绿原酸在制备治疗绒毛膜癌的药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，具体涉及绿原酸在制备治疗绒毛膜癌的药物中的用 途。 技术背景
[0002] 妊娠滋养细胞肿瘤是由妊娠滋养细胞异常发育及增殖所致，是一组罕见的滋养叶 组织疾病，可以看作是起源于浸润母体（胞衣）组织受孕的同种异体移植物，具有独特的形 态学和临床生物学行为，主要包括侵袭性葡萄胎、绒癌及胎盘部位滋养细胞肿瘤，其中绒癌 具有极强的侵袭力和广泛转移性，早期即可发生血道转移而危及患者生命。临床上多采用 化疗为主，手术为辅的方式进行治疗，但仍有部分高危转移患者出现耐药和复发，对这类患 者的治疗一直是滋养细胞肿瘤的一大难题。近年来，高靶向性的生物免疫治疗成为肿瘤免 疫研宄的新热点，并且应用于肿瘤的治疗。
[0003] 绿原酸（chlorogenic acid CGA)又名咖啡親酸，是由咖啡酸（caffeic acid CA)和奎尼酸（quinic acid QA)组成的缩酷酸，其化学名为3-0-咖啡酰奎尼酸 (3-o-caffeoylquinic acid CGA)。绿原酸是植物在进行有氧呼吸的过程中，经磷酸戊糖途 径中间产物合成的一种苯丙素类物质。绿原酸已经被开放应用于食品，保健品，化妆品和药 品等多个领域。由于它广泛的存在于常见的各种蔬菜水果中，具有多种生物活性，如：心 血管保护作用、抗氧化作用、抗紫外及抗辐射作用、抗诱变及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作 用、降脂降糖作用、免疫调节作用等。在医药化工和食品等领域都具有广泛的应用。现已经 报道的绿原酸有多种药理作用，但在治疗绒毛膜癌方面还鲜有报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述问题，本发明提供了绿原酸的一种新用途，具体为绿原酸在制备治疗绒 毛膜癌的药物中的用途。
[0005] 作为可选方式，在上述用途中，所述药物是以CTLA-4为靶点预防和治疗绒毛膜 癌。细胞免疫在机体对恶性肿瘤的免疫应答中发挥重要作用，而细胞毒T淋巴细胞相关抗 原4 (CTLA-4)的存在会与T细胞表面协同刺激分子受体（CD28)竞争性地与抗原呈递细胞 表面协同刺激分子（B7)结合，从而抑制T细胞的激活，下调或终止T细胞反应，阻碍肿瘤的 生物免疫治疗效果。因此，CTLA-4被认为是抑制机体抗肿瘤的免疫因子。发明人通过大量 实验发现绿原酸有利于阻断或减轻CTLA-4对T细胞免疫活性的抑制作用，从而刺激免疫细 胞的大量增殖，从而增强机体对肿瘤的免疫反应。
[0006] 本发明还提供了一种用于治疗绒毛膜癌的药物，其活性成分包括有效量的绿原 酸。
[0007] 作为可选方式，所述药物是以CTLA-4为靶点预防和治疗绒毛膜癌。
[0008] 作为可选方式，所述的药物是以绿原酸为有效成分，加入一种或多种药学上可接 受的药用赋形剂制备而成的制剂。
[0009] 作为可选方式，所述的药物中每制剂单位含有绿原酸1?lOOOmg。
[0010] 作为可选方式，所述的药物为口服制剂或注射制剂。
[0011] 作为可选方式，所述的药物是绿原酸占药物总质量的1-100%的口服制剂或注射 剂。
[0012] 作为可选方式，所述的药物口服制剂是片剂、胶囊剂、散剂、冲剂、颗粒剂。
[0013] 作为可选方式，所述的药物注射制剂是粉针剂、注射液。
[0014] 本发明还提供了一种绿原酸与其他常用药物在制备治疗绒毛膜癌的联合用药物 中的用途。进一步的所述其他常用药物为其他抗肿瘤类药物（如5-氟尿嘧啶）或\和免 疫应答促进类药物.。
[0015] 作为可选方式，所述绿原酸与其他常用药物的剂量配比为1:5?2:1。
[0016] 作为可选方式，所述免疫应答促进类药物是指能够促进或激活细胞免疫应答机制 的药物或免疫因子，如白介素12、白介素2、γ干扰素中的一种或几种。
[0017] 本发明还提供了一种治疗绒毛膜癌的联合用药物，其活性成分包括有效量的绿原 酸与其他常用药物。
[0018] 作为可选方式，所述的联合用药物是以绿原酸和其他常用药物为有效成分，加入 一种或多种药学上可接受的药用赋形剂制备而成的制剂。
[0019] 作为可选方式，所述绿原酸与其他常用药物的质量比为1:5?2:1。
[0020] 联合用药是指为了达到治疗目的而采用的两种或两种以上药物同时或先后应用。 本发明绿原酸与免疫应答促进类药物联合用于治疗绒毛膜癌的效应为相互促进的，绿原酸 本身既具有抑制肿瘤的作用，同时又对机体无害，且可以提高机体免疫力、改善机体造血功 能和肝肾功能；而且绿原酸能够阻断或减轻CTLA-4对T细胞免疫活性的抑制作用，从而刺 激免疫细胞的大量增殖，从而增强机体对肿瘤的免疫反应，提高免疫应答促进类药物的疗 效，具有良好的临床应用前景。
[0021] 本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥 的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
[0022] 本发明的有益效果：
[0023] 本发明采用绿原酸作为活性成分制成的药物，用于治疗绒毛膜癌。绿原酸本身既 具有抑制肿瘤的作用，同时又对机体无害，且可以提高机体免疫力、改善机体造血功能和肝 肾功能；而且绿原酸能够阻断或减轻CTLA-4对T细胞免疫活性的抑制作用，从而刺激免 疫细胞的大量增殖，从而增强机体对肿瘤的免疫反应。绿原酸通过两条途径阻断或减轻 CTLA-4对T细胞免疫活性的抑制作用：1.作用于CTLA-4的靶基因，阻断CTLA-4的表达，减 少体内CTLA-4的表达；2.直接作用于CTLA-4,使其失去活性。
【附图说明】：
[0024] 图1为实施例1中各实验组细胞增殖情况的柱状图；
[0025] 图2为实施例2中各实验组细胞增殖情况的柱状图；
