专利名称：用于治疗与胶原蛋白过量产生有关的疾病的c－蛋白酶抑制剂的利记博彩app
本申请涉及和是1996年2月14日申请的，名称为“用于治疗与胶原蛋白过量产生有关的疾病的C-蛋白酶抑制剂”的US申请系列号08/601203的部分继续申请，后者是1995年8月8日申请的临时US申请系列号60/002038的部分继续申请。1.发明领域胶原蛋白，与其它物质一起，对于结缔组织的适当形成是必需的。因此，胶原蛋白的过剩或不足产生或异常胶原蛋白(包括不正确加工的胶原蛋白)的产生与许多结缔组织疾病和症状有关。有证据表明C-蛋白酶是胶原蛋白适当成熟的主要关键的酶，因而是用于抑制、控制和/或调节胶原蛋白形成的理想目标。
本发明涉及能够抑制C-蛋白酶活性以调节、缓解和/或抑制不正常胶原蛋白形成的有机分子。更具体地说，本发明涉及化合物和其药物组合物用于治疗与胶原蛋白不适当或不规则产生有关的各种疾病的用途。2.发明背景胶原蛋白结构。目前已识别出19种类型的胶原蛋白，这些胶原蛋白，包括原纤维胶原蛋白I、II、III型，作为原胶原蛋白前体分子合成，它含有氨基和羧基末端的肽伸展部分。这些称之为“前区域”的肽伸展部分分别命名为N-和C-前肽。
前区域在三股螺旋前体分子从细胞中分泌以产生成熟三股螺旋胶原蛋白分子时裂解。在裂解时，“成熟”胶原蛋白分子能够例如结合入高度结构化的胶原蛋白纤维中。参见例如Fessler和Fessler，1978，Annu. Rev. Biochem. 47129-162；Bornstein和Traub，1979，蛋白质(eds. Neurath，H.和Hill，R.H.)，Academic Press，纽约，412-632页；Kivirikko等，1984，Extracellular Matrix Biochemistry(eds.Piez，K. A.和Reddi，A. H.)，Elsevier Science Publishing Co.，纽约，83-118页；Prockop和 Kivirikko，1984，N. Engl. J. Med. 311376-383；Kuhn，1987，胶原蛋白类型的结构和功能(eds. Mayne，R.和Burgeson，R.E.)Academic Press，Inc．奥兰多，弗罗里达，1-42页。
与胶原蛋白异常产生有关的疾病。一组危急疾病与胶原蛋白的不适当或不规则产生有关，其包括病理纤维变性或瘢痕，包括心内膜硬化、特发性间质性纤维变性、间质性肺纤维变性、肌外膜纤维变性、Symmer’s纤维变性、中枢周纤维变性、肝炎、皮肤纤维瘤、胆汁性肝硬变、酒精性肝硬变、急性肺纤维变性、特发性肺纤维变性、急性呼吸窘迫综合症、肾纤维变性/肾小球性肾炎、肾纤维变性/糖尿病性肾病、硬皮病/全身性硬皮病、硬皮病/局部性硬皮病、瘢痕瘤、瘢痕肥大、严重关节粘连/关节炎、骨髓纤维变性、角膜瘢痕、膀胱纤维变性、假肥大性肌营养障碍、心脏纤维变性、肌纤维变性/视网膜分离、食管狭窄、派尔(payronles)病。其它的纤维变性疾病可由手术引起或诱发，包括瘢痕修正/整形手术、青光眼、白内障纤维变性、角膜瘢痕、关节粘连、移植物抗宿主疾病、腱手术、神经夹带、杜普伊特伦挛缩、OB/GYN粘连/纤维变性、骨盆粘连、硬膜外纤维变性、再狭窄。治疗这些疾病的一种策略是抑制胶原蛋白的病理性过量产生。因此，鉴定和分离能控制、抑制和/或调节胶原蛋白产生的分子是主要的医学兴趣。
胶原蛋白形成和C-蛋白酶之间的相互关系。近年的资料认为，C-蛋白酶是主要关键的酶，它催化例如原纤维胶原蛋白，包括I型、II型和III型胶原蛋白的C-前肽的裂解。参见作为临时申请的1995年8月8日申请的US申请系列号60/002038，及其中的参考文献。
C-蛋白酶首先在人和鼠纤维细胞(Goldberg等，1975，细胞445-50；Kessler和Goldberg，1978，Anal. Biochem. 86463-469)和小鸡腱纤维细胞(Duskin等，1978，Arch. Biochem. Biophys. 185326-332；Leung等，1979，J. Biol. Chem. 254224-232)的组织培养基中发现。能从I型原胶原蛋白中除去C-端前肽的酸性蛋白酶也已被鉴定。Davidson等，1979，Eur.J.Biochem. 100551。
具有C-蛋白酶活性的部分纯化的蛋白酶在1982年从小鸡颅盖中得到。Njieha等，1982，Biochemistry 23757-764。在1985年，从鸡胚腱的条件培养基中分离、纯化和特征化了小鸡C-蛋白酶。Hojima等，1985，J. Biol. Chem. 26015996-16003。随后由鼠纤维细胞的组织培养基中提纯了鼠C-蛋白酶。Kessler等，1986，Collagen Relat.Res. 6249-266；Kessler和Adar，1989，Eur. J. Biochem. 186115-121。最后，如上述参考的相关申请和其中公开的参考文献，鉴定了cDNA编码的人体C-蛋白酶。
用这些小鸡和鼠C-蛋白酶纯化形式进行的实验表明，酶在形成功能胶原蛋白纤维的过程能起作用。Fertala等，1994，J. Biol. Chem.26911584。
C-蛋白酶抑制剂。由于酶显示出的对胶原蛋白产生的重要性，科学家已鉴定了许多蛋白酶抑制剂。参见例如Hojima等，文献同上。例如某些金属螯合剂已被证实具有C-蛋白酶抑制剂的活性。同样，胰凝乳蛋白酶抑制剂和胃蛋白酶A被发现是较强的C-蛋白酶抑制剂。此外，α2-巨球蛋白、ovostatin和牛犊血清显示至少部分的抑制C-蛋白酶活性。
同样，二硫苏糖醇、SDS、伴刀豆球蛋白A、Zn2+、Cu2+和Cd2+被报导在低浓度下是有抑制能力的。同样，某些还原剂、某些氨基酸、磷酸盐和硫酸铵在1-10mM浓度下是有抑制能力的。此外，酶显示出被碱性氨基酸赖氨酸和精氨酸所抑制。Leung等，文献同上；Ryhanen等，1982，Arch. Biochem. Biophys.215230-236。最后，人们发现高浓度氯化钠或Tris-HCl缓冲液抑制C-蛋白酶活性。例如，据报导，使用0.2、0.3和0.5M氯化钠，C-蛋白酶活性分别降低至在0.15M标准试验浓度下观察到的66、38和25％。在0.2-0.5M浓度下的Tris-HCl缓冲液显著抑制了活性，Hojima等，文献同上。与之相反，微生物抑制剂如亮肽素、磷酸美沙酮(phosphoramidon)、抗痛素、bestatin弹性蛋白和苦杏仁球蛋白(amastatin)被认为有弱的或没有C-蛋白酶活性。
C-蛋白酶活性及其抑制已使用各种试验方法测定。参见例如Kesslerand Goldberg，1978，Anal. Biochem.86463；Njieha等，1982，生物化学21757-764。尽管已经有了这些试验，但由于人体C-蛋白酶有限的可获得性，至少仍未进行大规模的潜在C-蛋白酶抑制剂的研究和试验。正如许多出版物中所述，酶难以用常规生物化学的方法分离，并且，直至上述参考和相关的专利申请中的报导，编码该酶的cDNA序列是未知的。
开发抑制C-蛋白酶活性的化合物。考虑到在胶原蛋白形成和成熟中的重要作用，C-蛋白酶显示出是治疗与胶原蛋白的不适当或不规则产生和成熟有关的疾病的理想目标。然而，到目前为止鉴定的抑制剂都没有被证实对于治疗与胶原蛋白有关的疾病是有效的或是C-蛋白酶活性的抑制剂。
能特异抑制C-蛋白酶活性以调节和调整异常或不适当的胶原蛋白产生的有效化合物的鉴定因而是合乎需要的，并且是本发明的目的。3.发明概述本发明涉及通过影响C-蛋白酶活性能够调节、调整和/或抑制胶原蛋白产生和/或成熟的有机化合物。本发明的化合物尤其具有下式a.抑制剂A
或
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；
