Rhodomollein XXV在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明设及化合物化odomolleinXXV的新用途，尤其设及化odomolleinXXV在制 备抗幽口螺杆菌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 幽口螺杆菌化elicobacterpylori，也）是一种革兰氏阴性螺旋状细菌。研究显 示，幽口螺杆菌是急、慢性胃炎W及胃、十二指肠溃瘍的主要致病原因，并可能与胃癌和胃 粘膜相关性淋己样组织(MLT)恶性淋己瘤发病有关。最近，世界卫生组织将化归为I类致癌 物，它在胃癌发展中起主导作用。目前流行的治疗化感染的方案是同时服用质子累抑制剂 (PPI)加两种抗生素(克拉霉素，阿莫西林、四环素、甲硝挫等选二种)的Ξ联疗法。影响Ξ联 疗法的最主要因素被认为是化对抗菌剂的耐药性;另一严重问题是质子累抑制剂会诱发消 化不良，大量抗菌剂则导致消化道内菌群的严重毁灭。因此，寻找高效、安全的抗化活性一 类新药物成为一个重要和迫切的任务。
[0003] 本发明设及的化合物RhodomolleinXXV是一个2014年发表（YongLi，etal.， MollanolA,aDiterpenoidwithaNewC-Nor-D-homograyananeSkeletonfromthe Fruitsoflihododen化onmolle.Org.Lett.2014,16,4320-4323.)的新化合物，该化合物 拥有全新的骨架类型（YongLi，etal.,MollanolA,aDite巧enoidwitha化wC-Nor-D-homograyananeSkeletonfromtheFruitsofRhododendronmolle.Org.Lett.2014, 16,4320-4323.)，对于本发明设及的化odomolleinXXV在制备抗幽口螺杆菌药物中的用途 属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于抗幽口螺杆菌的活性强得意想不到， 不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抗幽口螺杆 菌显然具有显著的进步。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于根据现有化odomolleinXXV研究中未发现其具有抗幽口螺杆 菌活性的报道的现状，提供了化odomolleinXXV在制备抗幽口螺杆菌药物中的应用。
[0005] 所述化合物lihodomolleinXXV,结构如式（I)所示：
[0006]
[0007] 所述化odomo1leinXXV在制备抗幽口螺杆菌药物中的应用，幽口螺杆菌为幽口螺 杆菌Helicobacterpylori，Hp标准菌株ATCC43504。
[000引一种抗幽口螺杆菌药物，由化odomolleinXXV为活性成分添加辅料制备而成，审U备方法为取5克化合物化odomolleinXXV，加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
[0009] 一种抗幽口螺杆菌药物，由化odomolleinXXV为活性成分添加辅料制备而成，审U 备方法为取5克化合物化odomolleinXXV，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0010] 化odomolleinXXV的体外实验表明，化odomolleinXXV具有很强的抗幽口螺旋杆 菌活性，纸片法显示其抑菌圈直径为16mm(ATCC43504)。用琼脂稀释法显示它能完全抑制5 个随机的临床菌株化pOOl、化003、化004、化018和化036)和1个标准菌株(ATCC43504)的生 长，最小抑菌浓度(MIC)均为0.5祉g/ml。用氨节西林作阳性对照，其对6株测试菌完全抑制 的最小浓度(MIC)为3.化g/ml。
[00川本研究结果显示，RhodomolleinXXV的抑制幽口螺旋杆菌活性的能力比氨节西林 强，说明对于与幽口螺旋杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃瘍等疾病来讲， 化odomolleinXXV是一个极具开发潜力的化合物。它可直接用于相应疾病的治疗W及相关 药物的制备。
[0012]本发明设及的化odomolleinXXV在制备治疗抗幽口螺杆菌药物中的用途属于首 次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽口螺杆菌抑制活性强得意想不 至IJ，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽口螺杆 菌感染的防治显然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0013] 本发明所设及化合物化odomolleinXXV的制备方法参见文献(YongLi，etal., MollanolA,aDiterpenoidwithaNewC-Nor-D-homograyananeSkeletonfromthe Rruitsoflihododen化onmolle.0;rg丄ett.2014,16,4320-4323.)
