具有抗肺癌作用的中药微乳组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有抗肺癌作用的中药微乳组合物及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。 近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均 占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完 全明确，大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。已有的研究证明： 长期大量吸烟者患肺癌的概率是不吸烟者的10~20倍，开始吸烟的年龄越小，患肺癌的几 率越高。此外，吸烟不仅直接影响本人的身体健康，还对周围人群的健康产生不良影响，导 致被动吸烟者肺癌患病率明显增加。
[0003] 城市居民肺癌的发病率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质 有关。随着如今雾霾的越发严重，人们对肺癌的关注也愈发重视。
[0004] 肺癌的临床表现比较复杂，症状和体征的有无、轻重以及出现的早晚，取决于肿瘤 发生部位、病理类型、有无转移及有无并发症，以及患者的反应程度和耐受性的差异。肺癌 早期症状常较轻微，甚至可无任何不适。中央型肺癌症状出现早且重，周围型肺癌症状出现 晚且较轻，甚至无症状，常在体检时被发现。
[0005] 肺癌的治疗有化学治疗、放射治疗和外科治疗，其中，放疗是一种局部治疗，常常 需要联合化疗；而外科手术并不是适用于所有病人，因此，化疗是肺癌的主要治疗方法，但 随着肿瘤对化疗药物的抗药性，新的抗癌药物的研发成了迫切解决的问题。
【发明内容】
[0006] 针对上述现有技术，本发明目的在于提供抗肺癌作用的中药微乳组合物及其制备 方法。
[0007] 本发明所提供的抗肺癌作用的中药微乳组合物，包括中药发酵物和亚贡提取物， 其中， 中药发酵物是由以下重量配比的中药组合物发酵而成:生黄芪30份、生白术15份、党参 16份、茯苓20份、天冬20份、薏苡仁15份、通关藤16份、五味子25份、泽兰30份、全蝎15份、葶 苈子20份、棉花根30份。
[0008] 所述中药发酵采用的菌株为灰色链丝菌(Streptomyces griseus)。
[0009] 所述中药发酵物和亚贡提取物的重量比为2:1。
[0010] 所述中药微乳组合物的制备方法为:包括如下步骤： 1) 称取配方量的中药组合物500g清洗后加入IL的培养基中，按接入量2*107cfu/mL的 接种量接入灰色链丝菌进行发酵12小时； 2) 高温消毒，真空旋转蒸发去除水分，获得中药发酵物； 3) 用水提取亚贡叶，提取液浓缩上大孔树脂柱，用水洗脱至样品流出量减少，再用95% 的乙醇洗脱，收集洗脱液并进行减压浓缩得亚贡提取物； 4) 取配方量的步骤2)制备的中药发酵物和步骤3)制备的亚贡提取物用胶体球磨研磨 并进行均质，形成中药组合物； 5) 取表面活性剂、助表面活性剂、油相和水相混合形成微乳制剂，再加入步骤4)制备的 中药组合物，在乳化均质机中乳化40分钟，形成含药纳米微乳制剂； 6) 根据规格罐装，充质量份数为10-20%的抛射剂。
[0011]进一步的，步骤1)所述的培养基配方为：牛肉膏〇. 5g，NaCl 0.01%，葡萄糖0.5%，酵 母膏0 · 02%，水100ml，pH值7 · 2-7 · 5。
[0012]进一步的，步骤5)所述的表面活性剂、助表面活性剂、油相、水相和中药组合物的 质量比为：10:20:2:10:6。
[0013]进一步的，步骤5)所述的表面活性剂为大豆磷脂、脂肪酸丙二醇酯或海藻酸。
[0014]进一步的，步骤5)所述的助表面活性剂丙三醇或正丁醇。
