P2x7受体抑制剂的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及P2X7受体抑制剂的用途，具体涉及P2X7受体抑制剂在制备治疗放射 性脑损伤的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 放射性脑损伤是指脑组织受到放射线照射，并在多种因素联合作用下导致神经元 发生变性、坏死而引发的中枢神经系统疾病。常见于原发或继发的头颈良恶性病变放射治 疗后，也见于工业生产中放射损伤。据统计，放疗后脑组织坏死的发生率可高达28. 5%， 放射后脑组织坏死一旦形成则病程不可逆，不仅严重影响患者生存质量，也给患者的家庭 和社会带来沉重负担和巨大危害。目前对于放射性脑损伤的研究，主要集中在放射后脑组 织病理改变及影像学改变两个方面，缺少对其发病机理的探讨，并且传统的药物治疗效果 有限，明确放射性脑损伤的发病机理并积极寻找有效的治疗手段是目前亟待解决的关键问 题。
[0003] 研究发现，在中枢神经系统的损伤中，小胶质细胞作为固有的具有免疫能力和吞 噬能力的细胞起着关键的作用，通过释放细胞因子如促炎症细胞因子、活性氧媒介物、蛋白 酶和补体蛋白，参与多种神经疾病的发生和进展，包括阿尔茨海默病，帕金森病，多发性硬 化，获得性免疫缺陷综合征。小胶质细胞在这些中枢系统慢性免疫性炎症性疾病中起着双 重的作用，一方面通过释放促炎性细胞因子放大炎症级联反应，介导神经细胞退行性改变， 另一方面发挥向损伤细胞趋化、吞噬等保护中枢神经系统的功能。放射性脑病与这些慢性 炎症性疾病在临床表现和影像学表现上都有相似性。实验中也观察到放射线能够激活小 胶质细胞，使细胞由静息的分枝状转变为激活的阿米巴样。放射后活化的小胶质细胞中 C0X-2、TNF-a、IL-6mRNA及相关蛋白表达水平增加，同时在动物实验中发现放射后，神经 纤维混乱，条理不清，神经元数量减少，神经元的分支消失，提示小胶质细胞活化参与了放 射后的脑损伤，可能通过释放炎性物质引起神经元的损伤。因此，小胶质细胞激活引起的炎 症反应可能在放射性脑病中起着重要的作用。
[0004] 炎症反应常常伴随细胞内或胞外ATP水平的升高。作用于嘌呤受体的ATP正常可 以来源于神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞。在病理条件下，如机械损伤或代谢物质刺 激、炎症反应或细胞损伤或细胞离子环境的改变，都可以刺激ATP的释放。实验中注意到， 在放射治疗引起的炎症性疾病中作为感受器的嘌呤受体，可能在放射性脑病的发生发展和 小胶质细胞的激活中起着至关重要的作用。小胶质细胞表达的嘌呤受体分为两类，离子通 道受体（P2XRec印tor，P2XR)和G蛋白偶联受体（P2YRec印tor，P2YR)，均通过介导细胞内 外Ca2+的流动发挥作用。P2X7受体（P2X7R)，P2X受体家族中特殊的一种，在单核/巨噬细 胞系上高表达，小胶质细胞上也有P2X7受体的广泛表达。国内外已有报道提出其在中枢神 经系统损伤和炎症性疾病如阿尔茨海默病，脊髓损伤及神经病理性疼痛中都起着重要的作 用。尚无文献报道，P2X7受体是否能够介导参与放射性脑病引起的炎症反应。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了P2X7受体抑制剂的新 用途，具体涉及P2X7受体抑制剂在制备治疗放射性脑损伤的药物中的用途。
[0006] 为实现上述目的，所采取的技术方案：P2X7受体抑制剂在制备治疗放射性脑损伤 的药物中的用途。
[0007] 优选地，所述P2X7受体抑制剂为BBG。本发明所述BBG的英文全称为brilliant blueG，中文名称为亮蓝G。
[0008] 本发明的原理是：在放射线造成的脑损伤发生发展中，射线激活的小胶质细胞发 挥了关键作用。放射线通过P2X7受体激活小胶质细胞，从而释放大量的炎性介质和炎症因 子，如IL-6，C0X-2，TNF-a。这些细胞因子间的相互作用能够调控神经元及神经胶质细胞 的生长、分化及激活，导致脑损伤的形成。而这些促炎症细胞因子的释放，能够被P2X7受体 特异性的抑制剂BBG所阻断。
[0009] 本发明的实验表明，放射后的小胶质细胞可以由静止时的长突起"分枝状"变 为短突起的"阿米巴状"，上调P2X7受体及炎症因子IL-6,C0X-2,TNFa的mRNA和蛋 白水平的表达。BBG的预处理能够抑制小胶质细胞的激活，降低P2X7受体及炎症因子 IL-6,C0X-2,TNFa的mRNA和蛋白水平的表达，并减轻放射后的神经损伤，从而保护神经元 及脑组织，因此，P2X7受体调控小胶质细胞在放射性脑损伤过程中有重要作用，BBG是一种 可行的脑损伤神经保护剂。
