Cathepsin L在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及化合物化th巧sinL的新用途，尤其设及化th巧sinL在制备治疗缺 血性脑损伤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 本发明人通过大量的实验发现，CathepsinL有抗缺血性脑损伤、抗脑缺血/再灌 注损伤的药理作用，具有预防或者治疗缺血性脑损伤的医药用途。 W03] 本发明设及的化合物化th巧sinL是一个2014年发表度aileyMiller，etal. ,TheMarineCyanobacterialMetaboliteGallinamideAIsaPotentand SelectiveInhibitorofHumanCathepsinL.J.化t.Prod. 2014, 77, 92-99.)的新化合 物，该化合物拥有全新的骨架类型度aileyMiller,etal.,TheMarine切anobacterial MetaboliteGallinamideAIsaPotentandSelectiveInhibitorofHumanCathepsin L.J.化t.Prod. 2014, 77, 92-99.)，对于本发明设及的化th巧sinL在制备治疗缺血性脑损 伤药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于缺血性脑损伤的治 疗作用活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性 特点，同时用于缺血性脑损伤的防治显然具有显著的进步。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于根据现有化thepsinL研究中未发现其具有治疗缺血性脑损伤 的报道的现状，提供了化thepsinL在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用。
[0005] 所述化合物化th巧sinL结构如式（I)所示：
[0006]
[0007] 所述化th巧sinL在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用，CathepsinL减少脑 缺血后脑组织水肿，缩小梗死体积，提高SOD活性，降低MDA含量，减轻自由基反应对脑组织 的损害。
[0008] -种治疗缺血性脑损伤药物，由化thepsinL为活性成分添加辅料制备而成，制备 方法为取5克化合物化thepsinL加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
[0009] -种治疗缺血性脑损伤药物，由化thepsinL为活性成分添加辅料制备而成，制备 方法为取5克化合物化th巧sinL加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0010] 本发明设及的化thepsinL在制备治疗缺血性脑损伤药物中的用途属于首次公 开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于缺血性脑损伤的作用强得意想不到，不 存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于治疗缺血性脑 损伤显然具有显著的进步。
[0011] 本发明人通过【具体实施方式】中的实验证明了化thepsinL具有治疗或预防缺血性 脑损伤的作用。
【具体实施方式】
[0012] 本发明所设及化合物化th巧sinL的制备方法参见文献度aileyMiller， etal. ,TheMarineCyanobacterialMetaboliteGallinamideAIsaPotentand SelectiveInhibitorofHumanCathepsinL.J.Nat.Prod. 2014, 77, 92-99.)
[0013]W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加W限定。
[0014] 实施例1 :本发明所设及化合物化th巧sinL片剂的制备：
[0015] 取5克化合物化th巧sinL加入糊精195克，混匀，常规压片机制成1000片。
