专利名称：神经细胞分化促进剂的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及新的神经细胞分化促进剂，它包含生理学活性物质NK175203或其可药用的盐作为活性组分并且预计例如，它可用作治疗痴呆的药物，神经细胞保护性药物或治疗外周神经病的药物。
生理学活性物质NK175203是在国际专利公开号WO94/05679中所描述的，公开的已知化合物。
据报道，该化合物具有作为骨髓细胞增殖促进剂的活性。
体外证明，神经生长因子(下文称NGF)延长轴突，调节神经递质的产生并对年老动物神经细胞的再生发挥作用〔Age，8，19(1985)〕。另一方面，已知，当将NGF加到已从鼠嗜铬细胞瘤上克隆化的新建立的细胞至PC12中时，PC12细胞停止增殖和分化成具有轴突的神经元细胞。由于这些作用，近来，NGF作为一种治疗痴呆的药物已引起人们的注意。通过使用这些细胞，已弄清楚，与NGF类似，成纤维细胞生长因子和白细胞介素6引起轴突的延长。近来，据报道，由微生物衍生的低分子量物质、Staurosporine也引起轴突的延长〔Shinkei Kagaku，26，200-220(1987)〕。
上述Stuurosporine在内科治疗中是非常有价值的，因为它与NGF不同，是低分子量物质。然而，令人遗憾的是，由于具有较高的毒性，它的实际应用受到限制。
在这种情况下，在内科治疗中，提供在低浓度下具有较低毒性并表现延长轴突作用的低分子量物质是非常重要的。
作为广泛研究的结果，本发明者发现，生理学活性物质NK175203或其可药用盐具有促进神经细胞分化的活性。
在此发现基础上已完成了本发明。
因此，本发明涉及神经细胞分化促进剂，它包含作为活性组分的生理活性物质NK175203或其可药用盐以及可药用赋形剂或载体。本发明进一步涉及治疗痴呆的药物，神经细胞保护性药物和治疗外周神经病的药物，它包含作为活性组分的生理活性物质NK175203或其可药用盐以及可药用赋形剂或载体。
简要说明绘1显示NK175203对改善由给予抗癌剂增加的尾神经潜伏期的作用。
图2显示NK175203对改善由给予何霉素(ADM)抑制的感觉神经功能(热敏感性)的作用。
图2a显示实验开始后第72天的试验结果，而图2b显示实验开始后第85天的试验结果。
实现本发明的最佳方法按照国际专利公开号WO94/05679中所描述的方法可制备和获得本发明中所使用的生理活性物质NK175203。
尤其，可通过培养属于链霉菌属的微生物并在介质中制备上述生理活性物质NK175203(例如，FERM BP-4372)，在培养基中聚积生理活性物质NK175203，然后收集它们来获得。
本发明中所使用的化合物，生理活性物质NK175203可以是其药用盐的形式。该盐的实例包括与碱金属如纳和钾的盐和与碱土金属如钙的盐。
包含生理活性物质NK175203作为活性组分的本发明神经细胞分化促进剂促进神经细胞的分化，并因此有效地用于修复和治疗神经细胞的各种损伤。因此预计，例如，该促进剂可用作治疗痴呆的药物，治疗由抗癌剂，糖尿病等所引起的外周神经病的药物或神经细胞保护性药物。
当本发明化合物用作神经细胞分化促进剂时，单独或作为与赋形剂或载体的混合物，以注射剂，口服制剂，栓剂等的形式给予。就赋形剂和载体而言，选择可药用的赋形剂和载体，并且根据给药途径和给药方法来确定其种类和组成。例如，就液体载体而言，可使用水，醇，动物和植物油如豆油，花生油，芝麻油和矿物油，以及合成的油。例如，就固体载体而言，可使用糖如麦芽糖和蔗糖，氨基酸，纤维素衍生物如羟丙基纤维素，和有机酸盐如硬脂酸镁。
