一种黑莓花青素的提取方法及其产品和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种黑莓花青素的提取方法及其产品和应用，属于植物提取技术领 域。
【背景技术】
[0002] 黑莓（Blackberry)，蔷薇科（Rosaceae)悬钩子属（Rubus)灌木，主要原产于新旧 大陆北温带，北美东部和太平洋沿岸尤为丰富，在不列颠群岛和西欧为常见萌生林和绿蓠 植物，品种较多栽培范围广泛，资源较为丰富。因新鲜黑莓不但有甘美的滋味，并且含有大 量的维生素、氨基酸、矿物元素、微量元素、无机盐类、果胶、黄酮、有机酸、酚类、粗蛋白及糖 类等多种营养成分，又具有食用和医疗保健的作用，而被广大人群所喜爱。黑莓具有镇静安 神、养颜益智、乌发明目、生津止渴、延年祛斑和降压消渴的功效。随着现代医学对黑莓进 行药理、药效毒理测试的研究，发现黑莓具有促进造血细胞的生长，提高动物体内微波的活 性，抗诱变，抗菌，抗病毒，抗辐射，抑制肿瘤及有害物质的生成，增强免疫力、抗寒功能及耐 劳能力，抗氧化，延缓细胞衰老，防止血管硬化，调节血糖和血脂，护肝等功效。
[0003] 花青素是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属类黄酮化合物，具 有较为广泛的生物活性，参与机体代谢，具有调节机体免疫力，延缓细胞衰老，防止血管硬 化，防衰老，调节血糖，抗菌，抗病毒，抗辐射，抑制肿瘤，抗氧化，护肝等生物活性，其中抗 氧化活性是其最主要的生物活性。
[0004] 传统的黑莓花青素提取方法主要有回流提取法、超声波辅助提取法、热乙醇提取 法、喊提取法和酸提取法，总体上呈现提取效率低、提取率低、工艺复杂或污染环境等诸多 缺陷，不适合工业化大生产。
[0005] 因此，研发一种黑莓花青素的提取方法，以提高提取效率和提取率，简化工艺，减 少污染，显得尤为必要。
【发明内容】
[0006] 为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种黑莓花青素的提取方法及其 产品和应用，该方法工艺简单，能够提高黑莓花青素的提取效率，实现高的提取率，其提取 物可应用于药品、化妆品或保健品中。
[0007] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0008] -种黑莓花青素的提取方法，包括以下步骤：
[0009] (1)将黑莓进行匀浆，得黑莓浆备用；
[0010] (2)加入水或任意浓度的乙醇，采用微波辅助萃取，得提取液；
[0011] (3)提取液离心，收集上清液，即得黑莓花青素提取物。
[0012] 进一步地，提取方法包括以下步骤：
[0013] (1)将黑莓进行匀浆，得黑莓浆备用；
[0014] (2)按5~25mL/lg黑莓浆的比例加入水或任意浓度的乙醇，采用微波辅助萃取， 微波功率100~700w，微波处理时间1~9min，得提取液；
[0015] (3)提取液离心，收集上清液，即得黑莓花青素提取物。
[0016] 更进一步地，提取方法包括以下步骤：
[0017] (1)将黑莓进行匀浆，得黑莓浆备用；
[0018] (2)按25mL/Ig黑莓浆的比例加入浓度为52%的乙醇，采用微波辅助萃取，微波功 率469w，微波处理时间4min，得提取液；
[0019] (3)提取液离心，收集上清液，即得黑莓花青素提取物。
[0020] 前述提取方法中，提取液离心为提取液在3500r/min条件下离心3~8分钟。
[0021] 优选地，前述提取方法中，提取液离心为提取液在3500r/min条件下离心5分钟。
[0022] 上述黑莓花青素的提取方法提取得到的黑莓花青素提取物。
[0023] 前述黑莓花青素提取物在制备抗氧化的药物或保健品中的应用。
[0024] 前述黑莓花青素提取物在化妆品中的应用。
[0025] 为了确保本发明黑莓花青素提取方法科学、合理，发明人进行了相应的实验研究 和筛选，才得以确定本发明的技术方案。具体实验内容如下：
[0026] 1.仪器与试药
[0027] I. 1 仪器
[0028] 锥形瓶、具塞试管、移液管、量筒、烧杯、试剂瓶、容量瓶、离心管、电子天平、台秤、 旋转蒸发仪、搅拌机、离心机、水浴锅、冰柜、酶标仪、微波炉、紫外分光光度计等。
[0029] 1. 2 试药
[0030] 黑莓、乙醇、7K、过硫酸钾、1，I-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH)、2, 2-联氮 基-双- (3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐（ABTS)。
[0031] 2.方法与结果
[0032] 2. 1黑莓花青素提取工艺
[0033] 2. I. 1工艺流程
[0034] 原料一匀浆一加适量乙醇一微波一离心一收集上清液一黑莓花青素提取物
[0035] 2. 1. 2操作过程
[0036] 黑莓预处理过程：将黑莓进行匀浆，备用。
