针对艰难梭菌免疫的组合物和方法
【专利说明】针对艰难梭菌免疫的组合物和方法
[0001] 相关申请 本申请要求2013年6月14日提交的美国顺序号61/835,246的优先权，其通过引用W其 整体结合到本公开内容中。 发明领域
[0002] 本公开内容设及用于在成人受试者(例如有发生原发症状性艰难梭菌感染风险的 成人)中诱导针对艰难梭菌(C. difficile)毒素 A和毒素 B的免疫应答的方法。
[0003] 发明背景 艰难梭菌(Clostridium difficile/C. difficile)是一种革兰氏阳性产芽抱的厌氧 细菌。艰难梭菌的病理作用由所分泌的毒素 A和B介导，其引起结肠粘膜损害和炎症。虽然艰 难梭菌感染(CDI)在一些患者中是无症状的，但是CDI可导致急性腹泻和结肠炎，在严重的 情况下可导致假膜性结肠炎和中毒性巨结肠。在接受改变正常肠菌群的药物的住院患者 中，艰难梭菌是医源性腹泻和结肠炎的临床上的重要原因，在社区中CDI的报告日益增多。 症状性艰难梭菌感染的风险因素包括抗生素治疗、高龄、基础疾病和在长期护理机构中住 院治疗或居住。
[0004] 进行了早期临床试验W评价艰难梭菌类毒素疫苗形式的安全性和免疫原性。在健 康成人（18-55岁）和老年人（含65岁）志愿者中，早期评价的包含类毒素 A和B的艰难梭菌疫 苗被证明是安全的，并且诱导对毒素 A和毒素 B两者的免疫应答(Greenberg等，Vaccine 30: 2245-2249 (2012);化glia等，化ccine, 30: 4307-4309 (2012))。所述研究中的最 大剂量为50 yg，且毒素 A与毒素 B的比率为3:1。在第0、28和56天给予候选疫苗。在健康成人 和老年人志愿者组两者中在多剂量后毒素 A的血清转化高于毒素 B的血清转化，而且观察到 与较年轻人组相比，老年人受试者中的抗体应答更快地下降。由于老年人常常免疫受损 (immunocomprised)，本领域普通技术人员将此视作是主要问题。依然需要用于存在症状性 艰难梭菌感染风险的成人(尤其在老年人中）的艰难梭菌疫苗。
[0005] 发明概述 本公开内容设及用于在成人受试者(例如有原发症状性艰难梭菌感染风险的成人）中 诱导针对艰难梭菌毒素 A和毒素 B的免疫应答的方法。在一些实施方案中，所述方法可包括 使用一次或多次给予(例如3次)通过任何合适的途径(例如肌内），W有效的类毒素 A:化k率 (例如按重量计约3:1、3:2或1:1类毒素 A:类毒素 B的任一种)和足够的纯度(例如至少约50-约100%，例如约90-100% (w/w))，将包含有效量的艰难梭菌类毒素 A和类毒素 B (例如约40-约500 yg/剂量(w/w，组合物中类毒素 A和B的总量））的组合物(例如疫苗)给予受试者，彼此 被适当分隔（例如相隔约1-10天，例如约7天）的多剂量给药方案的各剂量可由本领域普通 技术人员按本文所述确定。在一个实施方案中，所述方法可包括第一、第二和第=次给予， 其中第二次给予为第一次给予后约7天，第=次给予为第一次和/或第二次给予后至少约30 天和/或至少约180天。在多剂量方案的优选实施方案中，第一剂可在第一剂后约7天给予， 和/或第=剂在第一剂后约30天(或第2剂后约20-25天)给予。在一些实施方案中，所述方法 可包括一种或多种佐剂(例如侣佐剂）。在某些实施方案中，所述方法可包括将组合物给予 有感染风险的人类受试者。在一些实施方案中，人类受试者可为至少约40、50、65岁或更年 长的任一种。在一些实施方案中，人类受试者可为约40-约65岁。在一些实施方案中，人类受 试者可为约65-75岁或更年长。在某些运类实施方案中，人类受试者在第一次给予前的12个 月时间内，可能有至少一次或两次留医，每次持续至少约24、48或72小时或更久的任一种， 并接受全身(非局部)抗生素;和/或预期具有用于在第一次给予60天内进行计划的外科手 术的住院患者的住院治疗。在一些实施方案中，预期的/即将发生的留院/住院治疗可按计 划持续72小时或更久，并且可用于设及肾/膀脫/泌尿系统、肌骨骼系统、呼吸系统、循环系 统和/或中枢神经系统的至少一个的手术。优选通过运些方法诱导的免疫应答足W预防和/ 或治疗和/或改善和/或降低症状性艰难梭菌感染的风险。本领域的普通技术人员可从本文 提供的描述推导其它实施方案。