R4选自芳基、杂芳基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基X选自SO2、C＝O；Y选自OH、HOHN(羟胺)、H2N、烷基氨基；Z是直连键、亚甲基、氧、硫、氨基；n是0或1；或b.抑制剂B
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；
R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；或c.抑制剂C
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选白H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；或d.抑制剂D
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；或e.抑制剂E
其中R1选自OH、烷氧基、低级烷基、烷基氨基、肽；X选自N、C；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3是选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基。
本发明还涉及药物组合物，其含有治疗有效量的上述化合物和可药用的载体或赋形剂。该组合物通过抑制C-蛋白酶活性可调节胶原蛋白的产生和/或成熟。
本发明还涉及公开的化合物和组合物用于通过调节、抑制和/或调整C-蛋白酶活性以治疗与胶原蛋白的不适当或不规则产生有关的疾病的用途。
更具体地说，本发明的组合物可包括于治疗与胶原蛋白的不适当或不规则的产生有关的疾病的方法中，所述疾病包括，但不限制于，类风湿性关节炎、硬皮病、病理纤维变性或瘢痕。4.定义
“C-蛋白酶”应是指通过-Ala↓Asp-Asp-和/或Gly↓Asp-Glu-裂解能够加工胶原蛋白分子、衍生物或片段或它们的前体的酶。该术语应包括人体C-蛋白酶和它们的具有C-蛋白酶类似活性的衍生物、类似物、片段和变异体。
“可药用的盐”指的是保留游离酸的生物有效性和性质的盐，它们可通过与无机或有机碱，例如氢氧化钠、氢氧化镁、氨、三烷基胺、二烷基胺、单烷基胺、二元氨基酸、乙酸钠、苯甲酸钾、三乙醇铵等。
“烷基”指的是饱和脂族烃，包括直链、支链和环烷基。烷基优选含有1-12个碳原子。它最优选是1-7个碳原子，更优选1-4个碳原子的低级烷基。典型的烷基基团包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。烷基可以是被取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选是羧基、羟基、巯基、环烷基、杂环烷基、卤素、烷氧基、烷基氨基。
“芳基”指的是芳香基团，它含有至少一个具有共轭π电子体系的环，其包括碳环芳基、杂芳基和联芳基，它们都可以任选地被取代。优选的芳基是取代或未取代的苯基或吡啶基。优选的芳基取代基，优选苯基或吡啶基，是卤素、三卤甲基、羟基、SH、NO2、胺、硫醚、氰基、烷氧基。5.发明详述本发明涉及通过抑制C-蛋白酶活性能够调整和/或调节胶原蛋白形成的化合物。
更具体地说，本发明涉及这样的化合物，其作为治疗方法抑制C-蛋白酶活性，以治疗或控制各种结缔组织疾病，包括纤维变性疾病、关节疾病或由手术或突发损害导致或引发的疾病。5.1.化合物本发明一般涉及具有如下通式的化合物和/或组合物；a.抑制剂A
或
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自芳基、杂芳基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基X选自SO2、C＝O；Y选自OH、HOHN(羟胺氨基)、H2N、烷基氨基；Z是直连键、亚甲基、氧、硫、氨基；n是0或1；或b.抑制剂B
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；或c.抑制剂C
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基的烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；或d.抑制剂D
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5是选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；或e.抑制剂E
其中R1选自OH、烷氧基、低级烷基、烷基氨基、肽；X选自N、C；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基。
在本发明的具体实施方案中，本发明的化合物可具有下式
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐；或
和其可药用的盐。
本发明的化学式可存在互变现象。由于说明书中画出的结构式仅可表示可能的互变形式中的一种，应理解本发明包含了具有通过抑制C-蛋白酶活性调整和/或调节胶原蛋白的产生和/或成熟的能力的任何互变体形式。此外，应理解本发明包括每种所述化合物的所有可能的立体异构体。
除了上述化合物和它们的可药用的盐之外，在需要时，本发明还涉及具有通过抑制C-蛋白酶活性抑制、调整和/或调节胶原蛋白的产生和/或成熟的能力的化合物的溶剂化以及未溶剂化形式(例如水合形式)。
上述化合物可通过适合于制备化学上相关的化合物的任何已知方法制备。合适的方法由如下代表性的实施例说明。所需的起始物料可通过有机化学的标准方法得到。
单个的化合物作为影响C-蛋白酶活性的药物的相关活性和效果可使用已知技术测定。化合物优选进行一系列的筛选以测定化合物调节、调整和/或抑制胶原蛋白产生和成熟的能力。这些筛选包括生物化学试验、细胞培养试验和动物模型。5.2.适应症可使用本发明的化合物和组合物治疗与胶原蛋白的不适当或不规则产生和/或成熟有关的疾病，其包括关节炎疾病、纤维变性疾病和其它结缔组织疾病。
这些疾病或症状包括病理纤维变性或瘢痕，包括心内膜硬化、特发性间质性纤维变性、间质性肺纤维变性、肌外膜纤维变性、Symmer’s纤维变性、中枢周纤维变性、肝炎、皮肤纤维瘤、胆汁性肝硬变、酒精性肝硬变、急性肺纤维变性、特发性肺纤维变性、急性呼吸窘迫综合症、肾纤维变性/肾小球性肾炎、肾纤维变性/糖尿病性肾病、硬皮病/全身性硬皮病、硬皮病/局部性硬皮病、瘢痕瘤、瘢痕肥大、严重关节粘连/关节炎、骨髓纤维变性、角膜瘢痕、膀胱纤维变性、假肥大性肌营养障碍、心脏纤维变性、肌纤维变性/视网膜分离、食管狭窄、派尔病。其它的纤维变性疾病可由手术引起或诱发，包括瘢痕修正/整形手术、青光眼、白内障纤维变性、角膜瘢痕、关节粘连、移植物抗宿主疾病、腱手术、神经夹带、杜普伊特伦挛缩、OB/GYN粘连/纤维变性、骨盆粘连、硬膜外纤维变性、再狭窄。其它的纤维变性疾病可通过化学治疗引发，其包括例如肺纤维变性等。5.3.药物制剂和给药途径鉴定的化合物可以化合物本身或以其与合适载体或赋形剂混合的药物组合物形式以治疗或改善各种疾病的剂量向患者给药。治疗有效剂量指的是足以改善症状的化合物的量。用于本申请化合物的配制和给药的技术可以“Remington’s Pharmaceutical Sciences”Mack PublishingCo.，Easton，PA，最新版中找到。5.3.1.给药途径合适的给药途径可例如包括经口、直肠、经膜或经肠给药；肠胃外给药，包括肌内、皮下、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、静脉内、会阴内、鼻内或眼内注射。
此外，人们可局部地而不是全身地给药化合物，例如将化合物直接注射入关节内或纤维变性组织内，通常以储存或持续释放制剂形式。为避免在青光眼手术后通常留下的瘢痕，化合物可局部地给药，例如作为滴眼剂。