[0015]进一步的，步骤5)所述油相为大蒜油。
[0016] 进一步的，步骤5)所述水相为质量浓度为0.5%的黄芪多糖水溶液。
[0017] 进一步的，步骤6)所述的抛射剂为为异丁烷或二甲醚。
[0018] 本发明所制备的中药微乳组合物，粒径小于100nm，能够使所述中药组合物在抛射 剂中均匀稳定的分散，并在肺部有极高的传递效率，实现吸入性治疗肺癌的目的，开辟了肺 癌治疗的新篇章。
【具体实施方式】
[0019] 以下结合具体实施例对本发明进行详细说明，以下实施例所用试剂均为市售。所 用的的实验动物模型构建方法为：SPF级BALB/c雌性裸鼠，体质量为18±2g，4周龄，将肺腺 癌细胞A549培养至对数生长期，胰酶消化，然后用无血清培养液稀释成细胞悬液，取I X IO6 个（Iml)细胞接种于BALB/c裸鼠右腋皮下。肿瘤大小的计算方法，肿瘤体积V(mm3)=实体瘤 最长径(mm) X实体瘤最短径(mm)2/2〇
[0020] 实施例1 抗肺癌作用的中药微乳组合物，包括的中药发酵物和亚贡提取物，其中，中药发酵物是 由以下重量配比的中药组合物发酵而成:生黄芪30份、生白术15份、党参16份、茯苓20份、天 冬20份、薏苡仁15份、通关藤16份、五味子25份、泽兰30份、全蝎15份、葶苈子20份、棉花根30 份。
[0021 ]所述中药微乳组合物的制备方法为:包括如下步骤： 1) 称取配方量的中药组合物500g清洗后加入IL的培养基(牛肉膏0.5g，NaCl 0.01%，葡 萄糖0.5%，酵母膏0.02%，水100ml，pH值7.2-7.5)中，按接入量2*107cfu/mL的接种量接入灰 色链丝菌（Streptomyces griseus)进行发酵12小时； 2) 高温消毒，真空旋转蒸发去除水分，获得中药发酵物； 3) 用水提取亚贡叶，提取液浓缩上大孔树脂柱，用水洗脱至样品流出量减少，再用95% 的乙醇洗脱，收集洗脱液并进行减压浓缩得亚贡提取物； 4) 取配方量的步骤2)制备的中药发酵物和步骤3)制备的亚贡提取物用胶体球磨研磨 并进行均质，形成中药组合物； 5) 取质量比为：10:20:2:10的大豆磷脂、丙三醇、大蒜油和质量浓度为0.5%的黄芪多糖 水溶液混合形成微乳制剂，再加入步骤4)制备的中药组合物，在乳化均质机中乳化40分钟， 形成含药纳米微乳制剂； 6) 根据规格罐装，充质量份数为10-20%的异丁烷。
[0022]实施例1所制备的微乳组合物澄清，透明，流动性好，用透射电子显微镜观察大多 数呈圆球形；用水稀释后用马尔文粒度分析仪进行测定，平均粒径为5-50nm，粒径分布较 窄，粒径比较均匀，分散系数为0.595，。
[0023]实施例1所制备的微乳组合物的稳定性试验： (1)离心加速试验对微乳稳定性的影响 取实施例1制备的微乳适量于离心管中，置于高速离心机中，以13,000r/min进行离心 20min，依然澄清透明，未见分层现象。
[0024] (2)光稳定性试验 取实施例1制备的微乳适量于透明玻璃瓶中，密封置于日光灯下，室温光照15d，并于 Id、3d、5d、IOd、15d取样观察，结果表明，在试验期间表观未发生明显变化，且无分层和破乳 等现象。
[0025] (3)温度稳定性试验 取实施例1制备的微乳适量分装于玻璃瓶中，密封后置于4°C、25°C、37°C和60°C条件下 观察3个月，每15天取样观察。结果表明，在试验期间始终保持澄清透明的外观，未见明显的 分层和破乳现象。
[0026]实施例1所制备的微乳组合物的体内抑瘤作用 荷瘤裸鼠模型建立7天后，随机分为2组，每组6只，取实施例1所制备的微乳组合物喷雾 给药，第7天起观察荷瘤小鼠的状况，同时每周2次侧体重和肿瘤体积，当对照组肿瘤大小超 过2000 mm3时结束观察，称重，眼球取血，颈椎脱白处死小鼠并剥离肿瘤，记录瘤重，瘤重变 化如图1所示。肿瘤抑制率计算公式:抑制率=[(对照组瘤重-给药组瘤重)/对照组瘤重]X 100%，结果见表1所示。
