层2，所述聚合物PAH层2的外表面包裹层具有pH敏感型的脂质体层3，脂质体层3为具有光照、PH相应特性的脂质体。
[0039]所述金纳米笼I将药物5通过物理吸附(静电吸附)的方式装载到内部。
[0040]脂质体层3表面设置有连接细胞靶向材料的转铁蛋白层4。
[0041]所述聚合物PAH层2的厚度在0.5-5nm。脂质体层3采用天然磷脂制成。
[0042]实施例1
[0043]以金纳米笼作为药物载体，在其外层包裹上具有pH敏感特性的脂质体，在外层脂质体上连接细胞靶向材料转铁蛋白。脂质体作为门控开关，载体粒子结构示意图如图1。
[0044]I).制备银立方体纳米粒子:取5mL的乙二醇置50mL的圆底烧瓶中，加入洁净的磁子。将圆底烧瓶置入预先加热到150°C的油浴锅中，调节磁子转速至260-350rpm，加热半小时以上以确保其内部温度达到150°C。之后加入0.06mL，3mM的NaSH乙二醇溶液。2分钟后注入0.5mL，3mM的HC1(2.5yL 38%的浓盐酸加入至10.3mL的乙二醇可配得3mM的HCl乙二醇溶液)，然后立即加入1.25mL 20mg/mL PVP(分子量58000)乙二醇溶液。2分钟后加入282mM
0.4mL的三氟乙酸银乙二醇溶液开始引发反应，15分钟后停止加热搅拌。在反应过程中，可以用肉眼观察到溶液的颜色由白色变为橘黄色，到暗红色及褐色，最后10分钟左右形成外围绿色中间褐色的溶液。反应结束后，用冰水冷却。将溶液转移至50mL的离心管，用溶液两倍的丙酮冲洗烧瓶，并转移至离心管。4000转每分钟，12分钟离心去除上清，之后用同转速时间、去离子水离心清洗，保存于2mL去离子水中。
[0045]2).制备金纳米笼粒子:取5mL 9mM的PVP(分子量58000)水溶液至50mL圆底烧瓶，加入10yL上述银纳米立方溶液并加热至微沸。缓慢(约0.75mL/min)滴加0.1mM HAuC14，观察溶液颜色，到蓝色时停止滴加。记录HAuC14用量，继续反应10分钟。取出溶液冰浴冷却。4000转10分钟用去离子水离心清洗。之后加入NaCl至饱和以去除生成的AgCl，用去离子水继续清洗三遍。
[0046]3).制备pH敏感型脂质体:取2.516mL三氯甲烷(CHCL3与ImL甲醇(MeOH)按4:1比例混合，加入250mL圆底烧瓶中。向烧瓶中依次加入585μΙ^?度为25mg/mL的二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，140yL浓度为20mg/mL的油酸(OA)，760μΙ^度为10mg/mL的胆固醇(CHOL)，将溶液超声使其完全溶解。置于40°C下旋蒸4小时后再水化2小时以上，即得到脂质体纳米材料，将产物浓度稀释到5mg/mL。
[0047]4).制备脂质体包裹金纳米笼药物载体:将金纳米笼加入到lmg/mL的多环芳经(PAH)溶液中，静置反应I小时后，离心清洗两次。将产物与5mg/mL脂质体混合，反应两小时后5500rpm，12分钟离心三次，向得到的纳米粒子溶液中加入50微升二氯乙烷(EDC)和20微升(NHS)，搅拌两小时后加入30微升lmg/mL的转铁蛋白，混合2小时后离心，得到的产物即为所要制备的纳米药物载体粒子。
[0048]实施例2
[0049]以金纳米笼作为药物载体，在其外层包裹上具有pH敏感特性的脂质体，在外层脂质体上连接细胞靶向材料转铁蛋白。脂质体作为门控开关，以多柔比星(DOX)为药物分子制备纳米药物载体粒子。
[0050]I).制备银立方体纳米粒子:取2mL的乙二醇置50mL的圆底烧瓶中，加入洁净的磁子。将圆底烧瓶置入预先加热到140°C的油浴锅中，调节磁子转速至260-350rpm，加热半小时以上以确保其内部温度达到1400C ο之后加入0.03mL，3mM的NaSH乙二醇溶液。过2分钟后注入0.2mL，3mM的HCl (2.5yL 38%的浓盐酸加入至10.3mL的乙二醇可配得3mM的HCl乙二醇溶液)，然后立即加入ImL 20mg/mL PVP(分子量58000)乙二醇溶液。2分钟后加入282mM