此外，人们可以目标给药体系向例如关节炎或纤维变性组织靶向给药，例如以涂覆了特定抗体的脂质体形式。脂质体将到达目标，并由疾患组织选择性地吸收。5.3.2.组合物/制剂本发明的药物组合物可以本身已知的方法制备，例如通过常规的混合、溶解、造粒、制糖衣丸、研磨、乳化、包胶囊、夹带或冻干方法。
因此，用于本发明的药物组合物可以常规方法，使用一种或多种可药用的载体配制，所述载体含有有助于活性化合物加工成用于治疗的制剂的赋形剂和辅剂，合适的制剂取决于所选择的给药途径。
用于注射时，本发明的药物可配制成水溶液，优选在生理相容的缓冲液中，例如，Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理盐水缓冲液。用于经膜给药时，在制剂中使用适合于有待渗透的屏障的浸透剂，该浸透剂在现有技术中通常是已知的。
对于口服给药，化合物可通过将活性化合物与现有技术中已知的可药用的载体混合容易地配制。该载体能够将本发明的化合物配制成片剂、丸剂、糖衣剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆剂、悬浮剂等，用于所治疗的患者口服。用于口服的药物制剂可由固体赋形剂得到，选择性地研磨得到的混合物，和在根据需要加入合适的辅料后加工颗粒混合物以得到片剂或糠衣丸芯。合适的赋形剂尤其是填料，例如糖类，例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、阿胶或藻酸或其盐，例如藻酸钠。
糖衣丸芯带有合适的涂层。为此，可使用浓缩的糖溶液，它可选择性地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、喷漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或颜料可加入片剂或糖衣丸涂层中，以识别或区分活性化合物剂量的不同组合。
可用于口服的药物制剂包括由明胶制备的推进装料的胶囊，以及由明胶和增塑剂，例如甘油或山梨醇制备的软密封胶囊。推进装料的胶囊可含有与填料，例如乳糖、粘合剂，例如淀粉和/或润滑剂，例如滑石或硬脂酸镁和，选择性地，稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可溶解或悬浮于合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。此外，可加入稳定剂。用于口服的所有制剂应是适合于如此给药的剂量形式。
对于颊部给药，组合物可采用以常规方法配制的片剂或锭剂形式。
对于通过吸入给药，本发明使用的化合物方便地从加压包装或喷雾器，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适气体以气溶胶喷雾形式提供。在加压气溶胶情况下，可通过安装提供计量数量的阀确定剂量单元。用于吸入器或吹入器中的例如明胶的胶囊或药筒可配制成含有化合物和合适粉末基质，例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
化合物可配制成通过注射用于肠胃外给药，例如通过单次快速注射或连续输注。用于注射的制剂可以单位剂量形式存在，例如在含有加入的防腐剂的安瓶或多剂量容器。组合物可采用在油质或含水载体中的悬浮液、溶液或乳液形式，并可含有配制助剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
用于胃肠外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的悬浮液可制备成合适的油质注射悬浮液。合适的亲脂溶剂或赋形剂包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油酯，或脂质体。含水注射悬浮液可含有增加悬浮液体粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡萄糖。悬浮液还可选择性地含有合适的稳定剂或增加化合物溶解性的物质以制备高浓度溶液。
此外，活性成分可以是粉末形式，用于在使用前与合适的赋形剂，例如无菌无热原水混合。
化合物还可配制成直肠组合物，例如含有常规栓剂基质，例如可可脂或其它甘油酯的栓剂或保留灌肠剂。
除了上述制剂外，化合物还配制成储存制剂。该长作用配制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射给药。因此，例如化合物可使用合适的聚合或疏水物质(例如作为在可用的油中的乳液)或离子交换树脂，或作为微溶衍生物，例如作为微溶盐配制。
用于本发明的疏水化合物的可药用的载体是共溶剂体系，其含有苯甲醇、非极性表面活性剂、水混溶有机聚合物和水相。共溶剂体系可以是VPD共溶剂体系。VPD是3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂吐温80和65％w/v聚乙二醇300和余量的无水乙醇的溶液。VPD共溶剂体系(VPD5W)由用5％葡萄糖水溶液1∶1稀释的VPD组成。共溶液体系充分溶解疏水化合物，并且本身在全身给药时产生低的毒性。共溶剂体系的比例自然可考虑不破坏其溶解性和毒性特征改变。此外，共溶剂组分可改变，例如，其它低毒性非极性表面活性剂可用于代替吐温80；聚乙二醇的份额大小可改变；其它生物相容的聚合物可代替聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；和其它糖或多糖苷可代替葡萄糖。
此外，可采用适用于疏水药物化合物的其它给药体系。脂质体和乳液是适用于疏水药物的给药赋形剂或载体的已知实例。某些有机溶剂，例如二甲基亚砜也可以使用，尽管通常代价为较大的毒性。此外，化合物可使用缓释体系给药，例如含有治疗药物的固体疏水聚合物的半渗透基体。已证实了各种缓释材料，是本领域技术人员已知的，根据其化学性质，缓释胶囊释放化合物可持续数周至超过100天。根据治疗试剂的化学性质和生物稳定性，可采用适用于蛋白质稳定的其它策略。
药物组合物还可含有合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这种载体或赋形剂的实例包括，们不限制于，碳酸钙、磷酸钙、各种糖、纤维素衍生物、明胶和聚合物，例如聚乙二醇。
本发明的许多C-蛋白酶抑制化合物可作为与可药用的抗衡离子形成的盐提供。该可药用的碱加成盐是保留了游离酸的生理效果和性质的盐，它们通过与无机或有机碱，例如氢氧化钠、氢氧化镁、氨水、三烷基胺、二烷基胺、单烷基胺、二元氨基酸、乙酸钠、苯甲酸钾、三乙醇铵等等反应得到。5.3.3.有效剂量适用于本发明的药物组合物包括组合物，其含有有效量的活性成分以获得所需的目的。更具体地说，有效量指的是防止所治疗的患者现有症状的发展或改善之的有效量。本领域的技术人员能够很好地确定有效量，尤其在参考了本发明的详细描述之后。
对于任何在本发明的方法中使用的化合物，治疗有效量起初可通过细胞培养试验确定。例如，该剂量可在动物模型中确定以获得循环浓度范围，其包括在细胞培养中测定的IC50(即，试验化合物获得C-蛋白酶活性的半数最大抑制的浓度)。该资料可用于更精确地确定在人体中的使用剂量。
治疗有效剂量指的是导致患者症状改善或生存延长的化合物的量。该化合物的毒性和治疗效力可通过在细胞培养或实验动物中的标准药物实验确定，例如，用于测定LD50(总体50％致死的剂量)和ED50(有效治疗总体的50％的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比率是治疗系数，它可用LD50与ED50的比率表示。由细胞培养试验和动物研究得到的数据可用于确定人体的剂量范围。该化合物的剂量优选位于循环浓度范围内，所述浓度包括具有较小或没有毒性的ED50。剂量可根据所采用的剂量形式和所用的给药途径改变。确切的制剂、给药途径和剂量可由临床医生考虑患者的状况选择。参见，例如，Fingl等，1975，“治疗的药理基础”，第一章，第1页。
