杜仲叶绿原酸的新用途以及一种组合物的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体涉及杜仲叶绿原酸作为竹叶多糖的减毒药物或者 制剂方面的应用。
【背景技术】
[0002] 竹叶中含有多种对人体有益的活性物质，如黄酮、多糖、氨基酸和微量元素[1]。竹 叶多糖有增强机体免疫及抗疲劳、抗氧化、降血糖和保护肝脏等作用 [2_4];杜仲叶是近年来 天然药物开发的热点，因其含有较高含量的绿原酸（含量为7. 95% )，国内植物提取物厂家 将其作为天然绿原酸的提取原料。绿原酸是一种重要的生物活性物质，它具有广泛的生理 功能，主要有抗炎，抗病毒，以及抗氧化等作用。现代科学对绿原酸的生物活性研究已经深 入到医药、食品、保健及日用化工等多个领域。
[0003] 竹叶多糖的毒性目前尚未有公开报道。但是化合物的毒性一般可以通过体外细胞 实验进行初步验证。由于正常细胞生产较为缓慢，而癌细胞生产迅速，易于培养，通常作为 该实验的模型细胞。活细胞的生长情况可以用MTS法进行定量测定。MTS为黄色化合物，是 一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，操作原理均是活细胞线粒体 内的一些脱氢酶还原成有色的甲臜（formazan)，而死细胞则无此功能，活细胞越多，颜色 越深，酶标仪下测的OD值就越高。
[0004] I、Lv Z, Dong J, Zhang B. Rapid identification and detection of flavonoids compounds from bamboo leaves by LC-(ESI)-IT-T0F/MS[J] · BioResourc es, 2012, 7(2) :1405-1418 ；
[0005] 2、丁红秀，高荫榆，晁红娟，等.毛竹叶多糖抗疲劳作用研究[J].食品科 学，2008, 29(4) : 389 ~391 ;
[0006] 3、Mao J, Yin J, Ge Q, et al. In vitro antioxidant activities of polysaccharides extracted from Moso Bamboo-Leaf[J]. International journal of biological macromolecules, 2013, 55:1 ~ 5 ；
[0007] 4、丁红秀，高荫榆，晁红娟，等.毛竹叶多糖对高脂血症小鼠的降脂利肝作用 [J] ·食品科学，2010, 31 (9) : 259 ~262。
【发明内容】
[0008] 针对现有技术的研究，我们发现竹叶多糖对细胞具有一定的毒性，而本发明提供 了杜仲叶绿原酸对竹叶多糖的减毒作用，减少竹叶多糖的毒性。
[0009] 为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：
[0010] 杜仲叶绿原酸在降低竹叶多糖毒性方面的应用。
[0011] 杜仲叶绿原酸在制备降低竹叶多糖毒性的药物或者制剂方面的应用。
[0012] -种组合物，包括杜仲叶绿原酸和竹叶多糖，其中杜仲叶绿原酸与竹叶多糖的质 量比优选为1:0. 5-5。
[0013] 所述杜仲叶绿原酸与竹叶多糖的质量比更优选为1:1。
[0014] 杜仲叶绿原酸与竹叶多糖对癌细胞做测试，可得出杜仲叶绿原酸对竹叶多糖具有 明显减毒作用，对正常细胞做测试，也可得出相同的结论。可见杜仲叶绿原酸对竹叶多糖不 仅具有减毒作用，而且不会影响竹叶多糖原有的性质。
【附图说明】
[0015] 图1是400 μ g/ml三种药液对!fepG2细胞生长曲线的影响曲线图；
[0016] 图2是500 μ g/ml三种药液对H印G2细胞生长曲线的影响曲线图；
[0017] 图3是400 μ g/mL三种药液对HUVEC细胞生长曲线的影响曲线图；
[0018] 图4是500 μ g/mL三种药液对HUVEC细胞生长曲线的影响曲线图。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
[0020] 实施例1
[0021 ] 1模型细胞：HpeG2肝癌细胞
[0022] 2样品：杜竹复合物：杜仲叶绿原酸与竹叶多糖（按1:1质量比例混合）；杜仲叶 绿原酸（长沙远航生物技术有限公司）；竹叶多糖（东莞金色盆地生物技术有限公司）
