Turrapubin D在制备保肝药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物TurrapubinD的新用途，具体涉及TurrapubinD在制备保肝 药物中的应用。
【背景技术】
[0002] Chun-MaoYuan等人首次分离纯化出化合物TurrapubinD，并将成果发表在著名 天然产物杂志JournalofNaturalProduct上（BioactiveLimonoidandTriterpenoid ConstituentsofTurraeapubescens，J.Nat.Prod. ，2013,76,1166-1174)〇
[0003]目前尚未有该化合物的活性报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种TurrapubinD的医药用途。
[0005] 上述目的是通过如下技术方案实现的：
[0006]TurrapubinD在制备保肝药物中的应用，所述TurrapubinD化学结构式如下，
[0007]
【具体实施方式】
[0008] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。
[0009] 实施例1:TurrapubinD的分离制备及结构确证
[0010]TurrapubinD的制备方法同文献报道的制备方法（BioactiveLimonoidand TriterpenoidConstituentsofTurraeapubescens，J.Nat.Prod.，2013,76,1166-1174)〇
[0011] 结构确证：根据HRESI-MS可得分子式为C29H360s，不饱和度为12。核磁共振氢 谱数据SH (ppm，DMS0-d6, 500MHz) :H-1 (4. 12,t，J= 5. 7)，H-2 (2. 85,dd，J= 14. 9, 5. 7)， H-2 (2. 70,dd，J= 14. 9, 5. 7)，H-5 (2. 63,dd，J= 7. 5, 3. 6)，H-6 (2. 49,m)，H-9 (3. 38,d， J= 8. 7)，35,t，J= 8. 7)，H-12(5. 47,d，J= 8. 7)，H-15(3. 87,s)，H-16(l. 80， m)，H-16 (2. 24,dd，J= 14. 0, 7. 4)，H-17 (2. 99,dd，J= 10. 8,7. 4)，H-18 (0? 80,s)，H-19(1.06,s)，H-21(7. 12,s)，H-22(6. 16,s)，H-23(7.32,s)，H-28(0.96,s)，H-29(l. 11， s)，H-30 (5. 30,s)，7-OMe(3. 71，s)，12-OAc(1. 89,s);核磁共振碳谱数据Sc (ppm，DMS0-d6， 125Hz) :82. 6 (CH，1-C)，40. 0 (CH2, 2-C)，213. 4 (C，3-C)，48. 6 (C，4-C)，49. 2 (CH，5-C)， 31. 9 (CH2, 6-C)，174. 8 (C，7-C)，138. 7 (C，8-C)，56. 6 (CH，9-C)，48. 7 (C，10-C)，80. 6 (CH， 11-C)，76. 7 (CH，12-C)，45. 1 (C，13-C)，72. 0 (C，14-C)，59. 5 (CH，15-C)，34. 1 (CH2,16-C)， 38. 2 (CH，17-C)，14. 1 (CH3,18-C)，18. 3 (CH3, 19-C)，123. 2 (C，20-C)，140. 6 (CH，2 卜C)， 111. 6 (CH，22-C)，142. 9 (CH，23-C)，25. 6 (CH3, 28-C)，21. 1 (CH3, 29-C)，119. 7 (CH2, 30-C)， 52. 6 (CH3, 7-OMe)，171. 3 (C，12-OAc)，21. 7 (CH3,12-OAc)。
[0012] 结构确证数据与文献报道一致，因此可以确定本发明制备的化合物即为文献报道 的TurrapubinD〇
[0013] 实施例2:TurrapubinD的药理作用试验