剂量和间隔可分别调节以提供足以保持C-蛋白酶抑制效果的血浆含量或最小有效浓度(MEC)。对于每种化合物MEC将改变，但可由体外数据确定；例如使用本文所述的试验确定C-蛋白酶50-90％抑制所需的浓度。获得MEC所需的浓度将取决于各自的特征和给药途径。然而，HPLC试验或生物试验可用于确定血浆浓度。
剂量间隔也可使用MEC值确定。化合物应使用一定的给药方案来给药，该方案对于10-90％，优选30-90％，最优选50-90％的时间保持血浆浓度高于MEC。
在局部给药或选择吸收的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
当然，给药组合物的量将取决于所治疗的受体、受体的体重、疾患的严重性、给药方式和临床医生的判断。5.3.4.包装如果需要，组合物可以在包装或分发装置中存在，它可含有一个或多个含有活性成分的单位剂量。包装可例如包括金属或塑料箔，例如发泡药包装。包装或分散发装置可附带用于给药的装置。含有配制在可药用的载体中的本发明的化合物的组合物还可在合适的容器中制备、放置，贴上治疗所示症状的标记。在标记上所示的合适的症状可包括治疗关节炎或任何其它纤维变性疾病。6.实施例本发明的化合物可根据已知的方法合成。如下表示用于合成和测试本发明的化合物的优选方法。6.1.实施例1化合物合成6.1.1. N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺的合成用于合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺(5)(为命名目的，在本说明书中具体的化合物可称为“C#”，其中“#”是阿拉伯数字)，也称为FG047(抑制剂A的实施例)，的优选方法如下
2-[(4-氯苄基)氨基]乙酸乙基酯(3)的合成。在甘氨酸乙酯盐酸盐(1)(1.00g，7.16mmol)和4-氯苯甲醛(2)(1.00g，7.16mmol)在甲醇(10ml)的冷却溶液中加入无水氯化锌(75mg，0.55mmol)和NaBCNH3(0.45g，7.16mmol)。在室温下搅拌18小时后，用1N盐酸水溶液(20ml)处理反应混合物，再搅拌30分钟。用旋转蒸发器浓缩混合物以除去大多数甲醇溶剂，然后用乙醚(20ml)提取。水层在冰浴中小心地用45％(w/w)KOH水溶液碱化至pH10，用乙酸乙酯(2×50ml)提取。合并的乙酸乙酯有机层用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩。粗产物硅胶色谱法(4/1，己烷/乙酸乙酯)纯化得到2-[(4-氯苄基)氨基]乙酸乙基酯(3)油状物。
2-[[N-(4-甲氧基苯磺酰基)-N-(4-氯苄基)]氨基]乙酸乙基酯(4)的合成。将三乙胺(294mg，2.90mmol)滴加至2-[(4-氯苄基)氨基]乙酸乙基酯(3)(600mg，2.64mmol)和对-甲氧基苯磺酰氯(545mg，2.64mmol)在无水二氯甲烷(7ml)中的溶液中。混合物在室温下搅拌15小时，用1N盐酸(20ml)溶液处理。分离得到的两相，水层用二氯甲烷提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。粗产物用硅胶色谱法(3/1-2/1己烷/乙酸乙酯)纯化得到2-[[N-(4-甲氧基苯磺酰基)-N-(4-氯苄基)]氨基]乙酸乙基酯(4)油状物。
N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺(5)的合成。在沸点下分别制备羟基胺盐酸盐(171mg，2.46mmol)在甲醇(1.3ml)中的溶液和KOH(207mg，3.69mmol)在甲醇(1.3ml)中的溶液，冷却至40℃，然后将后者溶液加入前者。在冰浴中冷却反应混合物30分钟后，过滤出氯化钾固体。在滤液中加入乙酯(4)(487mg，1.23mmol)。在室温下搅拌6小时后，反应混合物用1N盐酸(20ml)溶液处理，用二氯甲烷提取。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩得到粗产物。残余物在乙醚中研制，收集白色固体得到异羟肟酸(hydroxamate)，即N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺(5)，也称作FG-047。
mp124-125℃；MS(ES)(M+H)+385；1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.47(s，1H，OH)，8.81(s，1H，NH)7.81-7.08(m，8H，Ph)，4.34(s，2H，CH2CO)，3.85(s，3H，OMe)，3.63(s，2H，CH2Ph).6.1.2. N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氟苄基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氟苄基)]氨基]乙酰胺(6)，也称为FG053(抑制剂A的实施例)的优选方法基本上与所述合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺的方法相同，使用起始物料4-氟苯甲醛代替4-氯苯甲醛。参见，6.1.1.部分
MS(ES)(M-1)-367；1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.45(s，1H，OH)，8.83(s，1H，NH)，7.81-7.08(m，8H，Ph)，4.33(s，2H，CH2CO)，3.85(s，3H，OMe)，3.62(s，2H，CH2Ph).6.1.3. 异羟肟酸的合成合成异羟肟酸(11)(抑制剂B的实施例)的优选方法如下
用溴乙酸叔丁基酯烷基化丙二酸酯(7)得到四酯(8)。经皂化和脱羧反应，得到的酸(9)与Glu(OBn)NHMe经肽偶合反应偶合得到(10)。在随后的水解、酐形成和NH2OH加成后，(10)可转化为所需的异羟肟酸(11)。6.1.4. N-羧甲基二肽的合成用于合成N-羧甲基二肽(16)，也称为FG057(抑制剂D的实施例)的优选方法如下
由文献方法容易地获得的结构单元(12)和(13)，通过经典的DCC/HOBt方法偶合以78％的收率得到二肽(14)。(14)用在二氯甲烷中的TFA脱保护，随后在NMM存在下用溴乙酸苄基酯烷基化形成N-羧甲基二肽(15)，它通过催化氢化转化为游离酸(16)。
Boc-Glu(OBn)OH和Boc-Asp(OBn)OH使用现有技术中已知的方法合成。
Boc-Glu(OBn)NHMe(13)的合成将三乙胺(2.0g，20mmol)滴加入Boc-Glu(OBn)OH(6.7g，20mmol)在无水THF(100ml)中的溶液中。将溶液在氩气氛下冷却至-78℃，然后滴加氯甲酸乙酯(2.2g，20mmol)。使反应混合物在2小时内温热至-30℃，加入甲胺(22mmol)的40％水溶液，使反应混合物温热至室温。在使反应再搅拌1小时后，加入乙醚(50ml)和水(70ml)。分离出有机层，用1M碳酸氢钠、10％柠檬酸和饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥。真空蒸发溶剂得到白色固体(5.0g，72％收率)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.38(s，9H，CH3)；1.85-2.59(m，4H，CH2)；2.75(d，3H，NCH3)；4.17(m，1H，CH)；5.08(δ，2H，OCH2)；5.33(bδ，1H，NH)；6.30(bs，1H，NH)；7.31(s，5H，Ph-H).
