苦参碱在制备抗类风湿性关节炎药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，具体涉及是一种生物碱类化合物--苦参碱在预防或 治疗类风湿性关节炎药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 类风湿性关节炎（RA)是当前危害人类健康的最重要疾病之一，被称为"不死的癌 症"。RA是一种以多关节受累、滑膜炎症、骨与软骨破坏等为主要特征的慢性全身性自身免 疫炎性疾病，其发病机理至今尚未完全阐明，普遍认为与遗传、感染和免疫调节等因素紊乱 密切相关（ImbodenJB.Theimmunopathogenesisofrheumatoidarthritis.AnnuRev PatholMechDis2009,4:417-434.)。我国RA的患病率约 0.3%-0.4%，约有 400 万患 者，病程5-10年致残率为60 %，晚期90 %患者丧失社会劳动力和生活自理能力，是成人劳 动力丧生的主要原因之一OaiSM,HanXH,ZhaoDB,ShiYQ,LiuY，MengJM.Prevalence ofrheumaticsymptoms,rheumatoidarthritis,ankylosingspondylitis,andgoutin Shanghai,China:aCOPCORDstudy.JRheumatol2003, 30:2245-2251.)，因此造成了很多 家庭问题以及巨大的社会负担。现行治疗类风湿性关节炎的方法主要有手术治疗、化学药 物治疗和细胞因子类生物制剂的治疗。一般认为外科手术只适用于晚期畸形病例，且费用 昂贵，对机体创伤较大；化学药物如非留体抗炎药、抗风湿药和糖皮质激素等的长期应用会 引起胃肠道不适、骨髓抑制、肝损伤、高血压等严重的不良反应；生物制剂在干预病变细胞 的同时，对正常细胞也同样会产生一定的作用，干扰机体的固有免疫和适应性免疫，从而产 生较大的毒性和破坏机体防御作用的风险（1.张义浜，刘志敏，熊凌霜.类风湿关节炎发 病机制及其治疗方法研宄进展.细胞与分子免疫学杂志，2005, 21 (增刊）：88-94. 2.Doan T,MassarottiE.RheumatoidArthritis:AnOverviewofNewandEmergingTherapies. JClinPharmacol2005,45:751-762.)。因此，寻求高效低毒的防治RA的药物仍是世界医 学界面临的一项艰巨任务和难题。
[0003] 苦参碱（matrine)是从中药苦参中分离得到的生物碱类化合物，结构式如式（I) 所示，属于喹诺里西啶类生物碱。
[0004]
[0005] 苦参中富含此类生物碱，主要有苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐定碱等多种成 分，以苦参碱、氧化苦参碱含量最高。该类成分具有利尿、抗病毒、抗病原体、抗肿瘤以及 防治肝纤维化等活性（刘梅，刘雪英，程建峰.苦参碱的药理研宄进展.中国中药杂 志，2003, 9:801-804;朱晓伟，宝金荣，布仁.苦参碱和氧化苦参碱抗肿瘤作用研宄进 展.2009,SI:82-84.)。此外，苦参碱作为一种新型生物农药，具有低毒、低残留和绿色环 保等特点以及良好的病虫害防治效果（赵素华，刘育俭，徐谦.天然植物源杀虫剂世 绿（苦参碱）对桃蚜的胃毒及触杀试验.黑龙江生态工程职业学院学报.2007,3:54-55 ; 郑方强，刘忠德.无公害杀虫剂防治韭蛆的药效试验及苦参碱杀虫作用的研宄.农 药，2002, 6:26-28.)。
[0006] 至今未见苦参碱用于治疗类风湿性关节炎方面的报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种生物碱类化合物一苦参碱新的医药用途。
[0008] 本发明提供了苦参碱在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的应用。
[0009] 所述的药物为：化合物苦参碱作为唯一活性成份，或包含化合物苦参碱的药物组 合物。
[0010] 所述药物中，化合物苦参碱的含量为0.l_99wt%，优选含量为0. 5-90wt%。
[0011] 所述的药物组合物可以和药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。
[0012] 所述的药物制剂可以是片剂、、颗粒剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、注射剂、 粉针剂，或气雾剂等。
