一种家禽患h7n9病毒时的处理方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于动物疫情防控领域，具体涉及一种家禽患H7N9病毒时的处理方法。 技术背景
[0002] 禽流感病毒可引起禽类的呼吸器官或全身性感染。高致病性禽流感病毒可以直接 感染禽类，偶尔也能直接或间接感染人类。低致病性禽流感病毒可以经基因突变或基因重 配转变成高致病性禽流感病毒。高致病性禽流感病毒是在人群中引发流感的一个潜在危险 因素，并会严重地威胁人类健康。H7N9禽流感病毒属于正粘病毒科甲型流感病毒属，与其他 甲型流感病毒一样，H7N9禽流感病毒为有包膜分节段的单负链RNA病毒。
[0003] 近年来，H7N9禽流感病毒在全球范围不断暴发和蔓延，给畜牧业经济带来了重大 损失，给人类生命安全造成了严重威胁，而且这种威胁在未来仍会继续存在。在未来相当 长的时期内，扑杀疫区（点）家禽仍将是扑灭禽流感疫情的最直接有效的措施。农业部 《高致病性禽流感疫情处置技术规范》（试行）中对患病禽群的捕杀有密封车辆或密封容器 或密封袋通入二氧化碳气体室息法和扭颈法。前者需要专用设备和二氧化碳气源并要逐个 抓活禽，目前基层难于配备、操作并导致尘埃飞扬。后者操作费事，需要耗费大量的人力，而 且一次性短时难于致死，家禽极力挣扎，粉尘飞扬更加严重，通过粉尘传播疫病的风险大大 地增加，不利于捕杀操作人员的生物安全防护。
[0004] 中国专利CN104378992A，提供了 一种用于以人道方式大规模扑杀家禽和对饲养棚 进行灭菌的基于二氧化碳的方法和系统，虽然该方法和系统可行性高，但是该方法需要喷 施液体二氧化碳，对饲养棚进行灭菌需要借助系统通过喷施单独来灭菌剂来完成，操作繁 琐，成本比较高。
【发明内容】
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[0005] 本发明为了在家禽患流感病时，及时地切断病毒源，杀灭病毒，为禽舍消毒，提供 一种家禽患传染病时的处理方法，能够一次性短时内致死家禽进而切断病毒源，通过流感 病H7N9病毒检测，确认消毒后的禽舍没有残留的活性病毒源，达到了对禽舍流感病病毒全 面杀灭的目的。
[0006] 为实现上述目的，本发明操作方法具体如下：
[0007] (1)配制消毒液：消毒剂使用的浓度应是平时消毒浓度的5倍左右，用10%浓度百 毒杀200倍稀释、2. 5%喷雾灵200倍稀释或抗毒威2. 5%浓度150倍稀释，进行喷洒消毒。
[0008] (2)初步消毒：消毒人员进入禽舍前，要洗澡、更衣，穿戴好已消毒过的连体防护 月艮、手套、胶鞋，佩戴N95 口罩。对禽舍消毒要不留死角，用电动常量喷雾器带禽喷雾消毒， 除尘，提高禽舍相对湿度达70% -75%。消毒人员离开禽舍后，对穿戴过的连体防护服、手 套、胶鞋、口罩以及喷雾器具再次消毒。
[0009] (3)福尔马林气体熏蒸：关闭门窗、进气孔、排气孔，对所有漏气孔隙用胶带粘贴 封堵严密，加温使禽舍温度达到25-28Γ。按禽舍空间计算福尔马林和高锰酸钾的用量：每 立方米用福尔马林溶液40-42ml，高锰酸钾21-23g，常水21-23ml。准备容积大于前三者总 容积约5-10倍的陶瓷或者搪瓷容器，先将高锰酸钾用水化开，而后加入福尔马林溶液，操 作人员快速离开，密闭熏蒸4-5小时。
[0010] ⑷去除福尔马林气体：在禽舍舍内放置氨气释放剂快速中和福尔马林，30分钟 后，同时打开禽舍门窗通风30-60分钟，之后就可打开笼具门，捡拾家禽尸体统一进行无害 化处理。
[0011] (5)消毒后H7N9病毒检测：采集禽舍地面、墙面、笼中、笼架、容器上面的标本，分 别提取样本中的总RNA，用禽流感H7N9病毒检测试剂盒检测，检测样本中没有残留流感病 毒后，方可再次启用禽舍进行家禽养殖。
