甘草查尔酮a在制备防治肺纤维化药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制剂技术领域，涉及甘草查尔酮A的一种新用途，具体涉及甘草 查尔酮A在防治肺纤维化药物中的应用及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 肺纤维化（pulmonary fibrosis，PF)是以弥漫性的肺泡炎、肺间质炎症和间质 纤维化为组织学特点的一组疾病群，涵盖多种疾病，多数疾病缺乏有效的治疗手段，预后极 差。因此，肺纤维化目前引起世界呼吸病学界的重视。目前，对肺纤维化的临床研宄主要集 中在特发性间质肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)方面，因其进展快、死亡 率高被世界卫生组织（WHO)列为疑难疾病，也是遍及全世界的疾病。
[0003] 肺纤维化的病理特点主要是长期肺部炎症肺泡持续性损伤，肺内间质细胞增生及 细胞外基质的大量沉积和广泛的肺实质重建。各种因素损伤肺泡上皮细胞和血管内皮细胞 后，均可引起肺泡巨噬细胞。中性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润，炎症细胞及其释放的 细胞因子介导了早期的肺损伤，损伤的存在和反复而改变肺组织微环境，特别是肺泡腔，从 而导致修复程序的失调，最终形成肺纤维化。
[0004] 甘草查尔酮A (licochalcone A)是从甘草属植物（Glycyrrhiza)中分离纯化的黄 酮类化合物。国内外资料显示，甘草查尔酮A有抗炎、抗癌、抗肿瘤、抑菌、体内代谢和抗疟 抗寄生虫等方面的作用，并未见抗肺纤维化相关的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是介绍甘草查尔酮A的一种新用途，具体涉及甘草查尔酮A在防治 肺纤维化药物中的应用。
[0006] 甘草查尔酮A在制备防治肺纤维化药物中的应用。
[0007] 进一步的，所述药物为预防和治疗肺纤维化的药物。
[0008] 进一步的，所述药物以甘草查尔酮A为活性成分，单独或加入一种或多种药用辅 料制备而成。
[0009] 进一步的，所述药物剂型为口服制剂、注射剂、气雾剂或粉雾剂。
[0010] 进一步的，所述口服制剂为胶囊剂、片剂或口服液剂型。
[0011] 进一步的，所述气雾剂是由甘草查尔酮A、助溶剂、表面活性剂和抛射剂组成。
[0012] 进一步的，所述粉雾剂是由甘草查尔酮A、生物粘附剂、表面活性剂和稀释剂组成。
[0013] 由于本发明首次公开了甘草查尔酮A在抗肺纤维化方面的作用，以及在防治肺纤 维化方面的应用，因此，将甘草查尔酮A单独或与其他活性成分或药用辅料制成的制剂，只 要该制剂用于防治肺纤维化，无论以任何给药方式，均属于本发明的保护范围。
[0014] 本发明的另一目的是公开了甘草查尔酮A用于防治肺纤维化药物剂型的制备方 法。
[0015] 甘草查尔酮A气雾剂的制备是将甘草查尔酮A、助溶剂和/或表面活性剂溶解后， 经两步灌装法或冷灌法制备而成。
[0016] 甘草查尔酮A粉雾剂的制备方法包括如下步骤：
[0017] 1)将甘草查尔酮A与各辅料分别粉碎后，过筛，备用。
[0018] 2)采用喷雾干燥技术、或冷冻干燥技术、或真空干燥技术，使甘草查尔酮A与具有 生物粘附性的材料形成附聚物，选取符合粒径要求的附聚物，定量分装于胶囊内或泡囊内， 即得本发明的制剂。
[0019] 甘草查尔酮A有很强的抗肺纤维化在作用，将甘草查尔酮A开发为抗肺纤维化的 药品具有良好的社会效益和经济效益，药效学试验证明甘草查尔酮A能明显改善肺纤维化 动物肺组织相关生化指标及病理学的改变，从而为甘草查尔酮A防治肺纤维化提供实验依 据。本发明所述药物可制成口服制剂、注射液、气雾剂或粉雾剂。
【附图说明】
[0020] 图1为甘草查尔酮A 口服给药对肺纤维化小鼠肺组织病理结构改变的影响（HE， 100X)，control 为空白对照组，Model 为模型组，LA 10mg/kg 为口服 LA 10mg/kg 组。
[0021] 图2为甘草查尔酮A 口服给药对肺纤维化小鼠肺组织胶原沉积的影响（Masson， 100X)，control 为空白对照组，Model 为模型组，LA 10mg/kg 为口服 LA 10mg/kg 组。
[0022] 图3为甘草查尔酮A气雾剂对肺纤维化小鼠肺组织病理结构改变的影响（HE， 100X)，control为空白对照组，Model为模型组，LA 5min为吸入LA 5min组。
[0023] 图4为甘草查尔酮A气雾剂对肺纤维化小鼠肺组织胶原沉积的影响（Masson， 100X)，control为空白对照组，Model为模型组，LA 5min为吸入LA 5min组。
[0024] 图5为甘草查尔酮A粉雾剂对肺纤维化小鼠肺组织病理结构改变的影响（HE， 100X)，control为空白对照组，Model为模型组，LA powder为吸入LA粉雾剂组。
[0025] 图6为甘草查尔酮A粉雾剂对肺纤维化小鼠肺组织胶原沉积的影响（Masson， 100X)，control为空白对照组，Model为模型组，LA powder为吸入LA粉雾剂组。
【具体实施方式】
[0026] 本发明结合【附图说明】和实施例作进一步说明，但并不限制本发明的范围。
[0027] 下列实施例中所用方法如无特别说明，均为常规方法。以下实施例中所需要的材 料或试剂，如无特殊说明均为市场购得。
