吡咯并[2,3d]嘧啶组合物及其应用的利记博彩app

专利名称：吡咯并[2,3d]嘧啶组合物及其应用的利记博彩app
背景技术：
腺苷是一种常见的多种生理活性调控剂，特别是在心血管和神经系统内。腺苷的作用通过特异性细胞表面受体蛋白调控。腺苷调控多种生理功能，包括镇静，舒张血管，抑制心脏心率和收缩，抑制血小板凝集，刺激糖质新生和抑制脂解。除了其对腺苷酸环化酶的作用，腺苷还可以开放钾通道，减少钙通道流量，和通过受体调控机理抑制和刺激磷酸肌醇翻转(参见例如C.E.Muller和B.Stein“腺苷受体拮抗剂结构和潜在治疗应用”，现代药物设计(Current PharmaceuticalDesign),2:501(1996)和C.E.Muller“A1-腺苷受体拮抗剂”Exp.Opin.Tlzer.Patents 7(5):419(1997))。
腺苷受体属于嘌呤受体总科，嘌呤受体总科目前细分为P1(腺苷)和P2(ATP,ADP，和其它核苷)受体。到目前为止从包括人的多个种属克隆了核苷腺苷的四个受体亚型。两个受体亚型(A1和A2a)在纳摩尔范围内对腺菅表现出亲合性，而其它两个己知亚型A2b和A3为低亲合性受体，在低-微摩尔范围内对腺苷表现出亲合性。A1和A3腺苷受体的激活可以抑制腺苷酸环化酶活性，而A2a和A2b的激活可以刺激腺苷酸环化酶。
已经研究出一些A1拮抗剂用于治疗认知疾病，肾衰竭，和心律不齐。已发现A2a拮抗剂可以治疗帕金森氏病的患者。特别是考虑到局部传递性能，腺苷受体拮抗剂可以用于治疗变应性炎症和哮喘。可获得的信息(例如，Nyce&Metzger“对于动物模型中哮喘的DNA反义治疗”自然，(1997)385:721-5)表明在该病理生理过程中A1拮抗剂可以阻断呼吸上皮细胞下平滑肌的收缩，而A2b或A3受体拮抗剂可以阻断肥大细胞脱颗粒，减少组胺以及其它炎症调控体的释放。已在整个胃肠道(特别是在结肠和肠上皮细胞中)，发现A2b受体。并已发现A2b受体调控cAMP反应(Strohmeier等，生物化学杂志(J.Bio.Chem.)(1995)270:2387-94)。
已表明腺苷受体存在于多种哺乳动物的视网膜中，包括牛、猪、猴、大鼠、豚鼠、小鼠、兔、和人(参见Blazynski等，腺苷受体在哺乳动物视网膜中的分散分布，神经化学杂志(Journal ofNeurochemistry),54卷，648-655(1990)；Woods等，牛视网膜腺苷A1受体结合位点特征，Experimental Eye Research,53卷，325-331(1991)；和Braas等，内源腺苷和视网膜神经节细胞腺苷受体，Proceedings ofthe National Academy ofScience,84卷，3906-15 3910(1987))。最近，Williams报道在培养人视网膜细胞系中观察到腺苷转运位点(Williams等，由SV-40 T抗原基因建立的培养人视网膜细胞系中的核苷转运位点，Current Eye Research,13卷，109-118(1994))。
用于调控腺苷摄取的摄取的化合物已建议作为治疗视网膜和视神经头损伤的的药物。在Shade的美国专利5,780,450中，Shade论述了用于治疗眼部疾病的腺苷摄取抑制剂的应用。Shade没有公开具体A3受体抑制剂的应用。美国专利5,780,450的整个内容在本文引用作为参考。
需要其它的腺苷受体拮抗剂作为药用，用于治疗上述参考疾病状态和/或状况。
发明概述本发明基于，至少部分基于发现某种N-6取代的7-脱氮嘌呤(如下文所描述)，其可以用于治疗对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病。这些疾病的例子包括腺苷受体活性增加的疾病，例如，支气管炎，胃肠道疾病或哮喘。这些疾病特征在于激活腺苷受体，其可以导致抑制或兴奋腺苷酸环化酶活性。本发明的组合物和方法包括对映异构或非对映异构的纯N-6取代的脱氮嘌呤。优选的N-6取代的7-脱氮嘌呤包括具有乙酰胺、氨甲酰、取代环己基(例如环己醇)、或通过烯烃链附着到N-6氮上的脲部分的化合物。
本发明涉及调控哺乳动物腺苷受体的方法，它是通过给哺乳动物治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，以调控腺苷受体的活性。适合的腺苷受体包括A1、A2或A3族。在优选的实施方案中，N-6取代7-脱氮嘌呤为腺苷受体拮抗剂。
本发明进一步涉及用于治疗哺乳动物的N-6取代7-脱氮嘌呤疾病的方法，例如哮喘，支气管炎，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺疾病，肾病，胃肠道疾病和眼病，它是通过给哺乳动物治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，以治疗哺乳动物疾病。适合的N-6取代7-脱氮嘌呤包括通式Ⅰ所式的化合物 及其药学可接受的盐。其中R1和R2分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基，或一起形成取代或未取代的杂环。R3为取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分。R4为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分。R5和R6分别独立为卤素原子，例如氯、氟或溴，氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或R4和R5或R5和R6一起形成取代或未取代的杂环或碳环。
在某个实施方案中，R1和R2可以分别独立为取代或未取代的环烷基或杂芳基烷基部分。在其它的实施方案中，R3为氢原子，或取代或未取代的杂芳基部分。在另外的实施方案中，R4、R5和R6分别独立为杂芳基部分。在一个优选的实施方案中，R1为氢原子，R2为环己醇，例如反式环己醇，R3为苯基，R4为氢原子，R5为甲基，R6为甲基。在另一个优选的实施方案中，R1为氢原子，R2为 ,R3为苯基，R4为氢原子，R5和R6为甲基。
本发明进一步涉及用于治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的药物组合物，例如哮喘，支气管炎，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺疾病，肾病，胃肠道疾病和眼病。该药物组合物包括治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤和药物可接受的载体。
本发明还进一步涉及用于治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的包装药物组合物。该包装的药物组合物包括装有治疗有效量的至少一种N-6取代7-脱氮嘌呤的容器，和使用N-6取代7-脱氮嘌呤治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的说明书。
本发明进一步涉及式Ⅰ的化合物，其中R1为氢原子；R2为取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷基，或R1和R2一起形成取代或未取代的杂环；R3为未取代或取代的芳基；R4为氢原子，和R5和R6分别独立为氢原子或烷基，以及它们药物可接受的盐。该实施方案的脱氮嘌呤可以优选为A3受体拮抗剂。这些化合物可以用于多种治疗应用，例如哮喘的治疗，与心衰有关的肾衰，和青光眼。在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为水溶性前体药物，它能够在体内代谢成活性药物，例如被酯酶催化水解。
在另一个实施方案中，本发明特征在于通过将细胞与N-6取代7-脱氮嘌呤(例如优选腺苷受体拮抗剂)接触，抑制细胞中腺苷受体(例如A3)活性的方法。
另一方面，本发明特征在于通过对动物给药治疗有效量的式Ⅰ的N-6取代7-脱氮嘌呤，治疗动物(例如人)眼损伤的方法。优选地，N-6取代7-脱氮嘌呤为动物细胞中A3腺苷受体拮抗剂。损伤为视网膜或视神经头损伤，可以是急性的或慢性的。损伤可以导致例如青光眼、浮肿、局部缺血、组织缺氧或创伤。
本发明特征还在于含有式Ⅰ的N-6取代7-脱氮嘌呤的药物组合物。优选地，药物组合物为眼药剂型(例如眼周、眼球后或眼内注射剂型，全身剂型，或外科冲洗溶液)。
在另一个实施方案中，本发明特征在于具有式Ⅱ的脱氮嘌呤 其中X为N或CR6；R1和R2分别独立为氢，或取代或未取代的烷氧基、氨基烷基、烷基、芳基、或烷基芳基，或一起形成取代或未取代的杂环，条件是R1和R2不同时为氢；R3为取代或未取代的烷基、芳基烷基、或芳基；R4为氢，或取代或未取代的C1-C6烷基；L为为氢，取代或未取代的烷基，或R4和L一起形成取代或未取代的杂环或碳环；R6为氢，取代或未取代的烷基，或卤素；Q为CH2,O,S，或NR7，其中R7为氢，或取代或未取代的C1-C6烷基；和W为未取代或取代的烷基，环烷基，芳基，芳基烷基，二芳基，杂芳基，取代羰基，取代硫代羰基，或取代磺酰基；条件是如果R3为吡咯烷基，R4不为甲基。本发明还涉及本发明化合物药物可接受的盐和前体药物。
在优选实施方案中，在式Ⅱ中X为CR6,Q为CH2,O,S，或NH，其中R6如上所定义。
在式Ⅱ的另一个优选实施方案中，X为N。
本发明进一步涉及通过将细胞与本发明的化合物接触，抑制腺苷受体(例如A2b腺苷受体)活性的方法。化合物优选受体拮抗剂。
本发明还涉及通过对动物给药治疗有效量的式Ⅱ化合物，治疗动物胃肠道疾病(例如腹泻)或呼吸疾病(例如过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺疾病)的方法。动物优选为人。发明详述现在更具体地描述本发明的特征和其它细节，并在权利要求中指出。应认为本发明的具体实施方案是为了说明本发明，而不是为了限制本发明。可以在多个实施方案中应用本发明的原则特征，而不偏离本发明的范围。
本发明涉及治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的方法。该方法包括对哺乳动物给药治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，如下所描述，以治疗哺乳动物的对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病。
术语“对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病”是包括特征在于对应用下文所述本发明N-6取代7-脱氮嘌呤治疗(例如包括应用本发明的N-6取代7-脱氮嘌呤明显消除至少一种症状或症状的治疗)有反应的疾病状态或状况。这些典型症状与宿主内腺苷增加有关，使宿主通常出现一些生理特征，包括但不限于毒素的释放，炎症，昏迷，水潴留，体重增加或体重减少，胰腺炎，肺气肿，风湿性关节炎，骨关节炎，多个器官衰竭，新生儿和成年呼吸窘迫综合症，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺病，眼病，胃肠道疾病，皮肤肿瘤增生，免疫缺陷，哮喘(参见例如C.E.Muller和B.Stein“腺苷受体拮抗剂结构和潜在治疗应用”，现代药物设计(Current Pharmaceutical Design),2:501(1996)和C.E.Muller“A1-腺苷受体拮抗剂”Exp.Opin.Ther.Patents 7(5):4 19(1997)，和I.Feoktistove,B..Polosa,S.T.Holgate和I.Biaggioni“腺苷A2B受体哮喘中新型治疗目标 ”TiPS 19；148(1998))。其效果通常与以下症状有关，包括但不限于发烧，气喘，恶心，腹泻，虚弱，头痛，甚至死亡。在一个实施方案中，对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病包括通过刺激腺苷受体(例如A1.A2a,A2b,A3等)，以调节细胞中钙浓度和/或PLC(磷酯酶C)活性，来调控的那些疾病。在一个优选的实施方案中，对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病与一个或多个腺苷受体有关，例如，N-6取代7-脱氮嘌呤作为拮抗剂。通过本发明的化合物治疗的反应疾病合适实例，例如为调控生理作用的腺苷受体亚型，包括中枢神经系统(CNS)作用，心血管作用，肾作用，呼吸作用，免疫作用，胃肠道作用和新陈代谢作用。腺苷的相对量与下列作用有关，即腺苷的水平增加可以引发一些作用，例如不期望的生理反应如哮喘发作。
CNS作用包括递质释放减少(A1)，镇静(A1)，运动活性降低(A2a)，抗惊厥活性，刺激化学感应器(A2)，和痛觉过敏。本发明化合物的治疗应用包括治疗痴呆，早老性痴呆和增加记忆力。
心血管作用包括血管舒张(A2a)，(A2b)和(A3)，血管收缩(A1)，心搏徐缓(A1)，血小板抑制(A2a)，负心脏变力和变导(A1)，心律不齐，心动过速，和血管生成。本发明化合物的治疗应用包括，例如防止心脏局部缺血诱导的损伤，保护心肌组织，和恢复心功能。
肾作用包括降低GFR(A1)，系肾小球膜细胞收缩(A1)，抑制尿分泌(A1)和抑制肾素释放(A1)。本发明化合物适合的治疗应用包括将本发明化合物用作利尿药，促尿钠排泄药，保钾药，肾保护药/防止急性肾衰药，抗高血压药，抗水肿药，和抗肾炎药。
呼吸作用包括支气管扩张(A2)，支气管狭窄(A1)，慢性阻塞性肺病，过敏性鼻炎，粘液分泌，呼吸抑制(A2)。本发明化合物适合的治疗应用包括抗哮喘应用，移植和呼吸疾病后的肺疾病治疗。
免疫作用包括抑制免疫反应(A2)，嗜中性粒细胞趋药性(A1)，嗜中性粒细胞产生超氧化物(A2a)，和肥大细胞脱颗粒(A2b和A3)。拮抗剂的治疗应用包括过敏性和非过敏性炎症，例如组胺和其它炎症调控剂的释放。
胃肠道作用包括抑制酸分泌(A1)。治疗应用可以包括反流和溃疡。胃肠道作用还包括慢性肠道和腹泻疾病，例如，与炎症有关的腹泻疾病(A2b)。
眼部疾病包括视网膜和视神经头损伤，和创伤相关的疾病(A3)。在一个优选实施方案中，眼病为青光眼。
本发明化合物其它治疗作用包括肥胖的治疗(分解脂肪的性质)，高血压，抑郁的治疗，镇静，抗焦虑，作为antileptics和轻泻排便药，不引起腹泻的运动作用。
术语“疾病状态”是指包括由不需要的腺苷水平、腺苷酰环化酶活性以及与腺苷受体异常兴奋和或cAMP增加相关的生理活性增加引起的或与其相关的疾病。在一个实施方案中，疾病状态是指例如哮喘，慢性阻塞性肺病，过敏性鼻炎，支气管炎，肾脏疾病，胃肠道疾病，眼部疾病。其它的例子包括慢性支气管炎和囊肿性纤维化。炎症疾病的适合例子包括非淋巴细胞性白血病，心肌缺血，绞痛，梗塞形成，脑血管缺血，间歇性跛行，肢体缺血，静脉高血压，曲张静脉，静脉溃疡和动脉硬化。损伤性多次灌注疾病包括例如任何手术后损伤，如整形外科，血栓溶解或血管成形术。
术语“对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的治疗”或“治疗对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病”是指包括改变疾病状态或状况，如上所述，使哺乳动物的生理症状可以明显消除或减少。该术语还包括控制、预防或抑制生理症状或与腺苷量异常有关的相关的作用。在一个优选的实施方案中，控制疾病状态或状况是指使疾病状态或状况根除。在另一个优选的实施方案中，进行选择控制，使腺苷受体的异常水平得到控制，同时不影响其它生理系统和参数。
术语“N-6取代7-脱氮嘌呤”是本领域认可的，是指包括具有式Ⅰ的化合物 “N-6取代7-脱氮嘌呤”包括其药物可接受的盐，在一个实施方案中，还包括某些本文描述的N-6取代嘌呤。
在某个实施方案中，N-6取代7-脱氮嘌呤不是N-6苯甲基或N-6苯乙基取代。在其它的实施方案中，R4不为苯甲基或苯乙基取代。在优选的实施方案中，R1和R2都为氢原子。在其它的优选实施方案中，R3不为氢原子。
术语N-6取代7-脱氮嘌呤的“治疗有效量”，如下文所描述，是指哺乳动物必须或足以达到所需功能(例如治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病或疾病状态)所需要治疗化合物的量。治疗化合物的有效量可以按照某些因素改变，如哺乳动物中已存在的病原体的量，年龄，性别，和哺乳动物体重，和本发明治疗化合物对哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的作用能力。本领域普通技术人员能够研究上述因素，不需进行不适当试验可以确定治疗化合物的有效量。体内或体外检测也可以用于确定下文所述治疗化合物的“有效量”。本领域普通技术人员可以选择治疗化合物的适当量，用于上述检测或进行治疗。
治疗有效量优选消除与对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病相关的至少一种症状或作用的至少大约20％(更优选至少40％，更优选至少60％，更加优选至少80％，与未治疗时相比)。本领域技术人员可以设计检测以确定这些症状和/或作用的消除。本发明这部分包括能够测定这些参数的任何本领域公知的技术。例如，如果要治疗的疾病为哮喘，可以利用本领域公知技术测定患者治疗前后消耗空气量，以测定体积的增加。同样，如果要治疗的疾病为炎症，可以利用本领域公知技术测定治疗前后的发炎面积，以测定消除的发炎面积。
术语“细胞”包括原核和真核细胞。
术语“动物”包括具有腺苷受体的任何生物体，或任何对对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病敏感的生物体。动物的例子包括酵母菌，哺乳动物，爬行动物，鸟类。还包括转基因动物。
术语“哺乳动物”是指本领域公知的，包括动物，优选为热血动物，更优选为牛、羊、猪、马、狗、猫、大鼠、小鼠、和人。本发明的该部分包括对对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病(炎症，肺气肿，哮喘，中枢神经系统疾病，或急性呼吸窘迫综合征)敏感的哺乳动物。
另一方面，本发明涉及调控哺乳动物一种或多种腺苷受体的方法，它是通过对哺乳动物给药治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，以调控腺苷受体的活性。适合的腺苷受体包括A1、A2或A3族。在一个优选的实施方案中，N-6取代7-脱氮嘌呤为腺苷受体拮抗剂。
术语“调控腺苷受体”是指包括化合物与一种或多种腺苷受体相互作用，引起与腺苷受体相关的增加、减少或非正常生理活性，或调控腺苷受体引起随后的级联效应的那些例子。与腺苷受体相关的生理活性包括诱导镇静，血管舒张，抑制心脏速率和收缩，抑制血小板凝结，刺激糖质新生，抑制脂解，打开钾通道，减少钙通道流量等。
术语“调控”是指包括预防、根除或抑制与腺苷受体非正常兴奋相关的不期望的生理活性增加，例如本发明治疗方法的内容。在另一个实施方案中，术语调控包括拮抗作用，例如消除活性或产生过敏或过敏性炎症(导致过渡刺激腺苷受体)的调控体。例如，本发明的治疗性脱氮嘌呤可以与腺苷受体相互作用，以抑制例如腺苷酸环化酶活性。
术语“以腺苷受体活性异常为特征的疾病”是指包括与腺苷受体异常兴奋相关的那些疾病或病症，因为受体的兴奋导致与疾病或病症直接或间接相关的生物化学和/或生理反应链。这些腺苷受体的兴奋不会单独引起疾病或病症，但只是引起需治疗的一些疾病或病症相关的典型症状。受体的异常兴奋可以是与需治疗疾病相关的单独一种因素或至少一种其中之一的因素。疾病的例子包括前面列出的那些疾病，包括炎症，胃肠道疾病和腺苷受体活性增加引起的症状。优选的例子包括与哮喘，过敏性鼻炎，慢性阻塞性肺病，肺气肿，支气管炎，胃肠道疾病和青光眼。
术语“治疗或以腺苷受体活性异常为特征疾病的治疗”是指包括缓和或消除与疾病相关的至少一种典型症状。治疗还包括缓和或消除多于一种症状。优选地，治疗，例如，基本上消除与疾病相关的症状。
本发明涉及具有式Ⅰ结构的N-6取代7-脱氮嘌呤化合物 其中R1和R2分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或一起形成取代或未取代的杂环；R3为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；R4为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分。R5和R6分别独立为卤素原子，例如氯、氟或溴，氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或R4和R5或R5和R6一起形成取代或未取代的杂环或碳环。还包括N-6取代7-脱氮嘌呤药物可接受的盐。
在某些实施方案中，R1和R2可以分别独立为取代或未取代的环烷基或杂芳基烷基部分。在其它的实施方案中，R3为氢原子，或取代或未取代的杂芳基部分。在另外的实施方案中，R4、R5和R6分别独立为杂芳基部分。
在一个优选的实施方案中，R1为氢原子，R2为取代或未取代的环己烷，环戊基，环丁基或环丙基部分，R3为取代或未取代的苯基部分，R4为氢原子，R5和R6都为甲基。分别独立为在另一个实施方案中，R2为环己醇，环己二醇，环己基磺酰胺，环己酰胺，环己酯，环己烯，环戊醇，或环戊二醇，R3为苯基部分。
在另一个实施方案中，R1为氢原子，R2为环己醇，R3为取代或未取代的苯基，吡啶，呋喃，环戊烷，噻吩部分，R4为氢原子，取代烷基、芳基、烷基芳基部分，R5和R6分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、烷基芳基部分。
在另一个实施方案中，R1为氢原子，R2为取代或未取代的烷基胺，芳基胺，或烷基芳基胺，取代或未取代的烷基酰胺，芳基酰胺，或烷基芳基酰胺，取代或未取代的烷基磺酰胺，芳基磺酰胺，或烷基芳基磺酰胺，取代或未取代的烷基脲，芳基脲，或烷基芳基脲，取代或未取代的烷基氨基甲酸盐，芳基氨基甲酸盐，或烷基芳基氨基甲酸盐，取代或未取代的羧酸，芳基羧酸，或烷基芳基羧酸，R3为取代或未取代的苯基部分，R4为氢原子，R5和R6为甲基。
在另一个实施方案中，R2为胍，修饰的胍，氰基胍，硫脲，硫酰胺，或脒。
在一个实施方案中，R2可以为 ，其中R2a-R2c分别独立为氢原子，或饱和或未饱和烷基，芳基，或烷基芳基部分，R2d为氢原子，或饱和或未饱和烷基，芳基，或烷基芳基部分，NR2eR2f或OR2g，其中R2e-R2g分别独立为氢原子，或饱和或未饱和烷基，芳基，或烷基芳基部分。或者，R2a和R2b可以一起形成大约3-8元的碳环或杂环，例如，环丙基，环戊基，环己基。
在本发明另一方面，R5和R6不都是甲基，优选地，R5和R6中一个是烷基，例如甲基，另一个为氢原子。
在本发明另一方面，当R4为1-苯基乙基和R1为氢原子时，R3不为苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，4-氯苯基，3，4-二氯苯基，3-甲氧基苯基，或4-甲氧基苯基，或当R4和R1为1-苯基乙基时，R3不为氢原子，当R4为氢原子和R3为苯基时，R1不为苯基乙基。
在本发明另一方面，当R5和R6一起形成碳环，例如 ，嘧啶并[4,5-6]吲哚，R3不为苯基，当R4为1-(4-甲基苯基)乙基，苯基异丙基，苯基，或1-苯基乙基，或当R4为1-苯基乙基时R3不为氢原子时。R5和R6一起形成的碳环可以是芳香环或脂肪环，可以具有4-12个碳原子，例如萘基，苯基环己基等，优选具有5-7个碳原子，例如环戊基或环己基。或者，R5和R6可以一起形成杂环，如下面公开的那些。典型的杂环包括4-12个碳原子，优选5-7个碳原子，可以为芳香环或脂肪环。杂环可以进一步被取代，包括具有一个或多个杂原子的环结构的一个或多个碳原子取代。
在本发明另一方面，R1和R2一起形成杂环，有代表性的例子包括，但不限于下面列出的杂环，如吗啉基，哌嗪等，例如4-羟基哌啶，4-氨基哌啶。其中R1和R2一起形成哌嗪代基团， ，R7可以为氢原子，或取代或未取代的烷基，芳基，或烷基芳基部分。
在本发明另一方面，R4和R5可以一起形成杂环，例如 。杂环可以是芳香环或脂肪环，可以具有4-12个碳原子，例如萘基，苯基环己基等，可以是芳香环或脂肪环，例如环戊基或环己基。杂环可以进一步被取代，包括具有一个或多个杂原子的碳环结构的碳原子取代。或者，R4和R5一起形成杂环，如下所公开。
在某些实施方案中，N-6取代7-脱氮嘌呤不为N-6苄基或N-6苯乙基取代。在其它的实施方案中，R4不为苄基或苯乙基取代。在优选的实施方案中，R1和R2不都为氢原子。在其它的优选实施方案中，R3不为氢原子。
本发明的化合物包括在体内代谢成活性药物的前体药物，例如通过酯酶催化的水解。可能成为前体药物的例子包括脱氮嘌呤，例如R2为被-OC(O)(Z)NH2取代的环烷基，其中Z为天然或非天然存在的氨基酸侧链，或它们的类似物，α、β、γ或ω氨基酸，或二肽。优选的氨基酸侧链包括甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，α-甲基丙氨酸，氨基环丙烷羧酸，铃兰氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，丙氨酸-丙氨酸，甘氨酸-丙氨酸。
在进一步实施方案中，本发明进一步涉及式Ⅰ的化合物，其中R1为氢原子；R2为取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷基，或R1和R2一起形成取代或未取代的杂环；R3为未取代或取代的芳基；R4为氢原子，和R5和R6分别独立为氢原子或烷基，以及它们药物可接受的盐。该实施方案的脱氮嘌呤可能为A3受体拮抗剂。
在一个实施方案中，R2为取代(例如羟基取代)或未取代的环烷基。在一个优选的附属实施方案中，R1和R4为氢原子，R3为未取代或取代的苯基，R5和R6分别为烷基。优选R2为单羟基环戊基或单羟基环己基。R2还可以被NH-C(=O)E取代，其中E为取代或未取代的C1-C4烷基(例如，烷基胺，如乙基胺)R1和R2还可以一起形成取代或未取代的杂环，其可以被胺或乙酰氨基取代。
另一方面，R2可以为A-NHC(=O)B，其中A为取代或未取代的C1-C4烷基(例如，乙基、丙基、丁基)，B为取代或未取代的C1-C4烷基(例如，甲基，氨基烷基，例如氨基甲基或氨基乙基，烷基氨基，例如甲基氨基，乙基氨基)，优选R1和R4为氢原子，R3为未取代或取代的苯基，R5和R6分别为烷基。B可以为取代或未取代的环烷基，例如环丙基或1-氨基-环丙基。
在另一个实施方案中，当R5和R6分别为烷基时，R3可以优选为未取代或取代的苯基。优选地，R3可以具有一个或多个取代基(例如，o-，m-或p-氯苯基，o-,m-或p-氟苯基)。
优选地，当R5和R6分别为烷基时，R3可以优选为取代或未取代的杂芳基。杂芳基的例子包括吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，吡咯基，三唑基，硫唑基，噁唑基，噁二唑基，呋喃基，亚甲基二氧苯基，和硫代苯基。优选R3为2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，3-嘧啶基。
优选在一个实施方案中，R5和R6分别为氢，在另一个实施方案中，R5和R6分别为甲基。
在一个特别优选的实施方案中，本发明的脱氮嘌呤为在体内可以代谢成活性药物的水溶性前体药物，例如通过酯酶催化水解。优选前体药物含有R2基团，其为被-OC(O)(Z)NH2取代的环烷基，其中Z为天然或非天然氨基酸侧链，或它们的类似物，α、β、γ或ω氨基酸，或二肽。优选的氨基酸侧链包括甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，α-甲基丙氨酸，氨基环丙烷羧酸，铃兰氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，丙氨酸-丙氨酸，甘氨酸-丙氨酸。