[0006] 发明详述 本公开内容设及可用于治疗、改善症状性艰难梭菌感染、降低其风险和/或预防症状性 艰难梭菌感染的组合物和方法。如上所述，本领域普通技术人员遇到设计针对由艰难梭菌 引起的感染的有效疫苗的困难。有效疫苗可W是例如治疗、改善症状性艰难梭菌感染、降低 其风险和/或预防症状性艰难梭菌感染的有效疫苗。通过本文所述组合物和方法出乎意料 地解决了运些问题。本文描述了运些出乎意料的有效解决方法的各种实施方案。提供了示 例性组合物。例如，提供使用一次或多次给予（例如3次给予或剂量)通过任何合适的途径 (例如肌内），W有效的类毒素 A:化k率(例如W重量计约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%，3: 1、3:2或1:1类毒素 A:类毒素 B)和足够的纯度(例如至少约50-约100%，例如约50、55、60、65、 70、75、80、85、90、95或90-100%(*/*)的任一种）的包含有效量的艰难梭菌类毒素4和类毒 素 B (例如约40-约500 yg/剂量，例如约40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、 160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、 350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500 蛇/剂量的任 一种，例如约50-约100 yg/剂量(w/w，组合物中类毒素 A和B的总量））的组合物，其中多剂量 给药方案的各剂量彼此被适当地分隔（例如至少约1 -约10天例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9或 10天的任一种，例如约7天）。本领域的普通技术人员应了解，剂量之间的时间长度(时间间 隔）随个体变化，且该间隔应足够长(例如W天测量），使得之前剂量的免疫应答既有时间发 生(例如致敏），又不W任何方式受到随后剂量(例如一次或多次加强剂量)抑制。例如，一个 具体个体在剂量之间可能需要至少约7天(例如5-8天），而另一个体可能只需要至少约4天 (例如3-5天）。因此，在一些实施方案中，给药间隔可改变达例如约10-20%。本领域普通技术 人员应了解剂量之间的时间可能需要按本文所述调节。在一些实施方案中，第二次给予为 在第一次给予(例如第0天)后的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天，第S次给予为第一次给予 后的至少约 20-200天(例如约 20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、 170、180、190或200天，例如约30或约180天）。例如，所述方法可包括第一、第二和/或第=次 给予，其中第二次给予为第一次给予后至少7天，第=次给予为第一或第二次给予后至少约 30天和/或至少约180天。在一些实施方案中，第二次给予为第一次给予后约7天，第=次给 予为第一次给予后约30天。在采用所述方法将所述组合物给予宿主/受试者时，通常观察到 免疫应答，运通常包括体液免疫应答，并可包括细胞免疫应答。在某些实施方案中，所述方 法可包括将免疫原性组合物给予有感染风险的人类受试者。在一些实施方案中，人类受试 者可为至少约40、50、65岁或更年长的任一种。在一些实施方案中，人类受试者可为约40-约 65岁。在一些实施方案中，人类受试者可为65-75岁。因此，还提供用于给予组合物的方法。 用于制备组合物的方法描述于本文，且对于本领域普通技术人员是可获得的。根据本文提 供的描述，其它实施方案将是清楚的。