[0028] 实施例1甘草查尔酮A对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用
[0029] 1.实验动物：
[0030] ICR小鼠，30只，雌性，购于浙江省实验动物中心，动物合格证编号：0012209,许可 证号码SCXK (浙）2014-0001。购入后饲养于浙江大学实验动物中心IVC系统，温度：20~ 26°C，湿度40~70% ;自由摄食饮水。
[0031] 2.主要实验仪器：
[0032] Mettler Toledo AG245 天平；FLUK0/F6 高速匀浆机；Bio-Rad 荧光定量 PCR 仪； Olympus BX51 显微镜；Eppendorf Centrifuge 5804R 离心机；Leica 切片机包埋机。
[0033] 3.主要试剂：
[0034] (1)注射用盐酸博莱霉素：15mg/瓶，批号140372,日本化药株式会社。
[0035] (2)SYBR Green、01igo d(T)、反转录酶、RNA酶抑制剂均购于北京康为试剂生物有 限公司。
[0036] (3)引物：由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。
[0037] 4.建立小鼠特发性肺纤维化模型：
[0038] 乙醚麻醉小鼠，仰卧位，切开颈部皮肤，分离气管，用微量进样器向气管内喷入 3mg/kg的博莱霉素（给药体积为ΙΟμΙ/lOg体重）；缝合皮肤，消毒。空白组气道内喷入相 同容积的生理盐水。
[0039] 5.分组给药：
[0040] 小鼠分3组，每组10只，分别为：空白组、模型组和甘草查尔酮A (LA) 10mg/kg组。 各组小鼠于造模后第二天开始灌胃给药，每天1次，连续21天，模型组和空白对照组给予生 理盐水。
[0041] 6.检测指标：
[0042] 末次给药后24小时，处死小鼠，分离气管，行气管插管，结扎左肺上叶，行肺泡灌 洗，收集灌洗液（BALF)做白细胞计数，1500rpm/min离心10min，沉淀用于涂片做分类计数。 左肺上叶上半部分液氮速冻后保存于-80度冰箱用于测定细胞因子，下半部分福尔马林溶 液中固定，石赌包埋、切片，做H&E染色和Masson' s染色，采用Image Pro软件分析胶原光 密度值，做半定量分析。
[0043] 7.结果
[0044] (1)甘草查尔酮A对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肺泡灌洗液中炎症的影响
[0045] 小鼠气道滴入3mg/kg博莱霉素，21天后肺泡灌洗液中白细胞总数、中性粒细胞。 淋巴细胞和巨噬细胞明显上升（P〈〇.〇〇l) ;LA 10mg/kg组能明显抑制肺泡灌洗液中的中性 粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞，且均具有统计学差异（P〈〇. 05~0. 001)。见表1。
[0046] 表1.甘草查尔酮A对肺纤维化小鼠 BALF中炎症细胞的影响
[0047]
【主权项】
1. 甘草查尔酮A在制备防治肺纤维化药物中的应用。
2. 根据权利要求书1所述应用，其特征在于：所述药物为预防和治疗肺纤维化的药物。
3. 根据权利要求书1所述应用，其特征在于：所述药物以甘草查尔酮A为活性成分，单 独或加入一种或多种药用辅料制备而成。
4. 根据权利要求书1或3所述应用，其特征在于：所述药物剂型为口服制剂、注射剂、 气雾剂或粉雾剂。
5. 根据权利要求书4所述应用，其特征在于：所述口服制剂为胶囊剂、片剂或口服液剂 型。
6. 根据权利要求书4所述应用，其特征在于：所述气雾剂是由甘草查尔酮A、助溶剂、表 面活性剂和抛射剂组成。
7. 根据权利要求书6所述应用，其特征在于：所述气雾剂是通过将甘草查尔酮A、助溶 剂和/或表面活性剂溶解后，经两步灌装法或冷灌法制备而成。
8. 根据权利要求书4所述甘草查尔酮A的应用，其特征在于：所述粉雾剂是由甘草查 尔酮A、生物粘附剂、表面活性剂和稀释剂组成。
9. 根据权利要求8所述甘草查尔酮A的应用，其特征在于：所述粉雾剂的组分及配比 如下： 组分 重量 甘草查尔酮A Ig 乳糖 24.8g 甘露糖 5g β-环糊精 3g 聚山梨酯80 O.lg 羟丙基纤维素 2g。
10. 根据权利要求书8所述应用，其特征在于：所述粉雾剂的制备方法，包括如下步 骤： 1) 将甘草查尔酮A与各辅料分别粉碎后，过筛，备用。 2) 采用喷雾干燥技术、或冷冻干燥技术、或真空干燥技术，使甘草查尔酮A与具有生物 粘附性的材料形成附聚物，选取符合粒径要求的附聚物，定量分装于胶囊内或泡囊内，即得 本发明的复方制剂。
【专利摘要】本发明属于药物制剂技术领域，涉及甘草查尔酮A的一种新用途，具体涉及甘草查尔酮A在防治肺纤维化药物中的应用及其制备方法，药效学试验证明甘草查尔酮A能明显改善肺纤维化动物肺组织相关生化指标及病理学的改变，从而为甘草查尔酮A防治肺纤维化提供实验依据。本发明所述药物可制成口服制剂、注射液、气雾剂或粉雾剂。甘草查尔酮A有很强的抗肺纤维化在作用，将甘草查尔酮A开发为抗肺纤维化的药品具有良好的社会效益和经济效益。
【IPC分类】A61P11-00, A61K31-12, A61K9-72
【公开号】CN104873481
【申请号】CN201510268709
【发明人】谢诒诚, 李曙民
【申请人】杭州紫金医药科技有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月22日