在具体地优选实施方案中，Z为甘氨酸侧链，R2为环己基，R3为苯基，R5和R6为甲基。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(顺-3-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(顺-3-(2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶三氟乙酸盐。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(3-乙酰氨基)哌啶基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-N’-甲脲丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-N’-甲脲丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(反-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(反-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，脱氮嘌呤为4-(反-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在另一个实施方案中，本发明特征在于通过将细狖与N-6取代7-脱氮嘌呤(例如优选腺苷受体拮抗剂)接触，抑制细胞中腺苷受体活性的方法(例如，A1,A2A,A2B，或优选A3)。
另一方面，本发明特征在于通过对动物给药治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，治疗动物(例如人)眼部损伤的方法。优选地，N-6取代7-脱氮嘌呤为动物细胞中A3腺苷受体拮抗剂。损伤为视网膜或视神经头损伤，可以是急性的或慢性的。损伤可以导致例如青光眼，水肿，局部缺血，组织缺氧或外伤。
在一个优选实施方案中，本发明特征在于具有上述式Ⅱ结构的脱氮嘌呤，其中X为N或CR6；R1和R2分别独立为氢，或取代或未取代的烷氧基、氨基烷基、烷基、芳基、或烷基芳基，或一起形成取代或未取代的杂环，条件是R1和R2不同时为氢；R3为取代或未取代的烷基、芳基烷基、或芳基；R4为氢，或取代或未取代的C1-C6烷基；L为为氢，取代或未取代的烷基，或R4和L一起形成取代或未取代的杂环或碳环；R6为氢，取代或未取代的烷基，或卤素；Q为CH2,O,S，或NR7，其中R7为氢，或取代或未取代的C1-C6烷基；和W为未取代或取代的烷基，环烷基，炔基，芳基，芳基烷基，二芳基，杂芳基，取代羰基，取代硫代羰基，或取代磺酰基，条件是如果R3为吡咯烷基，R4不为甲基。
在一个实施方案中，在式Ⅱ化合物中X为CR6,Q为CH2,O,S，或NH，在另一个优选实施方案中，X为N。
在式Ⅱ化合物的进一步实施方案中，W为取代或未取代的芳基，5-或6-元杂芳基或二芳基。W可以被一个或多个取代基取代。取代基的例子包括卤素，羟基，烷氧基，氨基，氨基烷基，氨基羧酰胺，CN,CF3,CO2R8,CONHR8,CONR8R9,SOR8,SO2R8，和SO2NR8R9，其中R8和R9分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基。优选地，W可以为取代或未取代的苯基，例如亚甲基二氧苯基。W还可以为取代或未取代的5-元杂环，例如吡咯，吡唑，噁唑，咪唑，三唑，四唑，呋喃，噻吩，噻唑和噁二唑。优选地，W可以为6-元杂环，例如吡啶，嘧啶，哒嗪，吡嗪，和硫代苯基。在一个优选实施方案中，W为2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，或5-嘧啶基。
在式Ⅱ化合物的一个优选实施方案中，Q为NH,W为3-吡唑，它可以是未取代的，或被取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基进行N-取代。
在式Ⅱ化合物的另一个优选实施方案中，Q为氧，W为2-噻唑环，它可以是未取代的，或被取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基取代。
在式Ⅱ化合物的另一个实施方案中，W为取代或未取代的烷基，环烷基，例如环戊基，或芳基烷基。取代基的例子包括卤素，羟基，取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，芳基烷基或NHR10，其中R10为氢，或取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基。
在另一个实施方案中，本发明特征在于式Ⅱ的脱氮嘌呤，其中W为-(CH2)a-C(=O)Y或(CH2)a-C(=S)Y,a为0-3的整数，Y为芳基，烷基，芳基烷基，环烷基，杂芳基，炔基，NHR11R12，或者，先决条件是Q为NH,OR13，其中R11,R12，和R13分别独立为氢，或未取代或取代的烷基，芳基，芳基烷基，或环烷基。优选地，Y为5-或6-元杂芳环。
并且，W可以为-(CH2)b-S(O)jY，其中j为1或2,b为0,1,2，或3,Y为芳基，烷基，芳基烷基，环烷基，炔基，杂芳基，NHR14R15，先决条件是b为1，Q为CH2，其中R14,R15，和R16分别独立为氢，或未取代或取代的烷基，芳基，芳基烷基，或环烷基。
在另一个实施方案中，R3选自取代或未取代的苯基，吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，吡咯基，三唑基，硫唑基，噁唑基，噁二唑基，吡唑基，呋喃基，亚甲基二氧苯基，和硫代苯基。当R3为苯基，它可以被例如羟基、烷氧基(例如甲氧基)、烷基(例如甲苯基)、卤素(例如邻、间、对氟苯基，或邻、间、对氯苯基)取代。优选地，R3可以为2-、3-、或4-吡啶基，或2-或3-嘧啶基。
本发明还涉及脱氮嘌呤，其中R6为氢或C1-C3烷基，优选R6为氢。
本发明包括脱氮嘌呤，其中R1为氢，R2为取代或未取代的烷基或烷氧基，取代或未取代的烷基胺，芳基胺，或烷芳基胺，取代或未取代的氨基烷基，氨基芳基或氨基烷基芳基，取代或未取代的烷基酰胺，芳基酰胺，或烷基芳基酰胺，取代或未取代的烷基磺酰胺，芳基磺酰胺，或烷基芳基磺酰胺，取代或未取代的烷基脲，芳基脲，或烷基芳基脲，取代或未取代的烷基氨基甲酸酯，芳基氨基甲酸酯，或烷基芳基氨基甲酸酯，或取代或未取代的烷基羧酸，芳基羧酸，或烷基芳基羧酸。优选地，R2为取代或未取代的环烷基，例如单或双羟基取代的环己基或环戊基(优选单羟基取代环己基或单羟基取代环戊基)。
优选地，R2可以为下式结构 其中A为C1-C6烷基，C3-C7环烷基，1-7个原子的链，3-7个原子的环，任选被C1-C6烷基，卤素，羟基，羧基，硫醇，或氨基取代；B为甲基，N(Me)2,N(Et)2,NHMe,NHEt,(CH2)rNH3+,NH(CH2)rCH3,(CH2)rNH2,(CH2)rCHCH3NH2,(CH2)rNHMe,(CH2)rOH,CH2CN,(CH2)mCO2H,CHR18R19，或CHMeOH，其中r为0-2的整数，m为1或2,R18为烷基，R19为NH3+或CO2H，或R18和R19一起形成 其中p为2或3；和R17为C1-C6烷基，C3-C7环烷基，1-7个原子的链，3-7个原子的环，任选被C1-C6烷基，卤素，羟基，羧基，硫醇，或氨基取代。
优选地，A为未取代或取代的C1-C6烷基。B可以为未取代或取代的C1-C6烷基。
在一个优选的实施方案中，R2为式-A-NHC(=O)B。在一个特别优选的实施方案中，A为-CH2CH2-和B为甲基。
本发明的化合物可以包括在体内可以代谢成活性药物的水溶性前体药物，例如通过酯酶催化水解。可能的前体药物包括脱氮嘌呤(例如R2为被-OC(O)(Z)NH2取代的环烷基)，其中Z为天然或非天然氨基酸侧链，或它们的类似物，α、β、γ或ω氨基酸，或二肽。优选的氨基酸侧链包括甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，α-甲基丙氨酸，氨基环丙烷羧酸，铃兰氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，丙氨酸-丙氨酸，甘氨酸-丙氨酸。
在另一个实施方案中，R1和R2一起为 其中n为1或2，其中环可以任选被一个或多个羟基，氨基，硫醇，羧基，卤素，CH2OH,CH2NHC(=O)烷基或CH2NHC(=O)NH烷基取代。优选地，n为1或2，所述的环被-NHC(=O)烷基取代。
在一个优选的实施方案中，R1为氢，R2为取代或未取代的C1-C6烷基，R3为取代或未取代的苯基，R4为氢，L为氢或取代或未取代的C1-C6烷基，Q为O,S或NR7，其中R7为氢或取代或未取代的C1-C6烷基，W为取代或未取代的芳基。优选地，R2为-A-NHC(=O)B，其中A和B分别独立为取代或未取代的C1-C4芳基。例如，A可以为CH2CH2。B例如可以为烷基(例如甲基)，或氨基烷基(例如氨基甲基)。优选地，R3为取代的苯基，L为氢。R6可以为甲基，或优选为氢。优选地，Q为O,S或NR7，其中R7为氢或取代或未取代的C1-C6烷基，例如甲基。W为未取代或取代的苯基(例如烷氧基，卤素取代)。优选地，W为对氟苯基，对氯苯基或对甲氧苯基。W还可以为杂芳基，例如，2-吡啶基。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(2-吡啶氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
在一个特别优选的实施方案中，脱氮嘌呤为4-(2-N’-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
本发明还涉及通过将细胞与本发明的化合物接触，抑制细胞中腺苷受体(例如A2b腺苷受体)活性的方法。
本发明还涉及通过对动物给药治疗有效量的本发明化合物(例如A2b拮抗剂)，治疗动物胃肠道疾病的方法。优选地，动物为人。
在另一个实施方案中，本发明涉及含有本发明的N-6取代7-脱氮嘌呤和药物可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的方法，它是通过对哺乳动物给药治疗有效量的本发明的脱氮嘌呤，对动物进行对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的治疗。优选地，疾病状态可以是腺苷调控的疾病。疾病状态的优选例子包括中枢神经系统疾病，心血管疾病，肾病，炎性疾病，过敏性疾病，胃肠道疾病，眼部疾病，和呼吸疾病。
术语“烷基”指饱和脂肪族基团，包括直链烷基，支链烷基，环烷基(脂环族)，烷基取代的环烷基，和环烷基取代的烷基。术语烷基进一步包括烷基基团，它进一步包括氧、氮、硫、或磷原子取代烃骨架的一个或多个碳原子，例如，氧、氮、硫、或磷原子。在优选的实施方案中，直链或支链烷在其骨架中具有30个或更少的碳原子(例如C3-C30直链，C3-C30支链)，更优选20个或更少的碳原子。同样，优选的环烷基在其环结构中具有4-10个碳原子，更优选在其环结构中具有5、6或7个碳原子。
并且，在整个说明书和权利要求中使用的术语烷基是指包括“未取代的烷基”和“取代的烷基”，其后者指烃骨架一个或更多碳原子上氢被取代的取代基的烷基部分。这些取代基可以包括，例如，卤素，羟基，烷基羰氧基，芳基羰氧基，烷氧基羰氧基，芳氧基羰氧基，羧酸酯，烷基羰基，烷氧基羰基，氨基羰基，烷基硫代羰基，烷氧基，磷酸酯，膦酸酯(phosphonato)，次膦酸酯(phosphinato)，氰基，氨基(包括烷基氨基，二烷基氨基，芳基氨基，二芳基氨基，和烷基芳基氨基)，酰氨基(包括烷基酰氨基，芳基酰氨基，氨基甲酰和脲基)，脒基，亚氨基，巯基，烷基硫代，芳基硫代，硫代羧酸酯，硫酸酯，磺酸酯，氨磺酰，亚磺酰氨基，硝基，三氟甲基，氰基，重氮基，杂环基，烷基芳基，或芳基或杂芳基部分。本领域技术人员应可以理解，如果适当，烃链上取代基部分本身可以被取代。环烷基可以进一步被例如上述的取代基取代。“烷基芳基”指被芳基取代的烷基(例如，苯基甲基(苄基))。术语“烷基”还包括类似长度的不饱和基团，其可以被上述的烷基取代，但其分别含有至少一个双键或三键。
在本文中使用的术语“芳基”指芳基基团，包括5-和6-元单环芳基，其可以0-4个杂原子，例如，苯，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，苯并噁唑，苯并噻唑，三唑，四唑，吡唑，吡啶，吡嗪，哒嗪和嘧啶等。芳基还包括多环稠合芳基，如萘基，喹啉基，吲哚等。环中具有杂原子的芳基还可以被称为“芳杂环”，“杂芳基”或“杂芳族化合物”。在一个或更多位置上，芳环可以被上述取代基取代，例如卤素，羟基，烷氧基，烷基羰氧基，芳基羰氧基，烷氧基羰氧基，芳氧基羰氧基，羧酸酯，烷基羰基，烷氧基羰基，氨基羰基，烷基硫代羰基，磷酸酯，膦酸酯(phosphonato)，次膦酸酯(phosphinato)，氰基，氨基(包括烷基氨基，二烷基氨基，芳基氨基，二芳基氨基，和烷基芳基氨基)，酰氨基(包括烷基酰氨基，芳基酰氨基，氨基甲酰和脲基)，脒基，亚氨基，巯基，烷基硫代，芳基硫代，硫代羧酸酯，硫酸酯，磺酸酯，氨磺酰，亚磺酰氨基，硝基，三氟甲基，氰基，重氮基，杂环基，烷基芳基，或芳基或杂芳基部分。芳基还可以与不是芳环的脂环或杂环稠合或桥接，以形成多环(例如四氢化萘)。
术语“烯基”和“炔基”指长度类似的不饱和脂肪族基团，可能被上述烷基取代，但其含有至少一个双键或三键。例如，本发明包括氰基和炔丙基。
除非另外规定碳原子数量，本文中使用的“低级烷基”是指如上所述的烷基基团，但具有1-10个碳原子，在其骨架结构中更优选有1-6个碳原子，在其骨架结构中更加优选有1-3个碳原子。同样，“低级烯基”和“低级炔基”具有类似长度的链。
术语“烷氧基烷基”、“多氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”指如上所述的烷基，其进一步包括氧、氮或硫原子取代烃骨架上的一个或多个碳原子，例如氧、氮或硫原子。
术语“多环”或“多环基团”指两个或更多个环的基团(例如环烷基，环烯基，环炔基，芳基和/或杂环)，其中两个或更多个碳连接成相邻的环，例如环为“稠环”。通过非相邻原子连接的环称为“桥”环。多环中的每一个环可以被上述的取代基取代，例如卤素，羟基，烷基羰氧基，芳基羰氧基，烷氧基羰氧基，芳氧基羰氧基，羧酸酯，烷基羰基，烷氧基羰基，氨基羰基，烷基硫代羰基，烷氧基，磷酸酯，膦酸酯(phosphonato)，次膦酸酯(phosphinato)，氰基，氨基(包括烷基氨基，二烷基氨基，芳基氨基，二芳基氨基，和烷基芳基氨基)，酰氨基(包括烷基酰氨基，芳基酰氨基，氨基甲酰和脲基)，脒基，亚氨基，巯基，烷基硫代，芳基硫代，硫代羧酸酯，硫酸酯，磺酸酯，氨磺酰，亚磺酰氨基，硝基，三氟甲基，氰基，重氮基，杂环基，烷基芳基，或芳基或杂芳基部分。
本文中使用的“杂原子”指除了碳或氢以外的任何元素。优选的杂原子为氮、氧、硫和磷。
术语“氨基酸”蛋白质中发现的天然或非天然存在的氨基酸，如甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，半胱氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，蛋氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，赖氨酸，精氨酸，脯氨酸，组氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，和色氨酸。氨基酸类似物包括具有加长或变短侧链的氨基酸，或具有适当功能基团的不同侧链。当氨基酸的结构允许立体异构型时，氨基酸还包括D和L立体异构体。术语“二肽”包括两个或多个氨基酸连接在一起。优选地，二肽两个氨基酸通过肽键连接。具体地，二肽包括例如丙氨酸-丙氨酸和甘氨酸-丙氨酸。
注意到本发明的一些化合物结构包括不对称碳原子。因此应该理解来自这些不对称的异构体(例如所有的对映异构体和非对映异构体)包括在本发明范围内，除非另有说明。通过常规的分离技术和通过用立体化学方法控制合成，可以基本上获得这些异构体的纯型。
本发明进一步涉及用于治疗动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的药物组合物，例如呼吸疾病(例如哮喘，支气管炎，慢性阻塞性肺病，过敏性鼻炎)，肾病，胃肠道疾病，和眼部疾病。药物组合物包括如上所述治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，和药物可接受的载体。应该理解上述所有的脱氮嘌呤包括在治疗范围内。进一步可以理解本发明的脱氮嘌呤可以单独应用，或与本发明的其它脱氮嘌呤组合应用，或与其它的治疗化合物组合应用，例如抗生素，抗炎药，或抗癌药。
术语“抗生素”是本领域公知的那些，包括微生物生长制备的那些物质和它们的合成衍生物，其可以消除或抑制病原体的生长，对病原体具有选择性毒性，对宿主患者产生最少的或没有有害效果。抗生素适合的例子包括，但不限于氨基糖甙类，头孢菌素，氯霉素，褐霉酸(fuscidic acids)，大环内酯类，青霉素，polymixins，四环素，和链霉素。
术语“抗炎药”是本领域公知的那些，包括作用于身体机理的那些药物，不直接拮抗炎症成因的药物，如糖皮质激素，阿司匹林，布洛芬，NSAIDS等。
术语“抗癌药”是本领域公知的那些，包括那些减少、根除或防止癌细胞生长的药物，优选不相反地影响其它生理功能。有代表性的例子包括顺铂和环磷酰胺。
当本发明的化合物作为药物给人或哺乳动物给药时，它们可以单独给药，或以含有0.1-99.5％(更优选0.5-90％)的活性成分组合以药物可接受的载体的药物组合物形式给药。
本文使用的术语“药物可接受的载体”是指药物可接受的材料、组分或载体，如液体或固体填充剂，稀释剂，赋型剂，溶剂或装胶囊材料，涉及将本发明的一种或多种化合物运送或传送到患者体内，使其可以发挥其预期的疗效。典型地，这些化合物从身体的一个器官或部分运送或传送到身体的另一个器官或部分。每个载体必须是“可接受的”是指和制剂的其它成分相容，并对患者无害。可以作为药物可接受载体的材料的一些例子包括糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素乙酸酯；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；赋型剂，如可可油和栓剂的蜡；油，如花生油、棉子油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；乙二醇类，如丙二醇；多羟基化合物，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和乙基月桂酸酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；褐藻酸；不含热原的水；等渗盐水；Ringer溶液；乙醇；磷酸盐缓冲液；和和药物制剂中使用的其它非毒性相容物质。
如上所说明，本发明化合物的某些实施方案可以含有碱基基团，氨基或烷基氨基，因此可以与药物可接受的酸形成药物可接受的盐。在这方面术语“药物可接受的盐”指本发明化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。这些化合物可以在本发明化合物的最终分离和纯化当时制备，或是通过将本发明纯化合物的游离碱基分别与适当的有机酸或无机酸反应，分离其盐获得。有代表性的盐包括氢溴酸盐，盐酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，硝酸盐，醋酸盐，戊酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，硬脂酸盐，月桂酸盐，安息香酸盐，乳酸盐，磷酸盐，甲苯磺酸盐，柠檬酸盐，马来酸盐，延胡索酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，萘酸盐，甲磺酸盐，葡萄糖酸盐，乳糖酸盐，和月桂醇磺酸盐等(参见例如，Berge等，(1977)“药物盐”，药物科学杂志(J.Pharm.Sci.)66:1-19)。
另一方面，本发明的化合物可以含有一个或多个酸性官能团，因此可以与药物可接受的碱形成药物可接受的盐。在这种情况，术语“药物可接受的盐”指本发明化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐同样可以在化合物的最终分离和纯化当时制备，或是通过将纯化合物的游离酸基分别与适当的碱反应，如药物可接受金属阳离子的羟基，碳酸盐，碳酸氢盐，或与氨水，或与药物可接受的有机伯、仲、叔胺反应。有代表性的碱或碱土金属盐包括锂，钠，钾，钙，镁，或铝盐等。用于形成碱加成盐的有机胺的代表性实例包括乙胺，二乙胺，乙二胺，乙醇胺，二乙醇胺，哌嗪等。
术语“药物可接受的酯”指本发明化合物的相对无毒的酯化产物。这些酯同样可以在化合物的最终分离和纯化当时制备，或是通过将纯化合物的游离酸基或羟基分别与适当的酯化剂反应。在催化剂存在下通过用醇处理，可以将羧酸转化成酯。含有羟基衍生物可以应用酯化剂(如烷酰基卤化物)处理，转化成酯。该术语进一步包括在生理条件下能够溶解的低级烃剂，例如烷基酯，甲基，乙基和丙基酯(参见例如，Berge等，同上)。
本发明进一步包括前体药物的应用，其在体内转化成本发明的化合物(参见例如，R.B.Silverman,1992,“药物设计和药物活性的有机化学”,Academic Press，第8章)。这些前体药物可以用于改变治疗化合物的体内分布(例如通常使药物进入蛋白酶反应部位)或药物动力学。例如，羧酸基可以被酯化，例如与甲基或乙基生成酯。当给患者给药该酯，该酯裂解，酶促或非酶促，还原或水解，使阴离子基团暴露出来。阴离子基团可以与裂解部分(例如酰氧基甲基酯)酯化，暴露出中间化合物，其随后分解产生活性化合物。在另一个实施方案中，前体药物为硫酸盐或磺酸盐的还原型，例如硫醇，在体内氧化成治疗化合物。并且，阴离子部分可以酯化成在体内活性转运的基团，被靶器官选择性吸收。可以选择酯，使治疗部分对特别反应部位产生特别靶向，如下面载体部分所描述。
组合物中还可以有润湿剂，乳化剂，润滑剂，如十二烷基硫酸钠，硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂，包衣剂，甜味剂，调味剂，芳香剂，防腐剂和抗氧化剂。
药物可接受的抗氧化剂的例子包括水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸，半胱氨酸盐酸盐，硫酸氢钠，偏亚硫酸氢钠，亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯，丁基化羟基苯甲醚(BHA)，丁基化羟基甲苯(BHT)，卵磷脂，丙基没食子酸，α-生育酚等，和金属螯合剂，如柠檬酸，乙二胺四乙酸(EDTA)，山梨糖醇，酒石酸，磷酸等。
本发明的制剂包括适合于口服、鼻、局部、经皮、口腔、舌下、直肠、阴道和/或非肠道给药。制剂可以方便地存在于一个单位剂量中，可以以药学领域任何已知的方法制备。可以与载体材料组合制成单一剂量的活性成分的量通常为化合物产生治疗效果的量。通常在100份中，该量范围在大约1％-99％，优选在大约5％-70％，最优选在10％-30％。
制备这些制剂和组合物的方法包括将本发明的化合物与载体，以及任选一种或多种辅助成分结合的步骤。通常，制剂的制备通过将本发明的化合物与液体载体或细小分散固体载体或与这两种一起均一、充分混合，然后，如果必要，制成一定形状制剂。
本发明的制剂适合于口服给药，可以制成胶囊，扁形胶囊剂，丸剂，片剂，锭剂(应用调味剂，通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)，粉末剂，颗粒剂，或水性或非水性液体的溶液或混悬液，或水包油或油包水型乳剂，或酏剂或糖浆剂，或锭剂(应用惰性添加剂，如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)，和/或漱口液等，每个中含有预先确定量的本发明的化合物作为活性成分。本发明的化合物还可以作为丸药、干药糖剂或膏剂给药。
在本发明用于口服给药的固体剂型中(胶囊，片剂，丸剂，糖衣剂，粉末剂，颗粒剂等)，活性成分与一种或多种药物可接受的载体混合，如柠檬酸钠，或磷酸二钙，和/或任何下列组分填充剂或添加剂，如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇，和/或硅酸；粘合剂，例如羧甲基纤维素，海藻酸盐，凝胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖，和/或阿拉伯胶；保湿剂，如甘油；崩解剂，如琼脂，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，褐藻酸，某些硅酸盐，和碳酸钠；延迟剂溶液，如石蜡；促进吸收剂，如季铵化合物；润湿剂，如十六醇和甘油单硬脂酸；吸收剂，如高岭土和膨润土；润滑剂，如滑石粉，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，十二烷基硫酸钠，和它们的混合物，和着色剂。当为胶囊、片剂和丸剂时，该药物组合物还可以包括缓冲剂。类似类型的固体组合物还可以应用软、硬明胶胶囊的填充剂，应用赋型剂如乳糖或乳糖(milk sugars)，以及高分子量聚乙二醇等。
片剂可以通过压制或模压制备，任选具有一种或多种辅助成分。压制片的制备可以应用粘合剂(例如凝胶和羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如淀粉羟基乙酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂。模压片可以通过在适当的机器上模压用惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物组合物进行制备。
片剂，和本发明药物组合物的其它固体剂型，如糖衣剂，胶囊，丸剂和颗粒剂，可以任选进行修整或包衣，如肠溶包衣和药物制剂领域公知的其它包衣。还可以制成活性成分缓慢或控制释放的制剂，例如通过改变羟丙基甲基纤维素的比例，以提供理想的释放曲线，其它的聚合物基质，脂质体和/或微球。它们可以进行灭菌，例如通过除菌过滤器过滤，或将灭菌剂加入固体组合物，在使用前其可以溶解在无菌水或一些其它无菌可注射介质中。这些组合物还可以任选含有不透明剂，或制成只释放活性成分的组合物，优选在胃肠道某一部分释放，任选以缓释释放。可以用于植入组合物的添加剂的例子包括聚合物质和蜡。活性成分还可以以微囊的形式，具有一种或多种上述赋型剂。
本发明化合物用于口服给药的液体剂型包括药物可接受的乳剂、微乳剂、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。除了活性成分，液体剂型可以含有本领域通常使用的稀释剂，例如水或其它容积，增溶剂，和乳化剂，如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，油(具体是棉籽油，花生油，玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢呋喃醇，聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯和它们的混合物。
除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包括辅助成分，如润湿剂，乳化剂和混悬剂，甜味剂，调味剂，着色剂，芳香剂和防腐剂。
混悬液，除了活性化合物，可以含有混悬剂，例如乙氧基化异十八醇，聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯，微晶纤维素，偏氢氧化铝，斑脱土，琼脂和黄蓍胶，和它们的混合物。