Boc-Asp(OBn)-Glu(OBn)NHMe(14)的合成在叔丁氧羰基氨基酯(13)(700mg，2mmol)在10ml二氯甲烷中的溶液中加入1.5mlTFA，反应混合物在室温下在氩气氛下搅拌1小时。真空蒸发过量的酸，残余物用乙醚处理数次，减压浓缩，得到无色油状物，其无需进一步提纯。加入在二氯甲烷(10ml)中的TFA盐、Boc-Asp(OBn)OH(466ml，2mmol)、HOBt(170mg，2mmol)和NMM(202mg，2mmol)，反应物在室温和氩气氛下搅拌过夜。过滤除去二环己基脲，减压浓缩滤液。残余物用乙酸乙酯(30ml)稀释，再次过滤，用1M碳酸氢钠、10％柠檬酸和饱和氯化钠溶液洗涤。有机层用硫酸镁干燥，真空浓缩得到白色固体，收率78％(867mg)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.41(s，9H，CH3)；1.85-3.05(m，9H，3CH2，NCH3)；4.40(m，2H，CH)；5.01(m，4H，OCH2)；5.53(d，1H，NH)；6.48(bs，1H，NH)；7.15-7.38(m，10H，Ph-H).
N-羧甲基二肽(15)的合成向Boc-Asp(OBn)-Glu(OBn)NHMe(14)(555mg，1mmol)在10ml二氯甲烷的溶液中加入1mlTHF，反应混合物在室温下在氩气氛中搅拌1小时。真空蒸发过量的酸，残余物用乙醚处理几次，减压浓缩，得到无色油状物，将其溶解在无水THF(20ml)中。在该溶液中加入NMM(101mg，1mmol)和溴乙酸苄基酯(230mg，1mmol)，反应混合物在室温下在氩气氛中搅拌过夜。减压浓缩反应混合物，残余物用乙酸乙酯(20ml)稀释，用1M碳酸氢钠、10％柠檬酸和饱和氯化钠溶液洗涤。有机层用硫酸镁干燥，然后浓缩得到无色油状物，将其经快速硅胶色谱法(乙酸乙酯/甲醇10∶1)纯化得到(15)(410mg)白色固体，收率88％。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.83-2.95(m，9H，3CH2，NCH3)；3.30-3.60(m，4H，CH & N CH2)；4.39(m，2H，CH)；5.05(m，6H，OCH2)；6.64(bs，1H，NH)；7.29-(m，15H，Ph-H)8.02(bs，-1H，NH)；13C-NMR(60MHz，CDCl3)；δ26.17，27.24，30.59，36.57(3CH2，NCH3)；49.59(NCH2)；52.54，59.07(2CH)；66.46，66.71，66.86(3OCH.)；128.17，128.26，128.34，128.55，128.80，135.27，135.44，135.79(Ph-C)；171.25，171.34，172.01，172.61，173.05(5C＝O).
N-羧甲基-Asp-Glu-NMe(16)的合成向苄基保护的N-羧甲基二肽(15)(68mg，0.113mg)在甲醇(5ml)的溶液中逐批加入Pd/C粉末(50mg)。混合物在氢气气氛(气袋压力)下在室温搅拌20小时。通过硅藻土垫过滤催化剂，用甲醇冲洗。浓缩滤液，粗固体在-20℃下由乙酸乙酯/甲醇重结晶，得到产物N-羧甲基-Asp-Glu-NMe(16)(23mg，0.065mmol)白色固体，收率58％。
mp147-149℃；NMR(360MHz，DMSO-d6)δ8.19(d，J＝8.5Hz1H)，7.72(m，1H)，4.20(m，1H)，3.45-3.20(m，4H)，2.63-2.44(m，5H)，2.20(m，2H)，1.93(m，1H)，1.72(m，1H).6.1.5.巯基化合物的合成合成巯基化合物(22)，也称为FG-O74(抑制剂C的实施例)的优选方法如下
用溴乙酸叔丁基酯在氢化钠存在下烷基化磷酸二乙基酯(17)，以90％的收率得到膦酸酯(18)。使用碳酸钾作为碱，(18)与甲醛进行Horner-Emmons反应形成不饱和酯(19)。(19)用LiOH进行皂化，然后进行硫代乙酸的Michael加成得到酸(20)。(20)与Glu(OBn)NHMe采用DCC/HOBt方法偶合，通过快速色谱法得到非对映体混合物的二肽(21)。(21)用在二氯甲烷中的TFA脱保护得到单酸(22)。
1-乙基-2-二乙基膦酰基琥珀酸4-叔丁基酯(18)的合成向氢化钠(0.48g，20mmol)在无水THF(80ml)中的悬浮液中滴加磷酰基乙酸三乙基酯(4.48g，20mmol)在THF(20ml)中的溶液，3小时后在室温下加入在THF(20ml)中的溴乙酸叔丁基酯。将得到的悬浮液在室温下搅拌3小时，加入水(50ml)，反应混合物用1M盐酸酸化到pH3。在加入乙醚(70ml)后，分离出有机层，用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，真空蒸发溶剂得到无色油状物，收率90％。
1-乙基-2-亚甲基-琥珀酸4-叔丁基酯(19)的合成将化合物(18)(5.4g，16mmol)、碳酸钾(6.9g，50mmol)和甲醛(3.2g，100mmol)的30％水溶液的混合物回流3小时。冷却后，混合物用己烷提取，有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥。在过滤和真空蒸发后，得到油质残余物，收率80％(2.7g)。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ1.29(t，j＝7Hz，3H，CH2)；1.43(s，9H，CH3)；3.24(s，2H，CH2；4.20(q，J＝Hz，2H，OCH2)；5.63，6.28(s，2H，＝CH2).
2-乙酰基硫基甲基-琥珀酸4-叔丁基酯(20)将不饱和酯(19)(2.3g，11mmol)溶解于THF(50ml)中，在0℃加入0.2MLiOH(264mg，11mmol)水溶液。使混合物温热至室温，再搅拌3小时。蒸发有机溶剂，水层用乙醚(30ml)提取。水层用1M盐酸酸化至pH3，用乙酸乙酯提取。有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥。在过滤和蒸发溶剂后，得到酸，白色固体，60％收率。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)；δ1.44(s，9H，CH3)，3.26(s，2H，CH2)；5.78，6.42(s，2H，＝CH2)10.01(bs，1H，COOH).
将酸(1.0g，5.4mmol)溶解于氯仿中，加入硫代乙酸(1.45g，19mmol)。混合物在60℃搅拌49小时，真空蒸发溶剂，以定量收率得到化合物(20)，为无色油状物。
1H-NMR(200MHz，CDCl3)；δ1.44(s，9H，CH3)；2.34(s，3H，CH3)；2.45-2.75(m，2H，CH2；2.96-3.33(m，3H，CH2，CH)；9.74(bs，1H，COOH).
