一种提取游离氨基酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种提取游离氨基酸的方法，特别涉及一种应用阳离子树脂提取氨基 酸的方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质，是在生物体内构 成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系。它在抗体内具有特殊的生 理功能，是生物体内不可缺少的营养成分之一。
[0003] 氨基酸在医药上主要用来制备复方氨基酸输液，也用作治疗药物和用于合成多肽 药物。目前用作药物的氨基酸有一百几十种，其中包括构成蛋白质的氨基酸有20种和构成 非蛋白质的氨基酸有100多种。
[0004] 由多种氨基酸组成的复方制剂在现代静脉营养输液以及"要素饮食"疗法中占有 非常重要的地位，对维持危重病人的营养，抢救患者生命起积极作用，成为现代医疗中必不 可少的医药品种之一。
[0005] 谷氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸、L 一多巴等氨基酸单独作用治疗一些疾病， 主要用于治疗肝病疾病、消化道疾病、脑病、心血管病、呼吸道疾病以及用于提高肌肉活力、 儿科营养和解毒等。此外氨基酸衍生物在癌症治疗上出现了希望。
[0006] 但是，目前对于从植物或蔬菜中提取游离氨基酸的研究，却存在很大的缺陷，现有 的技术操作复杂，多为实验室分离提取，制备量小，很难满足市场的需求，因此，需要提供一 种新的提取游离氨基酸的方法。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种从芦根中提取游离氨基酸的方法，该方法具有操作简 单、制作简单和样品用量少等特点。
[0008] 本发明提供了一种提取游离氨基酸的方法，该方法步骤如下： (1) 将新鲜氨基酸供体用水冲洗干净，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎机粉碎， 过滤，过滤后的粉末备用； (2) 称取粉碎后的氨基酸供体粉末，加入一定比例的提取溶剂，水浴回流提取； (3) 提取液过滤，加入高浓度乙醇至终浓度为75%，除去水溶性多糖和蛋白质； 所述高浓度乙醇为95%乙醇； (4) 离心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脱脂和色素;沉淀加水加热溶解，趁热过滤 除脂肪； (5) 滤液定容至50ml，加入5g活性炭搅拌lOmin，过滤，即得游离氨基酸提取液，4°C保 存备用，茚三酮比色法检测游离氨基酸含量。
[0009] 优选的，所述步骤（1)中所述烘干条件为60°C，恒温鼓风干燥箱内烘干6h~12h。
[0010] 优选的，所述步骤（1)中所述粉碎的氨基酸供体经40目筛子过滤，过滤后的粉末 备用。
[0011] 优选的，所述步骤（2)中所述提取溶剂为水、95%乙醇溶液、75%乙醇溶液、50%乙 醇溶液中的一种或多种。
[0012] 优选的，所述步骤（2)中氨基酸供体粉末与提取溶剂的比例为1:15-1:30 ;水浴 回流提取的条件为50-90°C，水浴回流提取l_5h。
[0013] 更优选的，所述步骤（2)中提取溶剂为水。
[0014] 更优选的，所述步骤（2)中氨基酸供体粉末与水的比例为1:15,水浴回流提取的 条件为60°C，水浴回流提取时间为2h。
[0015] 进一步的，所述步骤（5)中茚三酮比色法检测氨基酸供体中游离氨基酸的含量， 以天冬氨酸为对照品。
[0016] 本发明的有益效果是：本发明通过采用回流提取的方法，操作简单、制作简单和样 品用量少，不会破坏氨基酸的结构，获得了游离氨基酸，经茚三酮比色法测定，游离氨基酸 含量为8. 24mg/g。
【具体实施方式】
[0017] 下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。
[0018] 以新鲜芦根为例进行详细说明。
[0019] 实施例1 1. 芦根的前处理： (1)将新鲜芦根用自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗一次，淋干水后，60 °C恒温鼓风干燥 箱内烘干6h。
[0020] (2)然后剪成小段，用粉碎机粉碎，粉碎的芦根经40目筛子过滤，过滤后的粉末备 用。
[0021] 2.提取溶剂的选择： 水 95%乙醇溶液 75%乙醇溶液 50%乙醇溶液 2. 提取游离氨基酸的步骤： a)将新鲜芦根用自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗一次，淋干水后，60 °C恒温鼓风干燥箱 内烘干6h~12h，然后剪成小段，用粉碎机粉碎；b)称取一定量的芦根粉末，加入一定比例 的提取溶剂，水浴回流提取；c)提取液过滤，加入95%乙醇至终浓度为75%，除去水溶性多糖 和蛋白质；d)离心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脱脂和色素，沉淀加水加热溶解，趁热 过滤除脂肪；e)滤液定容至50ml，加入5g活性炭搅拌lOmin，过滤，即得游离氨基酸提取液。 4 °C保存备用。