[0013] 本发明采用类风湿性关节炎动物模型（TrenthamDE,TownesAS,Kang AH.AutoimmunitytotypeIIcollagenanexperimentalmodelofarthritis. JExpMedl977, 146:857 -868；VijiV,KavithaSK,HelenA.Bacopamonniera(L.) WettstinhibitstypeIIcollagen-inducedarthritisinrats.PhytotherRes 2010, 24:1377 - 1383)，观察本发明提供的化合物苦参碱灌胃给药的治疗作用。
[0014] 实验结果显示，苦参碱（80mg/kg)灌胃给药后，可显著降低RA大鼠关节炎指数，抑 制踝关节肿胀程度；下调大鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF-a)、白介素1 0 (IL-1 0 )、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、白介素17 (IL-17)和基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)和基质金属蛋白 酶-9 (MMP-9)水平；病理切片显示，苦参碱可显著减少滑膜增生及炎性细胞浸润。上述研宄 表明，苦参碱具有良好的抗RA活性。
[0015] 本发明寻找到了安全有效的防治RA药物。
【附图说明】
[0016] 图1苦参碱对II型胶原诱导RA模型大鼠左后足关节炎指数的影响（*VS模型组， p〈0. 05;**vs模型组，p〈0. 01)。
[0017] 图2苦参碱对II型胶原诱导RA模型大鼠左后足足肿胀的抑制作用（meanSD，n= 10)(*vs模型组，p〈0. 05;#vs模型组，p〈0. 01)。
[0018] 图3苦参碱对II型胶原诱导RA模型大鼠关节组织病理切片的影响（X40)，其中 A为正常组，B模型组，C阳性药组，D为苦参碱组。
【具体实施方式】
[0019] 现结合实施例，对本发明作详细描述，但本发明的实施不仅限于此。
[0020] 实施例中所用苦参碱，购自上海诗丹德生物技术有限公司，经HPLC检测纯度 彡 98%〇
[0021] 实施例1:苦参碱的抗类风湿性关节炎药效学实验
[0022] 1.1实验材料
[0023] 成年雄性180~220gSD大鼠（第二军医大学实验动物中心提供）40只，大鼠血清 TNF-a、IL-1的ELISA试剂盒（美国Sigma公司）。主要仪器：足趾容积测量仪（YLS-7A，山 东省医学科学院设备站）、酶标仪（BIO-RAD550)、离心机（Labofuge400R，Heraeus公司）、 电子天平（FA110A型，上海精密科学仪器有限公司）。
[0024] 1. 2实验造模及给药
[0025] 实验前将40只大鼠称重，按体质量随机分为4组，每组10只，自由饮食、进水。分 为空白组、模型组、阳性药组和苦参碱组。空白组：不予任何处理；模型组：将牛II型胶原 蛋白醋酸溶液与等容量的弗氏不完全佐剂混合，充分乳化。第〇天，SD大鼠尾根进行皮内 注射（lmg/ml)，每只0.lml;7日后，加强免疫，大鼠尾根用0.lml/只溶液注射作为激发注 射，第15日左右造成RA动物模型；阳性药组：地塞米松，0.05mg/kg，灌胃给药，每日1次； 苦参碱组：自造模成功之日起，给予大鼠苦参碱，灌胃给药，每日1次，剂量为80mg/kg，连续 给药30d。
[0026] 1. 3观察指标
[0027] (1)对大鼠关节肿胀程度进行关节炎指数评分，每3天评分一次。
[0028] (2)用足趾容积测量仪测量大鼠足趾肿胀程度，每3天测量一次。
[0029] (3)在实验结束次日，大鼠尾部静脉取血，置冰浴30min后，以2000r/min离心 15min，取上清，用ELISA法测定两组大鼠血清中TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、IL-17和MMP-2、 MMP-3、MMP-9水平，按试剂盒说明书进行操作。
[0030] (4)取大鼠踝关节骨组织进行病理切片检查。
[0031] 1.4实验结果
[0032] 采用SPSS14. 0对两组数据进行两样本t检验统计学分析，P〈0. 05时认为差异有 统计学意义。
[0033] (1)大鼠关节炎指数评分
