一种胡柚提取物的降糖用图
【技术领域】
[0001] 本发明属医药领域，涉及天然来源的胡柚提取物在制备降糖功能食品、保健品或 防治药物中的应用，尤其涉及胡柚提取物在糖尿病C57BL/6小鼠体内降糖的应用。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是以体内高血糖为特征的一种流行病。糖尿病分为两种：1型糖尿病(胰岛 素依赖)和2型糖尿病(非胰岛素依赖)，遗传和环境因素对于两者都有影响。糖尿病的发展 通常伴随其它代谢综合症，例如肥胖、高血脂和炎症等。在过去的几十年间，糖尿病及其并 发症的发生率显著增加，根据世界卫生组织（WHO)的数据，全世界范围内有3. 47亿糖尿病 患者。2型糖尿病占糖尿病的90%，它的发生由于胰岛素抵抗或者胰岛素分泌受损，表现为 高血糖和葡萄糖不耐受。2013年，在中国有9840万糖尿病病例（IDF)。因此，对于糖尿病 及其并发症的预防和控制项目刻不容缓。
[0003] 胡柚（CY tras CAaflg1S1Aaflefl1Si1S)是柚和酸橙的杂交后代，是浙江省衢州市常山县 特有的杂柑类良种，至今己有上百年的种植历史。其香气独特、浓郁，果实外形美观，呈鲜黄 色，富有光泽，果肉金黄色，汁液丰富，食之酸甜适中，略带苦味，食后使人觉得非常爽口。胡 柚具有清凉祛火，镇咳化痰，润喉醒酒，养颜益寿等诸多药理功效，营养价值很高。然而，关 于胡柚提取物在活体内是否具有降糖活性，未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种胡柚提取物在制备降糖药物中的应用。本发明所述的胡 柚提取物包括油胞层、白皮层和囊衣的固相萃取（SPE)粉末。
[0005] 本发明的另一个目的是提供胡柚提取物在制备降糖功能食品、保健品中的应用。 所述胡柚提取物为油胞层、白皮层和囊衣的固相萃取（SPE)粉末。
[0006] 本发明所述的胡柚提取物，通过以下方法制备获得： (1)分别称取胡柚油胞层、白皮层和囊衣冷冻干燥粉末I g，用80%丙酮20 mL (固液比 1:20)超声30 min，频率为60 kHz，功率为30 W，提取液通过减压抽滤得到澄清提取液，如 此重复3次，合并提取液，在旋转蒸发仪上蒸去丙酮，得到胡柚提取物水溶液。
[0007] (2)水溶液用固相萃取（SPE)S印-Pak?C18柱进行纯化（12cc/2g，Waters)，纯 化过程包括活化、平衡、上样、淋洗和洗脱五个步骤：Sep-Pak? C18柱首先用20 mL甲醇活 化，再用20 mL去离子水平衡，然后水溶液上样，待充分吸附后，小柱用40-80 mL去离子水 淋洗以洗去果实中的糖酸等极性物质，真空抽干后用足量的甲醇(根据洗脱颜色判断）充分 洗脱，洗脱液用真空干燥仪蒸干，分别得到粉末66. 3 mg、63. 6 mg和42. I mg，得到的粉末即 为胡柚油胞层、白皮层和囊衣SPE粉末。
[0008] 本发明发现在高脂诱导C57BL/6小鼠体内（i/7 w>〇)胡柚提取物可以显著降低糖 尿病C57BL/6小鼠的空腹血糖和血清血糖，增加葡萄糖耐量，减少胰岛素抵抗。
[0009] 本发明强调胡柚提取物这种天然产物在糖尿病防治中的最新发现。
[0010] 本发明提供一种胡柚提取物在制备降糖功能食品、保健品或防治药物中的应用。 胡柚提取物能够在糖尿病C57BL/6小鼠体内（i/? Wra)显著降低空腹血糖和血清血糖，增 加葡萄糖耐量，减少胰岛素抵抗。可作为功能食品、保健品或防治药物用于糖代谢异常相关 疾病的防治。
【附图说明】
[0011] 图1-1是以高脂饮食诱导糖尿病C57BL/6小鼠为饲喂对象，胡柚油胞层、白皮层和 囊衣SPE粉末对其葡萄糖耐量试验（OGTT)的影响。给药16周，第13周测定其葡萄糖耐量。 低脂+清水组为低脂饮食组，高脂+清水组为高脂饮食诱导糖尿病组，3个处理组剂量都为 40 mg/kg Bff, n=5-10〇
[0012] 图1-2是以高脂饮食诱导糖尿病C57BL/6小鼠为饲喂对象，胡柚油胞层、白皮层和 囊衣SPE粉末对其曲线下面积（AUC)的影响。给药16周，第13周进行OGTT试验，计算其 曲线下面积。低脂+清水组为低脂饮食组，高脂+清水组为高脂饮食诱导糖尿病组，3个处 理组剂量都为40 mg/kg BW，n=5-10。用SPSS软件进行差异显著性分析，进行Duncan多重 比较，不同的上标字母表示具差异显著性（#〇. 05)。
[0013] 图2是以高脂饮食诱导糖尿病C57BL/6小鼠为饲喂对象，胡柚油胞层、白皮层和囊 衣SPE粉末对其血清血糖的影响。给药16周，试验结束后处死小鼠取血清，测定其血清血 糖。低脂+清水组为低脂饮食组，高脂+清水组为高脂饮食诱导糖尿病组，3个处理组剂量 都为40 mg/kg BW，n=7-9。用SPSS软件进行差异显著性分析，进行Duncan多重比较，不同 的上标字母表示具差异显著性（#〇. 05)。