用于直肠和阴道给药的本发明药物组合物的制剂可以制成栓剂，其通过将一种或多种本发明的化合物与一种或多种适合的无刺激性赋型剂或载体混合制备，其包括例如可可油，聚乙二醇，栓剂蜡或水杨酸盐，其在室温下为固体，但在体温下为液体，因此，可以在直肠或阴道腔内熔化，释放活性化合物。
适合于阴道给药的本发明制剂还包括阴道栓剂，棉塞，乳剂，凝胶，膏剂，泡沫剂或喷雾剂，可以含有那些本领域公知的适合载体。
本发明化合物用于局部或非胃肠道给药的剂型包括粉末剂，喷雾剂，油膏剂，糊剂，乳剂，洗剂，凝胶，溶液，小片和吸入剂。活性化合物可以在无菌条件下与药物可接受的载体混合，可以与任何需要的防腐剂，缓冲剂或抛射剂混合。
油膏剂，糊剂，乳剂和凝胶可以含有，除本发明活性化合物外，赋型剂如动物和植物油脂，油，蜡，石蜡，淀粉，黄蓍胶，纤维素衍生物，聚乙二醇，硅酮，斑脱土，硅酸，滑石和氧化锌，和它们的混合物。
粉末剂，喷雾剂可以含有，除本发明化合物外，赋型剂如乳糖，滑石，硅酸，氢氧化铝，硅酸钙，和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常规的抛射剂，如含氯氟烃和挥发性未取代烃，如丁烷和丙烷。
经皮小片具有控制本发明的化合物向体内释放的优点。可以通过将化合物溶解或分散在适当介质中制备这些剂型。吸收促进剂还可以用于增加化合物透皮吸收量。通过提供控释膜或将活性化合物分散到聚合物基质或凝胶中，可以控制透皮吸收量。
眼科制剂，眼膏，粉末，溶液等也包括在本发明范围内。优选地，药物制剂为眼科制剂(例如眼周、眼球后、眼内注射剂，全身制剂，或外科冲洗液)。
本发明的眼科制剂可以包括一种或多种脱氮嘌呤和药物可接受的载体。可以使用不同类型的载体。载体通常本身为水性的。通常优选水溶液，基于制剂的类型，以及患者容易给药这些制剂的能力，将1-2滴溶液滴到患病眼部。然而，本发明的脱氮嘌呤还可以很容易地制成其它类型的组合物，如混悬剂，粘性或半粘性凝胶，或其它类型的固体或半固体组合物。本发明的眼科组合物还可以包括多种其它成分，如缓冲剂，防腐剂，共溶剂，和增稠剂。
可以加入适当的缓冲系统(例如磷酸钠，醋酸钠或硼酸钠)，以防止在储存条件下pH改变。
眼科制剂通常以多剂量包装。因此需要加入防腐剂以防止使用中污染。适合的防腐剂包括洁尔灭，乙基汞硫代水杨酸钠，氯丁醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，苯乙醇，乙二胺四乙酸二钠，山梨酸，polyquaternium-1，或本领域公知的其它防腐剂。这些防腐剂通常使用水平在0.001-1.0％重量/体积(“％w/v”)。
当在眼内外科手术中给药本发明的脱氮嘌呤，如通过眼球后或眼周注射和眼内灌注或注射，最优选使用平衡盐灌注溶液作为载体。生理平衡眼内灌注溶液的例子为BBS无菌灌注溶液和BSS Plus无菌眼内灌注溶液(Alcon Laboratories,Inc.,Fort Worth,Tex.USA)。后者溶液在美国专利4,550,022(Garabedian等)中描述，整篇文章在本文说明书中引用作为参考。眼球后或眼周注射液是本领域公知的那些，在多种出版物中公开，包括例如眼科外科手术Principles ofPractice,Ed.,G.L.Spaeth.W.B.Sanders Co.,Philadelphia,Pa.,U.S.A.,85-87(1990)。
如上所述，脱氮嘌呤在细胞水平防止或减少视网膜和视神经头组织损伤的应用，是本发明一个实施方案一个特别重要的方面。可以治疗的眼科疾病包括，但不限于视网膜病，黄斑变性，眼睛局部缺血，青光眼，与眼部组织损伤相关的损伤，如伤害性多次灌注局部缺血，光化学损伤，和与眼部手术相关的损伤，特别是视网膜或视神经头暴露在光或手术仪器下的损伤。该化合物还可以用作外科手术的附属物，如眼部手术后的vitreal或结膜下注射。该化合物可以用于突发疾病的急性治疗，也可以用作治疗慢性，特别是变性疾病的情况。该化合物还可以用于预防疾病，特别是在眼部手术或非扩散性眼科手术，或其它类型的手术前。
适合于非胃肠给药的本发明的组合物包括一种或更多的本发明的化合物，并组合以一种或更多的药物可接受的无菌等张水或非水溶液，分散液，混悬液，或乳状液，或无菌粉末，其在使用前可以再溶解成无菌可注射溶液或分散液，它可以含有抗氧剂，缓冲液，抑菌剂，溶质(其可以减少制剂与血液的张力，以更容易被接受)，或混悬液或增稠剂。
本发明药物组合物可以使用的适合的水性或非水性载体包括水，水，乙醇，多羟基化合物(如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)，和它们适合的混合物，植物油，如橄榄油，和可注射的有机酯，如油酸乙酯。例如通过应用包衣材料，如卵磷脂，通过维持分散液所需的粒径大小，通过应用表面活性剂，可以维持适当的流动性。
这些组合物还可以含有添加剂，如防腐剂，润湿剂，乳化剂，和分散剂。通过加入不同的抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯，氯代丁醇，苯酚山梨酸等，可以保证抑制微生物活性。还可以在组合物中加入等张剂，如糖，氯化钠等。另外，可以通过加入延缓吸收成分如单硬脂酸铝和凝胶，延长可注射组合物剂型的吸收。
在某些情况，为了延长药物的效果，期望减慢药物皮下或肌内注射的吸收。这可以通过应用具有低水溶性结晶或无定型材料的液体混悬液完成。药物的吸收速率基于其溶解速率，还基于结晶大小和结晶型。或者，延长非胃肠给药剂型的吸收可以通过将药物溶解或混悬在油性在体中完成。
通过将本发明化合物在生物可降解聚合物(如聚交酯-聚乙交酯)中形成微囊，制成可注射贮库制剂。根据药物和聚合物的比例，和使用特殊药物的性质，可以控制药物释放速率。其它生物可降解聚合物的例子包括聚(原酸酯)，和聚(酐)。还可以通过将药物保存在与体组织相容的脂质体或微乳中，制备贮库可注射制剂。
本发明的制剂可以口服、非胃肠道、局部或直肠给药。可以以每个制剂适合的给药路径给药。例如，片剂或胶囊可以口服给药，注射剂、吸入剂、眼部洗剂、油膏、栓剂等，可以通过注射、灌注或吸入给药，洗剂或油膏可以局部给药，栓剂可以直肠给药。优选口服给药。
本文中使用的“非胃肠道给药”和“以非胃肠道给药”是指除了肠道和局部给药的其它给药剂型，通常使用注射，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心脏内、真皮下、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、胸骨内注射和灌注。
本文使用的“系统给药”、“以系统给药”、“外周给药”、和“以外周给药”是指将化合物、药物或其它材料除了直接给药中枢神经系统，使通过代谢或其它途径进入患者中枢系统的给药，例如皮下给药。
为了治疗目的，这些化合物可以通过任何适当的途径给药人和其它动物，包括口服、鼻腔例如喷射，直肠、阴道内、非胃肠道、脑池内、和局部给药(通过粉末、油膏、或滴剂)，包括口腔和舌下给药。
无论选择的给药路径，可以用于本发明适合的含水剂型和/或药物组合物的本发明的化合物，可以通过本领域技术人员公知的常规技术制成药物可接受的剂型。
可以改变本发明药物组合物的活性成分的实际剂量水平，以达到治疗有效量，其对特定患者、组合物和给药方式有效达到所需治疗反应，而对患者无毒性。
选择的剂量水平基于多种因素，包括使用的本发明特殊化合物、或它们的酯、盐、或酰胺的活性，给药路径，给药时间，使用的特殊化合物的排泄速率，治疗时间，与特殊化合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料，年龄，性别，体重，疾病状态，治疗患者的健康情况和给药历史，以及医学领域公知的其它技术。
具有本领域普通技术的医生或兽医可以很容易地确定和规定所需药物组合物的有效量。例如，为达到所需的治疗效果，医生或兽医可以在药物组合物中使用本发明化合物的初始剂量低于所需水平，然后逐渐增加剂量，直到获得所需的治疗效果。
通常，本发明化合物的每日适合剂量为有效产生治疗效果的化合物最低剂量。该有效剂量通常基于上述因素。通常，对于患者本发明化合物静脉内和皮下给药的剂量，当用于指示的镇痛效果时，剂量范围在大约0.0001-200mg/公斤体重/日，更优选在大约0.01-150mg/公斤体重/日，更加优选在大约0.2-140mg/公斤体重/日。
如果需要，活性化合物的每日剂量可以分别以二、三、四、五、六或更多次在每日适当间隔给药，任选以单位剂量形式。
尽管本发明的化合物可能以单独给药，但优选该化合物以组合物形式给药。
本发明还包括用于治疗对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的包装药物组合物，例如不期望的哺乳动物腺苷受体水平增加。包装药物组合物包括装有治疗有效量的上述至少一种脱氮嘌呤和使用脱氮嘌呤治疗哺乳动物脱氮嘌呤反应疾病的说明书。
本发明的脱氮嘌呤可以应用有机合成的标准方法制备。脱氮嘌呤的纯化可以应用反相HPLC色谱、重结晶等，它们的结构确认可以通过质谱分析，IR和/或NMR光谱分析。
典型地，本发明中间体以及脱氮嘌呤的合成在溶液中进行。一个或更多的保护基团的加成和去除通常以本领域公知的技术进行。用于制备本发明脱氮嘌呤中间体的典型合成路径归纳在下面的合成路线I中。
通过下列实施例进一步描述本发明，绝不是为了限制。整个申请引用的(包括背景技术中所引用的)所有参考文献、未审查专利申请、和公开专利申请的内容，在本文引用作为参考。应该理解在整个实施例中使用的模型为可接受的模型，这些模型的效果对于人的治疗效果有预见性作用。
本发明的脱氮嘌呤可以应用有机合成的标准方法制备。脱氮嘌呤的纯化可以应用反相HPLC色谱、重结晶等，它们的结构确认可以通过质谱分析，元素分析，IR和/或NMR光谱分析。
典型地，本发明中间体以及脱氮嘌呤的合成在溶液中进行。一个或更多的保护基团的加成和去除通常以本领域公知的技术进行。用于制备本发明脱氮嘌呤中间体的典型合成路径归纳在下面的合成路线I中。
合成路线Ⅰ 其中R3,R5和R6如上所定义。
通常，保护的2-氨基-3-氰基-吡咯可以用酰基卤化物处理，形成羧酰氨基-3-氰基-吡咯，其可以用酸性甲醇处理成有效闭合环吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮(Muller,C.E.等，医学化学杂志(J.Med.Chem.)40:4396(1997))。然后吡咯保护基团通过用氯化试剂处理去除，例如磷酰氯，制备取代或未取代的4-氯-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。氯代嘧啶用胺处理，得到7-脱氮嘌呤。
例如，如合成路线I所示，N-(1-dl-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-吡咯用在吡啶和二氯甲烷中的酰基卤化物处理。得到的N-(1-dl-苯乙基)-2-苯基羧酰氨基-3-氰基-吡咯用甲醇/硫酸10∶1混合物处理，使环闭合，得到dl-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。苯乙基基团的去除通过用具有多磷酸(PPA)的嘧啶处理，然后用POCl3处理，得到关键的中间体，4-氯-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。进一步将4-氯-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶用表1中所列的多种胺处理，得到式(Ⅰ)和(Ⅱ)的化合物。
表1 制备6-取代吡咯的通常方法在下列合成路线(合成路线Ⅱ)中描述。
合成路线Ⅱ 其中R1至R5如上所定义。
乙基氰基乙酸酯与α-卤代酮的酯基转移和烷化，得到酮甲基酯。随后用脒(例如烷基、芳基或烷基芳基)盐酸盐处理保护酮，得到酮缩醇保护的嘧啶。随后通过结晶和磷酰氯处理，去除保护基团，得到氯代中间体，其可以进一步用胺处理，得到胺6-取代吡咯。另外，可以在本领域公知的条件下进行吡咯氮的烷基化。
制备5-取代吡咯的通常方法在下列合成路线(合成路线Ⅲ)中描述。
合成路线Ⅲ 其中R1至R6如上所定义，R为可去除的保护基团。
随后通过产品的溴化浓缩丙二腈和过量的酮，得到起始材料、-溴化、二溴化产物，用烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺处理。得到的胺产物用酰基氯处理，单酰化吡咯在酸存在下环化，得到相应的嘧啶。应用多磷酸去除吡咯保护基团，用磷酰氯处理，得到氯代产物。随后可以用胺处理氯代吡咯，得到氨基5-取代吡咯。可以在公知的条件下进行吡咯氮的烷基化。
合成路线Ⅳ和Ⅴ描述了用于制备本发明脱氮嘌呤1和2的方法。 其中R5和R6如上所述，例如CH3。6-甲基吡咯并嘧啶的具体制备对于6-甲基吡咯并嘧啶的(1)[R5=CH3]的关键反应是氰基乙酸酯与苯甲脒环化形成嘧啶。认为甲基氰基乙酸酯与苯甲脒环化形成嘧啶比相应的乙基酯更有效。因此，在NaOMe和过量α-卤代乙酰基部分(例如氯丙酮)存在下，乙基氰基乙酸酯进行酯基转移和烷基化，得到所需的甲基酯(3)，产率为79％(合成路线Ⅳ)。将酮酯(3)保护成为乙缩醛(4))，产率为81％。应用盐酸脒(例如盐酸苯甲脒)与2当量的DBU，获得嘧啶(5)新的环化方法，以54％的分离产率得到5。该方法比应用公开的条件(其在与胍环化中应用NaOMe)提高产率20％。通过在HCl水溶液中的乙缩醛去保护，获得吡咯并嘧啶(6)的环化，产率为78％。(6)与磷酰氯在回流下反应，得到相应的4-氯衍生物(7)。与反式-4-氨基环己醇在二甲基亚砜135℃下偶合，得到(1)，从(7)的产率为57％。本领域技术人员可以理解，在选择所需的取代基R5，试剂的选择具有很大的弹性。
合成路线Ⅳ 6-甲基吡咯并嘧啶的具体制备丙二腈与过量酮(例如丙酮)在苯回流下进行Knoevengel浓缩，得到8，蒸馏后的产率为50％。8与N-溴代琥珀酰亚胺在过氧化苯甲酰(在氯仿中)存在下进行溴化，蒸馏后得到起始原料、一-(9)和二-溴化产物(5/90/5)的混合物(70％)。混合物与α-甲基烷基胺或α-芳基烷基胺(例如α-甲基苯甲胺)反应，得到氨基吡咯。通过一个短的硅胶柱后，应用酰基氯(例如苯甲酰氯)将部分纯化胺(产率31％)进行酰化，得到一-(11)和二-酰化(12)吡咯，其通过闪光色谱进行分离。二取代的吡咯(12)的酸水解产生组合产率29％的酰基吡咯(11)。在浓硫酸和DMF存在下进行环化，得到(13)(产率23％)，其可以应用多磷酸去保护得到(14)。(14)与磷酰氯在回流下反应得到相应的4-氯衍生物(15)。与反式-4-氨基环己醇在二甲基亚砜135℃下偶合，得到(2)，从(14)的产率为30％。本领域技术人员可以理解，在选择所需的取代基R6，试剂的选择具有很大的弹性。
合成路线Ⅴ R6-取代吡咯(例如5-甲基吡咯并嘧啶)可选择的合成路线R6-取代吡咯(例如5-甲基吡咯并嘧啶)该可选择的合成路线包括乙基氰基乙酸酯至(16)的酯基转移和烷基化(合成路线Ⅵ)。盐酸苯甲脒与2当量的DBU浓缩，得到嘧啶(17)。通过在HCl水溶液中的乙缩醛去保护，获得吡咯并嘧啶(6)的环化。(14)与磷酰氯在回流下反应，得到相应的4-氯衍生物(15)。与反式-4-氨基环己醇在二甲基亚砜135℃下偶合，得到(2)。该过程将合成目标化合物(2)的合成反应步骤从9步减少至4步。并且产率明显改善。并且，本领域技术人员可以理解，在选择所需的取代基R6，试剂的选择具有很大的弹性。
合成路线Ⅵ 制备去甲基吡咯的通常方法在下列合成路线(合成路线Ⅶ)中描述。
合成路线Ⅶ 其中R1至R3如上所定义。
烷基氰基乙酸酯与二乙基乙缩醛在碱存在下进行烷基化，得到氰基二乙基乙缩醛，其用脒盐处理，以制备甲基吡咯并嘧啶前体。将前体氯化，用胺处理，以形成如上所述的去甲基吡咯并嘧啶目标物。
例如，合成路线Ⅷ描述了化合物(18)的合成。
合成路线Ⅷ 商业可获得的甲基氰基乙酸酯与溴代乙醛二乙基乙缩醛在碳酸钾和NaI存在下进行烷基化，得到(19)。两步环化得到(20)。最初，通过(19)与盐酸苯甲脒与2当量DBU反应，形成嘧啶-乙缩醛。应用1N HCl水溶液，将得到的嘧啶-乙缩醛去保护，而不进行纯化，得到的醛环化得到吡咯并嘧啶(20)，通过过滤将其分离。(20)与磷酰氯在回流下反应，得到相应的4-氯衍生物(21)。氯代衍生物与反式-4-氨基环己醇(在DMSO中)在135℃下偶合，从化合物(21)得到化合物(18)。
合成路线Ⅱ-Ⅷ示范了吡咯并嘧啶环可能在5-和6-位进行的官能化。通过应用不同的起始原料和稍微改变上述合成路线，在式(Ⅰ)和(Ⅱ)中的5-和6-位可以引入不同的官能团。表2举例说明了一些例子。
表25-和6-取代吡咯并嘧啶的选择列表。 通过下列实施例进一步描述本发明，绝不是为了限制。整个申请引用的(包括背景技术中所引用的)所有参考文献、未审查专利申请、和公开专利申请的内容，在本文引用作为参考。应该理解在整个实施例中使用的模型为可接受的模型，这些模型的效果对于人的治疗效果有预见性作用。实施例制备例1使用修改的Seela和Lupke烷基化方法1。向乙基氰基乙酸酯(6.58g,58.1mmol，在20mL MeOH中)冰冷却溶液(0℃)中缓慢加入NaOMe(25％w/v；58.1mmol)溶液。10分种后，缓慢加入氯丙酮(5mL；62.8mmol)。4小时后，除去溶剂。棕色油用EtOAc(100mL)稀释，用水(100mL)洗涤。干燥有机相，过滤，浓缩得到棕色油(7.79g；79％)。油(3)(合成路线Ⅳ)为甲基/乙基酯产物的混合物(9/1)，可以使用而不经过进一步纯化。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ4.24(q,J=7.2 Hz,OCH2),3.91(dd,1H,J=7.2,7.0Hz,CH),3.62(s,3H,OCH3),3.42(dd,1H,J=15.0,7.1Hz,1×CH2)；3.02(dd,1H,J=15.0,7.0Hz,1×CH2)；2.44(s,3H,CH3),1.26(t,J=7.1Hz，酯r-CH3)。
1Seela,F.；Lupke,U.Chem.Ber.1977,110,1462-1469。制备例2使用Seela和Lupke烷基化方法1。因此，酮(3)(合成路线Ⅳ；5.0g,32.2mmol)与乙二醇(4mL,64.4mmol)在TsOH(100mg)存在下进行保护，闪光色谱(SiO2；3/7 EtOAc/Hex,Rf0.35)后，得到油状的(4)(合成路线Ⅳ；5.2g,81.0)。还含有～5％的乙酯1H NMR(200MHz,CDCl3)δ4.24(q,J=7.2Hz,OCH2),3.98(s,4H,2×acetal-CH2),3.79(s,3H,OCH3),3.62(dd,1H,J=7.2,7.0Hz,CH),2.48(dd,1H,J=15.0,7.1Hz,1×CH2),2.32(dd,1H,J=15.0,7.0Hz,1×CH2)；1.35(s,3H,CH3),1.26(t,J=7.1Hz酯-CH3)；MS(ES):200.1(M++1)。
1Seela,F.；Lupke,U.Chem.Ber.1977,110,1462-1469。制备例3将乙缩醛(4)(合成路线Ⅳ,1g,5.02mmol)，苯甲脒(786mg,5.02mmol)，和DBU(1.5mL,10.04mmol)在干燥DMF(15mL)的溶液加热至85℃15小时。混合物用CHCl3(30mL)稀释，0.5N NaOH(10mL)和水(20mL)洗涤。干燥有机相，过滤，浓缩得到棕色油。尝试过闪光色谱(SiO2；3/7 EtOAc/CH2Cl2,Rf 0.35)，但是柱上有材料结晶。用MeOH洗涤硅胶。将含有产物组分(5)(合成路线Ⅳ)浓缩，不经过进一步纯化可以使用(783mg,54.3％):1H NMR(200MHz,CDCl3)δ8.24(m,2H,Ar-H),7.45(m,3H,Ar-H),5.24(br s,2H,NH2),3.98(s,4H,2×乙缩醛-CH2),3.60-3.15(m,2H,CH2),1.38(s,3H,CH3)；MS(ES):288.1(M++1)。
化合物(20)的制备(合成路线Ⅷ)将乙缩醛(19)(4.43g,20.6mmol)，盐酸benzamine(3.22g,20.6mmol)，和DBU(6.15mL,41.2mmol)在干燥DMF(20mL)的溶液加热至85℃15小时。混合物用100mL CHCl3稀释，用水(2×50mL)洗涤。干燥有机相，过滤，浓缩得到深棕色油。将深棕色油在1N HCl(100mL)室温下搅拌2小时。将得到的稀浆过滤得到棕褐色固体的盐酸盐(20)(3.60g,70.6％)；1HNMR(200MHz,DMSO-d6)11.92(s 1H),8.05(m,2H,Ar-H),7.45(m,3H,Ar-H),7.05(s,1H，吡咯-H)；MS(ES):212.1(M++1)。制备例4将乙缩醛(5)(700mg,2.44mmol)的1 N HCl(40mL)溶液在室温下搅拌20小时。将得到的稀浆过滤得到棕褐色2-苯基-6甲基-7H-吡咯[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮的盐酸盐1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ11.78(s,1H),8.05(m,2H,Ar-H),7.45(m,3H,Ar-H),6.17(s,1H，吡咯-H),2.25(s,3H,CH3)；MS(ES):226.1(M++1)。制备例5使用修改的Chen等的环化方法1。向异丙醇(60mL)中的溴化物(9)，(合成路线Ⅴ；20.0g,108mmol；90％纯度)的冰冷却(0℃)溶液中，缓慢加入α-甲基苯甲基胺(12.5mL,97.3mmol)。将黑色溶液升温至室温，搅拌15小时。混合物用EtOAc(200mL)稀释，0.5N NaOH(50mL)洗涤。将有机相干燥，过滤，浓缩得到黑焦油(19.2g；94％)。残渣通过闪光色谱(SiO2；4/96 MeOH/CH2Cl2,Rf0.35)部分纯化，得到黑色固体(6.38g,31％)的化合物dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4-甲基吡咯MS(ES):226.1(M++1)。1Chen,Y.L.；Mansbach,R.S.；Winter,S.M.；Brooks,E.；Collins,J.；Corman,M.L.；Dunaiskis,A.R.；Faraci,W.S.；Gallaschun,R.J.；Schmidt,A.；Schulz,D.W.医学化学杂志(J Med Chem.)1997,40,1749-1754。制备例6；向dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯1(14.9g,62.5mmol)和吡啶(10.0mL)的二氯甲烷(50.0mL)溶液中，在0℃下加入苯甲酰氯(9.37g,66.7mmol)。在0℃下搅拌1小时后，加入己烷(10.0mL)以帮助产物沉淀。在真空下除去溶剂，固体在EtOH/H2O中重结晶得到13.9g(65％)的dl-1-(1-苯乙基)-2-苯基羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯，熔点218-221℃；1H NMR15(200MHz,CDCl3)δ1.72(s,3H),1.76(d,J=7.3Hz,3H),1.98(s,3H),5.52(q,J=7.3Hz,1H),7.14-7.54(m,9H),7.68-7.72(dd,J=1.4Hz,6.9Hz,2H),10.73(s,1H)；MS(ES):344.4(M++1)。1Liebigs Ann.Chem.1986,1485-1505。
下列的化合物以类似的方法获得。制备例6dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-吡啶基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.83(d,J=6.8Hz,3H),2.02(s,3H),2.12(s,3H),5.50(q,J=6.8Hz,1H),7,14-7.42(m,5H),8.08(m,2H),8.75(m,3H)；MS(ES):345.2(M++1)。dl-1-(1-苯乙基)-2-(2-呋喃基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.84(d,J=7.4Hz,3H),1.92(s,3H),2.09(s,3H),5.49(q,J=7.4Hz,1H),6.54(dd,J=1.8Hz,3.6Hz,1H),7.12-7.47(m,7H)；MS(ES):334.2(M++1),230.1。dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-呋喃基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.80(d,J=7Hz 3H),1.89(s,3H),2.05(s,3H),5.48(q,J=7Hz,1H),6.59(s,1H),7.12-7.40(m,6H),7.93(s,1H)；MS(ES):334.1(M++1),230.0。dl-1-(1-苯乙基)-2-环戊基羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.82(d,J=7.4Hz,3H),1,88(s,3H),2.05(s,3H),1.63-1.85(m,8H),2.63(m,1H),5.43(q,J=7.4Hz,1H),6.52(s,1H),7.05-7.20(m,5H)；MS(ES):336.3(M++1)。dl-1-(1-苯乙基)-2-(2-噻吩基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.82(d,J=6.8Hz,3H),1.96(s,3H),2.09(s,3H),5.49(q,J=6.8Hz,1H),7.05-7.55(m,8H)；MS(ES):350.1(M++1),246.0。dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-噻吩基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.83(d,J=7.0Hz,3H),1.99(s,3H),2.12(s,3H),5.49(q,J=7.0Hz,1H),6.90(m,1H),7.18-7.36(m,6H),7.79(m,1H)；MS(ES):350.2(M++1),246.1。dl-1-(1-苯乙基)-2-(4-氟苯基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.83(d,J=7.4Hz,3H),1.96(s,3H),2.08(s,3H),5.51(q,J=7.4Hz,1H),7.16-7.55(m,9H)；MS(ES):362.2(M++1),258.1。dl-1-(1-苯乙基)-2-(3-氟苯基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.83(d,J=7.4Hz 3H),1.97(s,3H),2.10(s,3H),5.50(q,J=7.4Hz,1H),7.05-7.38(m,7H),7.67-7.74(m,2H)；MS(ES):362.2(M++1),258.1。dl-1-(1-苯乙基)-2-(2-氟苯基)羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.85(d,J=7.2Hz,3H),1.94(s,3H),2.11(s,3H),5.50(q,J=7.2hz,1H),7.12-7.35(m,6H),7.53(m,1H),7.77(m,1H),8.13(m,1H)；MS(ES):30 362.2(M++1),258.0。dl-1-(1-苯乙基)-2-异丙基羰基氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.19(d,J=7.0Hz,6H),1.82(d,J=7.2Hz,3H),1.88(s,3H),2.06(s,3H),2.46(m,1H),5.39(m,J=7.2Hz,1H),6.64(s,1H),7.11-7.36(m,5H)；MS(ES):310.2(M++1),206.1。
当dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4-甲基吡咯酰化时，得到单酰化的dl-1-(1-苯乙基)-2-苯甲酰氨基-3-氰基-4-二甲基吡咯，和二酰化吡咯dl-1-(1-苯乙基)-2-二苯甲酰氨基-3-氰基-4-甲基吡咯。单酰化吡咯1HNMR(200MHz,CDCl3)δ7.69(d,2H,J=7.8Hz,Ar-H),7.58-7.12(m,8H,Ar-H),6.18(s,1H，吡咯-H)，5.52(q,1H,J=7.2Hz,CH-CH3),2.05(s,3H，吡咯-CH3),1.85(d,3H,J=7.2Hz,CH-CH3)；MS(ES):330.2(M++1)；二酰化吡咯1H NMR(200MHz,CDCl3)δ7.85(d,2H,J=7.7Hz,Ar-H),7.74(d,2H,J=7.8Hz,Ar-H),7.52-7.20(m,9H,Ar-H),7.04(m,2H,Ar-H),6.21(s,1H,吡咯-H),5.52(q,1H,J=7.2Hz,CH-CH3),1.77(d,3H,J=7.2Hz,CRCH3),1.74(s,3H，吡各-CH3)；MS(ES):434.1(M++1)。制备例7在0℃下，向dl-1-(1-苯乙基)-2-苯基羧酰氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯(1.0g,2.92mmol)的甲醇(10.0mL)溶液中加入浓硫酸(1.0mL)。将得到的混合物回流15小时，冷却至室温。过滤沉淀，得到0.48g(48％)的dl-5,6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.02(d,J=7.4Hz,3H),2.04(s,3H),2.41(s,3H),6.25(q,J=7.4Hz,1H),7.22-7.50(m,9H),8.07-8.12(dd,J=3.4Hz,6.8Hz,2H),10.51(s,1H)；MS(ES):344.2(M++1)。
通过与制备例7类似的方法得到下列化合物dl-5,6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.03(d,J=7.2Hz,3H),2.08(s,3H),2.42(s,3H),6.24(q,J=7.2Hz,1H),7.09-7.42(m.5H),8.48(m,2H),8.70(m.3H)；MS(ES):345.1(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.98(d,J=7.8Hz,3H),1.99(s,3H),2.37(s,3H),6.12(q,J=7.8Hz,1H),6.48(dd,J=1.8Hz,3.6Hz,1H),7.17-7.55(m,7H),9.6(s,1H)；MS(ES):334.2(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.99(d,J=7Hz,3H),2.02(s,3H),2.42(s,3H),6.24(q,J=7Hz,1H),7.09(s,1H),7.18-7.32(m,5H),7.48(s,1H),8.51(s,1H)；MS(ES):334.2(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-环戊基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.95(d,J=7.4Hz,3H),2.00(s,3H),2.33(s,3H),1.68-1.88(m,8H),2.97(m,1H),6.10(q,J=7.4Hz,1H),7.16-7.30(m,5H),9.29(s,1H)；MS(ES):336.3(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.02(d,J=7.2Hz,3H),2.06(s,3H),2.41(s,3H),6.13(q,J=7.2Hz,1H),7.12(dd,J=4.8,2.8Hz,1H),7.26-7.32(m,5H),7.44(d,J=4.8Hz,1H),8.01(d,J=2.8Hz,1H)11.25(s,1H)；MS(ES):350.2(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.00(d,J=7.4Hz,3H),2.05(s,3H),2.43(s,3H),6.24(q,J=7.4Hz,1H),7.24-7.33(m,5H),7.33-7.39(m,1H),7.85(m,1H),8.47(m,1H),12.01(s,lH)；MS(ES):350.2(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.01(d,J=6.8Hz,3H),2.05(s,3H).2.42(s,3H),6.26(q,J=6.8Hz,1H),7.12-7.36(m.7H),8.23-8.30(m,2H),11.82(s,1H)；MS(ES):362.3(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.02(d,J=7.4Hz,3H),2.06(s,3H),2.44(s,3H),6.29(q,3=7.4Hz,1 H),7.13-7.51(m,7H),8.00-8.04(m,2H),11.72(s,1H)；MS(ES):362.2(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.00(d,J=7.2Hz,3H),2.05(s,3H),2.38(s,3H),6.24(q,J=7.2Hz,1H),7.18-7.45(m,8H),8.21(m,1H),9.54(s,1H)；MS(ES):362.2(M++1)。dl-5,6-二甲基-2-异丙基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.30(d,J=6.8Hz,3H),1.32(d,J=7.0Hz,3H),2.01(s 3H),2.34(s,3H),2.90(m,1H),6.13(m,1H),7.17-7.34(m,5H),10.16(s,1H)；MS(ES):310.2(M++1)。制备例8dl-1-(1-苯乙基)-2-苯甲酰氨基-3-氰基-4-二甲基吡咯(785mg,2.38mmol)与浓硫酸(1mL)的DMF(13mL)溶液在130℃下搅拌48小时。黑色溶液用CHCl3(100mL)稀释，用1 N NaOH(30mL)和盐水(30mL)洗涤。将有机相干燥，过滤，浓缩，通过闪光色谱(SiO2；8/2 EtOAc/Hex,Rf0.35)纯化，得到棕褐色固体(184mg,24％)的dl-5-甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ8.18(m 2H,Ar-H),7.62-7.44(m,3H,Ar-H),7.40-7.18(m,5H,Ar-H),6.48(s,1H，吡咯-H),6.28(q,1H,J=7.2Hz,CH-CH3),2.18(s,3H，吡咯-CH3),2.07(d,3H,J=7.2Hz,CH-CH3)；MS(ES):330.2(M++1)。制备例9dl-1-(1-苯乙基)-2-氨基-3-氰基-4,5-二甲基吡咯(9.60g,40.0mmol)与甲酸(50.0mL,98％)的混合物回流5小时。冷却到室温后，刮擦烧瓶侧壁，形成大量沉淀，过滤。将材料用水洗涤，直到中性pH，得到dl-5,6-二甲基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.96(d,J=7.4hz,3H),2.00(s,3H),2.38(s,3H),6.21(q,J=7.4Hz,1H),7.11-7.35(m,5H),7.81(s,1H),11.71(s,1H)；MS(ES):268.2(M++1)。制备例10dl-5,6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮(1.0g,2.91mmol)混悬在多磷酸(30.0mL)中。混合物加热到100℃4小时。将热的混悬液倒入水中，剧烈搅拌，成分散混悬液，用固体KOH碱化到pH 6。过滤得到的固体，收集得到0.49g(69％)的5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.17(s,3H),2.22(s,3H),7.45(br,3H),8.07(br,2H,),11.49(s,1H),11.82(s,1H)；MS(ES):344.2(M++1)。下列化合物按照类似于制备例10的方法获得5-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。MS(ES):226.0(M++1)。5,6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。MS(ES):241.1(M++1)。5,6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.13(s,3H),2.18(s,3H),6.39(dd,J=1.8Hz,3.6Hz,1H),6.65(dd,J=1.8Hz,3.6Hz,1H),7.85(dd.J=1.8,3.6Hz,1H,),11.45(s,1H),11.60(s,1H)；MS(ES):230.1(M++1)。5,6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.14(s,3H),2.19(s,3H),6.66(s,1H),7.78(s,1H),8.35(s,1H),11.3(s,1H),11.4(s,1H)；MS(ES):230.1(M++1)。5,6-二甲基-2-环苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ1.57-1.91(m,8H),2.12(s,3H),2.16(s,3H),2.99(m,1H),11.24(s,1H),11.38(s,1H)；MS(ES):232.2(M++1)。5,6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.14(s,3H),2.19(s,3H),7.14(dd,J=3.0,5.2Hz,1H),7.70(d,J=5.2Hz 1H),8.10(d,J=3.0Hz,1H),11.50(s,1H)；MS(ES):246.1(M++1)。5,6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.17(s,3H),2.21(s,3H),7.66(m,1H),7.75(m,1H),8.43(m,1H),11.47(s,1H),11.69(s,1H)；MS(ES):246.1(M++1)。5,6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.17(s,3H),2.21(s,3H),7.31(m,2H),8.12(m,2H),11.47(s,1H)；MS(ES):258.2(M++1)。5,6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.18(s,3H),2.21(s,3H),7.33(m,1H),7.52(m,1H),7.85-7.95(m,2H),11.56(s,1H),11.80(s,1H)；MS(ES):258.1(M++1)。5,6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.18(s,3H),2.22(s,3H).7.27-7.37(m,2H),7.53(m 1H),7.68(m,1H),11.54(s,1H),11.78(s,1H)；MS(ES):258.1(M++1)。5,6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ1.17(d,J6.6Hz,6H),2.11(s,3H),2.15(s,3H),2.81(m,1H),11.20(s,1H),11.39(s,1H)；MS(ES):206.1(M++1)。5,6-二甲基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮。1H NMR(200 MHz,DMSO-d6)δ2.13(s,3H),2.17(s,3H),7.65(s,1H)；MS(ES):164.0(M++1)。制备例115,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-4(3H)-酮(1.0g,4.2mmol)的磷酰氯(25.0mL)溶液，回流6小时，然后在真空下浓缩至干燥。将水加入到残渣中以诱导结晶，过滤得到的固体，收集得到0.90g(83％)的4-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.33(s,3H),2.33(s,3H),7.46-7.49(m,3H),8.30-8.35(m,2H),12.20(s,1H)；MS(ES):258.1(M++1)。
下列化合物按照类似于制备例11的方法得到。4-氯-5-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):244.0(M++1)。4-氯-6-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):244.0(M++1)。4-氯-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)8.35(2,2H),7.63(br s,1H),7.45(m,3H),6.47(br s,1H)；MS(ES):230.0(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):259.0(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.35(s.3H),2.35(s,3H),6.68(dd,J=1.8,3.6Hz,1H),7.34(dd,,J=1.8Hz,3.6Hz,1H),7.89(dd,J=1.8,3.6Hz,1H)；MS(ES):248.0(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),2.31(s,3H),6.62(s,1H),7.78(s,1H),8.18(s,1H),12.02(s 1H)；MS(ES):248.1(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-环苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ1.61-1.96(m,SH),2.27(s,3H),2.27(s,3H),3.22(m,1H),11.97(s,1H)；MS(ES):250.1(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.29(s,3H),2.31(s,3H),7.14(dd,J=3.1Hz.,4.0Hz,1H),7.33(d,J=4.9Hz,1H),7.82(d,J=3.1Hz,1H),12.19(s,1H)；MS(ES):264.1(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.32(s,3H),2.32(s,3H),7.62(dd,J=3.0,5.2Hz.,1H),7.75(d,S=5.2Hz,1H),8.20(d,J=3.0Hz,1H)；MS(ES):264.0(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.33(s,3H),2.33(s,3H),7.30(m,2H),8.34(m,2H),12.11(s,1H)；MS(ES):276.1(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),2.33(s,3H),7.29(m,1H),7.52(m,1H),7.96(m,1H),8.14(m,1H),11.57(s,1H)；MS(ES):276.1(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.34(s,3H),2.34(s,3H),7.33(m.2H),7.44(m.1H),7.99(m,1H),12.23(s,1H)；MS(ES):276.1(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ1.24(d,J=6.6Hz,6H),2.28(s,3H),2.28(s,3H),3.08(q,J=6.6Hz,1H),11.95(s,1H)；MS(ES):224.0(M++1)。4-氯-5,6-二甲基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),2.32(s,3H),8.40(s,1H)；MS(ES):182.0(M++1)。dl-4-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶。制备例12向dl-1,2-二氨基丙烷(1.48g,20.0mmol)和碳酸钠(2.73g,22.0mmol)的二氧杂环己烷(100.0mL)和水(100.0mL)的溶液中，在室温下加入二-叔-碳酸氢钠(4.80g,22.0mmol)。将得到的混合物搅拌14小时。在真空下除去二氧杂环己烷。过滤除去沉淀，将滤液在真空下浓缩至干燥。残渣用EtOAc研磨，然后过滤。滤液在真空下浓缩至干燥，得到dl-1-氨基-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基-丙烷和dl-2-氨基-2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基-丙烷，采用常规的色谱方法不能将其分离。混合物用于实施例8的反应。制备例13向Fmoc-β-Ala-OH(1.0g,3.212mmol)和草酰氯(0.428g,0.29mL,3.373mmol)的二氯甲烷(20.0mL)溶液中，在0℃下逐滴加入N,N-二甲基甲酰胺。在室温下搅拌混合物1小时，然后加入环丙基甲胺(0.229g,0.28mL,3.212mmol)和三乙胺(0.65g,0.90mL,6.424mmol)。10分种后，将混合物用1M盐酸(10.0mL)处理，将含水混合物用二氯甲烷(3×30.0mL)提取。将有机溶液在真空下浓缩至干燥。残渣用哌啶的N,N-二甲基甲酰胺(20.0mL)的20％溶液处理0.5小时。在真空下除去溶剂后，残渣用1M盐酸(20.0mL)和乙酸乙酯(20.0mL)处理。分离混合物，水层用固体氢氧化钠碱化至pH=8。通过过滤除去沉淀，水溶液过离子交换柱，用20％吡啶洗脱，得到0.262g(57％)的N-环丙基甲基β丙胺酸酰胺。1H NMR(200MHz,CD3OD)δ0.22(m,2H),0.49(m,2H),0.96(m,2H),2.40(t,2H),2.92(t,2H),3.05(d,2H)；MS(ES):143.1(M++1)。制备例14N-叔-丁氧基羰基-反式-1,4-环己基二胺将反式-1,4-环己基二胺(6.08g,53.2mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，通过套管加入二-叔-丁基碳酸氢盐(2.32g,10.65mmol溶在40mL二氯甲烷)。20小时后，反应在CHCl3和水之间分配。分离该层，水层用CHCl3(3x)提取。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩得到1.20g白色固体(53％)。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.0-1.3(m,4H),1.44(s,911),1.8-2.1(m,4H),2.62(brm,1H),3.40(brs,1H),4.37(brs,1H0；MS(ES):215.2(M++1)。4-(N-乙酰基)-N-叔-丁氧基羰基-反式-1,4-环己基二胺N-叔-丁氧基羰基-反式-1,4-环己基二胺(530mg,2.47mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中。逐滴加入乙酸酐(250mg,2.60mmol)。16小时后，反应物用水和CHCl3稀释。分离该层，水层用CHCl3(3x)提取。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。重结晶(EtOH/H2O)得到190mg白色结晶(30％)。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ0.9-1.30(m,4H),1.43(s,9H),1.96-2.10(m,7H),3.40(brs,1H),3.70(brs,1H),4.40(brs,1H),4.40(brs,1H)；MS(ES):257.2(M++1),242.1(M+-15),201.1(M+-56)。4-(4-反式-乙酸氨基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶。4-(N-乙酰基)-N-叔-丁氧基羰基-反式-1,4-环己基二胺(190mg,0.74mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，用TFA(6ml)稀释。16小时后，浓缩反应物。将粗品固体，DMSO(2mL),NaHCO3(200mg,2.2mmol)和4-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(35mg,0.14mmol)合并到一个烧瓶中，加热到130℃。4.5小时后，将反应物冷去例室温，用EtOAc和水稀释。分离该层，水层用EtOAC(3x)提取。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。色谱法(硅预制板；20:1 CHCl3:EtOH)得到0.3mg棕褐色固体(产率1％).MS(ES):378.2(M++1)。4-(N-甲磺酰基)N-叔-丁氧基羰基-反式-1,4-环己基二胺反式-1,4-环己基二胺(530mg,2.47mmol)溶解在二氯甲烷(20mL)中，用吡啶(233mg,3.0mmol)稀释。逐滴加入甲磺酰氯(300mg,2.60mmol)。16小时后，反应物用水和CHCl3稀释。分离该层，水层用CHCl3(3x)提取。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。重结晶(EtOH/H2O)得到206mg白色结晶(29％)。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.10-1.40(m,4H),1.45(s,9H),2.00-2.20(m,4H),2.98(s,3H),3.20-3.50(brs,2H),4.37(brs,1H)；MS(ES)293.1(M++1),278.1(M+-15),237.1(M+-56)。4-(4-反式-甲磺酰基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶。4-(N-磺酰基)-N-叔-丁氧基羰基-反式-1,4-环己基二胺(206mg,0.71mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，用TFA(6ml)稀释。16小时后，浓缩反应物。将粗品反应混合物，DMSO(2ml),NaHCO3(100mg,1.1mmol)和4-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶合并到一个烧瓶中，加热到130℃。15小时后，将反应物冷却到室温，用EtOAc(3x)稀释。合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。色谱法(硅预制板；20:1 CHCl3:EtOH)得到2.6mg棕褐色固体(产率5％).MS(ES):414.2(M++1)。实施例1将4-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(0.50g,1.94mmol)和4-反式-羟基环己胺(2.23g,19.4mmol)在甲基亚砜(10.0mL)中的溶液加热到130℃5小时。冷却至室温后，加入水(10.0mL)，得到的水溶液用EtOAc(3×10.0mL)提取。将合并的EtOAc溶液干燥(MgSO4)，过滤，滤液在真空下浓缩至干燥状态，残渣通过硅胶色谱纯化，得到0.49g(75％)的4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，熔点197-199℃；1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.25-1.59(m,8H),2.08(s,3H),2.29(s,3H),3.68-3.79(m,1H),4.32-4.38(m,1H),4.88(d,J=8Hz,1H),7.26-7.49(m,3H),8.40-8.44(dd,J=2.2,8Hz,2H),10.60(s,1H)；MS(ES):337.2(M++1)。