[0012] 所述的步骤（4)氨气释放剂为每立方米用氯化铵5g，生石灰IOg, 75-80 °C热水 l〇ml，混合后放入容器中即可产生氨气。
[0013] 所述的步骤（5)采集禽舍地面、墙面、笼中、笼架、容器上面的标本为家禽湿容粪 便，家禽饮用水，地面污水，未干涸血渍，提取总RNA的方法为常规Trizol法，禽流感H7N9 病毒检测试剂盒为设计有特异性探针的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，试剂盒为购买禽流 感H7N9病毒检测专业试剂盒。
[0014] 本发明具有如下优点和有益效果：该方法能够有效地适用于对家禽群患流感病后 及时处理，在灭菌杀毒处理家禽的同时，对禽舍也起到了消毒霉菌的目的。操作方法规范， 对规模养殖户与散养户都具有安全可靠、成本低、劳动强度小，并且对消毒后禽舍环境进行 了流感病毒的检测，确保了养殖安全问题。
【具体实施方式】
[0015] 以下通过具体实施例对本发明作进一步说明，但是本发明所保护的权利范围不仅 限于以下实施例。
[0016] 实施例1
[0017] 本实施例对已经患H7N9病毒的鸡，利用一种家禽患H7N9病毒时的处理方法进行 处理，包括以下步骤完成：
[0018] (1)配制消毒液：消毒剂使用的浓度应是平时消毒浓度的5倍左右，用1抗毒威 2. 5%浓度150倍稀释，进行喷洒消毒。
[0019] (2)初步消毒：消毒人员进入禽舍前，要洗澡、更衣，穿戴好已消毒过的连体防护 月艮、手套、胶鞋，佩戴N95 口罩。对禽舍消毒要不留死角，用电动常量喷雾器带禽喷雾消毒， 除尘，提高禽舍相对湿度达70%。消毒人员离开禽舍后，对穿戴过的连体防护服、手套、胶 鞋、口罩以及喷雾器具再次消毒。
[0020] (3)福尔马林气体熏蒸：关闭门窗、进气孔、排气孔，对所有漏气孔隙用胶带粘贴 封堵严密，加温使禽舍温度达到28°C。按禽舍空间计算福尔马林和高锰酸钾的用量：每立 方米用福尔马林溶液42ml，高锰酸钾21g，常水23ml。准备容积大于前三者总容积约10倍的 陶瓷或者搪瓷容器，先将高锰酸钾用水化开，而后加入福尔马林溶液，操作人员快速离开， 密闭熏蒸5小时。
[0021] (4)去除福尔马林气体：在禽舍舍内放置氨气释放剂快速中和福尔马林，氨气释 放剂为每立方米用氯化铵5g，生石灰10g，80°C热水10ml，混合后放入容器中即可产生氨 气。30分钟后，同时打开禽舍门窗通风60分钟，之后就可打开笼具门，捡拾家禽尸体统一进 行无害化处理。
[0022] (5)消毒后流感病毒检测：采集禽舍地面、墙面、笼中、笼架、容器上面的标本为家 禽湿容粪便，家禽饮用水，地面污水，未干涸血渍，常规Trizol法分别提取样本中的总RNA， 用设计有特异性探针的荧光定量RT-PCR试剂盒检测样本中没有残留禽流感H7N9病毒后， 再次启用禽舍进行家禽养殖。
[0023] 实施例2
[0024] 采集禽舍笼中家禽湿容粪便（Cl)、家禽槽中家禽饮用水（C2)、笼中未干涸血渍 (C3)，禽舍地面污水（C4)，用常规Trizol法，提取样本中的总RNA，由表一。
[0025] 表一样本总RNA提取质量分析
[0028] 注：" + "表示经I. 0 %琼脂糖凝胶电泳检测有条带。
[0029] 有18S和28S两条带说明RNA溶解充分，完整性良好，没有降解。NAN0DR0P2000C 微量分光光度计测定样品0D260/0D280在2. 0左右，无 DNA、蛋白质以及其他小分子，符合检 测要求。
[0030] 选用上海辉睿生物科技有限公司的one stepRT-PCR Master Mix，Code :Q40101， 按说明书操作反应体系为25μ1，其中2X0ne St印RT-PCR Reaction Buffer7.5ul，脱氧 三磷酸核苷5ul，DNA聚合酶4U，MMLV逆转录酶200U，RNA酶抑制剂20U，上游引物与下游引 物（10 μ mol/L)各 1 μ 1，探针（10 μ mol/L) 0. 5 μ 1，样本模板RNA 2-3 μ 1，反应体系中 MgCl2 浓度为5mmol/L (净含量为1. 25 X 10 4mmol) DEPC水补足25 μ 1。