[0016] 实施例2 :本发明所设及化合物化th巧sinL胶囊剂的制备：
[0017] 取5克化合物化th巧sinL加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0018] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0019] 实验例1:CathepsinL对大鼠局部脑缺血损伤的影响
[0020] (1)实施材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190~210g。阳性对照药：天保宁，康恩贝 集团制药有限公司生产，每片含银杏叶精提取物40mg。
[0021] (2)方法与结果 阳02引 1)化th巧sinL对大鼠中动脉血栓（MCA0)模型试验
[0023] 将60只大鼠随机分为六组，即假手术对照组、MCA0模型组、给药组3组，天保宁组 (24mg/kg)。造模前灌胃给药，一日一次，共给药屯次，假手术对照组、MCAT模型组、给予等 量的饮用水（Iml/lOOg)，造模后灌胃给药一次。大鼠腹腔注射12%水合氯醒溶液（350mg/ kg)麻醉，大鼠右侧邸位固定，在眼外赃和外耳道连线中点作一弧形切口，长约115cm，夹断 颠骨，用牙科钻在觀骨与颠鱗骨接合处靠近口侧1mm处做一直径215mm骨窗，清理残渣，暴 露大脑中动脉（位于嗅束及大脑下静脉之间）。将吸有50%氯化铁溶液lOul的小片定量 滤纸敷在此段大脑中动脉上30min后，取下滤纸，用生理盐水冲洗局部组织，逐层缝合，回 笼饲养。假手术组除不滴加氯化铁溶液外，其余手术步骤同模型组。MCA0大鼠神经症状和 梗塞范围的评定：在手术不同时间化h，24h)，按Bederson等方法并加W改进，对动物进行 行为评分。1.提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况。如双前肢对称伸向地面，记为0 分；如手术对侧前肢出现肩屈曲、时屈曲、肩内旋或既有腕时的屈曲又有内旋者，记为1分。 2.将动物置于平滑地面上，分别推双肩向对侧移动，检测阻力。如双侧阻力对等且有力者 记为0分；如向手术对侧推动时阻力下降者，记为1分。3.将动物两前肢置一金属网上，观 察两前肢的肌张力。双侧肌张力对等且有力者为0分；手术对侧前肢肌张力下降记为1分。 4.提鼠尾离开地面约一尺，动物有不停地向手术对侧旋转着，记为1分；否则记为0分。根 据W上标准评分，满分为4分，分数越高动物的行为障碍越严重。对行为检测打分值进行组 间比较，t检验。结果见表1。动物经末次行为评分后，断头取脑。去掉嗅球、小脑和低位 脑干，剩余部分在4°C下冠状切成5片。迅速将脑片置于TTC染液中（每5ml染液中含4% TTC1. 5ml，1MK2HPO4O. 1ml)，37°C避光溫解30min，再取出置于10%甲醒液中避光保存。经 染色后非缺血区为玫瑰红色，梗塞区为白色。将白色组织仔细挖下称重，W梗塞组织重量占 右侧半脑重量的百分比作为脑梗塞范围。结果进行组间比较，t检验，结果见表2。
[0024] 表1化th巧sinL对MCA0大鼠脑梗塞范围及神经症状的影响（η= 10) 阳0巧]
[0026] 注：与模型组相比 *ρ<0. 05, **ρ<0. 01。
[0027] 表2化th巧sinL对光化学诱导脑血栓形成大鼠脑梗塞的影响（η= 10)
[0028]
[0029] 注：与模型组相比 *p<0. 05, **p<0. 01。
[0030] 结果显示，除假手术未见行为异常改变，MCAO模型组大鼠在术后化、24h均出现 偏擁样症状。给药组与天保宁组的大鼠在术后化、24h其神经症状均有不同程度的改善 任<0.01，P<0.05)。术后2地，除假手术组未见脑组织异常改变外，模型组相比具有显著差 异（P<0. 01，P<0. 05)。CathepsinL可减轻梗塞灶，结果显示出一定的量效关系。
[0031] 实验例2:CathepsinL对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤的影响 阳0巧 （1)实验材料：SD大鼠，雌雄兼用，体重190~210g。MDA，SOD，蛋白定量（考马斯 亮蓝）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。 阳〇3引 似方法与结果