3-乙酰基硫甲基-4-氧代-5-氮杂-6-(R)-甲基氨基甲酰基-8-苄氧基羰基-辛酸4-叔丁基酯(21)在叔丁氧基羰基氨基酯(13)(700mg，2mmol)在10ml二氯甲烷中的溶液中加入1mlTFA，反应混合物在室温下在氩气氛下搅拌1小时。真空蒸发过量的酸，残余物用乙醚(15ml)处理数次，减压浓缩，得到无色油状物，其无需进一步提纯。将TFA盐、酸(20)(525mg，2mmol)、HOBt(170mg，2mmol)和NMM(202mg，2mmol)溶解在二氯甲烷(40ml)中，加入DCC(412mg，2mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液，反应物在室温和氩气氛下搅拌过夜。过滤除去二环己基脲沉淀，减压浓缩滤液。残余物用乙酸乙酯(30ml)稀释，再次过滤，用1M碳酸氢钠、10％柠檬酸和饱和氯化钠溶液洗涤。有机层用硫酸镁干燥，真空浓缩得到(21)无色油状物，将其用硅胶色谱法纯化，使用乙酸乙酯作洗脱剂，得到72％的收率(710mg)，为非对映体的混合物。1H-NMR(200MHz，CDCl3)；δ1.36，1.39(2s，9H，CH3)；1.87-3.2(m，14H，4CH3，CH3，NCH3)；4.40(m，2H，CH)；5.08，5.11(2s，2H，OCH2)；6.43，6.76，7.07(bs，-2H，NH)；6.76(2d，1H，NH)；7.31(m，15H，Ph-H).
3-巯甲基-4-氧代-5-氮杂-6-(R)-甲基氨基甲酰基-8-羰基-辛酸(22)(FG 074)的合成在叔丁氧基羰基氨基酯21(495mg，1mmol)在15ml二氯甲烷中的溶液中加入TFA(1.5ml)，反应混合物在室温下在氩气氛下搅拌1小时。真空蒸发溶剂和过量的酸，残余物用乙醚(10ml)处理数次，减压浓缩，得到无色油状物，其用硅胶色谱法(乙酸乙酯/甲醇10∶1，含有1％乙酸)提纯得到中间体的白色固体，收率84％(370mg)。
在室温下在中间体(30mg，0.07mmol)在1ml(1.5/1)甲醇/水中的溶液中加入LiOH.H2O(12mg，0.27mmol)。在室温下搅拌3小时后，反应混合物用0.5ml1N盐酸水溶液处理，用乙酸乙酯(2×10ml)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩得到硫化合物22，为胶状固体(19mg，0.06mmol)收率86％。
MS(ES)(M+H)+307
6.1.6. 2-[[N-(4-甲氧基苯磺酰基)-N-(4-氯苄基)]氨基]乙酸的合成合成2-[[N-(4-甲氧基苯磺酰基)-N-(4-氯苄基)]氨基]乙酸(23)，也称为GF046，(抑制剂A的实施例)的优选方法如下
2-[[N-(4-甲氧基苯磺酰基)-N-(4-氯苄基)]氨基]乙酸(23)的合成在乙酯(4)(300mg，0.75mmol)在1.5∶1甲醇/水(4ml)中的悬浮混合物中加入氢氧化锂/水。在室温下搅拌5小时后，混合物用1N盐酸(20ml)处理，用二氯甲烷(2×20ml)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩。粗固体从热的乙醚中重结晶得到(23)白色固体。
mp139.5-140℃；1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ7.79-7.08(m，4H，Ph)，4.37(s，2H，CH2)，3.85(s，3H，OCH3)，3.83(s，2H，CH2)6.1.7. N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺(30)，也称为GF055，(抑制剂A的实施例)的优选合成方法如下
2-[[N-(4-甲氧基苯磺酰基)]氨基]乙酸乙酯(26)的合成向甘氨酸乙酯盐酸盐(24)(3.0g，21.5mmol)和4-甲氧基苯磺酰基氯(25)(4.4g，21.3mmol)在无水二氯甲烷(60ml)中的混合物中加入三乙胺(4.79g，47.3mmol)。在室温下搅拌15小时后，反应混合物用1N盐酸(120ml)处理，用二氯甲烷(2×100ml)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩。粗固体从热的乙酸乙酯/己烷中重结晶得到磺酰胺(26)白色固体。
2-[[N-(4-甲氧基苯基磺酰基)-N-叔丁氧基羰基甲基]氨基]乙酸乙酯(27)的合成在冰浴中向氢化钠(分散在矿物油中，60％)(162mg，4.03mmol)在无水THF(10ml)中的浆状物中加入磺酰胺(26)(1.0g，3.66mmol)，然后加入溴乙酸叔丁基乙酯(785mg，4.03mmol)混合物在0℃下剧烈搅拌30分钟，然后在室温下搅拌15小时。在冰浴中冷却反应混合物后，将其用水(25ml)处理，用乙醚(2×25ml)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。残余物用硅胶色谱法(2∶1己烷∶乙酸乙酯)纯化，得到(27)无色浆状物。
N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(叔丁氧基羰基甲基)]氨基]乙酰胺(28)的合成在沸点下分别制备羟基胺盐酸盐(377mg，5.43mmol)在甲醇(2.7ml)中的溶液和KOH(456mg，8.13mmol)在甲醇(2.7ml)中的溶液，冷却至40℃，然后将后者溶液加入前者。在冰浴中冷却30分钟后，过滤出氯化钾固体。在滤液中加入乙酯(27)(1.05g，2.71mmol)。在室温下搅拌6小时后，反应混合物用1N盐酸溶液中和至pH4，在二氯甲烷(60ml)和水(20ml)之间分配。分离得到的两相，水层用二氯甲烷(60ml)提取，合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩。残余物用硅胶色谱法(11∶1二氯甲烷∶甲醇)纯化得到酯异羟肟酸(28)，也称为GF-058，白色同体。
N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺(29)的合成将叔丁基酯异羟肟酸(28)(520mg，mmol)在35％三氟乙酸/二氯甲烷(9ml)中的溶液在0℃搅拌10分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。浓缩混合物并真空干燥。残余物在乙酸乙酯中研制，收集固体，从乙酸乙酯/甲醇/己烷中重结晶得到酸异羟肟酸(29)白色固体。
mp160-161℃；MS(ES)(M+H)+319；1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ12.08(brs，1H，CO2H)，10.69(s，1H，OH)，8.96(s，1H，NH)，7.76(d，J＝8.7Hz，2H，Ph)，7.09(d，J＝8.7Hz，2H，Ph)，4.01(s，2H，CH2)，3.84(s，3H，OMe)，3.83(s，2H，CH2).6.1.8. N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酸异羟肟酸的合成合成N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酸异羟肟酸，也称为FG054，(抑制剂A的实施例)的优选方法如下
N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酸甲酯(32)的合成向L-脯氨酸甲酯盐酸盐(30)(1.00g，6.03mmol)和4-甲氧基苯磺酰基氯(31)(1.19g，5.75mmol)在无水二氯甲烷(17ml)中的溶液中加入三乙胺(1.22g，12.06mmol)。在室温下搅拌15小时后，反应混合物用1N盐酸(30ml)水溶液处理，用乙酸乙酯(2×100ml)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩得到(32)。该产物无需进一步纯化直接用于下一反应。
N-(4-甲氧基苯磺酰基)-L-脯氨酸异羟肟酸的合成(33)在沸点下分别制备羟胺盐酸盐(465mg，6.68mmol)在甲醇(3.4ml)中的溶液和KOH(561mg，10.0mmol)在甲醇(3.4ml)中的溶液，冷却至40℃，然后将后者溶液加入前者。在冰浴中冷却30分钟后，过滤出氯化钾固体。在滤液中加入乙酯(32)(1.0g，3.34mmol)。在室温下搅拌15小时后，反应混合物用1N盐酸(40ml)溶液处理，用二氯甲烷/甲醇(10∶1)提取。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，并浓缩得到粗产物。粗产物由热甲醇/乙酸乙酯中重结晶得到异羟肟酸(33)固体。
6.1.9. N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-三氟甲基苄基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-三氟甲基苄基)]氨基]乙酰胺(34)，也称为FG066(抑制剂A的实施例)的优选方法基本上与所述合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料4-三氟甲基苯甲醛代替4-氯苯甲醛。参见，6.1.1.部分
1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.50(s，1H，OH)，8.83(s，1H，NH)，7.81-7.08(m，8H，Ph)，4.45(s，2H，CH2CO)，3.86(s，3H，OMe)，3.67(s，2H，CH2Ph).
