专利名称：氨基金刚烷类化合物作为免疫调节剂的用途的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及氨基金刚烷类化合物作为免疫调节剂的用途，尤其在调节与调控已活化的中性白细胞上的用途。
中性白细胞(白细胞的一个亚类)牵涉到免疫防卫和血管系统与边缘组织中的其它反应(Roitt，I.M，Leitfaden der Immunologie，Steinkopf-Verlag Darmstadt，第二版，1984)。
中性白细胞可以由外源物质激活，例如细胞壁组分(一种市售的产品为″酵母聚糖″)。与此相关的是，活性氧在所谓的呼吸爆发作用中形成。
图1描述了中性白细胞刺激的简化的方案在配体(例如酵母聚糖A)结合到中性白细胞膜上的特异性受体上后，三磷酸鸟苷(GTP)被激活，其又转过来激活磷脂酰基-肌醇-4，5-二磷酸(PIP2)-特异性磷脂酶C(PLC)。PLC催化PIP2对肌醇-1，4，5-三磷酸(IP3)和二酰基甘油(DG)的水解。IP3刺激从胞内库释放Ca2+离子。Ca2+离子与DG一道激活蛋白激酶C(PC)，该酶磷酸化许多蛋白质，其中包括以这种方式激活NADPH氧化酶复合物。NADPH氧化酶又催化以下反应其中产生活性氧O2-。
虽然活化的中性白细胞对发挥免疫防卫作用来说是重要的，但疾病症状(例如急性或慢性炎症或其它过敏反应)可以由尤其是活性氧导致的过渡反应所引起。另一方面，中性白细胞活性可以低得或不足以对一般的免疫缺损病(例如爱滋病)进行成功的免疫防卫。因此，需要，尤其是从医学的角度需要能够体内和体外影响中性白细胞的调控和/或调节活性。与此相关，依据病症的不同，应该提高或降低中性白细胞活性，即中性白细胞活性应该是随意可控制的。
因此，本发明的目的是使得可以获得一种中性白细胞的活性的调控和/或调节剂。
现在已惊人地发现某些氨基金刚烷类化合物对中性白细胞的活性有调控和/或调节作用。本发明涉及这一发现。对此而言，中性白细胞已经被其它刺激物激活是决定性的。所说的氨基金刚烷自身不显示出任何对中性白细胞的激活作用。
通过将式(I)的氨基金刚烷类化合物用于调节已活化的中性白细胞的活性，上述目的相应地得到了解决
其中R1、R2、R3和R4各自分别选自-NR5R6、-NR5R6R7+、氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，前提是残基R1、R2、R3和R4的至少一个代表-NR5R6或-NR5R6R7；同时R5、Rg和R7各自分别选自氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，或者R5和R6与氮原子一道形成具有多达7元环的杂环基团。
这一类型的氨基金刚烷类化合物是已知的。就此而言，DE 2219256，DE 2856393，DE2232735，US 3450761或4122193中描述了1-氨基金刚烷。式(I)的化合物的产生一般用已知方法进行，例如卤素金刚烷的烷基化。尔后的进一步的卤化和烷基化产生个别的二和/或三-取代的金刚烷。EP392059(其所教导的方法清楚地由本文一并参考)涉及氨基金刚烷的产生方法。
氨基金刚烷类化合物也已经用于药物目的。就此而言，EP 392059公开了采用l-氨基金刚烷类化合物治疗阿尔茨海默病或由脑部局部缺血引起的人脑细胞损伤。US 3450761描述了具有抗病毒活性的金刚烷。
中性白细胞的活性是被提高还是部分地或完全地被抑制取决于所使用的氨基金刚烷类化合物的浓度。就此而言，从10-6至10-5M的浓度具有提高活性的作用。约5·10-6M的浓度(一种在体内血浆中完全可以达到的浓度)被证明对提高中性白细胞活性尤其有效。相反，活性的抑制由提高的氨基金刚烷浓度引起。适合于这一目的的浓度是10-4到10-3M。
本发明包括由一个或多个氨基基团取代的金刚烷类化合物，其中单氨基金刚烷是优选的。因此，合适的式(I)的化合物是其中R1代表氨基基团的那些化合物(例如l-氨基-3-乙基-5，7-二甲基-金刚烷)以及其中R1代表氨基基团，并且R3和R4代表氢原子的那些化合物(例如1-氨基-3-环己基-金刚烷或l-氨基-3-乙基-金刚烷)。
优选的金刚烷类化合物是l-氨基-3，5-二甲基-金刚烷，l-氨基-3，5-二乙基-金刚烷和N-取代的化合物l-N-甲氨基-3，5-二甲基-金刚烷和化合物l-N-乙氨基-3，5-二甲基-金刚烷。特别优选的是被称作memantine(INN，AkatinolMemantine)的1-氨基-3，5-二甲基-金刚烷，Grtelmeyer，R.等在神经康复谱(W.Zuckschwerdt出版社，慕尼黑，1993，50ff)中描述了用memantine治疗痴呆综合征。