[0037] 微波过程：将黑莓浆置于容器中，按5~25mL/lg黑莓浆的比例加入水或任意浓度 的乙醇，采用微波辅助萃取，保持微波功率在100~700W，微波时间为1~9分钟，得提取 液。
[0038] 收集过程：将提取液在3500r/min条件下离心3~8分钟，收集上清液，得黑莓花 青素提取物。
[0039] 2. I. 3 ABTS溶液的配制
[0040] ABTS · +溶液：7mmol/L ABTS溶液和2. 5mmol/L过硫酸钾溶液等体积混合置于室 温避光处反应16小时，即得ABTS自由基溶液。
[0041] 2. 2用盐酸甲醇法测定黑莓花青素含量
[0042] 2. 2. 1操作流程
[0043] 取黑莓花青素提取物一配制成适当浓度的溶液一取一定体积的黑莓花青素溶液 于具塞试管中一加5mL的1%的盐酸甲醇溶液一沸乙醇浴5分钟一冷却至室温一用紫外分 光光度计测530nm波长处的吸光度一计算黑莓花青素提取率。
[0044] 2. 2. 2黑莓花青素提取率的计算
[0045] 黑莓花青素提取率（mg/g)=提取物中花青素质量/黑莓质量
[0046] 2. 3用ABTS和DPPH自由基测定花青素抗氧化活性
[0047] 2. 3. 1操作流程
[0048] ABTS :取黑莓花青素提取物一配制成适当浓度的溶液一取50 μ L的黑莓花青素溶 液于试管中一加 ImL的ABTS ·+溶液一室温避光处反应20min -用紫外分光光度计测734nm 波长处的吸光度一计算黑莓花青素清除自由基能力。
[0049] DPPH :取黑莓花青素提取物一配制成适当浓度的溶液一取0. 5mL的黑莓花青素溶 液于具塞试管中一加〇. 5mL的0. 2mmol/L DPPH溶液一室温避光处反应40min -用紫外分 光光度计测517nm波长处的吸光度一计算黑莓花青素当量抗氧化能力。
[0050] 2. 3. 2黑莓花青素当量抗氧化能力的计算
[0052] 黑莓花青素当量抗氧化能力=TEAC#/C# (TEAC#表示样品在标曲中等价的 Trolox浓度，单位为μ M ;C#表示样品浓度，单位为mg ^mL 1C3 )
[0053] 2. 4提取工艺的单因素考察
[0054] 2. 4. 1微波功率的考察
[0055] 取预处理过的黑莓于容器中，按lOmL/lg黑莓浆的比例加入浓度为50%的乙醇， 放入微波炉分别保持功率在100、250、400、550、700?，微波5分钟后在350(^/1^11条件下离 心5分钟，取上清液得黑莓花青素提取物，再用盐酸甲醇法显色，用紫外分光光度计测定吸 光度，微波功率对黑莓花青素提取效果的影响见图1。
[0056] 由图1可知，微波功率在400w左右时，黑莓花青素提取效果较好。
[0057] 2. 4. 2乙醇浓度的考察
[0058] 取预处理过的黑莓于容器中，按lOmL/lg黑莓浆的比例加入乙醇，保持微波功率 在400w，其中加入乙醇的浓度分别为0 % (即水）、20 %、40 %、60 %、80 %、100 %，微波5分 钟后在3500r/min条件下离心5分钟，取上清液得黑莓花青素提取物，再用盐酸甲醇法显 色，用紫外分光光度计测定吸光度，乙醇浓度对黑莓花青素提取效果的影响见图2。
[0059] 由图2可知，乙醇的浓度为40%左右时，黑莓花青素提取效果较好。
[0060] 2. 4. 3乙醇用量的考察
[0061] 取预处理过的黑莓于容器中，分别按5mL/lg黑莓浆、lOmL/lg黑莓浆、15mL/lg黑 莓浆、20mL/lg黑莓浆、25mL/lg黑莓浆的比例加入浓度为40 %乙醇，保持微波功率在400w， 微波5分钟后在3500r/min条件下离心5分钟，取上清液得黑莓花青素提取物，再用盐酸甲 醇法显色，用紫外分光光度计测定吸光度，乙醇用量对黑莓花青素提取效果的影响见图3。
[0062] 由图3可知，乙醇用量为20mL/lg黑莓浆左右时，黑莓花青素提取效果较好。
[0063] 2. 4. 4微波时间的考察
[0064] 取预处理过的黑莓于容器中，按20mL/lg黑莓浆的比例加入浓度为40%乙醇，保 持微波功率在400w，微波1、3、5、7、9分钟后在3500r/min条件下离心5分钟，取上清液得黑 莓花青素提取物，再用盐酸甲醇法显色，用紫外分光光度计测定吸光度，微波时间对黑莓花 青素提取效果的影响见图4。
[0065] 由图4可知，微波时间在3分钟左右时，黑莓花青素提取效果较好。
[0066] 2. 5黑莓花青素提取工艺的响应面设计实验
[0067] 2. 5. 1因素与水平
[0068] 影响黑莓花青素提取工艺的主要因素有微波功率（XI，w)、乙醇的浓度（X2, ％ )、 乙醇的用量（X3，mL/lg黑莓浆）、微波时间（X4，min)4个因素，本实验采用四因素三水平的 BBD响应曲面设计法（见表1)，以吸光度（A)为指标，对其工艺的水平参数进行优选，所选 因素水平及响应曲面设计试验结果见表2~表5。
[0069] 表1响应面实验设计因素水平表
[0071] 2. 5. 2实验方法
[0072] 按响应面设计1-29号条件进行实验，用