5-溴汉防己甲素在制备逆转多药耐药白血病细胞的复方制剂中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及5-溴汉防己甲素在制备逆转多药耐药 白血病细胞的复方制剂中的应用。
【背景技术】
[0002] 恶性血液系统肿瘤白血病是威胁人类健康的主要疾病，化疗是目前治疗白血病的 重要手段之一。而多药耐药性（multidrug resistance, MDR)的发生在化疗过程中不可避 免，是白血病治疗失败的主要原因。MDR是指抗某细胞毒药物的耐药细胞系接触了一种或几 种药物后，不但对此药产生耐药性，而且对许多结构上无关的和作用机制不同的其它抗癌 药物产生交叉耐药性。这是一种独特的广谱耐药现象。
[0003] 虽然目前急性白血病的诱导缓解率日益提高，但仍有20%~40 %的患者不能达 到完全缓解，而多数缓解的患者又相继出现了复发，多药耐药的发生是白血病患者复发的 主要原因。因此MDR在白血病临床上越来越受到重视，对MDR机制研究和逆转MDR成为白 血病治疗迫切需要解决的问题。
[0004] MDR形成机制复杂，其中肿瘤细胞多药耐药基因1 (multidrug resistance l，mdrl)的过度表达导致细胞膜上P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp)增多是产生MDR的主 要机制之一。P-gp属于ATP结合盒蛋白，是高度糖基化蛋白，其耐药谱很广，多为双亲性或 亲脂性天然药物，如蒽环类、长春碱类和紫杉醇类药物。P-gp这种有机阳离子泵具有能量依 赖的跨膜药物外输泵作用，当肿瘤细胞与化疗药物接触时，脂溶性药物经浓度梯度进入细 胞，P-gp结合药物分子，其ATP位点则同时结合ATP，ATP水解使P-gp构型改变，将药物从 高亲和位点转移至低亲和位点，并将之从细胞内泵出胞外，是胞内药物浓度不断下降。药物 的抗肿瘤效应因此减弱甚至消失，肿瘤细胞出现耐药现象。因而，有效的P _ gp抑制剂可以 抑制P _ gp对肿瘤药物的外排作用，逆转肿瘤多药耐药，提高化疗效果。
[0005]目前，临床上用来克服耐药的手段主要有两种：一是尽量选择患者敏感的药物类 型或药物剂量，即换药或增加原来药物剂量，其缺点是化疗药物类型有限，且过大剂量会并 发严重的副反应；另一种是应用MDR逆转剂联合化疗克服耐药。目前联合使用逆转剂已 成为耐药逆转研究的发展趋势。理想的MDR逆转剂应具有以下条件：安全，对正常组织毒 性小；在体内及肿瘤细胞内能达到体外有效浓度；稳定、体内半衰期长等。第一代MDR逆 转剂主要包括钙离子通道阻滞剂、蛋白激酶C抑制剂、免疫抑制药物及表面活化剂等，它们 在体外试验中，可以部分甚至完全逆转MDR。但是，它们无特异性作用靶点，而且主要是通 过竞争性作用来抑制细胞毒药物的泵出，这样就必然要增加这些逆转剂的药物浓度，而这 些剂量往往是已经超出了其在体内产生毒性作用的最小剂量。第二代逆转剂主要包括右 旋维拉帕米（dexverapamil)、右旋尼古地平（dexniguldipine)、环孢菌素类似物伐司朴达 (valspodar，PSC833)和比立考达（biricodar，VX2710)等，较第一代具有较低的毒副作用， 而逆转MDR的活性却明显增强，但它们对化疗药物药代动力学的影响成为临床应用的一个 主要障碍。对部分病人来说，化疗药物的量可能是不足的，但对另外一部分病人来说，就可 能已超过了最大耐受量。到目前为止，MDR逆转剂经历了第一、二代，已发展到第三代。其 中环孢菌素D衍生物（PSC-833)由瑞士诺华公司研制，是迄今为止国际上第一个进入到临 床随机试验的P-gp抑制剂，但由于PSC-833临床试验未见明显耐药逆转作用，目前其上市 进程已被全面叫停，意味着目前临床上MDR面临着无药可用的境地。因此，继续寻找新型低 毒高效的MDR逆转剂依然是目前研发相关药物的主要方向。