[0010] 本发明的有益效果在于：本发明提供了P2X7受体抑制剂在制备治疗放射性脑损 伤的药物中的用途，本发明通过实验深入研究放射性脑损伤的发病机制以及P2X7受体在 放射性脑损伤发生发展中的作用，发现放射线通过P2X7受体激活小胶质细胞引起后续的 炎症反应，而P2X7受体的特异性抑制剂BBG可有效抑制该反应，进而保护神经元，可用于治 疗放射性脑损伤。
【附图说明】
[0011] 图1为本发明的实施例1中离体条件下照射前后各种P2X受体表达的RT-PCR电 泳图；
[0012] 图2为本发明的实施例1中离体条件下照射前后各种P2X受体表达的对比柱状 图；
[0013]图3为本发明的实施例1中离体条件下小胶质细胞BV2照射前后形态变化图；
[0014] 图4为本发明的实施例1中离体条件下小胶质细胞BV2照射后及预孵育BBG的活 化率的柱状图；
[0015] 图5为本发明的实施例1中离体条件下P2X7受体参与照射后P2X7受体的mRNA 水平的变化柱状图；
[0016] 图6为本发明的实施例1中离体条件下P2X7受体参与照射后炎症因子C0X-2的 mRNA水平的变化柱状图；
[0017]图7为本发明的实施例1中离体条件下P2X7受体参与照射后炎症因子IL-6的 mRNA水平的变化柱状图；
[0018] 图8为本发明的实施例1中离体条件下P2X7受体参与照射后炎症因子TNF-a的 mRNA水平的变化柱状图；
[0019] 图9为本发明的实施例1中离体条件下P2X7受体参与调控照射后P2X7受体及炎 症因子的蛋白电泳图，其中R24表示照射后24小时，R48表示照射后48小时，B24表示BBG 预处理照射后24小时，B48表示BBG预处理照射后48小时；
[0020] 图10为本发明的实施例1中离体条件下P2X7受体参与照射后P2X7蛋白水平的 变化柱状图；
[0021] 图11为本发明的实施例1中离体条件下P2X7受体参与照射后BV2释放炎症因子 C0X-2蛋白水平的变化柱状图；
[0022] 图12为本发明的实施例2中动物体内P2X7受体参与照射后P2X7受体基因水平 的变化柱状图；
[0023] 图13为本发明的实施例2中动物体内P2X7受体参与照射后促炎症因子IL-6基 因水平的变化柱状图；
[0024] 图14为本发明的实施例2中动物体内P2X7受体参与照射后促炎症因子C0X-2基 因水平的变化柱状图；
[0025] 图15为本发明的实施例2中动物体内P2X7受体参与照射后促炎症因子TNF-a基 因水平的变化柱状图；
[0026] 图16为本发明的实施例2中动物体内P2X7受体参与调控照射后P2X7受体及炎 症因子的蛋白电泳图；
[0027] 图17为本发明的实施例2中动物体内P2X7受体参与照射后P2X7蛋白水平的变 化柱状图；
[0028] 图18为本发明的实施例2中动物体内P2X7受体参与照射后BV2释放炎症因子 C0X-2蛋白水平的变化柱状图；
[0029] 图19为本发明的实施例2中动物体内小胶质细胞照射前后形态变化图；
[0030] 图20为本发明的实施例2中动物体内小胶质细胞照射后及预孵育BBG的活化率 的柱状图。
【具体实施方式】
[0031] 为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明 作进一步说明。
[0032] 实施例1 :离体情况下，P2X7受体在放射线激活小胶质细胞和促炎症因子释放过 程中的作用。
[0033] (1)细胞培养及准备：传代小胶质细胞株BV2于含体积百分浓度为10 %的胎牛血 清、质量百分浓度为1 %的双抗（青霉素、链霉素）的DMEM培养基中培养，在体积百分浓度 为5%的C02、37°C条件下，用培养瓶在培养箱中培养，两天换液一次。每次传代时用质量百 分浓度为〇. 25%胰酶（含质量百分浓度为0. 02%EDTA)消化，以均匀的密度接种于新的 培养瓶中。将细胞按照2XIO5Ail密度接种于6孔板中，24孔板接种密度为IX104/ml，在 37°C、体积百分浓度为5%CO2条件下，于培养箱中培养24小时后，换无血清培养液培养4 小时。
[0034] (2)实验分组及细胞照射：将细胞分为三组：对照组、照射组、药物预处理组，照射 组和药物预处理组再分为照射后24小时、48小时两个亚组。在照射前60min分别向对照组、 照射组加入生理盐水17ul，向药物预处理组加入BBG17ul(BBG:lOOnmol/L)。将准备好的 细胞放置于放疗床上，在培养瓶上覆盖Icm厚的猪皮，使射线能够更好的达到培养瓶的细 胞面，调整放射源于培养瓶底部Im处，单次放射，吸收剂量率6MeV/min，吸收总剂量10Gy， 对照组的细胞带入放疗室内，但不置于放射源下照射，取细胞上清液用于Q-PCR和West