6.1.10. N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-甲氧基苄基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯基磺酰基)-N’-(4-甲氧基苄基)]氨基]乙酰胺(35)，也称为FG067(抑制剂A的实施例)的优选方法基本上与所述合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料4-甲氧基苯甲醛代替4-氯苯甲醛。参见，6.1.1.部分1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.42(s，1H，OH)，8.79(s，1H，NH)7.81-6.86(m，8H，Ph)，4.29(s，2H，CH2CO)，3.85(s，3H，OMe)，3.73(s，3H，OMe)，3.28(s，2H，CH2Ph).
6.1.11. N-羟基-2-[[N’-(4-苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羟基-2-[[N’-(4-苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺(36)，也称为FG-080(抑制剂A的实施例)的优选方法基本上与所述合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(4-氯苄基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料苯磺酰基氯代替4-甲氧基苯磺酰基氯。参见上述6.1.1.部分。
MS(ES)(M+H)+355
36(FG-080)6.1.12. N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(苄基)]氨基]乙酰胺的合成合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(苄基)]氨基]乙酰胺(37)，也称为FG-061(抑制剂A的实施例)的优选方法基本上与所述合成N-羟基-2-[[N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-N’-(羧甲基)]氨基]乙酰胺的方法相同，但使用起始物料苄基溴代替溴乙酸叔丁基酯。参见上述6.1.7.部分。
MS(ES)(M-H)-349
37(FG-061)6.1.13. N-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬氨酸的合成合成N-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬氨酸(42)，也称为FG084，(抑制剂A的实施例)的优选方法如下FG084(抑制剂A)的合成
N-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬氨酸(40)。在室温下，向β-苄基-(L)-天冬氨酸盐酸盐(38)(2.00g，8.96mmol)和对甲氧基苯磺酰基氯(39)(1.76g，8.53mmol)在无水二氯甲烷中的溶液中加入三乙胺(1.81g，17.91mmol)。搅拌15小时后，反应混合物用1N盐酸(60ml)处理，用乙酸乙酯(3×50ml)提取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，浓缩得到N-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬氨酸(3.14g，7.99mmol，94％收率)，胶状产物。
N-苄氧基-N’-(4-甲氧基苯基磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬酰胺(41)。在室温下，向N-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬氨酸(300mg，0.76mmol)和O-苄基羟胺/盐酸在(7/3)THF/DMF(10ml)的无水溶液中的混合物中加入N-羟基苯并三唑(HOBT)(103mg，0.76mmol)、N-乙基吗啉(204mg，1.68mmol)和二异丙基碳化二亚胺(106mg，0.84mmol)。在搅拌一周末(2.5)后，反应混合物用(1/1)己烷/乙酸乙酯(40ml)稀释，依次用1N盐酸(2×20ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×20ml)和盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥并浓缩。残余物经硅胶快速色谱法((1/1)乙酸乙酯/己烷)纯化得到N-苄氧基-N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬酰胺(114mg，0.22mmol，30％收率)，白色固体。mp128-129℃；MS(ES)(M+S)+499N-羟基-N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-(L)-天冬酰胺(42)。将N-苄氧基-N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-β-苄基-(L)-天冬酰胺(102mg，0.20mmol)和10％Pd/C(43mg)在甲醇(7ml)中的混合物在氢气气氛(气袋压力)下剧烈搅拌20小时。用硅藻土垫过滤去催化剂，浓缩滤液。残余物由水中冻干，得到N-羟基-N’-(4-甲氧基苯磺酰基)-(L)-天冬酰胺(50mg，0.16mmol，77％收率)，吸湿飞扬性粉末。
1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ10.60(s，1H)，8.78(s，1H)，7.87(d，J＝8.2Hz，1H)，3.93(m，1H)，3.82(s，3H)，2.50(m，1H)，2.21(dd，J＝16.0，6.5Hz，1H).6.2.实施例2C-蛋白酶活性试验6.2.1. 用于测定抑制剂的C-蛋白酶活性和IC50的体外试验如下试验可用于测定本发明不同化合物对C-蛋白酶活性的活性水平和效果。
将约125μg放射标记的(14C)原胶原蛋白加入总体积为10μl的在0.1M Tris盐酸、0.1M氯化钠、0.02％Brij-35和5mM氯化钙溶液中的小鸡C-蛋白酶中。使反应在35℃进行15分钟，用半体积的3x终止/负荷缓冲液(30mM EDTA、30％甘油、6％SDS、0.006％溴酚蓝)终止。然后将试样加热至100℃4分钟，使用6％聚丙烯酰胺胶通过SDS-PAGE(Novex)分辨。通过放射自显影检测蛋白质谱带。酶活性的量基于相应于未裂解的原胶原蛋白谱带的消失。
抑制剂的IC50可通过画出％活性对抑制剂浓度的曲线，并估算产生50％活性的抑制剂浓度。
试验的抑制剂的IC50值示于表I中。
表I各鉴定的C-蛋白酶抑制剂的IC50抑制剂 Generic组 IC50FG-047 A 50μMFG-061 A 100μMFG-053 A 100μMFG-0521A 125μMFG-066 A 150μMFG-067 A 150μMFG-086(cbz-Pro-Leu-Gly-异羟肟酸2) A 200μMFG-087(Ac-PYYG-异羟肟酸) A 335μMFG-088(放射酰胺素3)A 350μMFG-054 A 400μMFG-057 A1500μMFG-0584A2100μMFG-055 A2600μMFG-0515A ＞＞ 100μMFG-046 A ＞＞ 1000μM1 商业上由Peptides International得到(IHN-3850-PI)2 商业上由Sigma得到(C-8537)3 商业上由Sigma得到(A-6671)4 中间体化合物(28)，参见6.1.7部分5 商业上由Peptides International得到(ISN-3835-PI)6.2.2. 用于测定抑制剂C-蛋白酶活性和IC50的体外ELISA试验抑制剂的IC50值还可以通过过滤ELISA试验测定。在该试验中，约25ng未标记的人体原胶原蛋白I用C-蛋白酶如6.2.1部分培养1小时。通过加入40μl沉淀缓冲液(0.5X反应缓冲液、0.1mg/ml小鸡胶原蛋白H、10μg/mlBAS、7.5mM EDTA)终止反应。加入25μl75％乙醇，混合反应混合物，在冰上培养1小时以沉淀原胶原蛋白。，使用Milliporemultiscreen真空阀，通过Millipore multiscreen-HV 0.45μm亲水板过滤，由沉淀的胶原蛋白中分离溶解的c-前肽。除去20μl的滤液，通过使用Takara Biomedicals的原胶原蛋白I型C-肽(PIP)EIA试剂盒测定裂解的C-前肽的量。
为抑制hBMP-1，将约20ng放射标记的(125I)人体原胶原蛋白I加入在总体积10μl的反应溶液中的1-2μl 5倍浓缩的重组hBMP-1细胞培养基(Kessler等，(1996)科学271360)中。使反应在35℃进行1小时，随后用半体积3x终止/负荷缓冲液终止，如上所述用SDS-PAGE进行分析。
抑制剂的IC50可通过画出％活性对抑制剂浓度的曲线，并估算产生50％活性的抑制剂浓度。IC50值示于表II中。
表II由ELISA测定的各鉴定的C-蛋白酶抑制剂的IC50抑制剂Generic组 IC50ELISAFG-061A 12μMFG-047A 13μMFG-053A 22μMFG-067A 37μMFG-066A 48μM6.2.3.用于测定抑制剂C-蛋白酶活性和IC50的组织培养试验抑制剂的体内C-蛋白酶活性和IC50值可在组织培养试验中通过测定在用化合物处理前后在条件培养基中原胶原蛋白和成熟胶原蛋白的产生而测定。胶原蛋白和原胶原蛋白的比例将直接与前体向成熟胶原蛋白产物的细胞转化有关，其表示C-蛋白酶活性。
