一种血红蛋白保存方法
【专利说明】
(一)技术领域:
[0001]本发明涉及生物医药领域，特别是血红蛋白的保存方法。
(二)【背景技术】:
[0002]以输入全血为主要手段的传统输血方式在医疗救护方面发挥了极为重要的作用，但同时其自身也存在难以克服的各种缺点，主要表现在:输入前需进行交叉配型、存在多种病毒交叉感染的危险、血源紧张、贮存期较短且需要特殊的设施。为了解决上述矛盾，人们早在19世纪末就开始了有关红细胞代用品的研宄。红细胞代用品是指具有扩充血容积、维持血管内外渗透压平衡并且有载氧功能，用以代替人红细胞的各种氧载体的总称。血液代用品的研制经历了从最初无载氧功能的血管扩容剂，如:高渗盐溶液、羟乙基淀粉溶液、明胶等到目前具有携氧功能的各种载体溶液。目前正在研制的以血红蛋白为基础各类产品与全血比较具有诸多优点，如:来源广泛、安全洁净、可长期保存、输入人体前无需进行交叉配型，特别适用于战争、自然灾害、以及其他突发事件中大量出血病人的急救。血红蛋白是人体内的物质，它的溶液作为红细胞代用品比化学合成物质更具优越性。
[0003]目前已有5家以血红蛋白为基础的产品完成或接近完成了III期临床研宄，取得了明显的进展。然而，这些产品应用于临床时都程度不同地出现了诸如血管收缩、血压升高，心脏、肾脏、肝脏等器官受损等毒副作用。机理研宄表明，产生这些毒副作用的原因主要为氧自由基的氧化作用，而自由基的产生主要是因为高铁血红蛋白的含量增高造成的，因此制品在生产及保存过程中都要严格控制并隔绝氧气，最大限度的控制高铁血红蛋白的含量在较低水平。
(三)
【发明内容】
:
[0004]本发明的目的在于提供一种血红蛋白的保存方法，它针对上述情况，发明一种操作简便、成本低廉、高效的血红蛋白的保存工艺。
[0005]本发明的技术方案:血红蛋白的保存，其特征在于它包括以下步骤:
[0006]1、取适量的人血加入3-6倍体积的生理盐水(0.9% NaCl溶液)，在4°C，2800转的条件下离心，15-30分钟。得到含白细胞，血浆蛋白和血小板的上清液并将其挤出，保留下层压积红细胞，重复上述洗涤过程3-5次以，直至上层清液基本无色，以最大限度除去红细胞以外的其他物质，得到洁净压积红细胞。
[0007]2、取一定量的压积红细胞，加入等体积的灭菌高纯去离子水进行5-15分钟的预胀，最后加入2倍体积的水低渗10-20分钟，10000转速下离心30-60分钟，离心后上清液为纯化血红蛋白溶液。
[0008]3、将纯化血红蛋白溶液分装入1ml样品瓶中，石蜡封口并放入装有焦性没石子酸溶液的棕色瓶中4°C保存，样品在保存到4个月后高铁血红蛋白含量仍然没超过3%，保持较低水平。(四)【具体实施方式】:
[0009]以下将通过【具体实施方式】的形式再对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅局限于以下的【具体实施方式】，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0010]实施例1洗血
[0011]取适量的人血加入3-6倍体积的生理盐水(0.9% NaCl溶液)，在4°C，2800转的条件下离心，15-30分钟。得到含白细胞，血浆蛋白和血小板的上清液并将其挤出，保留下层压积红细胞，重复上述洗涤过程3-5次以，直至上层清液基本无色，以最大限度除去红细胞以外的其他物质，得到洁净压积红细胞。
[0012]实施例2预胀
[0013]取一定量的压积红细胞，加入等体积的灭菌高纯去离子水进行预胀，预胀时间定为2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30分钟，分别于400倍显微镜下观察不同预胀时间细胞形态，根据细胞的圆润程度确定最佳预胀时间。
[0014]实施例3低渗破膜
[0015]向预胀好的红细胞中加入2倍体积的水低渗破膜，时间定为3，6，9，12，15，18，21，24，27，30，33，36，39，42，45，48，50分钟，分别于400倍显微镜下观察不同破膜时间细胞形态，根据细胞的破裂程度、纯化血红蛋白的浓度、破膜液过滤的难易程度确定最佳破膜时间。之后再10000转速下离心30-60分钟，离心后上清液为血红蛋白溶液。
[0016]实施例4保存
[0017]将纯化血红蛋白溶液分装入1ml样品瓶中，石蜡封口并放入装有焦性没石子酸溶液的棕色瓶中4°C保存，样品在保存到4个月后高铁血红蛋白含量仍然没超过3%，保持较低水平。
【主权项】
1.血红蛋白的保存方法，其特征在于它包括以下步骤:取适量的人血加入3-6倍体积的生理盐水(0.9% NaCl溶液)，在4°C，2800转的条件下离心，15-30分钟；得到含白细胞，血浆蛋白和血小板的上清液并将其挤出，保留下层压积红细胞，重复上述洗涤过程3-5次以，直至上层清液基本无色，以最大限度除去红细胞以外的其他物质，得到洁净压积红细胞；取一定量的压积红细胞，加入等体积的灭菌高纯去离子水进行预胀，最后加入2倍体积的水低渗10-20分钟，10000转速下离心30-60分钟，离心后上清液为血红蛋白溶液；将纯化血红蛋白溶液分装入1ml样品瓶中，4°C保存，样品在保存到4个月后高铁血红蛋白含量仍然保持较低水平。
2.根据权利要求1所述的血红蛋白的保存方法，将样品瓶放入棕色瓶并用石蜡封口。
3.根据权利要求1所述的血红蛋白的保存方法，在棕色瓶放入焦性没石子酸溶液。
【专利摘要】本发明涉及的是一种血红蛋白的保存方法，其特征在于它包括以下步骤：取适量的人血加入3-6倍体积的生理盐水(0.9％NaCl溶液)，在4℃，2800转的条件下离心，15-30分钟。得到含白细胞，血浆蛋白和血小板的上清液并将其挤出，保留下层压积红细胞，重复上述洗涤过程3-5次以，直至上层清液基本无色，以最大限度除去红细胞以外的其他物质，得到洁净压积红细胞。取一定量的压积红细胞，加入等体积的灭菌高纯去离子水进行5-15分钟的预胀，最后加入2倍体积的水低渗10-20分钟，10000转速下离心30-60分钟，离心后上清液为血红蛋白溶液。将纯化血红蛋白溶液分装入10ml样品瓶中，石蜡封口并放入装有焦性没石子酸溶液的棕色瓶中4℃保存，样品在保存到4个月后高铁血红蛋白含量仍然没超过3％，保持较低水平。
【IPC分类】A61K38-42, A61P7-08
【公开号】CN104873960
【申请号】CN201510218538
【发明人】李凤娟, 张释元, 刘洋, 候依萍, 黄雪雪, 蒋坤
【申请人】天津工业大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年4月28日