[0031] 用Rotor-Gene6000荧光检测系统进行检测，反应参数为：反应条件为50°C 30min， 95°C 5min进行逆转录，然后95°C 10s，55°C 30s，在55°C进行单点荧光检测，共进行40个循 环，可获得最低Ct值，进行数据分析。
[0032] 表二样本中禽流感H7N9病毒检测结果
[0033]
[0035] 实施例2,表二表面，采集禽舍笼中家禽湿容粪便（Cl)、家禽槽中家禽饮用水 (C2)、笼中未干涸血渍（C3)，禽舍地面污水（C4)，荧光检测系统进行检测，Ct值为0,对照禽 流感H7N9病毒3次重复都有Ct值，说明，采集禽舍笼中家禽湿容粪便（Cl)、家禽槽中家禽 饮用水（C2)、笼中未干涸血渍（C3)，禽舍地面污水（C4)中无 H7N9病毒存在，达到了预期的 效果。
【主权项】
1. 一种家禽患H7N9病毒时的处理方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 配制消毒液：消毒剂使用的浓度应是平时消毒浓度的5倍左右，用10%浓度百毒杀 200倍稀释、2. 5%喷雾灵200倍稀释或抗毒威2. 5%浓度150倍稀释，进行喷洒消毒； (2) 初步消毒：消毒人员进入禽舍前，要洗澡、更衣，穿戴好已消毒过的连体防护服、手 套、胶鞋，佩戴N95 口罩。对禽舍消毒要不留死角，用电动常量喷雾器带禽喷雾消毒，除尘， 提高禽舍相对湿度达70% -75%。消毒人员离开禽舍后，对穿戴过的连体防护服、手套、胶 鞋、口罩以及喷雾器具再次消毒； (3) 福尔马林气体熏蒸：关闭门窗、进气孔、排气孔，对所有漏气孔隙用胶带粘贴封堵 严密，加温使禽舍温度达到25-28Γ。按禽舍空间计算福尔马林和高锰酸钾的用量：每立方 米用福尔马林溶液40-42ml，高锰酸钾21-23g，常水21-23ml。准备容积大于前三者总容积 约5-10倍的陶瓷或者搪瓷容器，先将高锰酸钾用水化开，而后加入福尔马林溶液，操作人 员快速离开，密闭熏蒸4-5小时； (4) 去除福尔马林气体：在禽舍舍内放置氨气释放剂快速中和福尔马林，30分钟后，同 时打开禽舍门窗通风30-60分钟，之后就可打开笼具门，捡拾家禽尸体统一进行无害化处 理； (5) 消毒后H7N9病毒检测：采集禽舍地面、墙面、笼中、笼架、容器上面的标本，分别用 常规Trizol法提取样本中的总RNA，用禽流感H7N9病毒检测试剂盒检测，检测样本中没有 残留流感病毒后，方可再次启用禽舍进行家禽养殖。2. 根据权利要求1所述的一种家禽患H7N9病毒时的处理方法，其特征在于步骤（5)采 集禽舍地面、墙面、笼中、笼架、容器上面的标本为家禽湿容粪便，家禽饮用水，地面污水，未 干涸血渍。
【专利摘要】本发明公开了一种家禽患H7N9病毒时的处理方法，具体是通过(1)配制消毒液(2)初步消毒(3)福尔马林气体熏蒸(4)去除福尔马林气体(5)消毒后H7N9病毒检测，5个步骤完成的。本发明克服了对患病禽群的处理时费事费力，安全性防护不足的问题。利用该方法能够于对家禽群发病时有效处理患病家禽，安全可靠、操作简单，成本低、劳动强度小,并且利用该方法可以同时对禽舍消毒，起到事半功倍的效果。
【IPC分类】A61L2/20, A61L2/22, A61L101/32, A01P1/00, A01N35/02, A01N59/16
【公开号】CN105268001
【申请号】CN201510734668
【发明人】岳军堂
【申请人】岳军堂
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年11月3日