下列化合物按照类似于实施例1的方法得到。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-6-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ11.37(s,1H，吡咯-NH),8.45(m,2H,Ar-H),7.55(m,3H,Ar-H),6.17(s,1H，吡咯-H),4.90(br d,1H,NH),4.18(m,1H,CH-O),3.69(m,1H,CH-N),2.40-2.20(m,2H),2.19-1.98(m,2H),2.25(s,3H,CH3)1.68-1.20(m,4H)；MS(ES):323.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5-甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ11.37(s,1H，吡咯-NH),8.40(m,2H,Ar-H),7.45(m,3H,Ar-H),5.96(s,1H，吡咯-H),4.90(br d,1H,NH),4.18(m,1H,CH-O),3.69(m,1H,CH-N),2.38-2.20(m,2H),2.18-1.98(m,2H),2.00(s,3H,CH3)1.68-1.20(m,4H)；MS(ES):323.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。熔点245.5-246.5℃；1H NMR(200MHz,CD3OD)δ8.33(m,2H,Ar-H),7.42(m,3H,Ar-H),7.02(d,1H,J=3.6Hz，吡咯-H),6.53(d,1H,J=3.6Hz，吡咯-H).4.26(m,1H,CH-O),3.62(m,1H,CH-N),2.30-2.12(m,2H),2.12-1.96(m,2H),1.64-1.34(m,4H)；MS,M+1=309.3；分析(C18H20N4O)C,H,N。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(3-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.21-1.54(m,8H)；2.28(s,3H 152.33(s,3H)；3.70(m,1H),4.31(m,1H),4.89(d,1H),7.40(m,1H),8.61(m,2H),9.64(m,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(2-呋喃基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.26-1.64(m,8H),2.22(s,3H)202.30(s,3H),3.72(m,1H),4.23(m,1H),4.85(d,1H),6.52(m,1H),7.12(m,1H),7.53(m,1H),9.28(s,1H)；MS(ES):327.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(3-呋喃基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.25-1.63(m,8H),2.11(s,2H),2.27(s,3H),3.71(m,1H),4.20(m,1H),4.84(d,1H),7.03(m,1H),7.45(m,1H),8.13(m,1H),10.38(m,1H)；MS(ES):327.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-环戊基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.26-2.04(m,16H),2.26(s,2H),2.27(s,3H),3.15(m,1H),3.70(m,1H),4.12(m,1H),4.75(d,1H)；MS(ES):329.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(2-噻吩基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.28-1.59(m,8H),2.19(s,3H),2.29(s,3H),3.74(m,1H),4.19(m,1H),4.84(d,1H),7.09(m,1H),7.34(m,1H),7.85(m,1H),9.02(s,1H)；MS(ES):343.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(3-噻吩基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.21-1.60(m,8H),1.98(s,3H 2.23(s,3H),3.66(m,1H),4.22(m,1H),7.27(m,1H),7.86(m,1H),8.09(m,1H),11.23(s,1H)；MS(ES):343.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(4-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.26-1.66(m,8H),1.94(s,3H),2.28(s,3H),3.73(m,1H),4.33(m,1H),4.92(d,1H),7.13(m,2H),8.41(m,2H),11.14(s,1H)；MS(ES):355.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.26-1.71(m,8H),2.06(s,3H 2.30(s,3H),3.72(m,1H),4.30(m,1H),4.90(d,1H),7.09(m,1H),7.39(m,1H),8.05(m,1H),8.20(m,1H),10.04(s.1H)；MS(ES):355.2(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-(2-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.30-1.64(m,8H),2.17(s,3H),2.31(s,3H),3.73(m,1H),4.24(m,1H),4.82(d,1H),7.28(m,2H),8.18(m,1H),9.02(m,1H),12.20(s,1H)；MS(ES):355.3(M++1)。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.31(d,J=7.0Hz,6H),1.30-1.65(m,8H),2.27(s,3H),2.28(s,3H),3.01(m,J=7.0Hz,1H),3.71(m,1H),4.14(m,1H),4.78(d,1H)；MS(ES):303.2。dl-4-(2-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-异丙基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.31-1.42(br,4H),1.75-1.82(br,4H),2.02(s,3H),2.29(s,3H),3.53(m,1H),4.02(m,1H),5.08(d,1H),7.41-7.48(m,3H),8.30(m,2H),10.08(s,1H)；MS(ES):337.2(M++1)。4-(3,4-反式-二羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):353.2(M++1)。4-(3,4-顺式-二羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):353.2(M++1)。4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。熔点196-199℃；1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.72(s,3H),1.97(s,3H),2.31(s,3H),3.59(m,2H),3.96(m,2H),5.63(br,1H),7.44-7.47(m,3H),8.36-8.43(dd,J=1Hz,7Hz,2H),10.76(s,1H)；MS(ES):324.5(M++1)。dl-4-(2-反式-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。11H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.62(m,2H),1.79(br,4H),1.92(s,3H),2.29(s,3H),4.11(m,1H),4.23(m,1H),5.28(d,1H),7.41-7.49(m,3H),8.22(m,2H),10.51(s,1H)；MS(ES):323.2(M++1)。1对于制备2-反式-羟基环戊胺，参见PCT 9417090。dl-4-(3-反式-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。11H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.58-1.90(br,6H,),2.05(s,3H),2.29(s.3H),4.48-4.57(m,1H),4.91-5.01(m,2H),7.35-7.46(m,3H),8.42-8.47(m,2H),10.11(s,1H)；MS(ES):323.2(M++1)。1对于制备3-反式-羟基环戊胺，参见EP-A-322242。dl-4-(3-顺式-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。11H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.82-2.28(br,6H),2.02(s.3H),2.30(s,3H),4.53-4.60(m,1H),4.95-5.08(m,1H),5.85-5.93(d,1H),7.35-7.47(m,3H),8.42-8.46(m,2H),10.05(s,1H)；MS(ES):323.2(M++1)。1对于制备3-顺式-羟基环戊胺,参见EP-A-322242。4-(3,4-反式-二羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。11H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.92-1.99(br,2H),2.14(s,3H),2.20(br,2H),2.30(s,3H),2.41-2.52(br,2H),4.35(m,2H),4.98(m,2H),7.38-7.47(m,3H),8.38-8.42(m,2H),9.53(s,1H)；MS(ES):339.2(M++1)。1对于制备3-顺式-羟基环戊胺，参见PCT 9417090。4-(3-氨基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ2.02(s,3H),2.29(s,3H),2.71(t,2H),4.18(m,2H),5.75-5.95(m,3H),7.38-7.48(m,3H),8.37-8.41(m,2H),10.42(s,1H)；MS(ES):310.1(M++1)。4-(3-N-环丙基甲基氨基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ0.51(q,2H),0.40(q,2H),1.79-1.95(br,1H),2.36(s,3H),2.40(s,3H),2.72(t,2H),2.99(d,2H),4.04(t,2H),7.58-7.62(m,3H),8.22-8.29(m,2H)；MS(ES):364.2(M++1)。4-(2-氨基-2-氧乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.31(s,3H),2.38(s,3H),4.26(s,2H),7.36(m,3H).8.33(m,2H)；MS(ES):396.1(M++1)。4-(2-N-甲基氨基-2-氧乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1-99(s,3H),2.17(s,3H),2.82(d,3H),4.39(d,2H),5.76(t,1H),6.71(br,1H),7.41-7.48(m,3H),8.40(m.2H),10.6(s,1H)；MS(ES):310.1(M++1)。4-(3-叔丁基氧基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.45(s,9H),1.96(s,3H),2.29(s,3H),2.71(t,2H),4.01(q,2H),5.78(t,1H),7.41-7.48(m,3H),8.22-8.29(m,2H)；MS(ES):367.2(M++1)。4-(2-羟基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.92(s,3H),2.29(s,3H),3.81-3.98(br,4H),5.59(t,1H),7.39-7.48(m,3H),8.37(m,2H),10.72(s,1H)；MS(ES):283.1(M++1)。4-(3-羟基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.84(m,2H),1.99(s,3H),2.32(s,3H),3.62(t,2H),3.96(m,2H),3.35(t,1H),7.39-7.48(m,3H),8.36(m,2H),10.27(s,1H)；MS(ES):297.2(M++1)。4-(4-羟基丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.71-1.82(m,4H),1.99(s,3H),2.31(s,3H),3.68-3.80(m,4H),5.20(t,1H),7.41-7.49(m,3H),8.41(m,2H),10.37(s,1H)；MS(ES):311.2(M++1)。4-(4-反式-乙酰氨基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。4-(4-反式-甲磺酰氨基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶。4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶。4-(3-吡啶甲基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶。4-(2-甲基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-7-(1-苯乙基)吡咯并[2,3d]嘧啶。实施例2向冷却至0℃的三苯膦(0.047g,0.179mmol)和苯甲酸(0.022g,0.179mmol)的THF(1.0mL)混悬液中，在0℃下加入4-(4-反式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(0.05g,0.149mmol)。然后在10分钟内逐滴加入二乙基偶氮二羧酸酯。然后将反应升温至室温。反应完全后(TLC鉴别)，碳酸氢钠水溶液(3.0mL)淬灭反应混合物。分离水相，用乙醚(2×5.0mL)提取。合并有机相提取物，干燥，在真空下浓缩至干燥。向残渣中加入乙醚(2.0mL)和己烷(5.0mL)，这样过滤掉大量三苯膦氧化物。浓缩过滤液，得到粘性油，其可以通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到5.0mg(7.6％)的4-(4-顺式-苯甲酰氧基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):441.3(M++1)。该反应还制备了50.0mg(84％)的4-(3-环己烯基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):319.2(M++1)。实施例3向4-(4-顺式-苯甲酰氧基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(5.0mg,0.0114mmol)的乙醇(1.0mL)溶液中，加入10滴2M氢氧化钠。1小时后，用乙酸乙酯(3×5.0mL)提取反应混合物，干燥有机相，过滤，在真空下浓缩至干燥状态。残渣通过柱色谱(己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到3.6mg(94％)的4-(4-顺式-羟基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):337.2(M++1)。
下列化合物按照类似于实施例3的方法制备。4-(3-N,N-二甲基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.01(s,3H),2.31(s,3H),2.73(t,2H),2.97(s,6H),4.08(m,2H),6.09(t,1H),7.41-7.48(m,3H),8.43(m,2H),10.46(s,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。4-(2-甲酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ2.26(s,3H),2.37(s,3H),3.59-3.78(m,2H),3.88-4.01(m,2H),5.48-5.60(m,1H),7.38-7.57(m,3H),8.09(s,1H),8.30-8.45(m,2H),8.82(s,1H)；MS(ES):310.1(M++1)。4-(3-乙酰氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):338.2(M++1)。实施例4将4-(3-叔丁氧基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(70.0mg,0.191mmol)溶解在三氟乙酸∶二氯甲烷(1∶1,5.0mL)中。将得到的溶液在室温下搅拌1小时，然后回流2小时。冷却至室温后，混合物在真空下浓缩至干燥状态。残渣通过制备薄层色谱(EtOAc∶己烷∶AcOH=7∶2.5∶0.5)，得到40.0mg(68％)的4-(3-羟基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CD3OD)δ2.32(s,3H),2.38(s,3H),2.81(t,2H),4.01(t,2H),7.55(m.3H),8.24(m,2H)；MS(ES):311.1(M++1)。
下列化合物按照类似于实施例4的方法获得4-(3-氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):296.1(M++1),279.1(M+-NH3)。实施例5将4-(3-羟基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(50.0mg,0.161mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(0.50mL)，二氧杂环己烷(0.50mL)和水(0.25mL)的混合物中。向该溶液中加入甲胺(0.02mL,40％wt在水中，0.242mmol)，三乙胺(0.085mL)和N,N,N’N’-四甲基脲四氟硼酸酯(61.2mg,0.203mmol)。在室温下搅拌10分钟后，浓缩溶液，残渣通过制备薄层色谱纯化(EtOAc)，得到35.0mg(67％)的4-(3-N-甲基-3-氧丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.92(s,3H),2.30(s,3H),2.65(t,2H),4.08(t,2H),5.90(t,1H),6.12(m,1H),7.45(m,3H),8.41(m,2H),10.68(s,1H)；MS(ES):311.1(M++1)。下列化合物按类似于实施例5的方法获得4-(2-环丙烷羰基氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):350.2(M++1)。4-(2-异丁酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):352.2(M++1)。4-(3-丙酰氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.00-1.08(t,3H),1.71-2.03(m,4H),2.08(s,3H),2.37(s,3H),3.26-3.40(m,2H),3.79-3.96(m,2H),5.53-5.62(m,1H),6.17-6.33(m,1H).7.33-7.57(m,3H),8.31-8.39(m,2H),9.69(s,1H)；MS(ES):352.2(M++1)。4-(2-甲基磺酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.18(s,3H),2.27(s,3H),2.92(s,3H),3.39-3.53(m,2H),3.71-3.88(m,2H),5.31-5.39(m,1H),6.17-6.33(m,1H),7.36-7.43(m,3H),8.20-8.25(m,2H),9.52(s,1H)；MS(ES):360.2(M++1)。实施例6将4-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(0.70g,2.72mmol)和1,2-二氨基乙烷(10.0mL,150mmol)的混合物在惰性气体下回流6小时。在真空下除去过量的胺，然后分别用乙醚和己烷洗涤残渣，得到0.75g(98％)的4-(2-氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):282.2(M++1),265.1(M+-NH3)。实施例7
向4-(2-氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(70.0mg,0.249mmol)和三乙胺(50.4mg,0.498mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液中，在0℃下加入丙酰氯(25.6mg,0.024mL 0.274mmol)。1小时后，在真空下浓缩混合物，残渣通过制备薄层色谱纯化(EtOAc)，得到22.0mg(26％)的4-(2-丙酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶MS(ES):338.2(M++1)。
下列化合物按类似于实施例7的方法制备4-(2-N’-甲基脲乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ2.13(s,3H),2.32(s,3H),3.53(d,3H),3.55(m,2H),3.88(m,2H),4.29(m,1H),5.68(t,1H),5.84(m,1H),7.42(m,3H),8.36(dd,2H),9.52(s,1H)；MS(ES):339.3(M++1)。
4-(2-N’-乙基脲乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):353.2(M++1)。实施例8向1-(3-二甲基氨基丙基)3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(41.1mg,0.215mmol)，二甲基氨基嘧啶(2.4mg,0.020mmol)和丙酮酸(18.9mg,0.015mL,0.215mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液中，加入4-(2-氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(55.0mg,0.196mmol)。在室温下搅拌混合物4小时。进行常规检查和柱色谱(EtOAc)，得到10.0mg(15％)的4-(2’-丙酮酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶MS(ES):352.2(M++1)。实施例9向4-(2-氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(60.0mg,0.213mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液中，加入N-三甲基甲硅烷基异氰酸酯(43.3mg,0.051mL,0.320mmol)。在室温下搅拌混合物3小时，随后加入碳酸氢钠水溶液。通过少量硅胶过滤后，在真空下浓缩滤液至干燥状态，得到9.8mg(14％)的4-(2-脲乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶MS(ES):325.2(M++1)。
下列化合物按类似于实施例9的方法获得dl-4-(2-乙酰氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.28-1.32(d,J=8Hz,3H),1.66(s,3H),1.96(s,3H),2.30(s,3H)3.76-3.83(m,2H),4.10-4.30(m,1H),5.60-5.66(t,J=6Hz,1H),7.40-7.51(m,3H),8.36-8.43(m,2H),10.83(s,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。(R)-4-(2-乙酰氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.31(d,3H),1.66(s,3H)1.99(s,3H),2.31(s,3H),3.78-3.83(m,2H),4.17-4.22(m,1H),5.67(t,1H),7.38-7.5(m,3H),8.39(m,2H),10.81(s,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。(R)-4-(1-甲基-2-乙酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.41(d,3H),1.68(s,3H),2.21(s,3H),2.34(s,3H),3.46-3.52(br,m,2H),4.73(m,1H),5.22(d,1H),7.41-7.46(m,3H),8.36-8.40(m,2H),8.93(s,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。(S)-4-(2-乙酰氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.31(d,3H),1.66(s,3H)2.26(s,3H),2.35(s,3H),3.78-3.83(m,2H),4.17-4.22(m,1H),5.67(t,1H),7.38-7.5(m,3H),8.39(m,2H),8.67(s,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。(S)-4-(1-甲基-2-乙酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.41(d,3H),1.68(s,3H),2.05(s,3H),2.32(s,3H),3.46-3.52(m,2H),4.73(m,1H),5.22(d,1H),7.41-7.46(m,3H),8.36-8.40(m,2H),10.13(s,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。实施例104-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶与dl-1-氨基-2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基-丙烷和dl-1-氨基-1-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基-丙烷的混合物在类似于实施例1的条件下进行反应。反应得到dl-4-(1-甲基-2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基)乙基氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶和dl-4-(2-甲基-2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基)乙基氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶的混合物，通过柱色谱(EtOAc∶己烷=1∶3)将其分离。第一组分为dl-4-(1-甲基-2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.29-1.38(m,12H),1.95(s,3H),2.31(s,3H)3.34-3.43(m,2H),4.62-4.70(m,1H),5.36-5.40(d,J=8Hz,1H),5.53(br,1H),7.37-7.49(m,3H),8.37-8.44(m,2H),10.75(s,1H).MS 396.3(M++1)。第二组分为dl-4-(2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.26-1.40(m,12H),2.00(s,3H),2.31(s,3H)3.60-3.90(m,2H),3.95-4.10(m,1H),5.41-5.44(d,J=6.0Hz,1H),5.65(br,1H),7.40-7.46(m,3H),8.37-8.44(m,2H),10.89(s,1H).MS 396.2(M++1)。
