碱菀酯a及其衍生物的制备和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属医药领域，涉及抗肿瘤活性化合物碱毙醋A(tripolinolate A)和碱毙醋 A的衍生物的制备和医药用途。更具体说是从植物碱毙（Tripolium vulgare Nees)中提取 分离碱菀酯A和用化学合成方法制备碱菀酯A和碱菀酯A的衍生物以及它们在制备抗肿瘤 药物方面的应用。
【背景技术】
[0002] 碱毙（Tripolium vulgare Nees)是菊科碱毙属（Tripolium)唯一的一种植物，分 布于欧洲、亚洲、北美洲和非洲北部，我国吉林、山西、内蒙古、陕西、甘肃、新疆、山东、江苏、 浙江等省区都有分布。碱菀是温带气候区专性盐生植物，多生长在低位盐碱斑、盐碱湿地的 海岸，湖滨和沼泽等地方。目前，文献资料中还没有碱菀的药用记载，碱菀的化学成分也没 有研宄报道。
【发明内容】
[0003] 本发明的一个目的是提供一种碱菀酯A及其衍生物在制备治疗肿瘤药物中的应 用。碱菀酯A和碱菀酯A的衍生物显著抑制人脑胶质瘤U87-MG和U251细胞以及肠癌HCT-15 和SW620细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞凋亡。本领域技术人员应当理解，碱菀酯A和它的 衍生物对肿瘤细胞的作用并不仅局限于胶质瘤和肠癌，还包括其他各种肿瘤和癌症。
[0004] 所述碱菀酯A及其衍生物的结构通式2为：
[0005]
【主权项】
1. 一种碱菀酯A及其衍生物在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，具有式2结构 通式：
其中：R 和札各自独立地表示（-COCH3)、（-COCH2CH3)、[-COCH(CH 3) 2]、[-COCH2CH2CH3]、 [-C0CH (CH3) CH2CH3]、[-COCH2CH (CH3) 2]、[-COCH2 (CH2) 2CH3]、[-COCH2 (CH2) 3CH3]、 [-COCH2 (CH2) 4CH3]、[-COCH2 (CH2) 5CH3]、或其它的酰基。
2. 根据权利要求1所述的碱菀酯A及其衍生物在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征 在于，所述肿瘤为胶质瘤和肠癌。
3. -种碱菀酯A的提取分离方法，所述的碱菀酯A的化学结构式1为：
其特征在于，通过以下步骤实现： (1) 碱菀酯A的提取分离纯化： 将干燥的碱菀植物全草切成小段并用中药粉碎机将其粉碎成粉末，用甲醇渗漉提取， 甲醇渗漉液合并后经减压浓缩得到浓缩的甲醇提取液，浓缩的甲醇提取液用环己烷萃取， 合并环己烷萃取液并经减压浓缩得到环己烷萃取物浸膏，环己烷萃取物浸膏经硅胶柱层析 分离，分别用9:1和4:1，v/v的环己烷/乙酸乙酯依次洗脱，4:1的环己烷/乙酸乙酯的洗 脱液经减压浓缩得到的组分经反相硅胶柱层析分离，用甲醇洗脱，分段收集甲醇洗脱液，每 100毫升1份，各收集组分别用HPLC检测，将HPLC色谱保留时间t K 8. 9min的组分合并， 减压浓缩得到式1的单一化合物； (2) 碱菀酯A的理化性质和结构鉴定 取步骤（1)分离得到的单一化合物，根据1H谱、13C谱、HSQC谱、HMBC谱和高分辨质谱 分析，鉴定为4-(2S_甲基丁酰基）-9_乙酰基-松柏醇[4-(2S-methylbutyryl)-9_acetyl -coniferol]即碱菀酯A ;碱菀酯A为无色油状物，分子式C17H22O5;溶于甲醇、乙醇、吡啶，乙 酸乙酯，不溶于水；[a] D25+l〇.6(c 0.10，Me0H) ;UV λΜχ 215,256,290nm;HPLC保留时间为 8. 9min〇