0.1mL的三氟乙酸银乙二醇溶液开始引发反应，15分钟后停止加热搅拌。在反应过程中，可以用肉眼观察到溶液的颜色由白色变为橘黄色，到暗红色及褐色，最后10分钟左右形成外围绿色中间褐色的溶液。反应结束后，用冰水冷却。将溶液转移至50mL的离心管，用溶液两倍的丙酮冲洗烧瓶，并转移至离心管。4000转每分钟，12分钟离心去除上清，之后用同转速时间、去离子水离心清洗，保存于ImL去离子水中。
[0051 ] 2).制备金纳米笼粒子:取2mL 9mM的PVP(分子量58000)水溶液至50mL圆底烧瓶，加入5(^1^上述银纳米立方溶液并加热至微沸。缓慢(约0.75111171^11)滴加0.111^ HAuC14，观察溶液颜色，到蓝色时停止滴加。记录HAuC14用量，继续反应10分钟。取出溶液冰浴冷却。4000转10分钟用去离子水离心清洗。之后加入NaCl至饱和以去除生成的AgCl，用去离子水继续清洗三遍。
[0052]3).制备pH敏感型脂质体:取I mL三氯甲烷(CHCL 3与I mL甲醇(Me OH)按4:1比例混合)，加入250mL圆底烧瓶中。向烧瓶中依次加入10yL浓度为25mg/mL的二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，10yL浓度为20mg/mL的油酸(OA)，300μΙ^度为10mg/mL的胆固醇(CHOL)，将溶液超声使其完全溶解。置于40°C下旋蒸4小时后再水化2小时以上，即得到脂质体纳米材料，最终将产物浓度稀释到5mg/mL。
[0053]4).纳米药物载体粒子装载药物。首先，将水洗2次的金纳米笼粒子分散至ImL去离子水中，加入20yL 5mg/mL的DOX水溶液，避光过夜搅拌。过量的DOX通过离心分离，得到载入药物分子的金纳米笼溶液。
[0054]5).制备脂质体包裹金纳米笼药物载体:将ImL金纳米笼水溶液加入到lmg/mL的多环芳烃(PAH)溶液中，静置反应I小时后，离心清洗两次。将产物与5mg/mL脂质体混合，反应两小时后5500rpm，12分钟离心三次。向得到的纳米粒子溶液中加入10微升二氯乙烷(EDC)和10微升(NHS)，搅拌两小时后加入10微升lmg/mL的转铁蛋白，混合2小时后离心，得到的产物即为所要制备的纳米药物载体粒子。
[0055]实施例3
[0056]以金纳米笼作为药物载体，在其外层包裹上具有pH敏感特性的脂质体，在外层脂质体上连接细胞靶向材料转铁蛋白。脂质体作为门控开关，以多柔比星(DOX)为药物分子制备纳米药物载体粒子。
[0057]I).制备银立方体纳米粒子:取8mL的乙二醇置50mL的圆底烧瓶中，加入洁净的磁子。将圆底烧瓶置入预先加热到160°C的油浴锅中，调节磁子转速至260-350rpm，加热半小时以上以确保其内部温度达到1600C ο之后加入0.09mL，3mM的NaSH乙二醇溶液。过2分钟后注入1.5mL，3mM的HCl (2.5yL 38%的浓盐酸加入至10.3mL的乙二醇可配得3mM的HCl乙二醇溶液)，然后立即加入1.5mL 20mg/mL PVP(分子量58000)乙二醇溶液。2分钟后加入282mM
0.7mL的三氟乙酸银乙二醇溶液开始引发反应，15分钟后停止加热搅拌。在反应过程中，可以用肉眼观察到溶液的颜色由白色变为橘黄色，到暗红色及褐色，最后10分钟左右形成外围绿色中间褐色的溶液。反应结束后，用冰水冷却。将溶液转移至50mL的离心管，用溶液两倍的丙酮冲洗烧瓶，并转移至离心管。4000转每分钟，12分钟离心去除上清，之后用同转速时间、去离子水离心清洗，保存于3mL去离子水中。