[0023] 3方法：用胰液蛋白酶消化细胞，用DMEM培养基吹打均匀，进行细胞计数，制成 2X IO4Ail的单细胞悬液，以每孔100 μ 1接种在96孔板内，在37°C、5% CO2条件下待贴壁 后，分别加入浓度为400 μ g/ml、500 μ g/ml的杜竹复合物、杜仲叶绿原酸、竹叶多糖药液， 设置不加药物的对照组，每组重复3孔，以接种加药的当天记为0d，加入MTS，放入培养箱中 培养4h，于酶标仪492nm出测其吸光值（OD)，记录数据，再分别于l-7d进行测定，方法同 上。测定过程中，每2天换一次培养基，换培养基后再加入的药物浓度不变。以培养时间 (d)为横坐标，测得OD值作为纵坐标，绘制HepG2细胞生长曲线。
[0024] 表1 400 μ g/ml三种药液对H印G2细胞生长曲线的影响
[0027] 注：与对照组（control)比较，*P〈0. 05有显著性差异
[0028] 表2 500 μ g/ml三种药液对!fepG2细胞生长曲线的影响
[0030] 由表1、2结果和图1、2生长曲线显示，第1、2、3天细胞生长较快，第5、6、7天细胞 生长较慢，不同浓度的三种药品对IfepG2细胞生长曲线的影响趋势是相同的，即竹叶多糖 与空白对照组比较明显抑制细胞的生长，说明具有一定的细胞毒性。而复配样品、杜仲绿原 酸对细胞生长曲线影响较小，说明将复配后杜仲叶绿原酸降低了竹叶多糖对细胞生长曲线 的影响。由此得出杜仲绿原酸与竹叶多糖复配后降低毒性的作用。
[0031] 实施例2
[0032] 1模型细胞：HUVEC人脐静脉细胞，来源新生儿脐带，是一种干细胞，能无限次传代 (理论上），易于实验操作。由于其来源充足，取材、操作方便，在功能上比动物实验所得的 内皮细胞更符合人体，现认为它是一种活跃的"内分泌器官"，参与了机体许多生理病理变 化过程，是许多疾病发生的始动机制，因此，已成为主要的体外实验细胞模型。
[0033] 2样品：杜竹复合物：杜仲叶绿原酸与竹叶多糖（按1:1质量比例混合）；杜仲叶 绿原酸（长沙远航生物技术有限公司）；竹叶多糖（东莞金色盆地生物技术有限公司）
[0034] 3方法：用胰液蛋白酶消化细胞，用RPMI-1640培养基吹打均匀，进行细胞计数，制 成1~2 X IO4AiL的单细胞悬液，以每孔100 μ L接种在96孔板内，在37°C、5 % 0)2条件下待 贴壁后，分别加入浓度为400 μ g/mL和500 μ g/mL的杜竹复合物、杜仲叶绿原酸泡腾颗粒、 竹叶多糖泡腾颗粒样品溶液，其中杜仲叶绿原酸泡腾颗粒和竹叶多糖泡腾颗粒为阴性对照 组，设置不加药物的对照组，每组重复3孔，以接种加药的当天记为ld，加入MTS，放入培养 箱中培养4h，于酶标仪492nm处测其吸光值（OD)，记录数据，再分别于l-7d进行测定，方法 同上。测定过程中，每2天换一次培养基，换培养基后再加入的药物浓度不变。以培养时间 (d)为横坐标，测得OD值作为纵坐标，绘制HUVEC细胞生长曲线。
[0035] 表3 400 μ g/mL三种药液对HUVEC细胞生长曲线的影响
[0037] 注：与对照组（control)比较，*Ρ〈0· 05有显著性差异
[0038] 表4 500 μ g/mL三种药液对!fepG2细胞生长曲线的影响
[0039]
[0041] 由表3、4结果和图3、4生长曲线显示，第1、2、3天细胞生长较快为细胞生长指数 期，第4、5、6、7天细胞处于平稳期，不同浓度的三种泡腾颗粒对HUVEC细胞生长曲线的影响 不同，加入竹叶多糖泡腾颗粒后，细胞生长指数期偏低，过指数期到达平稳期时，明显比正 常值低，表现出抑制细胞生长的作用；加入杜竹复合物和杜仲叶绿原酸泡腾颗粒后，第一天 后进入生长指数期，其细胞增殖迅速，生长曲线与对照组的生长曲线轨迹相同，说明杜仲叶 绿原酸可以减少竹叶多糖对HUVEC细胞生长曲线的影响，具有协同减毒的作用，因此将杜 仲叶绿原酸和竹叶多糖复配制得的杜竹复合物可以降低竹叶多糖对细胞生长的影响，使细 胞可以正常生长。
【主权项】
1. 杜仲叶绿原酸在制备降低竹叶多糖毒性的药物或者制剂方面的应用。2. -种组合物，包括杜仲叶绿原酸和竹叶多糖，所述杜仲叶绿原酸与竹叶多糖的质量 比为 1:0. 5-5。3. 根据权利要求2所述组合物，其特征是，所述杜仲叶绿原酸与竹叶多糖的质量比为 1:1〇
【专利摘要】杜仲叶绿原酸的新用途以及一种组合物，本发明属于生物医药领域，具体涉及杜仲叶绿原酸对竹叶多糖的减毒作用，特别是提供了所述杜仲叶绿原酸在制备降低竹叶多糖毒性的药物方面的应用。本发明还提供了一种组合物，包括杜仲叶绿原酸和竹叶多糖，所述杜仲叶绿原酸与竹叶多糖的质量比为1:0.5-5。
【IPC分类】A61K31/715, A61K36/46, A61P39/02
【公开号】CN104997832
【申请号】CN201510066401
【发明人】李湘洲, 张胜, 王乙庚
【申请人】中南林业科技大学
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年2月9日