苯次磺酰胺类化合物作为病毒3c蛋白酶抑制剂在制备抗病毒药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及苯次横酷胺类化合物作为病毒3C蛋白酶抑制剂在制备抗病毒药物中 的应用，具体设及对柯萨奇病毒（Coxsackie virus)B3亚型（CVB3)的3C蛋白酶有较强抑制 效果的苯次横酷胺类化合物。
【背景技术】
[0002] 病毒性屯、肌炎(Viralmyocarditis)是一种严重威胁人类的感染性疾病。柯萨奇病 毒属于小RNA病毒科(Picornaviridae),能够导致重症屯、肌炎和神经系统疾病，严重危害人 类，特别是婴幼儿的生命健康。现已发现，该病毒的3C蛋白酶在其复制及侵染宿主的过程中 发挥重要作用，而且人体中没有其同源基因，因此是一个理想的药物设计祀点 (Esfandiarei and McManus,Molecular Biology and Pathogenesis of Viral Myocarditis.Annual Review of Pathology:Mechanisms of Disease,2008.3(1):p.127-155.)。人类鼻病毒化uman rhinovirus)的特异性抑制剂一芦平曲韦(rupinhivir)，就是 由此诞生的一种肤类药物(AK Patick,et al, In Vitro Antiviral Activity of AG7088, a Potent Inhibitor of Human Rhinovirus 3C Protease.Antimicrobial Agentsfe Chemotherapy，1999.43(10):P. 2444-50)，它具有与3C蛋白酶底物相似的空间构型，因而能 够同底物竞争性地与酶结合，发挥对酶的抑制作用。但目前对3C蛋白酶抑制剂的研究主要 局限于运种肤类化合物，化合物结构类型相对单一，而且尚无专口针对屯、肌炎病毒3C蛋白 酶的药物。目前尚未有关于苯次横酷胺类化合物作为屯、肌炎病毒3C蛋白酶的抑制剂的任何 报道。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供苯次横酷胺类化合物作为病毒3C蛋白酶抑制剂在制备抗病 毒药物中的应用，苯次横酷胺类化合物对小RNA病毒的3C蛋白酶具有很好的抑制活性，并且 在细胞水平上对几种能引起感染的病毒具有较强的抑制活性。
[0004] 本发明首先提供苯次横酷胺类化合物在制备预防和/或治疗含有3C蛋白酶的病毒 感染的抗病毒药物中的应用；
[0005] 所述苯次横酷胺类化合物的结构式如式I所示，
[0007] 式忡，Ri为H或C广Cs烷基;R2为H或C广Cs烷基;R3为H或C广Cs烧氧幾基。
[000引所述病毒为柯萨奇病毒，具体可为B3亚型。
[0009] 本发明还进一步提供了式I所示苯次横酷胺类化合物在制备病毒3C蛋白酶抑制剂 中的应用，其中所述病毒3C蛋白酶抑制剂抑制柯萨奇病毒B3亚型的3C蛋白酶的活性。
[0010] 活性成分为式I所示苯次横酷胺类化合物的预防和/或治疗含有3C蛋白酶的病毒 感染的抗病毒药物也属于本发明的保护范围，所述病毒具体为柯萨奇病毒B3亚型。
[0011] 所述抗病毒药物还可包括一种或多种药学上可接受的载体，所述载体包括药学领 域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体、润滑剂或增效剂等。
[0012] 所述抗病毒药物可W制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂或乳剂的形式使用，其 给药途径可W为口服、经皮、静脉或肌肉注射。
[001引式1中，扣可为甲基、乙基或异丙基；R2可为H或甲基;R3可为H、甲氧幾基或乙氧幾 基。
[0014]苯次横酷胺类化合物具体可为下述式1-式7所示化合物中任一种，
[0017] 本发明所设及的苯次横酷胺类化合物，具体可由文献(商建丽，南开大学化学学院 硕±学位论文，2011年;王建国，张立新等，中国发明专利化201110440557.3)中公开的方法 制备。
[0018] 通过体外酶活测试，本发明所提供的苯次横酷胺类化合物对CVB3 3C蛋白酶有着 很强的抑制作用，ICso达到咖级，与阳性对照芦平曲韦（ICso = I.57咖)活性相似，但化学结 构与芦平曲韦等短肤化合物完全不同，很可能具有与芦平曲韦完全不同的作用机制。经过 细胞水平活性测试，本发明所提供的苯次横酷胺类化合物对CVB3病毒有抑制作用。因此本 发明所提供的苯次横酷胺类化合物在制备CVB3亚型的3C蛋白酶抑制剂方面有很大应用潜 力。苯次横酷胺类化合物可W通过抑制CVB3 3C活性，在细胞水平上产生CVB3病毒抑制效 果，具有良好的抗病毒药物应用前景。
【附图说明】
[0019] 图1是式1-7所示苯次横酷胺类化合物对CVB3 3C蛋白酶的抑制曲线。
[0020] 图2是式1、式2、式5和式6所示苯次横酷胺类化合物对CVB3病毒感染的化Ia细胞的 抑制活性。
【具体实施方式】
[0021 ]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0022] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0023] 下述实施例用于合成苯次横酷胺类化合物所使用的化学原料及试剂心色氨酸甲 醋、1^-色氨酸乙醋、1^-色氨酸异丙醋、苯硫氯、对甲基苯硫氯、邻甲酸甲醋苯硫氯、邻甲酸乙 醋苯硫氯购自Al化Aesar(天津)化学品公司、上海晶纯试剂有限公司或美国Aurora化学品 公司，其余原料和试剂均为天津本地市售。
[0024] 下述实施例所使用生化原料及试剂如下：
[0025] 氯化钢、氯化钟、十二水合憐酸氨二钢、憐酸二氨钟、二甲基亚讽DMS0( W上均购自 国药集团化学试剂有限公司），S径甲基氨基甲烧（Tr i S，购自NOVON公司）、咪挫（购自MP Biomedicals公司）、二硫苏糖醇（dithiot虹eitol，DTT，购自北京欣经科生物公司）、牛血清 白蛋白（Bovine serum a化umin,BSA,购自Sigma公司）、甘油（购自Sigma公司）、芦平曲韦 (rupintrivir，购自加拿大Toronto Research Chemicals公司）、细胞增殖-毒性检测试剂 盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8,购自同仁化学公司）、3C蛋白酶底物
[00%] (H-Asp-{Glu化DANS)}-Met-Ser-Ala-IIe-Phe-Gln-Gly-Pro-IIe-Ser-ILys (DABC化M-Asp-OH,购自上海吉尔生化公司）、3925黑色平底不透明96孔酶标板（购自 Corning公司）、CVB3 3C蛋白酶(47iiM，20mM TrisJOOmM 化Cl,250mM咪挫，5%(v/v)甘油）、 2Xphosphate buffered saline(PBS)缓冲液（16g 化Cl，0.4g KCl，7.16g Na2册〇4* 12此0，0.48g K此P〇4，溶于1000 mL水，调pH值至7.4，使用高压蒸汽灭菌锅在