如以上所解释的，按照本发明的氨基金刚烷类化合物仅仅对预活化的或者已受特殊的激活物刺激的中性白细胞具有调节作用。
天然物质，例如酵母聚糖，N-甲酰基-Met-Leu-Phe(N-FLMP)或A23187(Ca拮抗剂)被称为激活物。如果人们意欲特异地或者更强烈地体外(但也体内)激活中性白细胞，则这些物质可以被利用。由此，在样品(例如体液样品，尤其是血液样品)中检测中性白细胞是可能的，即使是仅存在极少的中性白细胞或当它们的活性十分弱时。在此情况下，激活物可以与氨基金刚烷化合物一起存在由激活物刺激的中性白细胞的活化程度被同时添加的氨基金刚烷类化合物所增强。
应用的另一个领域是在具有各种形式的免疫缺损的患者(尤其是爱滋病患者)中改善免疫防卫。这里，可以施用包含按照本发明的氨基金刚烷类化合物的药物组合物，所述的化合物可以与也可以不与中性白细胞激活物组合。此外，在CGD(agranulomatosis)，韦格内氏肉芽肿病和/或糖原贮积病中的使用是可能的。
当然，中性白细胞也可以作为有机体天然免疫应答的结果(由于对不同免疫原的反应)被激活，并触发因过度反应产生的过敏反应，炎症以及风湿症状。这里，中性白细胞活性可以用适当提高的氨基金刚烷浓度来削弱，同时患者可以得到缓解。内部和外部炎症疾病(例如在膝盖，臀部或颌上的)以及自身免疫病可以特别地用包含氨基金刚烷的药物有效地治疗。应用的另一个领域是在寄生虫病(例如利什曼属病)的治疗中。
在这种情况下，医生经过判断，通过选择合适的剂量和给药形式，可以保证调节与调控中性白细胞活性的氨基金刚烷类化合物的适当浓度。取决于应用的领域，肠胃外形式(例如静脉内或口服给药形式)在这里是可能的；持续作用形式也是合适的。本发明也包括按照本发明的氨基金刚烷化合物与药学上可接受的盐(尤其是酸加成盐)的组合物；例如，盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、醋酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐或者与富马酸、马来酸、柠檬酸或磷酸的加成化合物是这里将提到的。该药物组合物还可以含有中性白细胞激活物，这取决于疾病的种类。通常的药学上可接受的载体和佐剂用于制剂中。
下列实施例借助特殊的化合物memantine说明氨基金刚烷衍生物的活性提高或抑制作用的依赖性。
实施例测定原理通过化学发光测定法进行在各种memantine浓度下的刺激的中性白细胞的活性的测定。活化的中性白细胞在呼吸爆发作用中形成活性氧，其以十分弱的化学发光(所谓的低水平或超弱化学发光)是可检测的。为了提高光子产率，加入敏化剂鲁米诺(指示剂依赖性化学发光)。鲁米诺是一种环酰肼，其能经活性氧氧化成重氮醌。通过过氧化氢阴离子的亲核进攻，这一重氮醌进一步转化成为α-羟基氢过氧化物，在光照射下其分解成aminophtalate。反应批中性白细胞106i.A.
PBS-缓冲液(pH 7.4)至250ml鲁米诺80mMmemantine 可变浓度刺激剂酵母聚糖 2.5毫克/毫升或PMA 1mM或A23187 20mM或N-FLMP 10mMPBS＝磷酸缓冲盐水类似的反应批可以用其他金刚烷类化合物产生。测定采用十分灵敏的低噪音光电倍增管进行测定，该光电倍增管把在光阴极上的光子转化成为初生电子，然后多倍放大它们成为电脉冲信号。
用刺激剂起始反应，并且在没有温育的40分钟时间(＝80个循环)下测定。结果采用由天然的刺激剂激活的中性白细胞(酵母聚糖A；a 23187；N-甲酰基-Met-Leu-Phe)，用10-6M memantine可以额外地增加RLU-碱比(baserate)(RLU＝相对光单位)(酵母聚糖A约90％；A 23187约60％；N-FMLP约78％的碱刺激作用)[图2-4]。这表明提高的呼吸爆发作用和提高的吞噬活性。用毒性佛波醇-Mystrate-乙酸酯刺激不发生这一反应(约-20％的碱刺激作用)[图5]。相反，memantine几乎完全抑制所有刺激剂的碱刺激作用(在10-3浓度下)。
在对照实验中可以看出，memantine本身既没有化学发光也不淬灭化学发光未示出。活化调节的特异性按照本发明的氨基金刚烷类化合物的调节作用是对中性白细胞高度特异性的。这样，氨基金刚烷类化合物不表现出对活化的白细胞的去调节作用的任何作用。图6显示ACC(1-氨基环丙烷-l-羧酸)本身不与相对高浓度的memantine反应。ACC是特异性髓过氧化物酶的指示剂，由白细胞的脱粒作用释放，并且在胞外空间中形成破坏性次氯酸盐。在乙烯(其可以由气相色谱检测)形成下髓过氧化物酶特异性地与ACC反应。于是，乙烯的形成量代表白细胞活性的间接测量值。