在注射剂中，通常需要使用生理盐水，各种缓冲剂，糖溶液如葡萄糖，肌醇和甘露糖醇溶液或醇如乙二醇，丙二醇和聚乙二醇。也可能在给药前，将本发明化合物与赋形剂如糖，例如肌醇，甘露糖醇，葡萄糖，甘露糖，麦芽糖或蔗糖，或者氨基酸，例如苯丙氨酸一起溶解在适宜的注射用溶剂(例如，静脉给药的液体如灭菌注射用水，生理盐水，葡萄糖溶液，电解质溶液或氨基酸溶液)中。
通常，在制剂中，该化合物的含量为重量的0.1-100％，优选为重量的1-98％，尽管在每个制剂中，该含量广泛变化。例如，在注射剂中，活性组分的含量通常为重量的0.1-30％，优选为重量的1-10％。当口服给药时，将化合物与上述固体或液体载体一起配制成片剂，胶囊剂、粉剂，颗粒剂，溶液，干糖浆等。通常胶囊剂，片剂，颗粒剂和粉剂含有的活性组分为重量的5-100％，优选为重量的25-98％。
根据病人的年令，体重和状况，治疗的目的等，可以确定剂量。通常当非肠道给药时，治疗剂量为1-100mg/kg·天，并且当口服给药时，治疗剂量为5-500mg/kg·天。
本发明化合物的特点为具有较低的毒性并且当连续给药时，只显示较小的蓄积毒性。当以500mg/kg的剂量，一次腹膜内给小鼠该药时，本发明化合物未显示毒性症状。
为了进一步更详细地说明本发明，给出下列实施例。然而，应该知道，本发明并非只限制于此，只要不远离本发明的精神和范围都包括在本发明范围内。实施例1由生理活性物质NK175203引起的PC12细胞的轴突延长试验按照Green等，Ann.Rev.Neurosi.，3，353(1980)的方法，根据形态的改变来判断结果。
尤其，在该方法中，将PC12细胞接种到含10％胎儿牛血清和10％马血清的Dulbecco改良的Eagle培养基中，以便提供1×104/ml的细胞密度，并且在37℃和5％CO2存在下，在胶原蛋覆盖的96孔多孔板中孵育过夜。接着，加入样品，并在一天后通过显微镜观察形态的改变。
结果，引起PC12细胞轴突延长的生理活性物质NK175203的有效浓度在20-2.0μg/ml范围内广泛变化。
在上述方法中，由于生理活性物质在50μg/ml下的细胞毒性，一天后，消灭PC12细胞。该浓度比促进神经细胞分化的物质的浓度高2.5-25倍，这意味着生理活性物质NK175203具有相对低的毒性。实施例2生理活性物质NK175203对抗癌剂引起的外周神经病模型作用的试验测定生理活性物质NK175203对改善由抗癌剂引起的外周神经病模型的作用。用五周大小的雄性CDF1鼠作为试验动物。由顺铂(下文简称CDDP)或阿霉素(下文简称ADM)诱导神经病。在实验开始的0，第7，14，21，28和32天，以5mg/kg的剂量经腹膜内给予CDDP，同时，在实验开始的0，第4，和14天，以10mg/kg的剂量，经尾静脉给予ADM。用NK175203作为一种药物来检测改善作用。每周给予NK175203三次(周一，三和五)共六周。实验开始的那天(即第0天)为周一。在使用前，将药物各自溶解在生理盐水中，表1概括了每组的剂量和给药途径。在实验开始的第0-42天，测定尾神经潜伏期。在第72和85天，进行摆尾试验(tail-flick test)(热敏感性检测)。
表1CDDP-或ADM-诱导的外周神经病模型组
(i)尾神经潜伏期的测定用下列方法测定尾神经潜伏期。将小鼠轻度乙醚化并且面朝上固定在软木板上。作为记录电极，将同心电极插入尾部距离根部2cm处的外侧。进一步，将两个针状电极插入相距4cm的部位作为刺激电极。通过刺激装置(SEN-7203型，由Nippon Konden Corporation生产)和绝缘体(SS-320丁型，由Nippon Kohden Corporation生产)在5-10V电压下，通过刺激电极输入刺激，持续时间0.05秒。将通过记录电极和放大器(EI-601G型，由Nippon Kohden Corporation)得到的20-50次刺激的作用电压加起来。然后计算平均值并用X-Y记录仪(WX-2400型，由Graphtec Corp生产)记录。将由此得到的作用电位的潜伏时间被刺激部位和记录部位之间的距离除，得到传导速度。
