双链rna及其相关的抗肿瘤组合物在制备肿瘤细胞抑制剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医学领域中双链RNA及其相关的抗肿瘤组合物在制备肿瘤细胞 抑制剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 微小核酸（miRNA)是一种内源的、在体内广泛表达的包含21~25个核苷酸的非 编码小RNA，是引起RNA干扰现象直接原因的物质之一。miRNA由具有发夹结构的约70~ 90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，在进化上高度保守，对基因表达进 行转录后调控。每个miRNA可以有多个调控（靶）基因，而几个miRNA也可以调节同一个 基因，据推测，miRNA调节着人类三分之一的基因。miRNA调节机体重要的生理与病理过程， 在细胞分化，生物发育及疾病发生发展过程中发挥巨大作用，且具有很强的组织特异性，已 经引起越来越多的研宄人员的关注。
[0003] 宫颈癌（Cervical Cancer)是一种严重威胁女性健康的恶性肿瘤。世界卫生组织 的数据显示，宫颈癌的死亡率在女性肿瘤种仅次于乳腺癌，占第二位。全球每年约有28. 8 万病例死亡，51万新增病例，其中有80%的病例在发展中国家，我国每年新增病例约为 13. 5万人，死亡病例约有3~5万人。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是如何抑制肿瘤细胞，所述抑制肿瘤细胞可为抑制肿 瘤细胞增殖和/或促进肿瘤细胞凋亡。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了抗肿瘤组合物。
[0006] 本发明所提供的抗肿瘤组合物，其活性成分由A和化疗药物组成，所述A为双链 RNA或所述双链RNA修饰物或与所述双链RNA相关的生物材料。
[0007] 上述抗肿瘤组合物中，所述双链RNA，其名称为AntiCC，所述AntiCC的一条链的从 5'端至:V端的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No. 1，所述AntiCC的另一条链的从:V端 至Y端的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No. 2。
[0008] 其中，SEQ ID No. 1由20个核糖核苷酸组成，SEQ ID No. 2由20个核糖核苷酸组 成，SEQ ID No. 1的第1-20位核糖核苷酸与SEQ ID No. 2的第1-20位核糖核苷酸反向互 补，将二者形成的双链RNA命名为AntiCC。
[0009] 上述抗肿瘤组合物中，所述双链RNA修饰物具体可为对所述AntiCC进行修饰得到 的双链RNA修饰物，其名称为AntiCC mimic。所述双链RNA修饰物中，各种修饰方法均可 选用，包括选自核糖修饰、碱基修饰和磷酸骨架修饰中的一种或几种的组合等。如可对所述 AntiCC进行下述Al)或A2)或A3)的修饰得到所述双链RNA修饰物：
[0010] Al)对所述AntiCC的核糖的2' -OH进行修饰；
[0011] A2)对所述AntiCC的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰；
[0012] A3)对所述AntiCC的核糖的Y端连上胆固醇的修饰。
[0013] 上述抗肿瘤组合物中，所述对所述AntiCC的核糖的V -OH进行修饰为将所述 2' -OH用甲氧基或氟取代或者对所述2' -OH进行脱氧修饰；所述对所述AntiCC的连接 核苷酸的磷酸二酯键进行修饰为将所述磷酸二酯键的氧用硫取代。
[0014] 在本发明的一个实施例中，所述双链RNA修饰物是将所述AntiCC的SEQ ID No. 2 所示链中所有胞苷酸（C)和所有腺苷酸（A)的f -OH均取代为甲氧基，SEQ ID No. 2所 示链的其它核苷酸不进行修饰，且SEQ ID No. 1所示链未进行修饰得到的修饰物，其名称为 Sr-OMe-AntiCC0
[0015] 上述抗肿瘤组合物中，所述与所述双链RNA相关的生物材料为下述BI)-B12)中的 任一种：
[0016] BI)编码所述AntiCC的DNA分子；
[0017] B2)含有BI)所述DNA分子的表达盒；
[0018] B3)含有BI)所述DNA分子的重组载体；
[0019] B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
[0020] B5)含有BI)所述DNA分子的重组微生物；
[0021] B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
[0022] B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
[0023] B8)含有M)所述重组载体的重组微生物；
[0024] B9)含有BI)所述DNA分子的转基因动物细胞系；