[0058]2).制备金纳米笼粒子:取8mL 9mM的PVP(分子量58000)水溶液至50mL圆底烧瓶，加入20(^1^上述银纳米立方溶液并加热至微沸。缓慢(约0.75111171^11)滴加0.111^ HAuC14，观察溶液颜色，到蓝色时停止滴加。记录HAuC14用量，继续反应10分钟。取出溶液冰浴冷却。4000转10分钟用去离子水离心清洗。之后加入NaCl至饱和以去除生成的AgCl，用去离子水继续清洗三遍。
[0059]3).制备pH敏感型脂质体:取4mL三氯甲烷(CHCL3与ImL甲醇(MeOH)按4:1比例混合，加入250mL圆底烧瓶中。向烧瓶中依次加入100yL浓度为25mg/mL的二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，300yL浓度为20mg/mL的油酸(OA)，1200yL浓度为10mg/mL的胆固醇(CHOL)，将溶液超声使其完全溶解。置于40°C下旋蒸4小时后再水化2小时以上，即得到脂质体纳米材料，最终将产物浓度稀释到5mg/mL。
[0060] 4).纳米药物载体粒子装载药物。首先，将水洗2次的金纳米笼粒子分散至3mL去离子水中，加入200yL 5mg/mL的DOX水溶液，避光过夜搅拌。过量的DOX通过离心分离，得到载入药物分子的金纳米笼溶液。
[0061 ] 5).制备脂质体包裹金纳米笼药物载体:将3mL金纳米笼水溶液加入到lmg/mL的多环芳烃(PAH)溶液中，静置反应I小时后，离心清洗两次。将产物与5mg/mL脂质体混合，反应两小时后5500rpm，12分钟离心三次。向得到的纳米粒子溶液中加入100微升二氯乙烷(EDC)和80微升(NHS)，搅拌两小时后加入100微升lmg/mL的转铁蛋白，混合2小时后离心，得到的产物即为所要制备的纳米药物载体粒子。
[0062]实施例4
[0063]以金纳米笼作为药物载体，在其外层包裹上具有pH敏感特性的脂质体，在外层脂质体上连接细胞靶向材料转铁蛋白。脂质体作为门控开关，以多柔比星(DOX)为药物分子制备纳米药物载体粒子，最后用pH=7.4，6.2，5.2分别触发其药物释放。
[0064]I).制备银立方体纳米粒子:取5mL的乙二醇置50mL的圆底烧瓶中，加入洁净的磁子。将圆底烧瓶置入预先加热到150°C的油浴锅中，调节磁子转速至260-350rpm，加热半小时以上以确保其内部温度达到150°C。之后加入0.06mL，3mM的NaSH乙二醇溶液。过2分钟后注入0.5mL，3mM的HCl (2.5yL 38%的浓盐酸加入至10.3mL的乙二醇可配得3mM的HCl乙二醇溶液)，然后立即加入1.25mL 20mg/mL PVP(分子量58000)乙二醇溶液。2分钟后加入282mM
0.4mL的三氟乙酸银乙二醇溶液开始引发反应，15分钟后停止加热搅拌。在反应过程中，可以用肉眼观察到溶液的颜色由白色变为橘黄色，到暗红色及褐色，最后10分钟左右形成外围绿色中间褐色的溶液。反应结束后，用冰水冷却。将溶液转移至50mL的离心管，用溶液两倍的丙酮冲洗烧瓶，并转移至离心管。4000转每分钟，12分钟离心去除上清，之后用同转速时间、去离子水离心清洗，保存于2mL去离子水中。
[0065]2).制备金纳米笼粒子:取5mL 9mM的PVP(分子量58000)水溶液至50mL圆底烧瓶，加入10yL上述银纳米立方溶液并加热至微沸。缓慢(约0.75mL/min)滴加0.1mM HAuC14，观察溶液颜色，到蓝色时停止滴加。记录HAuC14用量，继续反应10分钟。取出溶液冰浴冷却。4000转10分钟用去离子水离心清洗。之后加入NaCl至饱和以去除生成的AgCl，用去离子水继续清洗三遍。
[0066]3).制备pH敏感型脂质体:取2.516mL三氯甲烷(CHCL3与ImL甲醇(MeOH)按4:1比例混合，加入250mL圆底烧瓶中。向烧瓶中依次加入585μΙ^?度为25mg/mL的二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，140yL浓度为20mg/mL的油酸(OA)，760μΙ^度为10mg/mL的胆固醇(CHOL)，将溶液超声使其完全溶解。置于40°C下旋蒸4小时后再水化2小时以上，即得到脂质体纳米材料，最终将产物浓度稀释到5mg/mL。