[0026] 图3为实施例3中各实验组T细胞活性的柱状图；
[0027] 图4为实施例4中各实验组抑瘤率的柱状图。
【具体实施方式】：
[0028] 以下通过实施例的【具体实施方式】再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但 不应当将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明的精神和 原则之内做的任何修改，以及根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的等同替换或者改 进，均应包括在本发明的保护范围内。
[0029] 实施例1绿原酸以CTLA-4为作用靶点抑瘤效果模拟实验
[0030] 细胞培养
[0031] 绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞生长在含10 %胎牛血清的高糖DMEM完全培养基（添 加2mmol/L谷氨酰胺、lmmol/L丙酮酸钠、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素）中，置于37°C、 5% C02培养箱中培养，每3三天换液一次。当细胞长满70%?80%左右，以0. 25%的胰酶 和0. 02% EDTA混合液按1:3比例传代。
[0032] MTT比色法测定细胞增殖
[0033] 取指数生长期的JEG-3细胞按初始浓度为3 X IO4Ail接种于96孔板，分6组分别 为对照组、IL-12 组、CTLA-4+IL-12 组、0· 01 μ M 绿原酸 +CTLA-4+IL-12 组、0· 1 μ M 绿原酸 +CTLA-4+IL-12组和1 μΜ绿原酸+CTLA-4+IL-12组37°C、5% CO2培养箱中培养48h后换成 无血清培养基使其继续饥饿同步化24h ;然后分别给予5ng/ml的IL-12、5ng/ml的CTLA-4 和各剂量的绿原对JEG-3细胞进行外源性干预（各实验组的具体干预方式见表I)，36h终 止培养并收获细胞，对照组不做外源性干预，每组设5个平行孔。弃去孔内培养基，温和PBS 洗2遍，每孔加入180 μ L培养基，20 μ L 5ng/ml的MTT溶液，轻振培养板，再放回培养箱继 续培养4h后小心吸净上清。每孔加入150 μ L二甲基亚砜（DMSO)，振荡10min，使紫蓝色结 晶完全溶解。混匀后在酶标仪492nm波长处检测各孔的OD值。
[0034] 统计学处理
[0035] 采用SPSS 11. 5统计软件包进行统计学分析。数据均采用均数土标准差（-X土 s) 表示，采用单因素方差分析对数据进行处理，两两比较时采用SNK-q检验。以0. 05为显著 性检验水准。
[0036] 结果
[0037] MTT结果显示：5ng/ml的IL-12、5ng/ml的CTLA-4和各剂量的绿原对JEG-3细胞 进行作用36h后，IL-12能明显的抑制JEG-3细胞的增殖；CTLA-4能抑制IL-12的活性， CTLA-4+IL-12共同作用36h后，与对照组相比较，JEG-3细胞的增殖没有得到有效的抑制； 绿原酸+CTLA-4+IL-12组，JEG-3细胞的增殖得到了明显的抑制，并且抑制的程度与绿原酸 的给药量呈剂量依赖关系（表1、图1)。
[0038] 表I. IL-12、CTLA-4和绿原酸对JEG-3细胞增殖的影响
[0039]
【主权项】
1. 绿原酸在制备治疗绒毛膜癌的药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物是以CTLA-4为靶点预防和治疗 绒毛膜癌。
3. -种治疗绒毛膜癌的药物，其特征在于，其活性成分包括有效量的绿原酸。
4. 根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述的药物是以绿原酸为有效成分，加入 一种或多种药学上可接受的药用赋形剂制备而成的制剂。
5. 根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述的药物中每制剂单位含有绿原酸 1 ?IOOOmg0
6. 根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述的药物为口服制剂或注射制剂制剂。
7. 绿原酸与其他常用药物在制备治疗绒毛膜癌的联合用药物中的用途。
8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述绿原酸与其他常用药物的剂量配比 为 1:5?2:1 〇
9. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述其他学用药物为5-氟尿嘧啶、白介素 12、白介素2、γ干扰素中的一种或几种。
10. -种治疗绒毛膜癌的联合用药物，其特征在于，其活性成分包括有效量的绿原酸其 他常用药物。
【专利摘要】本发明公开了一种绿原酸在制备治疗绒毛膜癌的药物中的用途，属于生物医药领域。本发明采用绿原酸作为活性成分制成的药物，用于治疗绒毛膜癌。绿原酸本身既具有抑制肿瘤的作用，同时又对机体无害，且可以提高机体免疫力、改善机体造血功能和肝肾功能；而且绿原酸能够阻断或减轻CTLA-4对T细胞免疫活性的抑制作用，从而刺激免疫细胞的大量增殖，从而增强机体对肿瘤的免疫反应。同时通过将所述药物与其他抗肿瘤类药物联用对绒毛膜癌能够起到更为突出的抗癌效果。
【IPC分类】A61K31-216, A61P35-00
【公开号】CN104586828
【申请号】CN201510080133
【发明人】张洁, 殷蕊蕊, 黄骏, 黄望
【申请人】四川九章生物科技有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2015年2月13日