一种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及灵芝有效成分提取技术，特别涉及一种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法。
【背景技术】
[0002]灵芝又称林中灵、琼珍，外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形，为多孔菌科真菌灵芝的子实体。具有补气安神、止咳平喘的功效，用于眩晕不眠、心悸气短、神经衰弱、虚劳咳喘，延年益寿。灵芝在中国有上千年的药用历史，药王孙思邈从35岁开始一生长服灵芝，101岁无疾而终，用自己的一生见证灵芝的长寿之道。灵芝中主含氨基酸、多肽、蛋白质、真菌溶菌酶以及糖类、麦角留醇、三萜类、香豆精甙、挥发油、硬脂酸、苯甲酸、生物碱、维生素B2及C等;孢子还含甘露醇、海藻糖。三萜类化合物是灵芝的主要化学和药效成分之一。灵芝中所含三萜类化合物具有特别显著的生理活性。随着现代科学对灵芝研究的深入，至目前为止，总共分离到350余种化学成分，其中不少化学成分在抗肿瘤、保肝、降血糖、降血脂、增强单核吞噬细胞系与NK细胞功能、增强体液免疫功能、抗放射、镇痛、镇静、抗衰老等方面显示出了较强的活性。目前，公知的灵芝三萜类化合物的提取方法可以分为有机溶剂提取法和超临界C02萃取法，有机溶剂提取法是以氯仿或甲醇等有机试剂对灵芝药材或孢子粉提取而得粗提物，再用饱和碳酸氢钠溶液萃取取出其中的酸性成分，盐酸酸化，氯仿萃取出游离的酸性成分，得到含量较高的三萜类成分，这种方法通常需要较长的提取时间并消耗大量的提取溶剂，同时大量有机溶剂的使用会给人体和环境带来不利的影响；因此现在多数有条件的企业都米用超临界C02萃取法，超临界C02萃取技术是以超临界状态的C02为萃取剂，从液体或固体中萃取有效成分并进行分离的方法，该方法对许多物质特别是亲脂性成分具有较好的渗透性和较强的溶解能力，与传统溶剂萃取法相比，具有适用范围广泛、对原料成分无破坏、对产品和环境无污染、提取效率高和操作方便等优点，申请号为201410243422.1的发明专利公开了一种灵芝三萜类和多糖类有效成分多重提取工艺及其保健食品，由超临界C02萃取灵芝三萜类成分，水提取灵芝多糖等成分，调配混合制粒，计量填充胶囊，包装这些步骤制得的，本发明产品富含灵芝的精华成分及多种生物活性成分；申请号为200710094452.0的发明专利公开了一种灵芝三萜类化合物的快速制备方法及其产品，主要步骤包括C02超临界流体萃取技术萃取，萃取物乙醇溶解，葡聚糖凝胶色谱柱富集、纯化、减压浓缩，制备方法快速、简单，产品中有效的三萜类化合物种类和含量都有明显提高。但是上述的超临界C02萃取技术提取灵芝三萜类化合物的方法均存在一个缺陷，即对灵芝没有进行预处理，直接将灵芝子实体粉碎后加入超临界C02萃取设备的萃取釜中控制相关参数进行萃取，而灵芝子实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，因而直接将简单粉碎处理的灵芝粉进行⑶2超临界萃取，其得率也必定受影响。因此亟需开发一种能够高效提取灵芝三萜类化合物的方法。
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法，克服目前市场超临界co2萃取技术提取灵芝三萜类化合物时对灵芝没有进行预处理，直接将灵芝子实体粉碎后加入超临界co2萃取设备的萃取釜中控制相关参数进行萃取，而灵芝子实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，因而直接将简单粉碎处理的灵芝粉进行0)2超临界萃取，其得率受影响的缺陷，本发明提供一种工艺简单，适宜推广的可以提取到高浓度灵芝三萜及三萜皂苷的提取方法。
[0004]本发明是通过如下技术方案实现的:一种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法，包括如下步骤:
(1)粉碎:选取上品灵芝，将其切片，粉碎后并过100目筛；
(2)还原处理:将步骤(1)获得的灵芝粉加入1%抗坏血酸溶液中还原处理l-2h即得还原灵芝混合物，所述灵芝粉与1%抗坏血酸溶液的比例为m: V为1:3-5 ；
(3)冻融:将步骤(2)处理好的还原灵芝混合物放置冻融箱内，加入液氮反复冻融6-8
次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液对步骤(3)冻融处理的还原灵芝混合物进行超声波空泡化破壁，超声输出功率400-440W、采用50-60kHz的超声频率，超声处理30-45min，停滞8-12min，再次超声处理28-32min，浓缩超声液得破壁浓缩灵芝液；
(5)超临界C02萃取:取步骤(4)获得的破壁浓缩灵芝液进行超临界C02萃取，萃取条件为压力14MPa、温度30-32°C、动态萃取时间100-110min、C02流量lmL/min，背压阀温度45°C，将萃取液分级收集；
(6)冷冻干燥。
[0005]与现有的技术相比，本发明具有以下突出优点和效果:本发明应用了目前国际上最先进的超临界C02萃取技术获得灵芝有效生物活性物质，在进行超临界C02萃取前分别对灵芝粉进行还原、反复冻融以及破壁处理，采用抗坏血酸对灵芝粉进行抗氧化处理以防止灵芝三萜及三萜皂苷物质的氧化作用，进而结合反复冻融与超声破壁技术将灵芝子实体紧密的结构彻底破坏从而保证了高浓度的生物活性成分，而且工业化生产成本低，便于实施，市场前景非常乐观。
【具体实施方式】
[0006]