[0067]4).纳米药物载体粒子装载药物。首先，将水洗2次的金纳米笼粒子分散至2mL去离子水中，加入10yL 5mg/mL的DOX水溶液，避光过夜搅拌。过量的DOX通过离心分离，得到载入药物分子的金纳米笼溶液。
[0068]5).制备脂质体包裹金纳米笼药物载体:将2mL金纳米笼水溶液加入到lmg/mL的多环芳烃(PAH)溶液中，静置反应I小时后，离心清洗两次。将产物与5mg/mL脂质体混合，反应两小时后5500rpm，12分钟离心三次。向得到的纳米粒子溶液中加入50微升二氯乙烷(EDC)和20微升(NHS)，搅拌两小时后加入30微升lmg/mL的转铁蛋白，混合2小时后离心，得到的产物即为所要制备的纳米药物载体粒子。
[0069]6).pH触发释放:将5)中获得的载体粒子分为均等的三份，分别加入3mL pH= 7.4，
6.2，5.2的缓冲液。一定间隔时间后离心取上清测其吸收，随后加入新的等体积的三种缓冲液。通过不同PH下吸收校准曲线，累加计算即可得到随时间变化的pH释放曲线。
[0070]该实施例中制备出的纳米载体粒子在不同pH触发下的药物释放曲线如图2所示，其pH响应特性明显，24小时后酸性条件下释放相对于碱性条件下有较大幅度的增加，容易实现对癌症细胞靶向治疗，避免药物早期泄漏严重造成对正常细胞组织的损伤。
[0071]本发明的纳米药物载体具有核壳型结构，内层为装载药物的金纳米笼粒子，外层为PH敏感相应特性脂质体。此处，药物通过物理吸附的方式装载到金纳米笼粒子内部，表面的脂质体相当于加盖，当在PH、光照的外界激励触发下，外层脂质体形貌膨胀，使得内部的药物分子释放出来。即门控由“关”转为“开”的状态，从而释放出药物分子。
[0072]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出:对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种可控药物释放的纳米药物载体粒子，所述粒子具有核壳型结构，其特征在于:最内层为表面介孔并且中空结构的金纳米笼(I)，所述金纳米笼(I)表面修饰一层带有正电的聚合物PAH层(2)，所述聚合物PAH层(2)的外表面包裹层具有pH敏感型的脂质体层(3)。2.根据权利要求1所述的可控药物释放的纳米药物载体粒子，其特征在于:所述金纳米笼(I)将药物通过物理吸附的方式装载到内部。3.根据权利要求1所述的可控药物释放的纳米药物载体粒子，其特征在于:所述脂质体层(3)设置有连接细胞靶向材料的转铁蛋白层(4)。4.根据权利要求1所述的可控药物释放的纳米药物载体粒子，其特征在于:所述聚合物PAH层(2)的厚度在0.5-5nm;脂质体层(3)采用天然磷脂制成。5.—种基于权利要求1-4任一所述的可控药物释放的纳米药物载体粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤I，采用硫化物调停法制备银立方体纳米粒子； 步骤2，对步骤I得到的银立方体纳米粒子采用氯金酸还原法制备得到金纳米笼纳米粒子； 步骤3，采用薄膜蒸发法制备具有pH敏感型脂质体； 步骤4，在步骤2中制备的金纳米笼中载入药物分子: 步骤5，在步骤4制备的金纳米笼表面修饰一层厚度在0.5-5nm带正电的聚合物分子PAH，形成表面带有正电的金纳米笼粒子； 步骤6，在步骤5得到的纳米粒子表面包裹一层在步骤3中制备的pH敏感型脂质体，形成表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子； 步骤7，在步骤6得到的粒子表面修饰细胞靶向性材料转铁蛋白，形成所要制备的纳米药物载体粒子。