[0006] 从传统中药中开发耐药逆转剂是我们的一大优势，由于其低毒且源自天然植物的 特性，逐渐成为MDR抑制剂的研发重点。但目前发现的大多数中药逆转剂疗效均较弱。本 课题组前期已进行大量实验对多种多药耐药逆转剂的不断筛选，我们认为5-溴汉防己甲 素（5-Bromotetrandrine，简写BrTet)具有广阔的实际应用前景。它是由双苄基四氢异喹 啉类生物碱汉防己甲素经溴化得到。该化合物具有逆转多药耐药的活性，且BrTet属于低 毒类药物，它们既无异搏定等药的严重心血管毒性反应，也无环孢霉素的严重毒性、免疫抑 制及过敏反应，与抗肿瘤药物合用也不影响它们的药代动力学，因此是非常具有开发前景 的第三代MDR逆转剂。
【发明内容】
[0007] 发明目的：本发明的目的是提供了 5-溴汉防己甲素在逆转多药耐药白血病细胞 上的应用，通过抑制肿瘤细胞多药耐药基因mdrl的表达，抑制P-糖蛋白对肿瘤药物的外 排作用，增加细胞内蒽环类化疗药物浓度，逆转肿瘤多药耐药，提高化疗效果。
[0008] 技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了 5-溴汉防己甲素在制备逆转多 药耐药白血病细胞的复方制剂方面的应用。
[0009] 其中，上述逆转多药耐药白血病细胞的复方制剂为蒽环类化疗药物柔红霉素联合 5_溴汉防己甲素组成的复方制剂。
[0010] 其中，上述5-溴汉防己甲素的工作浓度为1. 0μmol/L至2. 0μmol/L之间。
[0011] 其中，上述5-溴汉防己甲素用来配合化疗药物治疗K562/A02白血病多药耐药细 胞。
[0012] 其中，上述化疗药物为蒽环类化疗药物。
[0013] 其中，上述柔红霉素工作浓度为0? 78125mg/L~100mg/L。
[0014] 其中，上述柔红霉素工作浓度为lmg/L。
[0015] 有益效果：与现有技术相比，本发明的优点如下：采用5-溴汉防己甲素作为白血 病耐药逆转剂，利用5-溴汉防己甲素在逆转多药耐药白血病细胞上的应用，5-溴汉防己甲 素在低浓度（1.0ym 〇l/L-2.0iim〇l/L)范围内，可以增加蒽环类化疗药物对耐药细胞的抑 制作用，而对敏感细胞抑制作用变化不大，其机制涉及5-溴汉防己甲素抑制多药耐药基因 mdr-1的扩增，从而抑制细胞表面多药耐药蛋白P-糖蛋白对肿瘤药物的外排作用，增加细 胞内柔红霉素浓度，最终有效的逆转肿瘤多药耐药，提高化疗效果。
【附图说明】
[0016] 图1为BrTet对K562细胞和K562/A02细胞增殖的影响；0? 25-3. 0iimol/L的 BrTet对K562和K562/A02细胞作用48小时后，细胞增殖变化；可见BrTet浓度小于 2. Oil mol/L时，细胞抑制率小于10%，无明显细胞毒作用；
[0017] 图2A为1. 0、1. 5和2. 0μmol/L浓度的5-溴汉防己甲素联合柔红霉素在体外 作用K562白血病细胞48小时后柔红霉素半数抑制浓度ICjt变化，图2B为1. 0、1. 5和 2. 0 y mol/L浓度的5-溴汉防己甲素联合柔红霉素在体外作用K562/A02白血病耐药细胞 48小时后柔红霉素半数抑制浓度ICjt变化；
[0018] 图3为5-溴汉防己甲素在体外作用白血病细胞K562和白血病耐药细胞K562/A02 后细胞内蒽环类化疗药物柔红霉素浓度变化；A :K562细胞单用DNR组；B :K562/A02细胞单 用 DNR 组；C :K562/A02 细胞 DNR+1. 0μmol/L BrTet 组；D :K562/A02 细胞 DNR+1. 5 ii mol/L BrTet 组；E :K562/A02 细胞 DNR+2. 0μmol/L BrTet 组；
[0019] 图4为5-溴汉防己甲素在体外作用白血病细胞K562和白血病耐药细胞K562/ A02,48小时后细胞P-糖蛋白编码基因mdrl变化；泳道1 :K562/A02细胞对照组；泳道2: K562/A02 细胞 +2. 0μmol/L BrTet 组；泳道 3 :K562/A02 细胞 +1. 5 ii mol/L BrTet 组；泳道 4 :K562/A02 细胞 +1. 0μmol/L BrTet 组。
【具体实施方式】
[0020] 下面将结合说明书附图，对本发明作进一步的说明。
[0021] 实施例1 BrTet体外对人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562及其耐 药株K562/A02增殖影响。
[0022] 所用5-溴汉防己甲素为商品化纯品。