下列化合物按类似于实施例10的方法制备(S,S)-4-(2-乙酰氨基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.43(m,4H),1.60(s,3H),1.83(m,2 H),2.18(s,3 H),2.30(m,2H),2.32(s,3H),3.73(br,1H),4.25(br,1H),5.29(d,1H),7.43-7.48(m,3H),8.35-8.40(m,2H),9.05(s,1H)。4-(2-甲基-2-乙酰氨基丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.51(s,6H),1.56(s,3H),2.07(s,3H),2.36(s,3H),3.76(d,2H),5.78(t,1H),7.41-7.48(m,3H),7.93(s,1H),8.39(m,2H),10.07(s,1H)；MS(ES):352.3(M++1)。实施例11
将dl-4-(1-甲基-2-(1,1-二甲基乙氧基)羰基氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(60.6mg,0.153mmol)用三氟乙酸(0.5mL,在二氯甲烷(2.0mL)中)处理14小时。在真空下除去有机溶剂至干燥状态。将残渣溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)和三乙胺(2.0mL)中。在0℃下加入乙酸酐(17.2mg,0.016,0.169mmol)。在室温下搅拌得到的混合物48小时，然后在真空下浓缩至干燥状态。残渣通过制备薄层色谱纯化(EtOAc)，得到27.0mg(52％)的dl-4-(1-甲基-2-乙酰氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ1.38-1.42(d,J=8Hz,3H),1.69(s,3H),2.01(s,3H),2.32(s,3H)3.38-3.60(m,2H),4.65-480(m,1H),5.23-5.26(d,J=6 Hz,1H),7.40-7.51(m,3H),8.37-8.43(m,2H),10.44(s,1H)；MS(ES):338.2(M++1)。实施例12(R,R)-4-(2-氨基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，按照类似于实施例1的方法从4-氯-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(0.15g,0.583mmol)和(1R,2R)-(-)-1,2-二氨基环己基(0.63g,5.517mmol)制备，在室温下用三乙胺(0.726g,7.175mmol)和乙酸酐(0.325g,3.18mmol)(在10.0mL N,N-二甲基甲酰胺中)处理2小时。在真空下除去溶剂后，向残渣中加入乙酸乙酯(10.0mL)和水(10.0mL)。分离混合物，用乙酸乙酯(2×10.0mL)提取水层。合并乙酸乙酯溶液，干燥(MgSO4)并过滤。在真空下将滤液浓缩至干燥状态，残渣通过柱色谱纯化(EtOAc∶己烷=1∶1)得到57.0mg(26％)的(R,R)-4-(2-乙酰氨基环己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.43(m,4H),1.60(s,3H),1.84(m,2H),2.22(s,3H),2.30(m,2H),2.33(s,3H),3.72(br,1H),4.24(br,1H),5.29(d,1H),7.43-7.48(m,3H),8.35-8.39(m,2H),8.83(s,1H)；MS(ES):378.3(M++1)。实施例13
向4-(2-羟基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(40.0mg,0.141mmol)(在1.0mL吡啶中)溶液中，在O℃下加入乙酸酐(O.108g,1.06mmol)。在室温下搅拌混合物4小时，在真空下除去溶剂。残渣通过制备薄层色谱纯化(EtOAc∶己烷=1∶1)，得到32.3mg(71％)的4-(2-乙酰氧乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.90(s,3H),2.08(s,3H),2.31(s,3H),4.05(m,2H),4.45(t,2H),5.42(m,1H),7.41-7.49(m,3H),8.42(m,2H),11.23(s,1H)。实施例14将Fmoc-β-Ala-OH(97.4mg,0.313mmol)和草酰氯(39.7mg,27.3μL,0.313mmol)的二氯甲烷(4.0mL)溶液，加入1滴N,N-二甲基甲酰胺，在0℃下搅拌1小时，然后在0℃下加入4-(2-氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(80.0mg,0.285mmol)和三乙胺(57.6mg,79.4μL,0.570mmol)。3小时后，在真空下浓缩混合物，用20％的哌啶在N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中的溶液处理0.5小时。在真空下除去溶剂后，残渣用二乙醚∶己烷(1∶5)洗涤，得到3.0mg(3％)的4-(6-氨基-3-氮杂-4-氧己基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):353.2(M++1)。实施例154-(2-氨基乙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶(70.0mg,0.249mmol)和琥珀酸酐(27.0mg,0.274mmol)的二氯甲烷(4.0mL)溶液中，加入1滴N,N-二甲基甲酰胺，在室温下搅拌4小时，用20％氢氧化钠(3×5.0mL)提取反应混合物。水溶液用3M盐酸酸化至pH=7.0。整个混合物用乙酸乙酯(3×10mL)提取。合并有机溶液，干燥(MgSO4)并过滤。在真空下将滤液浓缩至干燥状态，得到15.0mg(16％)的4-(7-羟基-3-氮杂-4,7-二氧庚基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。MS(ES):382.2(M++1)。实施例16在室温下向10mL二甲基甲酰胺(DMF)中，加入700mg的4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，然后加入455mg的N-Boc氨基乙酸，20mg N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP),293mg羟基苯并三唑(HOBT)和622mg的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCl)。搅拌反应混合物过夜。然后在减压下除去DMF，在20mL乙酸乙酯和50mL水中分配反应混合物。水相部分进一步用2×20mL乙酸乙酯提取，合并有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。在硅胶上纯化，用乙酸乙酯/己烷洗脱，得到410mg所需产物4-(顺式-3-(N-叔丁氧羰基-2-氨基-乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=480.2。然后在室温下用5mL 20％的三氟乙酸(在二氯甲烷中)处理，放置过夜，然后浓缩。用乙酸乙酯研磨，得到300mg的类白色固体；4-(顺式-3-(2-氨基-乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶三氟乙酸盐，MS(ES)(M++1)=380.1。
本领域技术人员可以理解下列的化合物可以由上面公开的方法合成4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=323.1。4-(顺式-3-(2-氨基-乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶三氟乙酸盐，MS(ES)(M++1)=380.1。4-(3-乙酰氨基)哌啶基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=364.2。4-(N’-甲基脲丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=353.4。4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=352.4。4-(N’-甲基脲丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=367.5。4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=309.1。4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=342.8。4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=327.2。4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES)(M++1)=310.2。实施例17合成路线Ⅸ(7)的吡咯氮(合成路线Ⅸ)在碱性条件下用二叔丁基碳酸氢盐保护，得到相应的氨基甲酸酯(22)。(22)进行区位选择性基团溴化，得到溴化物(23)。通常，化合物(23)用作多种亲核偶合的关键亲电子中间体。烷基溴与苯酚钠三水合物的置换得到化合物(24)。随后在一步中进行芳基氯的取代和去除叔丁基氨基甲酸酯保护基团，得到所需的化合物(25)。
按照合成路线Ⅸ化合物(22)-(25)的详细合成 二叔丁基碳酸氢盐(5.37g,24.6mmol)和二甲基氨基吡啶(1.13g,9.2mmol)加入到含有(7)(1.50g,6.15mmol)和吡啶(3mL)的溶液中。20小时后浓缩反应物，残渣在CH2Cl2和水中分配。分离CH2Cl2层，MgSO4干燥，过滤，浓缩得到黑色固体。闪蒸色谱(SiO2；1/9 EtOAc/己烷Rf 0.40)得到1.70g(80％)白色固体(22)。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ8.50(m,2H,Ar-H),7.45(m,3H,Ar-H),6.39(s,1H，吡咯-H),2.66(s,3H，吡咯-CH3),1.76(s,9H，氨基甲酸酯-CH3)；MS,M+1=344.1；Mpt=175-177℃。 将N-溴代丁二酰亚胺(508mg,2.86mmol)和AIBN(112mg,0.68mmol)加入到含有(22)(935mg,2.71mmol)和CCl4(50mL)的溶液中。将溶液加热回流。2小时后将反应物冷却到室温，在真空下浓缩得到白色固体。闪蒸色谱(SiO2；1/1 CH2Cl2/己烷Rf0.30)得到960mg(84％)白色固体(23)。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ8.52(m,2H,Ar-H),7.48(m,3H,Ar-H),6.76(s,1H，吡咯-H)4.93(s,2H，吡咯-CH2Br),1.79(s,9H，氨基甲酸酯-CH3)；MS,M+1=423.9；Mp155-157℃。 苯酚钠三水合物(173mg,1.02mmol)一部分加入到溴化物(23)(410mg,0.97mmol)溶解在CH2Cl2(5mL)和DMF(10mL)的溶液中。2小时后，在CH2Cl2和水中分配反应混合物。水层用CH2Cl2提取。合并CH2Cl2层，用水洗涤，MgSO4干燥，过滤，浓缩得到黄色固体。闪蒸色谱(SiO2；1/6 EtOAc/己烷Rf 0.40)得到210mg(50％)的白色固体(24)。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ8.53(m,2H,Ar-H),7.48(m,3H,Ar-H),7.34(m,2H,Ar-H),7.03(m,3H,Ar-H),6.83(s,1H,吡咯-H),5.45(s,2H,ArCH2O),1.76(s,9H,氨基甲酸酯-CH3)；MS,M=436.2。
25含有(24)(85mg,0.20mmol),N-乙酰基乙二胺(201mg,1.95mmol)and DMSO(3mL)加热到130℃。3小时后将反应物冷却到室温，在EtOAc和水中分配。用EtOAc(2x)提取水层。合并EtOAc层，用水洗涤，MgSO4干燥，过滤，浓缩。闪蒸色谱(SiO2；1/10 EtOH/CHCl3Rf0.25)得到73mg(93％)的白色泡沫固体(25)。1H NMR(200MHz,DMSO-d6)δ11.81(br s,1H,N-H),8.39(m,2H,Ar-H),8.03(br t,1H,N-H),7.57(br t,1H,N-H),7.20-7.50(m,5H,Ar-H),6.89-7.09(m,3H,Ar-H),6.59(s,1H，吡咯-H),5.12(s,2H,ArCH2O),3.61(m,2H,NCH2),3.36(m,2H,NCH2),1.79(s,3H,COCH3)；MS,M+1=402.6。
下列化合物按照类似于实施例17的方法获得。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。mp 196-197℃；MS(ES):401.6(M++1)。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES):420.1(M++1)。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES):436.1(M++1)。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES):432.1(M++1)。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-吡啶-2-酮)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES):403.1(M++1)。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES):400.9(M++1)。
4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES):414.8(M++1)。
4-(2-N'-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶，MS(ES):416.9(M++1)。人腺苷A1和A2a受体的酵母β-半乳糖苷酶受体基因分析用人腺苷A1(A1R；CADUS菌株CY12660)或人A2a(A2a；CADUS菌株CY8362)以及附加的lacZ(β-半乳糖苷酶)报告基因转化酵母菌株(S.cerevisiae)，将其用作功能性读出器。下文列出转化体的完全描述(参见酵母菌株)。将NECA(5’-N-乙基羧基氨基腺苷)，一种对A1和A2a受体具有相似亲合性的强效腺苷受体激动剂，用作所有分析的配体。检查实验化合物在8种浓度下(0.1-10,000nM)，通过CY12660或CY8362抑制NECA-诱导的β-半乳糖苷酶活性的能力。
酵母储备培养物的制备。
每种酵母菌株，CY 12660和CY8362分别在LT琼脂平板上划线，然后在30℃保温直到观察到克隆。将来自这些克隆的酵母加入LT液体培养基(pH 6.8)，然后在30℃生长过夜。然后将各酵母菌株稀释到OD600=1.0-2.0(约1-2×107细胞/ml)，该值通过分光光度计(MolecularDevices VMAX)测定。向每6ml酵母液体培养物中加入4ml 40％甘油(1:1.5 vol:vol)(“酵母/甘油储备液”)。从该酵母/甘油储备液制备十个1ml等分液，在-80℃储藏，直到需要分析时。
酵母A1R和A2aR分析。
将每小瓶CY8362和CY12660酵母/甘油储备液解冻，然后在添加其它物质的LT液体培养基(92ml LT液体培养基，向其中加入5ml 40％葡萄糖、0.45ml 1M KOH和2.5ml Pipes,pH 6.8)中培养。使液体培养物在30℃生长16-18小时(过夜)。然后在含有4U/ml腺苷脱氨酶(来自牛肠粘膜的Ⅵ或Ⅶ型，Sigma)的LT培养基中稀释从过夜生长培养物取出的液体，以得到CY8362(A2aR)的OD600=0.15(1.5×106个细胞/ml)，和CY12660(A1R)的OD600=0.50(5×106个细胞/ml)。
在96-孔微滴板中，以终体积100ul进行分析，从而在所有孔中得到终浓度为2％的DMSO。对于初步筛选，各实验化合物应用1-2个浓度(10uM,1μM)。对于化合物作图谱，实验8个浓度(10000,1000,500,100,50,10,1和0.1nM)。向各微滴板中，将10ul 20％DMSO加入“对照”和“总”孔，而将10ul实验化合物(在20％DMSO中)加入未知孔中，随后，将10ul NECA(对于A1R为5uM，对于A2aR为1uM)加入总孔和未知孔；将10ul PBS加入对照孔。最后，将80ul酵母菌株，CY8362或CY12660，加入所有孔中。然后简单振摇所有平板(LabLine轨道振摇器2-3分钟)，然后在30℃干燥烤箱中保温4小时。
可以利用比色法(例如，ONPG,CPRG)，发光法(例如，Galacton-Star)，或荧光测定底物(例如，FDG,Resorufin)定量β-半乳糖苷酶活性。目前，由于荧光检测具有优越的信躁比，相对无干扰，和低消耗，使其成为优选的检测方法。将荧光素二半乳糖吡喃糖苷(FDG,Molecular Probes或Marker Gene Technologies)，一种β-半乳糖苷酶的荧光底物，以20ul/孔(终浓度=80uM)加入所有孔。振摇平板5-6秒(LabLine轨道振摇器)，然后在37℃保温90分钟(95％O2/5％CO2培养箱)。在90分钟培养期的终点，加入20ul/孔1MNa2CO3，终止β-半乳糖苷酶活性，并将所有板层振摇5-6秒。然后振摇平板6秒，利用荧光仪(Tecan Spectrafluor；激发光=485nm，发射光=535nm)测定相对荧光强度。
计算“对照”孔的相对荧光值被解释为背景，该值从“总”和“未知”值中扣除。化合物图谱分析是经对数转换(x-轴化合物的浓度)，然后按照一个适合计算IC50值的位点竞争曲线进行(GraphPadPrism)。
酵母菌株啤酒糖酵母培养了菌株CY12660[farl*1442 tbtl-1 fusl-HIS3 canlstel4::trpl::LYS2 ste3*1156 gpal(41)-Gai3 lys2 ura3 leu2 trpl:his3；LEU2 PGKp-MfalLeader-hAlR-PHO5term 2mu-orig REP3 Ampr]和CY8362[gpalprGasE10K farl*1442 tbtl-1 fusl-HIS3 canl ste14::trpl:LYS2 ste3*1156 lys2 ura3 leu2 trpl his3；LEU2 PGKp-hA2aR 2mu-oriREP3 Ampr]。
LT培养基LT(Leu-Trp添加)培养基由100g DIFCO酵母氮基础培养基组成，同时添加下列物质1.0g缬氨酸，1.0g天冬氨酸，0.75g苯丙氨酸，0.9g赖氨酸，0.45g酪氨酸，0.45g异亮氨酸，0.3g蛋氨酸，0.6g腺嘌呤，0.4g尿嘧啶，0.3g丝氨酸，0.3g脯氨酸，0.3g半胱氨酸，0.3g精氨酸，0.9g组氨酸和1.0g苏氨酸。
表达人A1腺苷受体的酵母菌株的构建在该实施例中，描述了表达人A1腺苷受体的酵母菌株的构建，所述人A1腺苷受体功能上参与酵母信息素系统途径。
Ⅰ．表达载体的构建为了构建一种人A1腺苷受体的酵母表达载体，应用基于人A1腺苷受体的公开序列设计的引物和标准技术，通过人海马mRNA的逆转录酶PCR得到A1腺苷受体cDNA。将PCR产物亚克隆到酵母表达质粒Pmp15的NcoⅠ和XbaⅠ位点。
如下述从pLPXt制备pMP15质粒通过消化、末端-填补和重连接去除YEP51的XbaⅠ位点(Broach,J.R.等(1983)“高水平、可诱导地在酵母中表达克隆基因的载体”p.83-117，在M.Inouye(编)的《基因表达的实验操作》科学出版社(Academic Press,New York)，制备Yep51NcoDXba。通过BamHⅠ消化、末端填补、接头(New England生物学实验室，#1081)连接、XbaⅠ消化和重连接，在BamHⅠ位点产生另一个XbaⅠ位点，以制备YEP51NcoXt。用Esp31和NcoⅠ消化该质粒，然后将其与PCR产生的Leu2和PGKp片段连接。应用含有Esp31和BcoⅠ位点的引物，从YEP51Nco通过扩增产生2kb的Leu2 PCR产物。应用含有BglⅡ和NcoⅠ位点的PCR引物通过扩增从pPGKas产生660个碱基对的PGKpPCR产物(Kang,Y.-S.等(1990)细胞分子生物学(Mo!.Cell.Biol.)10:2582-2590)。得到的质粒被称为pLPXt。通过将a-因子前原(pre-pro)引导序列的编码区插入NcoⅠ位点，修饰pLPXt。插入前原引导序列的目的是为了使NcoⅠ克隆位点保留在引导序列的3’-端，而不在5’-端重新出现。通过这种方法，可以通过用NcoⅠ和XbaⅠ消化质粒克隆受体。得到的质粒被称为pMP15。
插入人A1腺苷受体cDNA的pMP15质粒被命名为p5095。在该载体中，受体cDNA与酵母a-因子前原引导序列的3’端融合。在蛋白质成熟修饰过程中，前原肽序列被切除，产生成熟的全长受体。该步骤发生在受体通过酵母分泌途径加工过程中。该质粒通过Leu筛选维持(即，在缺乏亮氨酸的培养基上生长)。测定了克隆的编码区的序列，发现与公开文献(GenBank登录号545235和556143)中报道的一致。
Ⅱ．酵母菌株的构建为了制备表达人A1腺苷受体的酵母菌株，将酵母菌株CY7967用作起始亲代菌株。CY7967的基因型如下MATa gpaD1163 gpal(41)Ga13 farlD1442 tbt-1 FUS1-HIS3 canlste14::trp1::LYS2 ste3D11 56 lys2 ura3 leu2 trp1 his3遗传标记综述如下MATa 匹配型a.gpalD1163内源性酵母G-蛋白GPA1已经被删除。gpal(41)Gai3 将gpal(41)-Gai3整合入酵母基因组。该嵌合Ga蛋白由内源性酵母Ga亚基GPA1的前41个氨基酸和与其融合的哺乳动物G-蛋白Gai3组成，所述哺乳动物G-蛋白Gai3中关联N-末端氨基酸已经被删除。farlD1442FARI基因(负责细胞周期阻滞)已经被删除(因此防止由于信息素应答途径的激活而导致的细胞周期的阻滞)。tbt-1通过电穿孔具有高度转化效率的菌株。FUSI-HIS3FUS1启动子和HIS3编码区之间的融合(由此产生一种信息素可诱导的HIS3基因)。can 1精氨酸/刀豆氨酸透性酶。ste14::trp1::LYS2....STE14(一种C-法呢基甲基转移酶)的基因破坏(由此降低通过信息素途径的基础信号)。ste3Dl1156 内源性酵母SIR,a因子信息素受体(STE3)被破坏。lys2 2-aminoapidate还原酶中缺陷，酵母必需赖氨酸维持生长。ura3 乳清苷-5’-磷酸盐脱羧酶中缺陷，酵母必需尿嘧啶维持生长。leu2 b-异丙基苹果酸盐脱氢酶中缺陷，酵母必需亮氨酸维持生长。trp1核苷酸邻氨基苯甲酸盐中缺陷，酵母必需色氨酸维持生长。his3脒唑甘油磷酸酯脱氢酶中缺陷，酵母必需组氨酸维持生长。
通过电穿孔将两种质粒转化到菌株CY7967中质粒p5095(编码人A1腺苷受体；见上述)和质粒p1584(它是一种FUS1-β-半乳糖苷酶报告基因质粒)。质粒p1584来源于质粒pRS426(Christianson,T.W.等(1992)基因(Gene)110:119-1122)。质粒pRS426在核苷酸2004-2016有一个多接头位点。将FUS1启动子和β-半乳糖苷酶基因的融合体插入限制性位点EagⅠ和XhoⅠ，以产生质粒p1584。P1584通过Trp筛选维持(即，在缺乏亮氨酸的培养基中生长)得到的携带p5095和p1584的菌株，被称为CY12660，表达人A1腺苷受体。为了在液体或琼脂板上生长该菌株，使用缺乏亮氨酸和色氨酸的基础培养基。为了在平板上进行生长分析(检测FUS1-HIS3)，使平板pH为6.8，并含有0.5-2.5mM 3-氨基-1,2,4-三唑，不含亮氨酸、色氨酸和组氨酸。作为特异性对照，所有实验中均包括与一种或其它基于酵母的七种跨膜受体筛选的比较。
表达人A2a腺苷受体的酵母菌株的构建在该实施例中，描述了表达人A2a腺苷受体的酵母菌株的构建，所述人A2a腺苷受体功能上参与酵母信息素系统途径。
Ⅰ．表达载体的构建为了构建一种人A2a腺苷受体的酵母表达载体，从Phil Murphy博士(NIH)处得到人A2a受体cDNA。接受该克隆后，对A2a受体插入体测序，发现与公开的序列相同(GenBank登录号#S46950)。用VENT聚合酶通过PCR从质粒切除受体cDNA，然后克隆到质粒pLPBX中，其通过酵母中的组成型磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子驱动。再次完全测序全整插入体的序列后，发现其与公开序列相同。然而，由于应用的克隆方法的缘故，受体的羧基末端附加了三个氨基酸，GlySerVal。