[0027]表1肿瘤抑制率计算
通过表1数据可知，本发明所述的微乳组合物具有显著的抗肿瘤效果。
【主权项】
1. 抗肺癌作用的中药微乳组合物，其特征在于，包括中药发酵物和亚贡提取物，其中， 中药发酵物是由以下重量配比的中药组合物发酵而成：生黄芪30份、生白术15份、党参16 份、茯苓20份、天冬20份、薏苡仁15份、通关藤16份、五味子25份、泽兰30份、全蝎15份、葶苈 子20份、棉花根30份。2. 根据权利要求1所述的抗肺癌作用的中药微乳组合物，其特征在于，所述中药发酵采 用的菌株为灰色链丝菌(Streptomyces griseus)。3. 根据权利要求1所述的抗肺癌作用的中药微乳组合物，其特征在于，所述中药发酵物 和亚贡提取物的重量比为2:1。4. 权利要求1-3任一项所述微乳微乳组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 称取配方量的中药组合物500g清洗后加入1L的培养基中，按接入量2*107cfu/mL的接 种量接入灰色链丝菌进行发酵12小时； 2) 高温消毒，真空旋转蒸发去除水分，获得中药发酵物； 3) 用水提取亚贡叶，提取液浓缩上大孔树脂柱，用水洗脱至样品流出量减少，再用95% 的乙醇洗脱，收集洗脱液并进行减压浓缩得亚贡提取物； 4) 取配方量的步骤2)制备的中药发酵物和步骤3)制备的亚贡提取物用胶体球磨研磨 并进行均质，形成中药组合物； 5) 取表面活性剂、助表面活性剂、油相和水相混合形成微乳制剂，再加入步骤4)制备的 中药组合物，在乳化均质机中乳化40分钟，形成含药纳米微乳制剂； 6) 根据规格罐装，充质量份数为10-20%的抛射剂。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的培养基配方为:牛肉膏0.5g， NaCl 0·01%，葡萄糖0· 5%，酵母膏0·02%，水100ml，pH值7· 2-7· 5。6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤5)所述的表面活性剂、助表面活性剂、 油相、水相和中药组合物的质量比为：10:20:2:10:6。7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤5)所述的表面活性剂为大豆磷脂、月旨 肪酸丙二醇酯或海藻酸;所述的助表面活性剂丙三醇或正丁醇。8. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤5 )所述油相为大蒜油。9. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤5)所述水相为质量浓度为0.5%的黄芪 多糖水溶液。10. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤6)所述的抛射剂为为异丁烷或二甲 醚。
【专利摘要】本发明公开了一种抗肺癌作用的中药微乳组合物，包括中药发酵物和亚贡提取物，其中，中药发酵物是由以下重量配比的中药组合物发酵而成：生黄芪30份、生白术15份、党参16份、茯苓20份、天冬20份、薏苡仁15份、通关藤16份、五味子25份、泽兰30份、全蝎15份、葶苈子20份、棉花根30份。本发明通过吸入法治疗肺癌，开拓了抗肿瘤脂质体领域的新篇章。
【IPC分类】A61K35/646, A61P35/00, A61K9/107, A61K36/8994
【公开号】CN105535691
【申请号】CN201610075366
【发明人】陈亮, 朱全, 闻伟
【申请人】陈亮, 朱全, 闻伟
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年2月3日