4. 根据权利要求3所述的一种碱菀酯A的提取分离方法，其特征在于，步骤⑴渗漉提 取所用的溶媒为甲醇、或乙醇，溶媒和药材用量的比例是5~7升：1公斤；所述硅胶柱层 析中硅胶用量与样品量的比例是20~50克：1克；所述反相硅胶柱层析ODS的用量与样品 量的比例是30~60克：1克。
5. 根据权利要求3所述的一种碱菀酯A的提取分离方法，其特征在于，步骤（1)中HPLC 检测条件：Zorbax Bonus-RP ODS HPLC色谱柱，150X4. 6mm, 5 μπι ;流动相甲醇/水，65 :35 ; 流速lmL/min ;检测波长256nm。
6.权利要求1所述的一种碱菀酯A及其衍生物的化学合成方法，其特征在于，通过以下 步骤实现： (1) 松柏酸⑶的制备：
将香草醛（3a)和丙二酸（3b)溶于二氧杂环己烷中，加入无水吡啶和苯胺，在90~ 95°C保温反应2~3小时，冷至室温。反应物加入20%碳酸钾后搅拌，用浓盐酸调至PH为 2~3,析出沉淀物，抽滤，用冷水洗涤固体，真空干燥后得到松柏酸（3)，所述的香草醛 (3a)、丙二酸（3b)、二氧杂环己烷、无水吡啶、苯胺的用量比例为0. 02~0. 05 (mol) :0. 03~ 0. 06 (mol) : 20 ~30 (ml) : 10 ~15 (ml) : I. 0 ~2. 0 (ml); (2) 松柏酸甲酯（4)的制备：
将松柏酸（3)溶于无水甲醇中，在零度条件下逐渐加入亚硫酰氯搅拌10~15分钟后， 在室温下放置7~8小时并不停搅拌，反应物经ODS柱层析分离得到松柏酸甲酯（4)，所述 的松柏酸（3)、亚硫酰氯、甲醇的用量比为0.1 (mol) :0. 12~0. 15 (mol) : 300~400 (mL); (3) 松柏醇⑶的语1|名·，
将松柏酸甲酯（4)溶于无水四氢呋喃中，逐步加入四氢铝化锂，室温放置9~10小时 并不断搅拌，反应物经ODS柱层析分离得到松柏醇（5)，其中松柏酸甲酯（4)、四氢铝化锂、 四氢呋喃的用量比为〇. I (mol) :0.2~0.3 (mol): 500~1000 (mL); (4) 碱菀酯A及其衍生物的制备：
其中：R和R1同权利要求1 ; 将松柏醇（5)溶于吡啶中，加入具有结构式（6)的酸酐化合物，室温放置10~24后加 水并搅拌均匀，反应物用乙酸乙酯萃取，萃取物经ODS柱层析和制备型高效液相色谱分离 得到结构式（2)的碱菀酯A及其衍生物，所述的松柏醇（5)、酸酐化合物、吡啶的用量比为 0· I (mol) : 0· 2 ~0· 3 (mol) : 100 ~200 (mL) 〇
7. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为碱菀酯A及其衍生物各自单独 使用或合用或与其他药物或有效成分一起，与药学上可接受的赋形剂制成。
8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物的制剂为液体制剂、固体制剂、 胶囊制剂或缓释制剂。
【专利摘要】本发明提供从碱菀植物的全草中提取分离碱菀酯A以及合成碱菀酯A及其衍生物的制备方法。碱菀酯A和碱菀酯A的衍生物显著抑制人脑胶质瘤U87-MG和U251细胞以及肠癌HCT-15和SW620细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞凋亡，可在制备治疗肿瘤药物中的应用。碱菀酯A和它的衍生物对肿瘤细胞的作用并不仅局限于胶质瘤和肠癌，还包括其他各种肿瘤和癌症。碱菀酯A及其衍生物的结构通式为：。
【IPC分类】A61K31-222, C07C67-08, A61P35-00, C07C67-48, C07C69-28, C07C69-16
【公开号】CN104825437
【申请号】CN201510154546
【发明人】张治针, 陈璐, 梁英, 宋腾飞, 安佳库玛, 王文玲, 虞斯然, 黄豪彩, 连晓媛
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月2日