[0014] 图3是以高脂饮食诱导糖尿病C57BL/6小鼠为饲喂对象，胡柚油胞层、白皮层和囊 衣SPE粉末对其胰岛素抵抗评价指数（HOM-IR)的影响。给药16周，试验结束后处死小鼠取 血清，测定其血清血糖和血清胰岛素含量，计算胰岛素抵抗评价指数。低脂+清水组为低脂 饮食组，高脂+清水组为高脂饮食诱导糖尿病组，3个处理组剂量都为40 mg/kg BW，n=8-9。 用SPSS软件进行差异显著性分析，进行Duncan多重比较，不同的上标字母表示具差异显著 性（/X0· 05)。
【具体实施方式】
[0015] 本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
[0016] 实施例1胡柚提取物的制备 分别称取胡柚油胞层、白皮层和囊衣冷冻干燥粉末I g，用80%丙酮20 mL (固液比 1:20)超声30 min，频率为60 kHz，功率为30 W，提取液通过减压抽滤得到澄清提取液，如 此重复3次，合并提取液，在旋转蒸发仪上蒸去丙酮，得到胡柚提取物水溶液。
[0017] 水溶液用固相萃取（SPE) S印-Pak? C18柱进行纯化（12 cc/2 g，Waters)，纯化过 程包括活化、平衡、上样、淋洗和洗脱五个步骤：S印-Pak? C18柱首先用20 mL甲醇活化，再 用20 mL去离子水平衡，然后水溶液上样，待充分吸附后，小柱用40-80 mL去离子水淋洗以 洗去果实中的糖酸等极性物质，真空抽干后用足量的甲醇(根据洗脱颜色判断）充分洗脱， 洗脱液用真空干燥仪蒸干，分别得到粉末66. 3 mg、63. 6 mg和42. I mg，得到的粉末即为胡 柚油胞层、白皮层和囊衣SPE粉末。
[0018] 实施例2胡柚提取物的C57BL/6小鼠试验 C57BL/6小鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，饲喂的低脂饲料(含10%脂肪） 和高脂饲料(含45%脂肪）购自江苏美迪森生物医药有限公司。所有小鼠在恒温恒湿环境 下饲养，提供12 h光照12 h黑暗环境。每组10只小鼠，低脂+清水组为低脂饮食组，高 脂+清水组为高脂饮食诱导糖尿病组，3个处理组剂量都为40 mg/kg BW。所有小鼠可以自 由摄取食物和蒸馏水，处理组通过灌胃针灌胃的方式进行给药，灌胃体积为20 mL/kg BW， 低脂和高脂对照组灌胃蒸馏水。试验为期16周，1周连续给药6天，停药1天。从第11周 开始测定空腹血糖，间隔1周测定1次，测定前小鼠禁食8 h，对小鼠尾静脉剪尾取血，用 强生One Touch Ultra ZSJ 843ETT型血糖仪测定空腹血糖值。数据用平均值土标准误（ ?± SE )表示，使用SPSS软件进行数据分析，进行Duncan多重比较，不同的上标字母表示具 差异显著性(#〇. 05)。具体的3周空腹血糖测定值见表1。表1是以高脂饮食诱导糖尿病 C57BL/6小鼠为饲喂对象，胡柚油胞层、白皮层和囊衣SPE粉末对其3周空腹血糖的影响。 给药16周，第11周测定第1次空腹血糖，以后间隔1周测定一次。低脂+清水组为低脂饮 食组，高脂+清水组为高脂饮食诱导糖尿病组，3个处理组剂量都为40 mg/kg BW，n=6-10。 用SPSS软件进行差异显著性分析，进行Duncan多重比较，不同的上标字母表示具差异显著 性（/X0· 05)。
[0019]
【主权项】
1. 一种胡柚提取物在制备降糖药物中的应用，所述胡柚提取物为油胞层、白皮层和囊 衣的固相萃取粉末。
2. -种胡柚提取物在制备降糖功能食品、保健品中的应用，所述胡柚提取物为油胞层、 白皮层和囊衣的固相萃取粉末。
3. 根据权利要求1或2所述的一种胡柚提取物的应用，其特征在于，所述胡柚提取物通 过以下方法制备获得： (1) 分别称取胡柚油胞层、白皮层和囊衣冷冻干燥粉末I g，用80%丙酮20 mL，固液比 1:20,超声30 min，频率为60 kHz，功率为30 W，提取液通过减压抽滤得到澄清提取液，如此 重复3次，合并提取液，在旋转蒸发仪上蒸去丙酮，得到胡柚提取物水溶液； (2) 水溶液用固相萃取Sep-Pak? C18柱进行纯化，12 cc/2 g，水，纯化过程包括活化、 平衡、上样、淋洗和洗脱五个步骤：S印-Pak? C18柱首先用20 mL甲醇活化，再用20 mL去离 子水平衡，然后水溶液上样，待充分吸附后，小柱用40-80 mL去离子水淋洗以洗去果实中的 糖酸等极性物质，真空抽干后用足量的甲醇充分洗脱，洗脱液用真空干燥仪蒸干，分别得到 粉末66. 3 mg、63. 6 mg和42. I mg，得到的粉末即为胡柚油胞层、白皮层和囊衣SPE粉末。
【专利摘要】本发明提供一种胡柚提取物在制备降糖功能食品、保健品或降糖药物中的应用。胡柚油胞层、白皮层和囊衣提取物能够在糖尿病C57BL/6小鼠体内（in vivo）显著降低空腹血糖和血清血糖，增加葡萄糖耐量，减少胰岛素抵抗。可作为功能食品、保健品或防治药物用于糖代谢异常相关疾病的防治。
【IPC分类】A61P3-10, A23L1-29, A61K36-752
【公开号】CN104547176
【申请号】CN201510034686
【发明人】李鲜, 贾胜, 孙崇德, 陈昆松
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月23日