Ⅱ．酵母菌株的构建为了制备表达人A2a腺苷受体的酵母菌株，将酵母菌株CY8342用作起始亲代菌株。CY8342的基因型如下MATa farlD1442 tbt1-1 lys2 ura3 leu2 trp1 his3 fus1-HIS3 canlste13D1156gpaD1163 ste14::trpl::LYS2 gpalp-rGasE10K(或gpalp-rGasD229S或gpal p-rGasE10K+D229S)遗传标记如实施例1中的描述，除了G-蛋白质变异。为了表达人A2a受体，应用其中内源性酵母G蛋白GPA1已经被删除并被哺乳动物Gas替代的酵母菌株。应用三种大鼠Gas突变体。这三种突变体含有一种或两种点突变，这将它们转化成有效地连接酵母βr的蛋白质。他们被认定为GasE10K(其中十位的谷氨酸被赖氨酸替代)、GasD229S(其中229位的天冬氨酸被丝氨酸替代)和GasE10K+D229S(其中含有两种点突变)。
用亲代载体pLPBX(受体-)或用pLPBX-A2a(受体+)转化菌株CY8342(携带三种突变大鼠Gas蛋白质之一)。加入具有与β-半乳糖苷酶编码序列(见上述)融合的FUS1启动子的质粒，以评价信息素应答途径激活的量级。
应用表达人A1腺苷受体的酵母菌株的功能分析在该实施例中，描述了酵母中人A1腺苷受体的调节物的功能筛选分析过程。
Ⅰ．分析中应用的配体腺苷，该受体的一种天然激动剂，以及其它两种合成激动剂用于该分析过程。在一小组实验中使用腺苷(据报道EC50约为75nM),和(-)-N6-(2-苯基异丙基)-腺苷(PIA)(据报道亲合性约为50nM)。所有生长分析中均使用5’-N-乙基羧基酰氨基-腺苷(NECA)。为了防止由于生长培养基中存在腺苷而导致发生信号，向所有分析中加入腺苷脱氨酶(4U/ml)。
Ⅱ．酵母中的生物学应答通过将A1受体表达载体(p5095，见上述)引入一系列表达不同G蛋白亚基的酵母菌株，评价A1腺苷受体在异源酵母系统中功能性偶联的能力。这些转化体的绝大部分表达Gai或Gao亚型的Ga亚基。还实验了其它Ga蛋白的混杂受体-Ga蛋白偶联的可能身份。在各种菌株中，将STE18和嵌合STE18-Gγ2构建体整合到酵母的基因组中。酵母菌株携带一种缺陷型HIS3基因和一种FUS1-HIS3的整合拷贝，由此得以在含有3-氨基-1,2,4-三唑(以0.2,0.5和1.0mM进行实验)和缺乏组氨酸的选择性培养基中筛选。分析转化体，在含有3-氨基-1,2,4-三唑，4U/ml腺苷脱氨酶和缺乏组氨酸的培养基上制备细胞单层。应用五微升各种浓度的配体(例如，0,0.1,1.0，和10mM的NECA)。监测生长2天。在各种酵母菌株中以该方式实验配体-依赖性生长应答。结果在下表1中概括。符号(-)表明没有检测到配体依赖性受体激活，而(+)表示配体-依赖性应答。术语“LIRMA”表示配体独立性受体介导的激活。
表3
如表3所示，发现在表达GPA1(41)-Gai3嵌合体的酵母菌株中发生最强烈的信号。
Ⅲ．fusl-LacZ分析为了更充分地鉴定信息素应答途径激活的特征，测定了由于激动剂刺激，通过fullLacZ的β-半乳糖苷酶的合成。为了进行β-半乳糖苷酶分析，向表达人A1腺苷受体以及共同表达Stel8-Gγ2嵌合体和GPA41-Gαi3的酵母菌株的对数中期培养物加入增加浓度的配体。分离转化体，在存在组氨酸和4U/ml腺苷脱氨酶的情况下生长过夜。与4U/ml腺苷脱氨酶和配体培养五小时后，用CPRG作为β-半乳糖苷底物测定β-半乳糖苷酶的诱导。每次分析使用5×105个细胞。
NECA刺激得到的结果显示浓度为10-8M的NECA刺激约2-倍β-半乳糖苷酶活性。而且，NECA浓度为10-5M时，观察到约10-倍的刺激指数。
通过确认拮抗剂对该菌株的作用，扩大该分析的应用。测试了两种已知腺苷拮抗剂，XAC和DPCPX，在β-半乳糖苷酶分析中竞争性拮抗NECA(浓度为5Mm)的能力。在这些分析中，用FDG作为底物和每次分析1.6×105个细胞测定β-半乳糖苷酶的诱导。结果表明XAC和DPCPX均可作为酵母-表达的A1腺苷受体的强效拮抗剂，IC50值分别为44nM和49nM。
为了确定该抑制作用是否特异于A1亚型，用基于酵母的A2a受体分析进行了一系列补充实验(在实施例4中描述)。基于酵母的A2a分析得到的结果表明，XAC是相对有效的A2a受体拮抗剂，与公开的报道一致。相比较而言，DPCPX在该受体上相对无效，如公开的报道所期望的。
Ⅳ．放射性配体结合通过测定受体的放射性配体结合参数进一步对A1腺苷受体分析定性。用从表达人A1腺苷受体的酵母制备的膜，分析由几种腺苷受体参照化合物XAC、DPCPX、和CGS对[3H]CPX的取代结合。将表达人A1腺苷受体的酵母膜的结果与表达人A2a腺苷受体或人A3受体的酵母膜的结果进行比较，以考察结合特异性。为了进行该分析，将50mg膜与0.4nM[3H]CPX和增加浓度的腺苷受体配体共同保温。在50mM Tris-HCl,pH 7.4,1mM EGTA,10mM MgCl2,0.25％BSA和2U/ml腺苷脱氨酶中，同时存在蛋白酶抑制剂的存在下在室温下培养60分钟。加入50mM冰冷却的Tris-HCl,pH 7.4和10mM MgCl2终止结合，然后应用Packard 96-孔收获器，在预先用0.5％polyethyenimine浸泡的GF/B滤器上快速过滤。应用Prism2.01软件，通过非线性最小平方曲线适配程序(nonlinear least square curve fitting procedure)分析数据。该实验中得到的IC50值在表4中概括如下表4
这些数据表明参考化合物具有与文献中报道一致的亲合性。这些数据进一步表明，基于酵母的分析对分辨受体亚型特异性足够灵敏。
应用表达人A2a腺苷受体的酵母菌株的功能性分析在该实施例中，描述了人A1腺苷受体调节物在酵母中的功能筛选分析过程。
Ⅰ．分析中应用的配体天然配体腺苷，以及其他完全定性和商业提供的配体用于研究人A2a受体在酵母中的功能性表达。该分析过程中应用了三种配体。它们包括配体报道的Ki 功能腺苷500nM激动剂5’-N-以及羧基酰氨基腺苷10-15nM 激动剂(NECA)(-)-N6-(2-苯基异丙基)-腺苷 100-125nM激动剂(PIA)为了防止由于生长培养基中存在腺苷而导致产生信号，向所有分析中加入腺苷脱氨酶(4U/ml)。
Ⅱ．酵母中的生物学应答测试了A2a受体激动剂在用A2a受体表达质粒转化并表达GasE10K、GasD229S或GasE10K+D229S的酵母中刺激信息素应答途径的能力。配体以受体依赖性方式刺激信息素应答途径的能力由酵母表型的改变显示。受体激活使表型从组氨酸营养缺陷型改变为组氨酸原养型(fusl-HIS3的激活)。分离出三种独立转化体，在存在组氨酸的情况下生长过夜。清洗细胞，除去组氨酸，稀释到2×106个细胞/ml。将5μl各种转化体在存在或缺乏4U/ml腺苷脱氨酶的情况下，点到非选择性培养基(包括组氨酸)或选择性培养基(1mM AT)上。平板在30℃生长24小时。在存在组氨酸的情况下，受体+(R+)和受体-(R-)菌株均可生长。然而在缺乏组氨酸的情况下，仅R+细胞生长。因为没有向这些平板中加入配体，该结果可能有两种解释。一种可能的解释是，携带受体的酵母由于配体独立性受体介导的激活(LigandIndependent Receptor Mediated Activation,LIRMA)处于生长有利状态。另一种解释是酵母已经合成了配体腺苷。为了鉴别这两种可能性，向生长中的酵母和平板中加入降解配体的酶，腺苷脱氨酶(ADA)。在存在腺苷脱氨酶的情况下，R+细胞不再在缺乏组氨酸的情况下生长，表明酵母实际上合成了配体。
该解释通过液体中的A2a生长分析确证。在该实验中，在存在或缺乏腺苷脱氨酶(4U/ml)的情况下，培养三种密度的(1×106个细胞/ml；3×105个细胞/ml；1×105个细胞/ml)R+酵母(一种表达A2a受体的GasE10K菌株)。使用增加浓度(0,0.1,0.2或0.4mM)的3-氨基-1,2,4-三唑(AT)，一种咪唑甘油-P脱水酶(HIS3基因的蛋白质产物)的竞争性拮抗剂，增强了分析的严紧度。在存在腺苷脱氨酶和3-氨基-1,2,4-三唑时，酵母生长不太旺盛。然而，无3-氨基-1,2,4-三唑时，腺苷脱氨酶几乎无效。因此腺苷脱氨酶本身对信息素应答途径无直接影响。
一种测量生长并可以为高通量筛选而小型化的替换研究是一种A2a受体配体印迹分析。表达A2a受体(A2aR+)或缺乏受体(R-)的GasE10K菌株在存在组氨酸和4U/ml腺苷脱氨酶的情况下生长过夜。清洗细胞除去组氨酸，稀释到5×106个细胞/ml。将1×106个细胞喷洒到含有4U/ml腺苷脱氨酶和0.5或1.0mM 3-氨基-1,2,4-三唑(AT)的选择性平板上，使其干燥1小时。将5μl下列试剂应用于单层10mM腺苷，38.7mM组氨酸，二甲亚砜(DMSO),10mMNECA。细胞在30℃生长24小时。结果显示，无受体的细胞仅可在加有组氨酸的培养基中生长。相比较而言，R+细胞仅在A2a受体配体PIA和NECA印迹的面积上生长。因为平板含有腺苷脱氨酶，腺苷印迹的地方缺乏生长，证明腺苷脱氨酶是有活性的。
Ⅲ.fusl LacZ分析为了定量酵母配对途径的活化作用，测定了通过fusl LaeZ合成β-半乳糖苷酶。用编码人A2a受体(R+)的质粒或缺乏受体(R-)的质粒转化表达GasE10K,GasD229S或GasE10K+D229S的酵母菌株。分离转化体，在存在组氨酸和4U/ml腺苷脱氨酶的情况下生长过夜。将1×107个细胞稀释到1×106个细胞/ml，然后暴露于增加浓度的NECA4小时，然后测定细胞中的β-半乳糖苷酶活性。结果证明，R-菌株中基本上没有检测到β-半乳糖苷酶活性，而在表达GasE10K,GasD229S或GasE10K+D229S的的R+菌株中，随着NECA浓度的增加，检测到β-半乳糖苷酶活性随之增加，表明在被检测的β-半乳糖苷酶单位中，对应于增加浓度的配体检测到了剂量依赖性增加。该剂量依赖性仅在表达A2a受体的细胞中观察到。而且，A2a受体的最强效Gas构建体是GasE10K。GasD229S是A2a受体的次强效Gas构建体，而GasE10K+D229S构建体在测试的三种Gas构建体中效果最弱，当然GasE10K+D229S构建体也可刺激可容易检测量的β-半乳糖苷酶活性。
为了进一步描述鉴定分析，参见美国专利申请序列号09/088985，发明名称为“腺苷受体在酵母中的功能性表达”，申请于1998年6月2日(代理机构案号CPI-093)，其全部内容并入本文作为参考。
人腺苷受体亚型的药理学特征材料和方法材料[3H]-DPCPX[环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤，8-[二丙基-2,3-3H(N)](120.0 Ci/mmol)；[3H]-CGS21680，[羧乙基-3H(N)](30Ci/mmol)和[125I]-AB-MECA([125I]-4-氨基苯甲基-5’-N-甲基羧基酰氨基腺苷)(2,200 Ci/mmol)从New England Nuclear(Boston,MA)购买。XAC(黄嘌呤胺类同系物)；NECA(5’-N-乙基羧基酰氨基腺苷)；和IB-MECA来自Reasearch Biochemicals International(RBI,Natick,MA)。腺苷脱氨酶和完全蛋白酶抑制剂混合片从BoehringerMannheim Corp.(Indianapolis,IN)购买。来自HEK-293细胞、分别稳定表达人腺苷2a[RB-HA2a]；腺苷2b[RB-HA2b]；和腺苷3[RB-HA3]受体亚型的细胞膜从Receptor Biology(Beltsville,MD)购买。细胞培养试剂来自Life Technologies(Grand Island,NY)，除了血清来自Hyclone(Logan,UT)。
酵母菌株啤酒糖酵母如上述培养菌株CY12660[farl*1442tbtl-1 fus1-HIS3 canl ste14::trp1::LYS2 ste3*1156 gpal(41)-Gai3 lys2 ura3leu2 trp1:his3；LEU2PGKp-Mfal Leader-hAl R-PHO5term 2mu-origREP3 Ampr和CY8362[gpalp-rGasE10K far1*1442tbtl fus1-HIS3 canlste14::trp1:LYS2 ste3*1156 lys2 ura3 leu2 trp1 his3；LEU2 PGKp-hA2aR2mu-ori REP3 Ampr]。
酵母培养物转化的酵母在添加2％蔗糖的Leu-Trp[LT]培养基(pH 5.4)中生长。为了制备细胞膜，将250ml LT培养基与30ml1-2×106个细胞/ml的起始滴度培养过夜，在旋转产生的固定氧气条件下，在30℃培养。16小时生长后，离心收集细胞，如下述制备细胞膜。
哺乳动物组织培养稳定表达人腺苷2a受体亚型的HEK-293细胞(Cadus clone#5)在添加10％胎牛血清和1X青霉素/链霉素的Dulbeco’s最小基本培养基(DMEM)中，在500mg/ml G418抗生素的选择压力下，在37℃潮湿的含5％CO2大气下生长。
酵母细胞膜制剂过夜培养后，通过在Sorvall RT6000离心机中以2,000xg离心收获250ml培养物。细胞在冰-冷却的水中清洗，在4℃离心，沉淀重悬浮于添加蛋白酶抑制剂混合片(每25ml缓冲液1片)的10ml冰-冷却的溶胞缓冲液[5mM Tris-HCl,pH 7.5；5mMEDTA]。向悬浮液中加入玻璃珠(17g；目数400-600；Sigma)，在4℃剧烈涡旋5分钟打碎细胞。用另外30ml溶胞缓冲液加蛋白酶抑制剂稀释匀浆液，在3,000xg离心5分钟。随后膜以36,000xg(SorvallRC5B,SS34型转子)成粒45分钟。得到的细胞膜沉淀重悬浮于添加蛋白酶抑制剂混合片(每50ml缓冲液1片)的5ml膜缓冲液[50MmTris-HCl,pH 7.5；0.6mM EDTA；和5mM MgCl2]中，在-80℃以备进一步实验。
哺乳动物细胞膜制剂如以前的描述制备HEK-293细胞膜(DuzicE等生物化学杂志(J.Biol.Chem.)267,9844-9851,1992)。简单地说，用PBS清洗细胞，用橡胶淀帚收获。细胞在Sorvall RT6000离心机中在4℃以200×g沉淀。在4℃将沉淀重悬浮于5ml/m溶胞缓冲液(5mM Tris-HCl,pH 7.5；5mM EDTA；5mM EGTA；0.1mM苯基甲基磺酰基氟化物，10mg/ml抑肽素A；和10mg/ml抑肽酶)，在Dounce匀浆仪中匀浆。然后在36.000xg(Sorvall RC5B,5534型转子)离心细胞溶解液45分钟，然后将沉淀重悬浮于5ml膜缓冲液[50mM Tris-HCI，pH 7.5；0.6mM EDTA；5mM MgCl2；0.1mM苯基甲基磺酰基氟化物，10mg/ml抑肽素A；和10mg/ml抑肽酶)，然后在-80℃储存以备进一步实验。
用Bio-Rad蛋白质分析试剂盒，基于Bradford染料-结合程序(Bradford,M.分析生化(Anal.Biochem.)72:248(1976))确定酵母和哺乳动物细胞膜中总蛋白质浓度。
腺苷1受体亚型饱和和竞争放射性配体结合。
应用拮抗剂[3H]DPCPX作为放射性配体，进行对人A1受体亚型转化的酵母细胞膜结合的饱和和竞争。将细胞膜在结合缓冲液[50mMTris-HCl,pH 7.4；含10mM MgCl2；1.0mM EDTA；0.25％BSA；2U/ml腺苷脱氨酶和1片蛋白酶抑制剂混合片/50ml]中稀释至浓度为1.0mg/ml。在饱和结合时，将细胞膜(50μg/孔)与增加浓度的[3H]DPCPX(0.05-25nM)(在终体积为100μl的结合缓冲液中)，在缺乏和存在10μM未标记XAC的情况下，在96-孔微滴板中于25℃保温1小时。
在竞争结合时，细胞膜(50μg/孔)与[3H]DPCPX(1.0nM)(在终体积为100μl的结合缓冲液中)，在缺乏和存在10μM未标记XAC或浓度增加的竞争化合物的情况下，在96-孔微滴板中于25℃保温1小时。
腺苷2a受体亚型竞争放射性配体结合应用激动剂[3H]CGS-21680作为放射性配体，进行对来自稳定表达人A2a受体亚型的HEK293细胞的细胞膜的竞争结合。将细胞膜在结合缓冲液[50mM Tris-HCl,pH 7.4；含10mM MgCl2；1.0mM EDTA；0.25％BSA；2U/ml腺苷脱氨酶和1片蛋白酶抑制剂混合片/50ml]中稀释至浓度为0.2mg/ml。将细胞膜(10μg/孔)与[3H]CGS-21680(100nM)(在终体积为100μl的结合缓冲液中)，在缺乏和存在50μM未标记NECA或浓度增加的竞争性化合物的情况下，在96-孔微滴板中于25℃保温1小时。
腺苷3受体竞争放射性配体结合应用激动剂[125I]AB-MECA作为放射性配体，进行对来自稳定表达人A3受体亚型的HEK293细胞的细胞膜的竞争性结合。将细胞膜在结合缓冲液[50mM Tris-HCl,pH 7.4；含10mM MgCl2；1.0mM EDTA；0.25％BSA；2U/ml腺苷脱氨酶和1片蛋白酶抑制剂混合片/50ml]中稀释至浓度为0.2mg/ml。将细胞膜(10μg/孔)与[125I]AB-MECA(0.75nM)(在终体积为100μl的结合缓冲液中)，在缺乏和存在10μM未标记IB-MECA或浓度增加的竞争性化合物的情况下，在96-孔微滴板中于25℃保温1小时。
在培养终点，加入附加10mM MgCl2的冰-冷却的50mM Tris-HCl(pH 7.4)缓冲液，终止A1、A2a、和A3受体亚型放射性配体结合分析，然后在Filtermate 196细胞收获器(Packard)中通过预先于0.5％聚氮丙啶浸泡的玻璃纤维滤器(96孔GF/B UniFilter,Packard)快速过滤。滤纸板用50μl/孔的发光液体(MicroScint-20,Packard)涂布干燥，然后在TopCount(Packard)上读数。分析进行三次。在A1R,A2aR和A3R结合分析中，非特异性结合分别占总结合的5.6±0.5％,10.8±1.4％和15.1±2.6％。
腺苷2b受体亚型竞争放射性配体结合应用A1受体拮抗剂[3H]DPCPX作为放射性配体，进行对来自稳定表达人A2b受体亚型的HEK293细胞的细胞膜的竞争性结合。将细胞膜在结合缓冲液[10mM Hepes-KOH,pH 7.4；含1.0mM EDTA；0.1mM苄脒和2U/ml腺苷脱氨酶]中稀释至浓度为0.3mg/ml。将细胞膜(15μg/孔)与[3H]DPCPX(15nM)(在终体积为100μl的结合缓冲液中)，在缺乏和存在10μM未标记XAC或浓度增加的竞争性化合物的情况下，在96-孔微滴板中于25℃保温1小时。在培养终点，加入冰-冷却的10mM Hepes-KOH(pH 7.4)缓冲液终止分析，然后在Filtermate 196细胞收获器(Packard)中通过预先于0.5％聚氮丙啶(polyethylenimine)浸泡的玻璃纤维滤器(96孔GF/C UniFilter,Packard)快速过滤。滤纸板干燥涂布50μl/孔的发光液体(MicroScint-20,Packard)，然后在TopCount(Packard)上读数。分析进行三次。非特异性结合占总结合的14.3±2.3％。DPCPX；[3H]CGS-2-680和[125I]AB-MECA的特异性结合定义为总结合和非特异性结合之间的差值。针对总结合计算化合物的百分抑制率。通过适合一点模型的迭代曲线分析竞争性数据，应用GraphPad Prizm 2.01软件从IC50值计算KI值(Cheng和Prusof，生化药理学(Biochem.Pharmacol.)22,3099-3109,1973)。
结果某些细胞表面受体的主要功能是识别合适的配体。因此，我们通过确定配体结合亲合性，确定在酵母中表达的腺苷1受体亚型的功能完整性。从用人腺苷1受体亚型构建体转化的啤酒糖酵母制备的粗细胞膜表现特异性可饱和的[3H]DPCPX结合，KD为4.0±0.19nM。从饱和等温线计算KD和Bmax值，数据的斯卡查德转换(Scatchardtransformation)表明一级结合位点。酵母细胞膜制剂中腺苷结合位点的密度估计为716.8±43.4fmol/mg膜蛋白。
用亚型选择性腺苷配体(XAC,DPCPX；CGS-15943；CDS-046142；CDS-046i23；NECA,(R)-PIA；IB-MECA和Alloxazine)研究了用人A1受体亚型转化的重组酵母细胞的药理学亚型特征。它们以期望的数量级与[3H]DPCPX竞争。用这些化合物记录的置换曲线对于所有配体均表现典型的尖锐，各配体的数据可以通过一点适配模拟。从曲线的各化合物(表5)估计出的表观解离常数与其它文献公开的受体该值一致。
表5用人A1受体亚型转化的酵母细胞膜的Ki值配体 Kj(nM)XAC 5.5DPCPX7.1CGS-1.59410.8NECA179.6(R)-PIA 56.3IB-MECA 606.5Alloxazine 894.1CDS-046142 13.9CDS-0461239.8表6至12论证了本发明的脱氮嘌呤的效果和结构活性谱。表13和14证明了人腺苷受体位点的选择性可以通过调节脱氮嘌呤结构的官能度实现。表14还证明了这样一个令人惊奇的发现，即其中阐述的化合物与表13的化合物相比具有较低的毫微摩尔活性，以及较高的A2b受体选择性。
表6CDS-046142序列的活性N6-取代基的效果 表7CDS-046142序列的活性N2-取代基的效果
表8CDS-046142序列的活性吡咯环取代基的效果 表9
表10CDS-046123序列的活性N6-取代基的效果
CDS-046123序列的活性N6-取代基的效果
表12CDS-046123的“retro-amide”类似物 表13选择性腺苷拮抗剂分布表 12-噻吩基-2-基；2C5-H；3水溶性；4R5和R6为氢；5R3为3-氟苯基；6R3为3-氯苯基；7R3为吡啶基；8％活性@10μM
表14选择性A2b拮抗剂分布表
引用参考文献所有的专利、公开专利申请和其它参考文献，在此引用作为参考。等同物本领域熟练技术人员公认，或可以认可，应用常规实验可以制备出本发明具体描述的本发明具体实施方案的等同物。这些等同物液包括在下列权利要求的范围内。
权利要求
1．一种用于治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，以治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病。
2．按照权利要求1的方法，其中所述的对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病为一种疾病状态，其中所述疾病状态为由腺苷调控的疾病。
3．按照权利要求1的方法，其中所述的N-6取代7-脱氮嘌呤不为N-6苄基或N-6苯乙基取代。
4．按照权利要求2的方法，其中所述的疾病状态为中枢神经系统疾病，心血管疾病，肾病，炎性疾病，过敏性疾病，胃肠道疾病，眼部疾病，和呼吸疾病。
5．按照权利要求1的方法，其中所述的N-6取代7-脱氮嘌呤具有式Ⅰ的结构 其中R1和R2分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或一起形成取代或未取代的杂环；R3为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；R4为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；R5和R6分别独立为卤素原子，氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或R4和R5或R5和R6一起形成取代或未取代的杂环或碳环。
6．一种用于调控哺乳动物腺苷受体的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，以调控哺乳动物腺苷受体。
7．按照权利要求6的方法，其中所述的腺苷受体为A1、A2、A2a、A2b、或A3。
8．按照权利要求6的方法，其中所述的腺苷受体与中枢神经系统疾病，心血管疾病，肾病，炎性疾病，胃肠道疾病，眼部疾病，过敏性疾病，和呼吸疾病有关。
9．按照权利要求6的方法，其中所述的N-6取代7-脱氮嘌呤具有式Ⅰ的结构 其中R1和R2分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或一起形成取代或未取代的杂环；R3为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；R4为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；和R5和R6分别独立为卤素原子，氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或R4和R5或R5和R6一起形成取代或未取代的杂环或碳环。
10．一种用于治疗哺乳动物哮喘的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的N-6取代7-脱氮嘌呤，以治疗哺乳动物哮喘。
11．一种具有式Ⅰ结构的N-6取代7-脱氮嘌呤 其中R1和R2分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或一起形成取代或未取代的杂环，条件是R1和R2不都为氢原子，或R1或R2都不为1-苯基乙基；R3为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；R4为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；和R5和R6分别独立为卤素原子，氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或R4和R5或R5和R6一起形成取代或未取代的杂环或碳环，条件是R4不为1-苯基乙基，以及它们药物可接受的盐。
12．按照权利要求11的脱氮嘌呤，其中R1为氢原子；R2为取代或未取代的环烷基，取代或未取代的烷基，或R1和R2一起形成取代或未取代的杂环；R3为未取代或取代的芳基；R4为氢原子，和R5和R6分别独立为氢原子或烷基，以及它们药物可接受的盐。
13．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R2为取代或未取代的环烷基。
14．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R1和R4为氢原子，R3为未取代或取代的苯基，R5和R6分别为烷基。
15．按照权利要求14的脱氮嘌呤，其中R2被至少一个羟基取代。
16．按照权利要求15的脱氮嘌呤，其中R2为一羟基环戊基。
17．按照权利要求15的脱氮嘌呤，其中R2为一羟基环己基。
18．按照权利要求14的脱氮嘌呤，其中R2被-NH-C(=O)E取代，其中E为取代或未取代的C1-C4烷基。
19．按照权利要求18的脱氮嘌呤，其中E为烷基胺。
20．按照权利要求18的脱氮嘌呤，其中E为乙基胺。
21．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R1和R2一起形成取代或未取代的杂环。
22．按照权利要求21的脱氮嘌呤，其中所述杂环被胺取代。
23．按照权利要求21的脱氮嘌呤，其中所述杂环被乙酰氨基取代。
24．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R2为-A-NHC(=O)B，其中A为未取代的C1-C4烷基，B为取代或未取代的C1-C4烷基。
25．按照权利要求24的脱氮嘌呤，其中R1和R2为氢，R3为未取代或取代的苯基，R5和R6分别为烷基。
26．按照权利要求25的脱氮嘌呤，其中A为CH2CH2。
27．按照权利要求25的脱氮嘌呤，其中A为CH2CH2CH2。
28．按照权利要求25的脱氮嘌呤，其中A为CH2CH2CH2CH2。
29．按照权利要求25的脱氮嘌呤，其中B为甲基。
30．按照权利要求25的脱氮嘌呤，其中B为氨基烷基。
31．按照权利要求30的脱氮嘌呤，其中B为氨基甲基。
32．按照权利要求30的脱氮嘌呤，其中B为氨基乙基。