[0014] 一、材料和仪器
[0015]HL7702肝细胞株由中国科学院上海生命科学研究所提供。TurrapubinD自制， HPLC归一化纯度大于98 %。高糖DMEM培养基、高糖DMEM/F12 = 1:1培养基、胎牛血清均 购于HycLone。EDTA购于上海试剂一厂。台盼蓝购于北京化工厂。无糖DMEM培养基购于 Gibco。胰酶、MTT、DMS0均购于Amresco。LDH释放法检测试剂盒购于GENMDE。ALT生化 检测试剂盒、AST生化检测试剂盒、LDH生化检测试剂盒均购于美国贝克曼试剂有限公司。 Western及IP细胞裂解液、PMSF、BCA蛋白浓度测定试剂盒、MDA检测试剂盒均购于碧云天 生物技术研究所。
[0016]C02培养箱（SheL-Lab2300)，电热恒温孵育箱（上海跃进医疗器械厂），缺氧培养 盒（长沙长锦科技有限公司），GasALertExtreme氧气检测仪（加拿大BWTechnoLogies)， 酶标仪（美国BioTekEpoch)，全自动生化仪（BeckmanLX20)，离心机（德国Eppendorf centrifyge541f5D)，孔板离心机（德国Eppendorfcentrifyge5430R)，电子微量天平 (METTLERTOLEDOAL104)，PH仪（ThermoORION3STAR)。
[0017] 二、试验方法
[0018] 1、细胞分组
[0019] 将细胞分为6组，每组6个复孔：
[0020] (1)正常培养组（N组）：完全培养基，正常条件下培养；
[0021] (2)缺血再灌注组（IR组）：完全培养基正常条件培养lh后，模拟缺氧8h，再灌注 4h；
[0022] (3)TurrapubinD组：
[0023]RE1 组：TurrapubinD0? 5ng/mL预处理lh;
[0024]RE2 组：TurrapubinD5ng/mL预处理lh;
[0025]RE3 组：TurrapubinD50ng/mL预处理lh;模拟缺氧 8h，再灌注 4h;
[0026] (4)生理盐水组（NS组）：以与TurrapubinD组同等体积的生理盐水预处理lh， 模拟缺氧8h，再灌注4h。
[0027] 2、TurrapubinD的预处理
[0028] (1)TurrapubinD的配制：将lmgTurrapubinD溶解于 500mL生理盐水中。移 液枪吸取2. 5mL于第一支离心管中，用生理盐水稀释至lOmL配制成浓度为500ng/mL的TurrapubinD溶液。从第一支离心管中吸取lmL至第二支离心管中，用生理盐水稀释至 10mL配制成浓度为50ng/mL的TurrapubinD溶液。从第二支离心管中吸取lmL至第三支 离心管中，用生理盐水稀释至10mL配制成浓度为5ng/mL的TurrapubinD溶液。作好标记。
[0029] (2)TurrapubinD预处理：正常培养组和缺血再灌注组以每孔100yL新鲜的完 全培养基更换。RE1组每孔加入5ng/mL的TurrapubinD溶液10yL和新鲜的完全培养基 90yL，RE2组每孔加入50ng/mL的TurrapubinD溶液10yL和新鲜的完全培养基90yL， RE3组每孔加入500ng/mL的TurrapubinD溶液10yL和新鲜的完全培养基90yL。生理 盐水组每孔加入生理盐水10yL和新鲜的完全培养基90yL。轻轻摇动96孔板，使药液充 分混混勾，放入C02培养箱中孵育lh。
[0030] 3、肝细胞体外模拟缺血再灌注损伤模型的建立：
[0031] (1)体外模拟缺血过程：预处理时间结束后，从细胞培养箱中取出第一块96孔 板，正常培养组每孔用100yL完全培养基更换，放入C02培养箱中继续培养8h。从〇)2培 养箱中取出第二块96孔板，缺血再灌注组、TurrapubinD预处理组和生理盐水组每孔用 100yL无糖DMEM培养基置换完全培养基，放入缺氧培养盒中，培养盒中放入盛有50mL灭 菌水的无菌小瓶保持饱和湿度。将缺氧培养盒放入37°C恒温孵育箱中，进气口连接94% N2-5%C02-1% 02混合气体，出气口连接氧气检测仪。以2L/min的气体流量通入混合气体， 当氧气检测仪显示出气口氧气浓度〈1 %时，调节混合气体流量300mL/mi