此外，可测定C-前肽/细胞的培养基含量，并且比较未处理的细胞和抑制剂处理的细胞。6.3.用于测定抑制剂C-蛋白酶活性和效果的动物模型在现有技术中模拟与不规则或不适当胶原蛋白产生有关的临床疾病的若干动物模型是已知的，可用于测定本发明的化合物的体内效果。这些物质模型包括大鼠创伤室(chamber)模型(Schilling等，1959，外科46702-210)、雄二醇刺激的子宫扩张模型(Mandell等，1982，生物化学杂志2575268-5273)和诱导的血管生成模型(Matrigel)(Passaniti等，1992，实验研究67519-528)。其它动物模型包括临床疾病模型，如肝纤维变性模型(Tsukamoto等，1990，肝病研讨会1056-65；Kock-Weser，1952，实验研究1324-331；Marrione，1949，美国病理杂志25273-285；Tams，1957，美国病理杂志3313-27；Wahl等，1986，实验医学杂志163884-902)、肺纤维变性模型(Kelly等，1980，实验临床医学杂志96954-964)、动脉再狭窄模型(Jackson，1994，Trends of Cardiovascular Medicine4122-130；Clowes等，1983，实验研究49327-333)、肾纤维变性模型(Yamamoto等，1987，Kidney International32514-525)、腱恢复模型(Fanklin等，1986，实验和临床医学杂志108103-108)、肿瘤生长模型(kiohs等，1985，JNCL75353-359)、trabeculectomy模型(Lahery等，1989，眼病理学研究5155-179)和腹粘连模型(Williams等，1992，外科研究杂志5265-70)。6.4. 实施例4细胞毒性测定研究潜在抑制剂的细胞毒性以测定它们是否对细胞生存或繁殖有影响。这些试验包括使用快速繁殖期或静止期细胞。接种已知数目的细胞，并以增加的时间暴露于潜在抑制剂的浓度范围。通过细胞计数或染色法(例如结晶紫)测定细胞数目。
细胞毒性作为细胞生存和细胞繁殖的函数评价。细胞生存包括使用静止期细胞，并通过细胞数目(计数或染色法)进行测定。细胞数目的降低表示细胞损失，因此，对细胞生存有影响。细胞繁殖包括使用快速繁殖期细胞，也由细胞数目测定。此时，相对于未处理的细胞数目的降低表示对细胞繁殖有影响。
本发明并不限制于实施方案说明的范围，实施方案用于本发明单一方面的说明，功能相当的任何化合物和它们的使用方法在本发明的范围内。事实上，除了上述之外，由如下描述和附图
，本发明的各种改性对于本领域技术人员来说是显而易见的。这种改性也在所附权利要求书的范围内。
所有列出的参考文献其全文列为本文参考文献。
权利要求
1.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可药用的盐，所述化合物具有选自如下的结构式
或
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自芳基、杂芳基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基X选自SO2、C＝O；Y选自OH、HOHN(羟胺)、H2N、烷基氨基；Z是直连键、亚甲基、氧、硫、氨基；n是0或1。
2.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可药用的盐，所述化合物具有选自如下的结构式
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；和R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基。
3.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可药用的盐，所述化合物具有选自如下的结构式
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；和R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基。
4.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可药用的盐，所述化合物具有选自如下的结构式
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选白H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基。
5.具有C-蛋白酶抑制效果的化合物和其可药用的盐，所述化合物具有选自如下的结构式
其中R1选自OH、烷氧基、低级烷基、烷基氨基、肽；X选自N、C；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基。
6.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
7.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
8.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
9.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
10.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
11.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
12.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
13.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
14.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
15.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
16.权利要求1的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
17.权利要求3的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
18.权利要求3的化合物和其可药用的盐，其中上述化合物具有下式
19.药物组合物，其含有选自如下的化合物
或
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、卤代芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自芳基、杂芳基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、烷基氨基、芳烷基氨基；X选自SO2、C＝O；Y选自OH、HOHN(羟胺)、H2N、烷基氨基的基团；Z是直连键、亚甲基、氧、硫、氨基；n是0或1；和可药用的载体或赋形剂；或
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；和R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；和可药用的载体或赋形剂；或
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；和R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；和可药用的载体或赋形剂；或
其中R1选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；和可药用的载体或赋形剂；或
其中R1选自OH、烷氧基、低级烷基、烷基氨基、肽；X选自N、C；R2选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R3选自H、低级烷基、单或多卤代烷基、羧基烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、联芳基、联芳基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、酰氧基烷基、巯基烷基、(氨基、单或二烷基氨基)烷基、酰氨基烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基；R4选自H、低级烷基；R5选自H、低级烷基、羧基烷基、(单或二烷基氨基)烷基、烷基(硫基、亚磺酰基或磺酰基)烷基、alkoy烷基酰基烷基；和可药用的载体或赋形剂。
20.药物组合物，其含有选自如下的化合物
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂；或
和可药用的载体或赋形剂。
21.治疗与胶原蛋白的不适当或不规则产生有关的疾病的方法，其包括施用有效量的权利要求20的组合物。
22.治疗与胶原蛋白的不适当或不规则产生有关的疾病的方法，其包括施用有效量的权利要求21的组合物。
23.权利要求22的方法，其中纤维变性疾病选自肝硬变和关节炎。
24.权利要求23的方法，其中纤维变性疾病选自肝硬变和关节炎。
全文摘要
本发明涉及能够抑制C－蛋白酶活性以调整、调节和/或抑制不正常胶原蛋白产生的新用途。
文档编号A61P13/00GK1198096SQ96197271
公开日1998年11月4日 申请日期1996年8月8日 优先权日1995年8月8日
发明者M·布伦内尔, W·B·何 申请人:菲布洛根有限公司