[0014] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加W限定。
[0015] 实施例1:本发明所设及化合物化odomolleinXXV片剂的制备：
[0016] 取20克化合物RhodomolleinXXV，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压 片机制成1000片。
[0017] 实施例2:本发明所设及化合物化odomolleinXXV胶囊剂的制备：
[0018] 取20克化合物化odomolleinXXV，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混 匀，装胶囊制成1000粒。
[0019 ]下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0020] 化odomolleinXXV的药理实验
[0021] 1)供试菌株
[0022] 幽口螺杆菌巧elicobacterpylori，Hp)标准菌株ATCC43504购于美国菌种保存 中屯、（AmericanTypeCul1:ureCollection,ATCC)el5株Hp临床菌株采自江苏省人民医院 消化科、江苏省中医院检验科和南京市儿童医院胃镜室接受胃镜检查的患者;在连续胃镜 检查中对消化性溃瘍、十二指肠球炎或痛状胃炎的患者，先经快速尿素酶实验确定为化阳 性者，再取胃窦黏膜1-2块，切碎后接种于含8%马血清、Ξ甲氧节氨喀晚（trimethropin，TMP) 1.25g/L、多粘菌素（polymyxin)B2500U/L、万古霉素（vancomycin)lOmg/L的Columbia 选择性琼脂培养基中，于37°C在微氧环境下(5%02，10%C02和85%N2)培养72小时。收集细 菌，经涂片革兰氏染色，氧化酶、触酶和尿素酶鉴定为阳性后，传代纯培养，所得菌株作为实 验菌株。
[0023] 2)菌株培养
[0024] 我们采用微需氧袋(购自上海医科大学)进行HP的菌株培养，它可通过化学反应产 生化所需要的微需氧环境。
[0025] 3)生物活性测定
[00%] 采用纸片法(Microbiologicalpapermethod)测定化合物对幽口螺杆菌的抑制 作用，用琼脂稀释法来测定供试样品的最低抑菌浓度（miηima1iηhibi10ry concentration,MIC)。
[0027] I.纸片法实验
[0028] (A)准备培养基将配制好的Columbia培养基经高压蒸汽灭菌后，冷却至50-60°C， 加8%马血清或绵羊血，混匀倾注于已经灭菌的培养皿中，每皿7-lOml，培养基厚度为1.5mm (无菌操作）。
[0029] (B)转接实验菌(涂菌)用微量取样器取稀释好的108C即/ml(10D660 = 108CFU/ml) 化的菌悬液0.1ml均匀地涂抹在适宜的培养皿表面。倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目 的使琼脂表面干燥，备用。
[0030] (C)贴样品纸片用微量取样器取化1待测样品（质量浓度2mg/ml)注入已经灭菌的 圆滤纸片上。用无菌綴子綴取含样品的纸片和对照空白纸片，按无菌操作分别纸片紧贴于 含菌琼脂表面，每隔一定距离贴一张纸片。每种菌做3皿，所得结果求其平均值。
[0031] (D)培养将各平皿置于微需氧袋中，封口，打开气体发生器，再置于37°C培养箱中 培养7化。
[0032]化)测抑菌圈直径取出平板后，分别测量各纸片周围抑菌圈直径的大小。参照对照 组的结果，可得出待测样品敏感实验的结果。重复Ξ次。
[0033] II.琼脂稀释法测定MIC
[0034] (A)药物平板的制备首先将测试的化合物用二甲基亚讽(DMS0)溶液配制成0.5mg/ ml的母液，再用无菌水稀释，最终配成 10.0,8.0,6.0,4.5,4.0,3.5,3.0,2.5,2.0,1.5,1.0， 0.5和0.2化g/ml的浓度系列，DMS0在介质中的浓度小于1 %。将1ml配制好的测试化合物溶 液与保溫于50°C的9ml哥伦比亚培养基另加1ml保溫于50°C的马血清充分混匀，诱制入培养 皿中冷却即成。
[0035] (B)转接实验菌（涂菌）用微量取样器吸取稀释好的lX108CFU/ml化的菌悬液 0.1ml均匀地涂抹在培养皿表面，倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目的使琼脂表面干燥， 备用。
[0036] (C)确定MIC将待测培养皿在微需氧袋(含:85%N2，10%C02和5%〇2)中，保溫37°C 培养72小时，观察化生长情况，与空白组相对照，W完全没有菌生长的样品最低浓度为最低 抑菌浓度（minimalinhibitoryconcentration,MIC)值。阳性对照为氨节西林 (Ampicillin)。
[0037] 3、化odomolleinXXV的药理实验结果
[0038] 体外实验表明，化odomolleinXXV具有很强的抗幽口螺旋杆菌活性，纸片法显示 其抑菌圈直径为16mm(ATCC43504)。用琼脂稀释法显示它能完全抑制5个随机的临床菌株 (化001、化003、化004、化018和化036)和1个标准菌株(ATCC43504)的生长，最小抑菌浓度 (MIC)均为0.5祉g/ml。用氨节西林作阳性对照，其对6株测试菌完全抑制的最小浓度(MIC) 为3.化g/ml。
[0039] 结论:化odomollein XXV抑制幽口螺旋杆菌活性的能力比氨节西林强，说明对于 与幽口螺旋杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃瘍等疾病来讲，Rhodomollein XXV是一个极具开发潜力的化合物。它可直接用于相应疾病的治疗W及相关药物的制备。
【主权项】
1. RhodomolIein XXV在抗幽门螺杆菌药物中的应用，所述化合物Rhodomol Iein XXV结 构如式(I)所示：式⑴。2. 如权利要求1所述RhodomolIein XXV在抗幽门螺杆菌药物中的应用，其特征在于幽 门螺杆菌为幽门螺杆菌Helicobacter pylori，Hp标准菌株ATCC 43504。3. -种抗幽门螺杆菌药物，其特征在于由权利要求1所述RhodomolIein XXV为活性成 分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物RhodomolIein XXV，加入糊精195克，混匀， 常规压片制成1000片。4. 一种抗幽门螺杆菌药物，其特征在于由权利要求1所述RhodomolIein XXV为活性成 分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物RhodomolIein XXV，加入淀粉195克，混匀， 装胶囊制成1000粒。
【专利摘要】体外活性实验表明Rhodomollein？XXV具有很强的抗幽门螺旋杆菌(Helicobacter？pylori，Hp)活性。Rhodomollein？XXV可用于急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病的治疗及在制备治疗急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡药物中得到应用。本发明涉及的Rhodomollein？XXV在制备治疗抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽门螺杆菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽门螺杆菌感染的防治显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61P1/04, A61P31/04, A61K31/352
【公开号】CN105412072
【申请号】CN201510936811
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月16日