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于:所述步骤I制备银立方体纳米粒子的方法，将2-8份的乙二醇置于反应容器中，加入洁净的磁子；将反应容器置入预先加热到140-160°C的油浴锅中，调节磁子转速至260-350rpm，加热确保反应容器内部温度达到140-160°C；之后加入0.03-0.09份的3mM的NaSH乙二醇溶液；2分钟后注入0.2-0.8份的3mM的HCl，然后立即加入1-1.5份的20mg/mL分子量为58000的PVP乙二醇溶液；2分钟后加入0.Ι-Ο.7份的 282mM 三氟乙酸银乙二醇溶液开始引发反应， 15分钟后停止加热搅拌; 反应结束后，将溶液冷却离心，离心后去除上清得到的溶液在通过去离子水离心清洗，清洗完成后保存于1-3份的去离子水中，得到制备好的银立方体纳米粒子溶液。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于:所述步骤2中制备金纳米笼纳米粒子的方法，取2-8份9mM的分子量为58000的PVP水溶液至反应容器中，加入0.05-0.2份步骤I中的银立方体纳米粒子溶液并加热至微沸;缓慢滴加0.1mM的HAuC14，观察溶液颜色，到蓝色时停止滴加;继续反应10分钟后，取出溶液冷却，并用去离子水离心清洗;之后加入NaCl至饱和以去除生成的AgCl，得到金纳米笼纳米粒子溶液。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于:所述步骤3中制备具有pH敏感型脂质体的方法:取1-4份的三氯甲烷和0.25-1份甲醇，将三氯甲烷与甲醇按4:1比例混合放入反应容器中，向反应容器中依次加入0.1-1份浓度为25mg/mL的二油酰磷脂酰乙醇胺，0.1-0.3份浓度为20mg/mL的油酸，0.3-1.2份浓度为10mg/mL的胆固醇，将溶液超声使其完全溶解；置于40°C下旋蒸4小时后再水化2小时以上，即得到脂质体纳米材料，将产物浓度稀释到5mg/ mL，得到5mg/ mL的脂质体纳米材料溶液。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于:所述步骤4中在金纳米笼中载入药物分子的方法，将步骤2得到的金纳米笼纳米粒子溶液分散至1-3份去离子水中，加入0.02-0.2份浓度为5mg/mL的药物分子水溶液，避光过夜搅拌，过量的药物分子通过离心分离，得到载入药物分子的金纳米笼溶液;所述步骤5中形成表面带有正电的金纳米笼粒子的方法:将1-3份步骤4制备的载入药物分子的金纳米笼溶液加入到lmg/mL的PAH溶液中，静置反应I小时后，离心清洗，得到表面带有正电的金纳米笼粒子溶液。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于:所述步骤6中形成表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子的方法:将步骤5得到的表面带有正电的金纳米笼粒子溶液与步骤3中得到的5mg/mL的脂质体纳米材料溶液混合，反应两小时后离心，得到表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子的溶液;所述步骤7中表面修饰细胞革El向性材料转铁蛋白的方法:将步骤6得到的表面脂质体包裹金纳米笼纳米药物载体粒子的溶液中加入0.01-0.1份二氯乙烷和0.01-0.08份NHS，搅拌两小时后加入0.01-0.1份lmg/mL的转铁蛋白，混合2小时后离心，得到的产物即为所要制备的纳米药物载体粒子。
【文档编号】A61P35/00GK105902516SQ201610348564
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年5月24日
【发明人】王著元, 房杰, 朱丹, 崔平, 崔一平
【申请人】东南大学