一种蚕蛹的超高压提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种蚕蛹的超高压提取方法。
【背景技术】
[0002] 蚕蛹性平味甘，具有祛风、健脾、止消渴、镇惊安神、益精助阳等功效。《备急千金要 方》说它"益精气，强男子阳道，治泄精。"《本草纲目》记载："为末饮服，治小儿疳瘦，长肌， 退热，除蛔虫；煎汁饮，止消渴。"药理研究表明，蚕蛹对机体糖、脂肪代谢能起到一定的调 整作用。白僵蚕蛹油有降血脂的作用；用蚕蛹油提纯品制成丸剂，用于治疗高胆固醇血症， 对降低胆固醇和改善肝功能有显著疗效。适量食用蚕蛹，对高血压、高血脂、慢性肝炎及营 养不良患者有较好的辅助治疗功效。此外，蚕蛹中含有一种广谱免疫物质，对癌症有特殊疗 效。据报道，日本等国已经从蚕蛹中生产出了 α-干扰素，临床用于抗癌治疗。
[0003] 蚕蛹具有极高的营养价值，含有丰富的蛋白质(鲜蚕蛹含粗蛋白占51%)、脂肪酸 (粗脂肪占29%)、维生素(包括维生素 Α、维生素 Β2、维生素 D及麦角留醇等)。蚕蛹的蛋白质 含量在50%以上，远远商于一般食品，而且蛋白质中的必需氣基酸种类齐全。香蛹蛋白质由 18种氨基酸组成，其中人体必需的8种氨基酸含量很高。蚕蛹中的这8种人体必需的氨基 酸含量大约是猪肉的2倍、鸡蛋的4倍、牛奶的10倍，且营养均衡、比例适当，是一种优质的 昆虫蛋白质。
[0004] 超高压提取（u ltrah igh-pressure ex traction, UHPE)，也称超高冷等静压提 取，是指用100~1000 MPa的流体静压力作用于提取溶剂和中药的混合液上，并在预定压力 下保持一段时间，使植物细胞内外压力达到平衡后迅速卸压。由于细胞内外渗透压力忽然 增大，细胞膜的结构发生变化，使得细胞内的有效成分能够穿过细胞的各种膜而转移到细 胞外的提取液中，达到提取中药有效成分的目的。超高压提取可以有效提取黄酮类、皂苷 类、多糖类和生物碱类等有效成。
[0005] 目前，未见采用超高压方法提取蚕蛹的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明提供了 一种新的蚕蛹的超高压提取方法。
[0007] 本发明蚕蛹的超高压提取方法，包括如下步骤：
[0008] ( 1)取新鲜、干蚕蛹，以水或浓度为50%~90%乙醇溶液为溶剂，匀浆，超高压提 取1~5次，每次5~20min，即得提取液，其中，超高压提取的压强为100-800MPa，温度为 20 ~80? ;
[0009] (2)过滤步骤（1)的提取液，得上清液，浓缩，浓缩液中加入10%~40% (w/v)的中 性氧化铝；
[0010] (3)将步骤（2)的浓缩液冷藏24~48h，去除上层油脂，离心，得上清液，浓缩，干 燥，粉碎，即可。
[0011] 步骤（1)中,所述溶剂的用量为蚕蛹的6~10倍（v/w)。优选地，所述溶剂的用量 为蚕蛹的6~8倍（v/w)。
[0012] 步骤（1)中，用匀浆机对加入溶剂的蚕蛹进行匀浆。
[0013] 步骤（1)中，所述乙醇溶液的浓度为60%~80%。优选地，所述乙醇溶液的浓度为 70%。
[0014] 步骤（1)中，所述超高压提取的次数为2~3次，提取时间为15~20min。
[0015] 步骤（1)中，所述超商压提取的压强为200~600MPa。优选地，所述超商压提取的 压强为500MPa
[0016] 步骤（1)中，所述超高压提取的温度为50~70°C。优选地，所述超高压提取的温 度为60°C。
[0017] 步骤（2)中，所述浓缩是浓缩至相对密度为1. 05~1. 25 (50°C测）。
[0018] 步骤（2)中，所述浓缩液中加入20~30% (w/v)中性氧化铝脱色、脱臭。优选地， 所述中性氧化铝的用量为25% (w/v)。
[0019] 步骤（3)中，所述冷藏的温度为0~15°C。
[0020] 步骤（3)中，所述离心的温度为5~15°C，转速10000r/min。
[0021] 目前通常采用酶解的方法来提高蚕蛹蛋白质的收率，操作复杂、耗时长，在制备过 程中易受微生物的污染。在质量控制方面未对蚕蛹的功效成分氨基酸进行检测。
[0022] 而本发明采用超高压提取方法，可以高效提取蚕蛹的有效成分，收率高、耗时短、 不易被污染，制得的提取物中，氨基酸总量高达199g，蛋白质总量高达326g。
[0023] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明权利要 求书记载的内容所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】 图1为氨基酸的含量测定方法的标准图谱。
【具体实施方式】
[0024] I、氨基酸的含量测定方法(方法来源：食品中氨基酸的测定方法GB/ T5009. 124-2003)
[0025] 1.原理
[0026] 食品蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后， 与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
[0027] 2.试剂
[0028] 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为往离子水。
[0029] 2.1浓盐酸：优级纯。
[0030] 2. 26mol/L盐酸：浓盐酸与水1 :1混合而成。
[0031] 2. 3苯酚：需重蒸馏。
[0032] 2. 4混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售）：0· 0025mol/L
[0033] 2. 5 缓冲液：
[0034] 2· 5· 1ρΗ2· 2的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7. 2H20)和16. 5ml 浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2. 2。
[0035] 2. 5. 2pH3. 3的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到 1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3. 3。
[0036] 2. 5. 3pH4. 0的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到 1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4. 0。