[0034] 如图1所示，给药第30天，苦参碱组左后足关节炎指数为0.6±0. 5,模型组左后足 关节炎指数为1.8±0.8,苦参碱可显著降低II型胶原诱导的RA大鼠左后足关节炎指数，与 模型组相比存在显著性差异，表明苦参碱对大鼠类风湿性关节炎模型有较好的治疗作用。
[0035] (2)大鼠足趾肿胀度
[0036] 如图2所示，空白组大鼠左后足趾无明显改变，模型组有明显的肿胀，与空白组存 在显著性差异，提示造模成功；给药第30天，苦参碱组左后足体积为1681. 7± 178.8,模型 组左后足体积为2037. 3±188.6,苦参碱给药组大鼠在实验后期左后足趾肿胀程度减轻，与 模型组相比存在显著性差异，表明苦参碱对大鼠类风湿性关节炎模型有较好的治疗作用。
[0037] (3)血清学指标
[0038] 如表1所示，与模型组相比，苦参碱能显著降低血清中TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、 IL-17和MMP-3、MMP-9的水平，说明苦参碱（80mg/kg)灌胃给药能显著降低类风湿性关节 炎动物模型血清中的关键促炎细胞因子及骨质破坏相关因子的水平，可有效缓解RA大鼠 的炎症反应及骨质破坏。
[0039] 表1苦参碱对II型胶原诱导RA模型大鼠血清中细胞因子水平的影响 (mean土SD,n=8)
[0041](注：*vs模型组，p〈0. 05 ;**vs模型组，p〈0. 01)
[0042] (4)病理切片
[0043] 如图3所示，模型组大鼠病理组织切片显示滑膜增生和炎性细胞浸润严重，阳性 药地塞米松和苦参碱给药后均可显著减少滑膜增生及炎性细胞浸润，提示苦参碱可有效抑 制RA模型大鼠的炎症损伤及关节骨质破坏。
[0044] 鉴于上述药效实验评价结果，本发明的生物碱类化合物苦参碱具有显著抗类风湿 性关节炎活性，因此可用于制备抗类风湿性关节炎药物。
[0045] 以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述 实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的 变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
【主权项】
1. 苦参碱在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的应用。2. 根据权利要求1所述的苦参碱在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的 应用，其特征在于，所述的药物为苦参碱作为唯一活性成份，或包含苦参碱的药物组合物。3. 根据权利要求1所述的苦参碱在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的 应用，其特征在于，所述药物中苦参碱的含量为〇. l_99wt%。4. 根据权利要求1所述的苦参碱在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的 应用，其特征在于，所述药物中苦参碱的含量为〇. 5-90wt%。5. 根据权利要求2所述的苦参碱在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的 应用，其特征在于，所述的药物组合物和药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。6. 根据权利要求5所述的苦参碱在制备预防或治疗类风湿性关节炎药物或食品中的 应用，其特征在于，所述的药物制剂是片剂、、颗粒剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、注射 剂、粉针剂，或气雾剂。
【专利摘要】本发明涉及医药技术领域，本发明涉及生物碱类化合物苦参碱在制备抗类风湿性关节炎药物中的应用。本发明通过II型胶原诱导的大鼠类风湿性关节炎模型证实了苦参碱可显著改善类风湿性关节炎大鼠症状，具有良好的抗类风湿性关节炎作用。本发明涉及的化合物苦参碱可用于制备抗类风湿性关节炎药物，为寻求安全有效的抗类风湿性关节炎药物提供了一种新的来源。
【IPC分类】A23L1/29, A61P19/02, A61K31/4375, A61P29/00
【公开号】CN104940198
【申请号】CN201510291942
【发明人】蒲江, 郑承剑, 韩婷, 张巧艳, 蒋益萍
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年6月1日