相对而言，呼吸爆发作用的指示剂与由呼吸爆发作用而产生的氧自由基(超氧化物，OH-基团和过氧化氢)被memantine激活。在体内容易获得的10-7M浓度下已显示了这一点。通过加入Fe3+(其通过Haber-Weiβ反应使反应平衡从超氧化物和过氧化氢移至OH基团的方向)可以使活化作用可视化。这一类型的氧种类的一种灵敏指示剂是KMB(a-酮基-g-甲基硫代丁酸酯)，其中其在氧化条件下分解成乙烯，并且可以容易地被检测[图7]。
作为对照，图8显示KMB-反应(但不是ACC-反应)首先由加入＞5×10-4M的Fe3+所刺激。Fe3+单独无影响。
权利要求
1.具有式(I)的氨基金刚烷类化合物在调节已活化的中性白细胞活性上的用途
其中R1、R2、R3和R4各自分别选自-NR5R6、-NR5R6R7+、氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，前提是残基R1、R2、R3和R4的至少一个代表-NR5R6或-NR5R6R7；同时R5、R6和R7各自分别选自氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，或者R5和R6与氮原子一道形成具有多达7元环的杂环基团。
2.按照权利要求1的用途，其中式(I)的氨基金刚烷类化合物选自l-氨基-3-乙基-5，7-二甲基-金刚烷，l-氨基-3-环己基-金刚烷，l-氨基-3-乙基-金刚烷，l-氨基-3，5-二甲基-金刚烷，l-氨基-3，5-二乙基-金刚烷，l-N-甲氨基-3，5-二甲基-金刚烷，l-N-乙氨基-3，5-二甲基-金刚烷。
3.按照权利要求1或2的用途，其中中性白细胞的活性由浓度从10-6至10-5的式(I)的氨基金刚烷类化合物提高。
4.按照权利要求1或2的用途，其中中性白细胞的活性由浓度从10-4至10-2的式(I)的氨基金刚烷类化合物降低。
5.按照权利要求1-4之任一的用途，其是在体外调节中性白细胞活性上的用途。
6.按照权利要求3的用途，其是在治疗CGD(agranulomatosis)、韦格内氏肉芽肿病和/或免疫缺损病，尤其是爱滋病上的用途。
7.按照权利要求4的用途，其是在治疗慢性或急性炎症，过敏反应，自身免疫病以及寄生虫病，尤其是利什曼属病上的用途。
8.具有式(I)的氨基金刚烷类化合物在生产用于调节已活化的中性白细胞活性之药物上的用途
其中R1、R2、R3和R4各自分别选自-NR5R6、-NR5R6R7+、氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，前提是残基R1、R2、R3和R4的至少一个代表-NR5R6或-NR5R6R7；同时R5、Rg和R7各自分别选自氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，或者R5和R6与氮原子一道形成具有多达7元环的杂环基团。
9.按照权利要求8的用途，其中所说的药物还含有中性白细胞的激活物。
10.具有式(I)的氨基金刚烷类化合物在与激活物一道体内或体外增强，特异性活化中性白细胞上的用途
其中R1、R2、R3和R4各自分别选自-NR5R6、-NR5R6R7+、氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，前提是残基R1、R2、R3和R4的至少一个代表-NR5R6或-NR5R6R7；同时R5、Rg和R7各自分别选自氢、具有多达7元环的芳基或杂芳基、C1-C20-烷基、C1-C20-链烯基和C1-C20-炔基，其中所说的烷基、链烯基和炔基残基可以是有支链的、无支链的或环状的，并且可以是由或未由卤素、具有多达7元环的芳基或杂芳基取代的，或者R5和R6与氮原子一道形成具有多达7元环的杂环基团。
11.按照权利要求10的用途，其是在检测样品中中性白细胞的方法上的用途。
12.按照权利要求9或10的用途，其中所说的激活物选自酵母聚糖，N-甲酰基-Met-Leu-Phe和A 23187。
全文摘要
氨基金刚烷类化合物可以用于体内或体外调控和/或调节事先活化的中性白细胞的活性。由此,低的浓度范围起到提高活性的作用,而较高的浓度范围起到降低活性的作用。
文档编号A61P33/02GK1198669SQ96197347
公开日1998年11月11日 申请日期1996年8月21日 优先权日1995年8月25日
发明者E·F·艾尔斯特内 申请人:莫茨股份公司