[0022] 4.检测： 茚三酮比色法检测游离氨基酸含量。
[0023] 标准曲线制备：准确吸取lmg/mL的天冬氨酸标准溶液0. 0、0. 05、0 . 1、0 . 2、0 . 3、 0· 4、0· 5mL (相当于0、50、100、200、300、400、500 ug氨基酸），分别置于5mL刻度试管中， 各加水补充至体积为800 ul，然后加入2%茚三酮乙醇溶液和磷酸盐缓冲溶液（pH为8.04) 各200 ul，混合均匀，于沸水浴上加热15min，冷却至室温，静置15min，加水定容至5ml，摇 匀。在570nm波长下，以试剂空白为对照测定其余各溶液的吸光度A。得回归方程 Y=0. 2669X+0. 0041 (R2=O. 9974)，结果表明在100 - 500ug范围内呈良好的线性关系。 [0024] 5.正交试验设计： 丰1田妄平丰
【主权项】
1. 一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，该方法包括的步骤如下： (1) 将新鲜氨基酸供体用水冲洗干净，淋干水后，烘干，然后剪成小段，用粉碎机粉碎， 过滤，过滤后的粉末备用； (2) 称取粉碎后的氨基酸供体粉末，加入一定比例的提取溶剂，水浴回流提取； (3) 提取液过滤，加入高浓度乙醇至终浓度为75%，除去水溶性多糖和蛋白质； 所述高浓度乙醇为95%乙醇； (4) 离心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脱脂和色素，沉淀加水加热溶解，趁热过滤 除脂肪； (5) 滤液定容至50ml，加入5g活性炭搅拌lOmin，过滤，即得游离氨基酸提取液，4°C保 存备用，茚三酮比色法检测游离氨基酸含量。
2. 根据权利要求1所述的一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤（1)中 所述烘干条件为60°C，恒温鼓风干燥箱内烘干6h~12h。
3. 根据权利要求1或2所述的一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤（1) 中所述粉碎的氨基酸供体经40目筛子过滤，过滤后的粉末备用。
4. 根据权利要求1所述的一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤（2)中 所述提取溶剂为水、95%乙醇溶液、75%乙醇溶液、50%乙醇溶液中的一种或多种。
5. 根据权利要求1或3所述的一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤（2) 中氨基酸供体粉末与提取溶剂的比例为1:15-1:30 ;水浴回流提取的条件为50-90°C，水浴 回流提取l_5h。
6. 根据权利要求3所述的一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤（2)中 提取溶剂为水。
7. 根据权利要求4所述的一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤（2)中 氨基酸供体粉末与水的比例为1:15,水浴回流提取的条件为60°C，水浴回流提取时间为 2h〇
8. 根据权利要求1所述的一种提取游离氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤（5)中 茚三酮比色法检测氨基酸供体中游离氨基酸的含量，以天冬氨酸为对照品。
【专利摘要】本发明公开了一种提取游离氨基酸的方法，该方法步骤如下：（1）将新鲜氨基酸供体用水洗净，烘干，剪成小段，用粉碎机粉碎，过滤，粉末备用；（2）称取粉碎后的氨基酸供体粉末，加入一定比例的提取溶剂，回流提取；（3）提取液过滤，加入高浓度乙醇至终浓度为75%；（4）离心，上清液沸水浴蒸干得浸膏，用乙醚脱脂和色素，沉淀加水加热溶解，趁热过滤除脂肪；（5）滤液定容，加入活性炭搅拌，过滤，即得游离氨基酸提取液，4℃保存备用，茚三酮比色法检测游离氨基酸含量。本发明通过采用回流提取的方法，操作简单、制作简单和样品用量少，不会破坏氨基酸的结构，获得了游离氨基酸，经茚三酮比色法测定，游离氨基酸含量为8.24mg/g。
【IPC分类】A61P21-00, A61P11-00, A61P39-02, A61P9-00, A61K36-899, A61P1-16, A61P1-00, A61P25-00, A61P35-00, A61P3-02, A61K31-198
【公开号】CN104689106
【申请号】CN201510071401
【发明人】戴祖新
【申请人】海门市润圣纺织品有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年2月11日