[0007]本公开内容还描述了通过给予受试者（例如人类)包含艰难梭菌的一种或多种抗 原的组合物W针对艰难梭菌使受试者免疫的方法。例如，合适的组合物可包含含或不含佐 剂(例如氨氧化侣）、类毒素 A:类毒素 B比率大致约3:2、共约50或约10化g (或约50-100 yg) 艰难梭菌类毒素(类毒素 A和类毒素 B)。出于比较目的，可将含有抗原的组合物给予一组受 试者，并将安慰剂组合物(例如0.9%生理盐水)给予（例如在同一方案中）另一组。可在特定 日期(例如在第一次给予后第〇、14、30、60、180和/或210天，和/或多达1000天)获得受试者 的免疫学数据和安全性数据。给予组合物可发生在例如第0天(第一次给予）、约第7天(第二 次给予）、约第30天(第=次给予)和/或约第180天(备选第=次给予或第四次给予）。
[000引如上所述，组合物可包含有效的类毒素 A:B比率(例如W重量计约3:1、3:2或1:1类 毒素 A:类毒素 B的任一种）、足够的纯度(例如约90%或更高纯度(w/w))下的艰难梭菌类毒素 A和类毒素 B。例如，组合物可包含类毒素 A:类毒素 B比率大致约3: 2的艰难梭菌类毒素 A和B 的高度纯化(例如>90% (w/w/))的制剂。所述组合物可采用可获得的任何制备方法制备(例 如2013年3月15日提交的美国临时申请顺序号61/790,423、2014年3月14日提交的共同待审 的PCT/US2014/029035、2013年3月15日提交的61/793，376和/或2014年3月14日提交的共同 待审的PCT/US2014/029070中所述），其每一个W其整体结合到本公开内容中）。如本公开内 容的实施例中所述，毒素 A和B经从艰难梭菌的培养物中纯化，灭活，并W目标的3:2比率混 合，并且在诱导和/或提高针对艰难梭菌毒素 A和B的免疫应答时显示是有效的。然而如上所 述，可将类毒素 A和BW任何有效的量和/或有效的比率组合(有效的表示例如提供有效的疫 苗)。
[0009] 本文所用术语"艰难梭菌类毒素"是指被部分或完全灭活的艰难梭菌毒素（毒素 A 或毒素 B)。通过例如体外细胞毒性测定法或通过动物毒性测量，如果与未处理的毒素相比 具有较少毒性(例如100%、99%、98%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%或更少的毒性或它 们之间的任何值），则毒素被灭活。可通过从艰难梭菌培养物中纯化毒素并通过化学法(例 如甲醒、戊二醒、过氧化物或氧处理)使毒素灭活，来产生艰难梭菌类毒素。或者，可采用重 组方法，产生毒性缺乏或降低的野生型或突变型艰难梭菌毒素。通过遗传方法制备类毒素 的方法是本领域众所周知的。例如，可进行导致毒性降低的突变。还可制备缺乏特殊区域W 降低毒性的野生型或突变型艰难梭菌毒素。
[0010] 组合物(其可为疫苗)可作为冻干制剂提供，在规定时，所述冻干制剂可在临床基 地用稀释剂复溶，与佐剂(例如侣佐剂例如憐酸侣或氨氧化侣)或注射用水(WFI)混合。稀释 剂可为例如任何药学上可接受的稀释剂(例如20 mM巧樣酸钢、5%薦糖和0.016%甲醒;10 mM 巧樣酸盐、4%薦糖、0.008%甲醒、0.57%氯化钢）。佐剂可包含例如合适浓度(例如约800-1600 yg/mL的任一种）的佐剂，例如在WFI中包含侣(例如氨氧化侣或憐酸侣）的佐剂。例如，佐剂 (例如在0.57%氯化钢中的800-1600 yg /mL氨氧化侣）可用作稀释剂W使冻干制剂复溶。 WFI可用来稀释冻干疫苗用于未加佐剂的制剂。最后的给药溶液可包含例如组合物/疫苗、 稀释剂和佐剂。如上所述，安慰剂还可W液体制剂(例如0.9%生理盐水)提供。每次递送剂量 的研究药物(疫苗或安慰剂)的体积可为约0.5 mL。可通过任何合适的途径(例如皮下、静脉 内、肌内、腹膜内、皮内、结节内、鼻内、口服)给予制剂。
[0011] 可通过本领域技术人员已知的各种方法的任一种，来评价本文所述材料(例如组 合物)和/或方法的任一种的有用性(例如免疫原性）。本文所述测定法的任一种或多种或任 何其它的一种或多种