33．按照权利要求25的脱氮嘌呤，其中B为烷基氨基。
34．按照权利要求33的脱氮嘌呤，其中B为甲基氨基。
35．按照权利要求33的脱氮嘌呤，其中B为乙基氨基。
36．按照权利要求25的脱氮嘌呤，其中B为取代或未取代的环烷基。
37．按照权利要求36的脱氮嘌呤，其中B为环丙基。
38．按照权利要求36的脱氮嘌呤，其中B为1-氨基-环丙基。
39．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R3为取代或未取代的苯基。
40．按照权利要求39的脱氮嘌呤，其中R5和R6分别为烷基。
41．按照权利要求40的脱氮嘌呤，其中R3为未取代的苯基。
42．按照权利要求40的脱氮嘌呤，其中R3为取代的苯基。
43．按照权利要求42的脱氮嘌呤，其中R3为具有至少一个取代基的苯基。
44．按照权利要求43的脱氮嘌呤，其中R3为邻-、间-、或对-氯苯基。
45．按照权利要求43的脱氮嘌呤，其中R3为邻-、间-、或对-氟苯基。
46．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R3为取代或未取代的杂芳基。
47．按照权利要求46的脱氮嘌呤，其中R5和R6分别为烷基。
48．按照权利要求47的脱氮嘌呤，其中R3为选自吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，吡咯基，三唑基，硫唑基，噁唑基，噁二唑基，呋喃基，亚甲基二氧苯基，和硫代苯基的基团。
49．按照权利要求48的脱氮嘌呤，其中R3为2-吡啶基，3-吡啶基或4-吡啶基。
50．按照权利要求48的脱氮嘌呤，其中R3为2-嘧啶基或3-嘧啶基。
51．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R5和R6分别为氢。
52．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中R5和R6分别为甲基。
53．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述化合物为4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
54．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述化合物为4-(顺式-3-(2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶三氟乙酸盐。
55．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述化合物为4-(3-乙酰氨基)哌啶基-5，6．二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
56．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述化合物为4-(2-N’-甲基脲丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
57．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述化合物为4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
58．按照权利要求13的脱氮嘌呤，其中所述化合物为4-(2-N’-甲基脲丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
59．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述化合物为4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
60．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
61．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
62．按照权利要求12的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
63．具有式Ⅱ结构的脱氮嘌呤 其中X为N或CR6；R1和R2分别独立为氢，或取代或未取代的烷氧基、氨基烷基、烷基、芳基、或烷基芳基，或一起形成取代或未取代的杂环，条件是R1和R2不同时为氢；R3为取代或未取代的烷基、芳基烷基、或芳基；R4为氢，或取代或未取代的C1-C6烷基；L为为氢，取代或未取代的烷基，或R4和L一起形成取代或未取代的杂环或碳环；R6为氢，取代或未取代的烷基，或卤素；Q为CH2,O,S，或NR7，其中R7为氢，或取代或未取代的C1-C6烷基；和W为未取代或取代的烷基，环烷基，炔基，芳基，芳基烷基，二芳基，杂芳基，取代羰基，取代硫代羰基，或取代磺酰基；条件是如果R3为吡咯烷基，R4不为甲基。
64．按照权利要求58的脱氮嘌呤，具有式Ⅲ的结构 其中Q为CH2,O,S，或NH。
65．按照权利要求64的脱氮嘌呤，其中R4为氢，L为氢或甲基，R3为未取代或取代的芳基。
66．按照权利要求65的脱氮嘌呤，其中W为取代或未取代的芳基，5-或6-元杂芳基，或二芳基。
67．按照权利要求66的脱氮嘌呤，其中W被一个或更多选自下组的取代基取代，包括卤素，羟基，烷氧基，氨基，氨基烷基，氨基羧酰胺，CN,CF3,CO2R8,CONHR8,CONR8R9,SOR8,SO2R8，和SO2NR8R9，其中R8和R9分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基。
68．按照权利要求66的脱氮嘌呤，其中W为亚甲基二氧苯基。
69．按照权利要求66的脱氮嘌呤，其中W为取代或未取代的苯基。
70．按照权利要求66的脱氮嘌呤，其中W为取代或未取代的5-元杂芳环。
71．按照权利要求66的脱氮嘌呤，其中W选自吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，吡咯基，三唑基，噻唑，噁唑基，噁二唑基，吡唑基，呋喃基，和硫代苯基。
72．按照权利要求71的脱氮嘌呤，其中Q为NH，W为3-吡唑，它是未取代的，或被取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基进行N-取代。
73．按照权利要求71的脱氮嘌呤，其中Q为氧，W为2-噻唑环，它是未取代的，或被取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基取代。
74．按照权利要求66的脱氮嘌呤，其中W为6-元杂芳环。
75．按照权利要求74的脱氮嘌呤，其中W选自2-吡啶基，3-吡啶基，和4-吡啶基。
76．按照权利要求74的脱氮嘌呤，其中W选自2-嘧啶基，4-嘧啶基，和5-嘧啶基。
77．按照权利要求65的脱氮嘌呤，其中W为取代或未取代的烷基，环烷基，炔基，或芳基烷基。
78．按照权利要求77的脱氮嘌呤，其中W为炔基。
79．按照权利要求78的脱氮嘌呤，其中W被一个或多个选自下组的取代基取代，包括卤素，羟基，取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基，或NHR10，其中R10为氢，或取代或未取代的烷基，环烷基，芳基，或芳基烷基。
80．按照权利要求77的脱氮嘌呤，其中W为取代或未取代的环戊基。
81．按照权利要求65的脱氮嘌呤，其中W为-(CH2)a-C(=O)Y或-(CH2)a-C(=S)Y,a为0,1,2或3,Y为芳基，烷基，芳基烷基，环烷基，杂芳基，NHR11R12，或者，先决条件是Q为NH,OR13,其中R11,R12，和R13分别独立为氢，或未取代或取代的烷基，芳基，芳基烷基，或环烷基。
82．按照权利要求81的脱氮嘌呤，其中a为1。
83．按照权利要求81的脱氮嘌呤，其中Y为5-或6-元杂芳环。
84．按照权利要求65的脱氮嘌呤，其中W为-(CH2)b-S(O)jY，其中j为1或2,b为0,1,2，或3,Y为芳基，烷基，芳基烷基，环烷基，杂芳基，NHR14R15，或者，先决条件是Q为NH,OR16，其中R14,R15，和R16分别独立为氢，或未取代或取代的烷基，芳基，芳基烷基，或环烷基。
85．按照权利要求64的脱氮嘌呤，其中R3选自取代或未取代的苯基，吡啶基，嘧啶基，哒嗪基，吡嗪基，吡咯基，三唑基，硫唑基，噁唑基，噁二唑基，吡唑基，呋喃基，亚甲基二氧苯基，和硫代苯基。
86．按照权利要求85的脱氮嘌呤，其中R3为未取代的苯基。
87．按照权利要求85的脱氮嘌呤，其中R3为具有至少一个取代基的苯基。
88．按照权利要求87的脱氮嘌呤，其中所述取代基选自羟基、烷氧基、烷基和卤素。
89．按照权利要求88的脱氮嘌呤，其中所述取代基为卤素。
90．按照权利要求89的脱氮嘌呤，其中R3为邻、间、或对氟苯基。
91．按照权利要求89的脱氮嘌呤，其中R3为邻、间、或对氯苯基。
92．按照权利要求88的脱氮嘌呤，其中R3为烷基取代的苯基。
93．按照权利要求92的脱氮嘌呤，其中R3为甲苯基。
94．按照权利要求88的脱氮嘌呤，其中R3为烷氧基取代的苯基。
95．按照权利要求94的脱氮嘌呤，其中R3为甲氧苯基。
96．按照权利要求85的脱氮嘌呤，其中R3为2-、3-、或4-吡啶基。
97．按照权利要求85的脱氮嘌呤，其中R3为2-或3-嘧啶基。
98．按照权利要求64的脱氮嘌呤，其中R6为氢或C1-C3烷基。
99．按照权利要求98的脱氮嘌呤，其中R6为氢。
100．按照权利要求64的脱氮嘌呤，其中R1为氢，R2为取代或未取代的烷基或烷氧基，取代或未取代的烷基胺，芳基胺，烷基芳基胺，取代或未取代的氨基烷基，氨基芳基或氨基烷基芳基，取代或未取代的烷基酰胺，芳基酰胺，或烷基芳基酰胺，取代或未取代的烷基磺酰胺，芳基磺酰胺，或烷基芳基磺酰胺，取代或未取代的烷基脲，芳基脲，或烷基芳基脲，取代或未取代的烷基氨基甲酸酯，芳基氨基甲酸酯，或烷基芳基氨基甲酸酯，或取代或未取代的烷基羧酸，芳基羧酸，或烷基芳基羧酸。
101．按照权利要求100的脱氮嘌呤，其中R2为取代或未取代的环烷基。
102．按照权利要求101的脱氮嘌呤，其中R2为单或双羟基取代的环己基。
103．按照权利要求102的脱氮嘌呤，其中R2为单羟基取代的环己基。
104．按照权利要求101的脱氮嘌呤，其中R2为单或双羟基取代的环戊基。
105．按照权利要求104的脱氮嘌呤，其中R2为单羟基取代的环戊基。
106．按照权利要求104的脱氮嘌呤，其中R2为 其中A为C1-C6烷基，C3-C7环烷基，1-7个原子的链，3-7个原子的环，任选被C1-C6烷基，卤素，羟基，羧基，硫醇，或氨基取代；B为甲基，N(Me)2,N(Et)2,NHMe,NHEt,(CH2)r,NH3+,NH(CH2)r,CH3,(CH2)rNH2,(CH2)r,CHCH3NH2,(CH2)rNHMe,(CH2)rOH,CH2CN,(CH2)mCO2H,CHR18R19，或CHMeOH，其中r为0-2的整数，m为1或2,R18为烷基，R19为NH3+或CO2H，或R18和R19一起形成 其中p为2或3；和R17为C1-C6烷基，C3-C7环烷基，1-7个原子的链，3-7个原子的环，任选被C1-C6烷基，卤素，羟基，羧基，硫醇，或氨基取代。
107．按照权利要求106的脱氮嘌呤，其中A为未取代或取代的C1-C6烷基。
108．按照权利要求106的脱氮嘌呤，其中B为未取代或取代的C1-C6烷基。
109．按照权利要求106的脱氮嘌呤，其中R2为式-A-NHC(=O)B。
110．按照权利要求106的脱氮嘌呤，其中A为-CH2CH2-,B为甲基。
111．按照权利要求11、12、65或66的脱氮嘌呤，其包括在体内代谢成活性药物的水溶性前体药物。
112．按照权利要求111的脱氮嘌呤，其中所述前体药物在体内通过酯酶催化水解代谢。
113．按照权利要求111的脱氮嘌呤，其中R2为被-OC(O)(Z)NH2取代的环烷基，其中Z为天然或非天然氨基酸侧链，或它们的类似物，α、β、γ或ω氨基酸，或二肽。
114．按照权利要求113的脱氮嘌呤，其中Z为甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，赖氨酸，α-甲基丙氨酸，氨基环丙烷羧酸，铃兰氨酸，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，丙氨酸-丙氨酸，或甘氨酸-丙氨酸侧链。
115．按照权利要求64的脱氮嘌呤，其中R1和R2一起为 其中n为1或2，其中环可以任选被一个或多个羟基，氨基，硫醇，羧基，卤素，CH2OH,CH2NHC(=O)烷基或CH2NHC(=O)NH烷基取代。
116．按照权利要求115的脱氮嘌呤，其中n为1或2，所述的环被-NHC(=O)烷基取代。
117．按照权利要求64的脱氮嘌呤，其中R1为氢，R2为取代或未取代的C1-C6烷基，R3为取代或未取代的苯基，R4为氢，L为氢或取代或未取代的C1-C6烷基，Q为O,S或NR7，其中R7为氢或取代或未取代的C1-C6烷基，W为取代或未取代的芳基。
118．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中R2为-A-NHC(=O)B，其中A和B分别独立为未取代的C1-C4芳基。
119．按照权利要求118的脱氮嘌呤，其中A为CH2CH2。
120．按照权利要求118的脱氮嘌呤，其中B为甲基。
121．按照权利要求118的脱氮嘌呤，其中B为氨基烷基。
122．按照权利要求121的脱氮嘌呤，其中B为氨基甲基。
123．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中R3为未取代的苯基。
124．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中L为氢。
125．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中R6为氢或甲基。
126．按照权利要求125的脱氮嘌呤，其中R6为氢。
127．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中Q为O。
128．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中Q为S。
129．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中Q为NR7，其中R7为氢，或取代或未取代的C1-C6烷基。
130．按照权利要求129的脱氮嘌呤，其中R7为氢。
131．按照权利要求129的脱氮嘌呤，其中R7为甲基。
132．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中W为未取代的苯基。
133．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中W为具有至少一个取代基的苯基。
134．按照权利要求133的脱氮嘌呤，其中所述取代基为卤素。
135．按照权利要求134的脱氮嘌呤，其中W为对氟苯基。
136．按照权利要求134的脱氮嘌呤，其中W为对氯苯基。
137．按照权利要求133的脱氮嘌呤，其中所述取代基为烷氧基。
138．按照权利要求137的脱氮嘌呤，其中W为对甲氧基。
139．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中W为对杂芳基。
140．按照权利要求139的脱氮嘌呤，其中W为2-吡啶基。
141．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
142．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
143．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
144．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
145．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(2-吡啶氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
146．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
147．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶。
148．按照权利要求117的脱氮嘌呤，其中所述脱氮嘌呤为4-(2-N’-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
149．一种抑制细胞中腺苷受体活性的方法，其包括将所述细胞与权利要求11、12、14、25、63、或65的脱氮嘌呤接触。
150．按照权利要求140的方法，其中所述脱氮嘌呤选自4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(2-吡啶氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N’-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(顺式-3-(2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶三氟乙酸盐；4-(3-乙酰氨基)哌啶基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N’-甲脲丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N’-甲脲丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；和4-(反-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
151．按照权利要求149的方法，其中所述腺苷受体为A2b腺苷受体。
152．按照权利要求151的方法，其中所述脱氮嘌呤为所述A2b腺苷受体的拮抗剂。
153．按照权利要求149的方法，其中所述腺苷受体包括A3腺苷受体。
154．按照权利要求153的方法，其中所述N-6取代7-脱氮嘌呤为所述A3腺苷受体的拮抗剂。
155．一种用于治疗动物胃肠道疾病的方法，其包括对所述动物给药治疗有效量的权利要求63或65的脱氮嘌呤。
156．按照权利要求155的方法，其中所述脱氮嘌呤选自4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(2-吡啶氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；和4-(2-N’-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
157．按照权利要求155的方法,其中所述疾病为腹泻。
158．按照权利要求155的方法，其中所述动物为人。
159．按照权利要求155的方法，其中所述脱氮嘌呤为所述动物细胞中A2b腺苷受体的拮抗剂。
160．一种用于治疗动物呼吸疾病的方法，其包括对所述动物给药治疗有效量的权利要求63或64的脱氮嘌呤。
161．按照权利要求160的方法，其中所述脱氮嘌呤选自4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(2-吡啶氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；和4-(2-N'-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
162．按照权利要求160的方法，其中所述疾病为哮喘，慢性阻塞性肺病，过敏性鼻炎，或上呼吸道疾病。
163．按照权利要求160的方法，其中所述动物为人。
164．按照权利要求160的方法，其中所述脱氮嘌呤为所述动物细胞中A2b腺苷受体的拮抗剂。
165．一种用于治疗动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的方法，包括对哺乳动物给药治疗有效量的权利要求11、12、14、25、63或64的脱氮嘌呤，以治疗动物的对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病。
166．按照权利要求165的方法，其中所述对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病为一种疾病状态，其中该疾病状态为通过腺苷调控的疾病。
167．按照权利要求165的方法，其中所述疾病状态为中枢神经系统疾病，心血管疾病，肾病，炎性疾病，过敏性疾病，胃肠道疾病，或呼吸疾病。
168．一种用于治疗动物眼部损伤的方法，其包括对所述动物给药有效量的权利要求11、12、14、或25的脱氮嘌呤。
169．按照权利要求168的方法，其中所述N-6取代7-脱氮嘌呤选自4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(顺式-3-(2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶三氟乙酸盐；4-(3-乙酰氨基)哌啶基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N’-甲脲丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N’-甲脲丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；和4-(反-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
170．按照权利要求168的方法，其中所述损伤包括视网膜或视神经头损伤。
171．按照权利要求168的方法，其中所述损伤为急性或慢性。
172．按照权利要求168的方法，其中所述损伤导致青光眼，水肿，局部缺血，组织缺氧或外伤。
173．按照权利要求168的方法，其中所述动物为人。
174．按照权利要求168的方法，其中所述N-6取代7-脱氮嘌呤为所述动物细胞中的A3腺苷受体的拮抗剂。
175．一种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求11、12、14、25、63或64的脱氮嘌呤，和药物可接受的载体。
176．按照权利要求175的方法，其中所述脱氮嘌呤选自4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氟苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-氯苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(4-甲氧苯氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(2-吡啶氧基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基乙基)氨基-6-(N-甲基-N-苯基氨基)甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N'-甲基脲乙基)氨基-6-苯氧甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(顺式-3-羟基环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(顺式-3-(2-氨基乙酰氧基)环戊基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶三氟乙酸盐；4-(3-乙酰氨基)哌啶基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N’-甲脲丙基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-乙酰氨基丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-N’-甲脲丁基)氨基-5,6-二甲基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(2-氨基环丙基乙酰氨基乙基)氨基-2-苯基-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；4-(反式-4-羟基环己基)氨基-2-(3-氟苯基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶；和4-(反-4-羟基环己基)氨基-2-(4-吡啶基)-7H-吡咯并[2,3 d]嘧啶。
177．按照权利要求175的药物组合物，其中所述治疗有效量为有效治疗呼吸疾病或胃肠道疾病。
178．按照权利要求177的药物组合物，其中所述胃肠道疾病为腹泻。
179．按照权利要求177的药物组合物，其中所述呼吸疾病为哮喘，过敏性鼻炎，或慢性阻塞性肺病。
180．按照权利要求175的药物制剂，其中所述药物制剂为眼用制剂。
181．按照权利要求175的药物制剂，其中所述药物制剂为眼周、眼球后或眼内注射制剂。
182．按照权利要求180的药物制剂，其中所述药物制剂为全身制剂。
183．按照权利要求180的药物制剂，其中所述药物制剂为外科手术冲洗伤口溶液。
184．一种用于治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的包装药物组合物，包括装有治疗有效量的至少一种权利要求11、12、14、25、63或64的脱氮嘌呤的容器，和使用所述脱氮嘌呤治疗哺乳动物对N-6取代7-脱氮嘌呤响应的疾病的说明书。
185．用于制备 的方法，包括以下步骤 与 反应，以提供 其中P为低级烷基或保护基团； b)将步骤a)的产物环化，以提供 c)将步骤b)的产物氯化，以提供和d)用胺处理步骤c)的产物，由此提供 其中R1和R2分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或一起形成取代或未取代的杂环；R3为取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；和R5为卤素原子，氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分。
186．用于制备 的方法，包括以下步骤a) 与 反应，以提供 其中P为可去除的保护基团；b)在环化条件下处理步骤a)的产物，以提供 c)在适当条件下处理步骤b)的产物，以提供 和d)用胺处理步骤c)的氯化产物，以提供 其中R1和R2分别独立为氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分，或一起形成取代或未取代的杂环；R3为取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分；和R6为卤素原子，氢原子，或取代或未取代的烷基、芳基、或烷基芳基部分。
全文摘要
本发明公开了用于治疗腺苷受体兴奋疾病的新型脱氮嘌呤。
文档编号A61P37/08GK1311680SQ99809302
公开日2001年9月5日 申请日期1999年6月1日 优先权日1998年6月2日
发明者阿林多·L·卡斯特利亚诺, 布里安·麦吉本, 戴维·J·威特 申请人:Osi药物公司