在开始实验的第42天，测定尾神经潜伏期。
图1显示结果。与未受损组比较，单独给予CDDP组显示出明显减少传导速度，这表明已诱发神经病。另一方面，合并使用CDDP和NK175203的组显示出，与单独给予CDDP的组相比，每个试验对象都明显增加传导速度。当所记录的由于给予CDDP而相起的传导速度的减小为100％时，合并使用CDDP与10和40mg/kg NK175203的组显示，改善作用以剂量依赖方式分别为45和60％。(ii)摆尾试验(热敏感性测定)用下列方法进行摆尾试验。用6V的Natsume Thermal Counter(由Natsume生产)热灯照射。通过用灯照射30秒，将测定木板预热后，将灯关闭。然后，用相距大约10cm高的热灯照射鼠尾，并测定小鼠感受到热并摆尾时所需要的时间。
在开始实验的第72天，用ADM诱导组进行第一次摆尾试验。用热灯照射距离尾根部4cm部位。图2a显示结果。与单独给予ADM组比较，联合给予ADM与40mg/kg NK175203的组显示出明显缩短的摆尾时间，由此表明改善了对热刺激的反应。
接着，在第85天，进行第二次试验。用热灯照射距离尾根部3cm的部位。图2b显示结果。与未受损组比较，给予ADM的组显示出明显延迟的摆尾时间，由此表明通过给予ADM，抑制了对热刺激的反应。进一步，联合给予ADM和NK175203的组显示出与未受损组类似的摆尾时间，由此表明，明显改善了由给予ADM所抑制的感觉神经功能。
根据这些结果证明，NK175203具有改善由鼠抗癌剂诱导的外周神经病模型的作用。实施例3(实施例1的制剂)制备颗粒将50份重的生理活性物质NK175203的钠盐，600份重的乳糖，300份重的结晶纤维素和20份重的羟丙基纤维素充分混合。然后，通过使用滚动压片机(Roller CompactorTM)将得到的混合物压片，经16目和19目筛研磨并包裹，得到颗粒。实施例4(实施例2的制剂)制备片剂在V形混合器中，将100份重的生理活性物质NK175203的钠盐，90份重的结晶乳糖，107份重的结晶纤维素和3份重的硬脂酸镁混合并将得到的混合物成型为片剂，每片重300mg，实施例5(实施例3的制剂)制备注射剂向50份重的生理活性物质NK175203的钠盐和120份重的甘露糖醇中加入蒸馏水，得到总体积为2000份。溶解后，通过GS型毫孔滤器，将溶液无菌过滤。将滤液引入10ml小瓶中并冷冻干燥，得到每小瓶含50mg本发明化合物盐的冻干注射粉针。
如上所述，生理活性物质NK175203或其可药用盐具有促进PC12细胞轴突延长的活性和相对低的毒性。因此用作细胞分化促进剂并预计，例如可用作治疗痴呆的药物，治疗由抗癌剂，糖尿病等引起的外周神经病的药物或神经细胞保护性药物。
权利要求
1.神经细胞分化促进剂，它包含作为活性组分的生理活性物质NK175203或其可药用盐以及可药用赋形剂或载体。
2.治疗痴呆的药物，它包含作为活性组分的权利要求1物质或其盐以及赋形剂或载体。
3.神经细胞保护性药物，它包含作为性组分的权利要求1物质或其盐以及赋形剂或载体。
4.治疗外周神经病的药物，它包含作为活性组分的权利要求1的物质以及赋形剂或载体。
全文摘要
本发明提供神经细胞分化促进剂，它包含作为活性组分的生理活性物质NK175 203或其可药用盐。预计本发明神经细胞分化促进剂可用作治疗痴呆的药物，神经细胞保护性药物或治疗由抗癌剂所引起的外周神经病的药物。
文档编号A61K35/74GK1149256SQ95193237
公开日1997年5月7日 申请日期1995年5月15日 优先权日1994年5月23日
发明者驹形大介, 森野富夫 申请人:日本化药株式会社