[0025] B10)含有B2)所述表达盒的转基因动物细胞系；
[0026] BI 1)含有B3)所述重组载体的转基因动物细胞系；
[0027] B12)含有M)所述重组载体的转基因动物细胞系。
[0028] 上述抗肿瘤组合物中，B2)所述的含有编码AntiCC的DNA分子的表达盒（AntiCC 表达盒）是指能够在宿主细胞中表达AntiCC的DNA，该DNA不但可包括启动AntiCC转录的 启动子，还可包括终止AntiCC转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。
[0029] 可用现有的表达载体构建含有所述AntiCC表达盒的重组载体。
[0030] 上述抗肿瘤组合物中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。
[0031] 上述抗肿瘤组合物中，B5)_B8)所述的微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。
[0032] 上述抗肿瘤组合物中，B9)_B12)所述的转基因动物细胞系不包括繁殖材料。
[0033] 上述抗肿瘤组合物中，所述化疗药物可为喜树碱。
[0034] 所述喜树碱的结构式如式1 :
[0035]
【主权项】
1. 抗肿瘤组合物，其活性成分由A和化疗药物组成，所述A为双链RNA或所述双链RNA 修饰物或与所述双链RNA相关的生物材料； 所述双链RNA的一条链序列为序列表中SEQ ID No. 1，所述双链RNA的另一条链序列为 序列表中SEQ ID No. 2 ; 所述双链RNA修饰物是经过下述Al)或A2)或A3)修饰得到的双链RNA修饰物： Al)对所述双链RNA的核糖的f -OH进行修饰； A2)对所述双链RNA的连接核苷酸的磷酸二酯键进行修饰； A3)对所述双链RNA的核糖的Y端连上胆固醇的修饰； 所述与所述双链RNA相关的生物材料为下述BI)-B12)中的任一种： BI)编码所述双链RNA的DNA分子； B2)含有BI)所述DNA分子的表达盒； B3)含有BI)所述DNA分子的重组载体； B4)含有B2)所述表达盒的重组载体； B5)含有BI)所述DNA分子的重组微生物； B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物； B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物； B8)含有M)所述重组载体的重组微生物； B9)含有BI)所述DNA分子的转基因动物细胞系； B10)含有B2)所述表达盒的转基因动物细胞系； B11)含有B3)所述重组载体的转基因动物细胞系； B12)含有M)所述重组载体的转基因动物细胞系。
2. 根据权利要求1所述的抗肿瘤组合物，其特征在于：所述化疗药物为喜树碱。
3. 权利要求1或2所述抗肿瘤组合物在制备肿瘤细胞抑制剂或肿瘤抑制剂中的应用。
4. 权利要求1所述A在制备肿瘤细胞抑制剂或肿瘤抑制剂中的应用。
5. 根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述肿瘤细胞抑制剂为抑制肿瘤细 胞增殖的产品和/或促进肿瘤细胞凋亡的产品；所述肿瘤抑制剂为抑制肿瘤发生的抑制剂 和/或抑制肿瘤生长的抑制剂。
6. 治疗和/或预防肿瘤的产品，其活性成分为权利要求1或2所述抗肿瘤组合物。
7. 治疗和/或预防肿瘤的产品，其活性成分为权利要求1所述A。
8. 根据权利要求1或2所述抗肿瘤组合物、或权利要求3-5任一所述应用、或权利要 求6或7所述产品，其特征在于：所述肿瘤可为宫颈癌、肠癌、鼻咽癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、肺 癌、非小细胞肺癌或子宫内膜癌。
9. 权利要求1所述双链RNA或所述双链RNA修饰物。
10. 权利要求1所述与所述双链RNA相关的生物材料。
【专利摘要】本发明公开了双链RNA及其相关的抗肿瘤组合物在制备肿瘤细胞抑制剂中的应用。本发明所提供的抗肿瘤组合物，其活性成分由A和化疗药物组成，所述A为双链RNA或所述双链RNA的修饰物或与所述双链RNA相关的生物材料；所述双链RNA的名称为AntiCC，其一条链序列为序列表中SEQ ID No.1，另一条链序列为序列表中SEQ ID No.2，SEQ ID No.1与SEQ ID No.2反向互补；所述双链RNA的修饰物是对所述双链RNA的核糖的2′-OH进行修饰得到修饰物。实验证明，可以利用本发明的抗肿瘤组合物和AntiCC抑制肿瘤细胞增殖和/或促进肿瘤细胞凋亡。
【IPC分类】A61K31-4745, A61K48-00, A61P35-00
【公开号】CN104667299
【申请号】CN201510091139
【发明人】何杰, 张雅鸥, 卢锦华, 王凡, 吴江斌, 许乃寒, 谢伟东
【申请人】清华大学深圳研究生院
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月28日