下列实例进一步说明本发明，但不应当作为本发明的限制:
实施例1: 一种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法，包括如下步骤:
(1)粉碎:选取上品灵芝，将其切片，粉碎后并过100目筛；
(2 )还原处理:称取300g步骤(1)获得的灵芝粉加到1200ml的1%抗坏血酸溶液中还原处理2h即得还原灵芝混合物；
(3)冻融:将步骤(2)处理好的还原灵芝混合物放置冻融箱内，加入液氮反复冻融8次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液对步骤(3)冻融处理的还原灵芝混合物进行超声波空泡化破壁，超声输出功率440W、采用50kHz的超声频率，超声处理35min，停滞lOmin，再次超声处理28min，浓缩超声液得破壁浓缩灵芝液；
(5)超临界C02萃取:取步骤(4)获得的破壁浓缩灵芝液进行超临界C02萃取，萃取条件为压力14MPa、温度30°C、动态萃取时间100min、C02流量lmL/min，背压阀温度45°C，将萃取液分级收集；
(6)冷冻干燥。
[0007]实施例2:—种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法，包括如下步骤:
(1)粉碎:选取上品灵芝，将其切片，粉碎后并过100目筛；
(2)还原处理:称取200g步骤(1)获得的灵芝粉加到1000ml的1%抗坏血酸溶液中还原处理lh即得还原灵芝混合物；
(3)冻融:将步骤(2)处理好的还原灵芝混合物放置冻融箱内，加入液氮反复冻融6次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液对步骤(3)冻融处理的还原灵芝混合物进行超声波空泡化破壁，超声输出功率440W、采用60kHz的超声频率，超声处理30min，停滞8min，再次超声处理32min，浓缩超声液得破壁浓缩灵芝液；
(5)超临界C02萃取:取步骤(4)获得的破壁浓缩灵芝液进行超临界C02萃取，萃取条件为压力14MPa、温度32°C、动态萃取时间110min、C02流量lmL/min，背压阀温度45°C，将萃取液分级收集；
(6)冷冻干燥。
[0008]实施例3:—种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法，包括如下步骤:
(1)粉碎:选取上品灵芝，将其切片，粉碎后并过100目筛；
(2 )还原处理:称取400g步骤(1)获得的灵芝粉加到1200ml的1%抗坏血酸溶液中还原处理1.5h即得还原灵芝混合物；
(3)冻融:将步骤(2)处理好的还原灵芝混合物放置冻融箱内，加入液氮反复冻融7次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液对步骤(3)冻融处理的还原灵芝混合物进行超声波空泡化破壁，超声输出功率420W、采用55kHz的超声频率，超声处理30min，停滞12min，再次超声处理32min，浓缩超声液得破壁浓缩灵芝液；
(5)超临界C02萃取:取步骤(4)获得的破壁浓缩灵芝液进行超临界C02萃取，萃取条件为压力14MPa、温度30°C、动态萃取时间105min、C02流量lmL/min，背压阀温度45°C，将萃取液分级收集；
(6)冷冻干燥。
[0009]以上所述，仅为本发明的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的技术人员在本发明所揭露的技术范围内，可不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法，其特征在于包括如下步骤: (1)粉碎:选取上品灵芝，将其切片，粉碎后并过100目筛； (2)还原处理:将步骤(1)获得的灵芝粉加入1%抗坏血酸溶液中还原处理l-2h即得还原灵芝混合物，所述灵芝粉与1%抗坏血酸溶液的比例为m: V为1:3-5 ； (3)冻融:将步骤(2)处理好的还原灵芝混合物放置冻融箱内，加入液氮反复冻融6-8次； (4)破壁:使用40%乙醇溶液对步骤(3)冻融处理的还原灵芝混合物进行超声波空泡化破壁，超声输出功率400-440W、采用50-60kHz的超声频率，超声处理30-45min，停滞8-12min，再次超声处理28-32min，浓缩超声液得破壁浓缩灵芝液； (5)超临界C02萃取:取步骤(4)获得的破壁浓缩灵芝液进行超临界C02萃取，萃取条件为，压力14MPa、温度30-32°C、动态萃取时间100-110min、C02流量lmL/min，背压阀温度45°C，将萃取液分级收集； (6)冷冻干燥。
【专利摘要】本发明公开了一种高浓度灵芝三萜及三萜皂苷复合提取方法，涉及灵芝有效成分提取技术。本发明包括粉碎、还原处理、冻融、破壁、超临界CO2萃取以及冷冻干燥六大步骤。本发明在进行超临界CO2萃取前分别对灵芝粉进行还原、反复冻融以及破壁处理，采用抗坏血酸对灵芝粉进行抗氧化处理以防止灵芝三萜及三萜皂苷物质的氧化作用，进而结合反复冻融与超声破壁技术将灵芝子实体紧密的结构彻底破坏从而保证了高浓度的生物活性成分，而且工业化生产成本低，便于实施，市场前景非常乐观。
【IPC分类】A61K36/074
【公开号】CN105477024
【申请号】CN201510957448
【发明人】张英, 魏道智, 毛德春, 毛帅, 林文津, 宁书菊, 钱和
【申请人】福建省健神生物工程有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月21日