[0037] 2. 5. 4pH6. 4的柠檬酸钠缓冲液：称取19. 6g柠檬酸钠和46. 8g氯化钠(优级纯)加 水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6. 4。
[0038] 2. 6茚三酮溶液
[0039] 2· 6· 1ρΗ5· 2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH. H20) 168g，加进冰乙酸(优级纯） 279ml，加水稀释到1000 ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5. 2。
[0040] 2. 6. 2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H60S)和乙酸锂溶液（2. 6. l)50ml加 进4g水合茚三酮（C9H403. H20)和0. 12g还原茚三酮（C18HltlO6. 2H20)搅拌至完全溶解。
[0041] 2. 7高纯氮气：纯度99. 99%。
[0042] 2. 8冷冻剂：市售食盐与冰按1 :3混合
[0043] 3.仪器和设备
[0044] 3. 1真空泵
[0045] 3. 2恒温干燥箱
[0046] 3. 3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20~30ml。用往离子水冲洗干 净并烘干。
[0047] 3. 4真空干燥器(温度可调节）
[0048] 3. 5日本日立（Hitachi, Japan)L_8900型全自动氨基酸分析仪天美（中国）科学 仪器有限公司
[0049] 4.检测方法
[0050] 4. 1试样处理
[0051] 样品采集后用匀浆机打成匀浆(或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分 析用时将其解冻后使用。
[0052] 4. 2分析步骤
[0053] 4. 2. 1 称样
[0054] 正确称取一定量样品，精确到0.0 OOlg。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质 含量在10~20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定 前再稀释。将称好的样品防于水解管中。
[0055] 4. 2. 2 水解
[0056] 在水解管内加6mol/L盐酸10~15ml (视样品蛋白质含量而定)，含水量高的样 品（如牛奶）可加进等体积的浓盐酸，加进新蒸馏的苯酚3~4滴，再将水解管放进冷冻 剂中，冷冻3~5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近Opsi)，然后充进高纯氮气； 再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在 110 ± I °C的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。
[0057] 打开水解管，将水解液过滤后，用往离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到 50ml容量瓶内，用往离子水定容。吸取滤液Iml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40~ 50°C干燥，残留物用1~2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用lmlpH2. 2的缓冲 液溶解，供仪器测定用。
[0058] 4. 2. 3 测定
[0059] 正确吸取0. 200ml混合氨基酸标准，用pH2. 2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓 度为5. 00nmol/50 μ L,作为上机测定用的氨基酸标准,用氨基酸自动分析仪以外标法测定 样品测定液的氨基酸含量。
[0060] 4. 2. 4结果计算
[0061] 按下式计算
【主权项】
1. 一种蚕蛹的超高压提取方法，其特征在于：包括如下步骤： (1) 取新鲜、干蚕蛹，加入水或浓度为509T90%乙醇溶液，匀浆，在温度为2(T80°C，压强 为100-800MPa条件下，超高压提取1飞次，每次5~20min，即得提取液； (2) 过滤步骤（1)的提取液，得上清液，浓缩，浓缩液中加入109T40% (w/v)的中性氧化 错； (3) 将步骤（2)的浓缩液冷藏24~48h，去除上层油脂后，离心，得上清液，浓缩，干燥，粉 碎，即可。
2. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述溶剂的用量为蚕蛹 的6~10倍（v/w)。
3. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述用匀浆机对加入溶 剂的蚕蛹进行匀浆。
4. 根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述溶剂的用量为蚕蛹的6~8倍（v/ w)。
5. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述乙醇溶液的浓度为 60%~80%。
6. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述超高压提取的次数 为2~3次，提取时间为15~20min。
7. 根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1)中，所述超高压提取的压强 为30(T600MPa，选为提取的压强为500MPa。
8. 权利要求1~7任一项所述方法制备的蚕蛹提取物。
【专利摘要】本发明公开了一种蚕蛹的超高压提取方法，包括如下步骤：（1）取新鲜、干蚕蛹、加入水或浓度为50%~90%乙醇溶液，超高压提取1~5次，每次5~20min，即得提取液，其中，超高压提取的压强为200-600MPa，温度为20~80℃；（2）离心步骤（1）的提取液，得上清，浓缩，得浓缩液；（3）将步骤（2）的浓缩液冷藏24~48h，去除上层油脂，离心，浓缩，干燥，粉碎，即可。本发明超高压提取方法可以有效提取蚕蛹的有效成分，收率高，操作简便，应用前景良好。
【IPC分类】A23L1-29, A61K35-64
【公开号】CN104688779
【申请号】CN201310655824
【发明人】舒梅
【申请人】舒梅
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2013年12月9日