[0034] 1)实验方法：120只大鼠随机分为5组，即假手术组、模型组、3个给药组，每组25 只。除假手术组不插线外，其余4组造模（MCA0)。给药组各剂量组ig每天1次，连续13d。 术前比ig再给药1次。6%水合氯醒（350mg/kg)腹腔麻醉，颈部正中切开，分离右侧颈总 动脉（CCA)、颈外动脉巧CA)、颈内动脉（ICA)。结扎颈总动脉近屯、端、颈外动脉起始端后，在 颈总动脉处剪一"V"形小口，沿颈总动脉插入线栓（线栓采用直径为0. 235mm的鱼线，头端 烧成球状，并于距线球18. 5mm处作标记）经颈内动脉向烦内插至大脑中动脉分支叉处，插 入深度为18~20mm，将线与颈内动脉一起结扎。术中维持体溫（37±015)°C。在灌注时外 拉线使球端回至ECA，拔除插线，结扎ECA即可。假手术组除不插线外，其余步骤同上。大脑 中动脉栓塞后化恢复血供，神经行为学评分参照ZeaLongaS分制标准，术后出现左前肢屈 曲，行走时向左侧转圈即视为造模成功，然后保溫常规饲养，至24h断头处死取材。实验过 程中，因麻醉意外、MCA0手术失败、造模不成功及24h内死亡的均弃去不用。
[0035] 脑组织含水量的测定：大鼠造模24h后断头取脑，称量两侧半脑湿重。再置于烘箱 中，100°C烘烤24h至恒重，精确称量干重，计算含水量。脑组织含水量=(湿重-干重）/ 湿重X 100%。
[0036] 脑梗塞体积测定：断头取脑，将大脑作连续2mm冠状切片，共5片，然后将脑片放 入2%TTC憐酸盐缓冲液中37°C恒溫解育30min，正常脑组织染为红色，梗死灶呈白死。滤 纸吸去表面液体后用刀片小屯、刻取未着色部分的质量百分比，W此反应梗死体积比。脑组 织匀浆SOD活力、MDA含量的检测：右侧半脑称重后按1 :10加入冰生理盐水制成匀浆，参照 SOD、MDA试剂盒说明书，检测脑组织中SOD、MDA含量。应用SPSS13. 0化rwindows软件对 数据进行处理；计量数据WX+S表示，各组间比较采用单因素方差分析。
[0037] 。结果
[0038] 脑组织含水量：左脑组织含水量各组间相比无统计学意义，模型组右脑组织含水 量明显高于各组（P<〇. 05)，高于假手术组（P<0. 05)，给药组各剂量组可降低模型脑组织含 水量（p<〇. 05)(表 3)。
[0039] 表3化th巧sinL对脑组织含水量、梗死体积、SOD、MDA含量的影响（η=8)
[0040]
[0041] 与模型组相比*ρ<0. 05, *卸<0. 01
[0042] 脑梗塞体积：模型组脑组织脑梗塞体积高于各组（P<0. 05)，给药组各剂量组可降 低模型脑组织梗死体积（P<〇. 05)。
[0043] 结论：CathepsinL可减少脑缺血后脑组织水肿，缩小梗死体积，提高SOD活性， 降低MDA含量，减轻自由基反应对脑组织的损害，对缺血脑组织具有明显的保护作用。 化th巧sinL可W用于制备治疗缺血性脑损伤药物。
【主权项】
1. Cathepsin L在治疗缺血性脑损伤药物中的应用，所述化合物Cathepsin L结构如式 (I )所示：式（I )。2. 如权利要求1所述Cathepsin L在治疗缺血性脑损伤药物中的应用，其特征在于 Cath印sin L减少脑缺血后脑组织水肿，缩小梗死体积，提高SOD活性，降低MDA含量，减轻 自由基反应对脑组织的损害。3. -种治疗缺血性脑损伤药物，其特征在于由权利要求1所述Cathepsin L为活性成 分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物Cathepsin L，加入糊精195克，混匀，常规 压片制成1000片。4. 一种治疗缺血性脑损伤药物，其特征在于由权利要求1所述Cathepsin L为活性成 分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物Cathepsin L，加入淀粉195克，混匀，装胶 囊制成1000粒。
【专利摘要】本发明公开了Cathepsin？L在制备治疗缺血性脑损伤药物中的应用，属于药物新用途技术领域。Cathepsin？L对治疗缺血性脑损伤具有治疗作用，因此具有良好的开发应用前景，属于首次公开，而且其对于治疗缺血性脑损伤活性强。
【IPC分类】A61P9/10, A61K31/4015
【公开号】CN105412085
【申请号】CN201510902422
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月8日