专利名称：治疗对干扰素治疗无反应者的丙型肝炎的方法
技术领域：
本发明总的来说涉及病人的丙型肝炎病毒感染的药物治疗。
丙型肝炎病毒(HCV)，即大多数输血后获得性肝炎的假定因子，现已由新的血清学检测加以肯定(Kuo，G.等人.，Science，244362-4(1989))。尽管对献血汇集质量加以改进，并且对献血试验提供现代工具，但目前接受输血的人中估计急性感染的发生率仍在5-10%(Alter，H.J.，inZuckerman，A.J.，ed.，ViralHepatitisandLiuerDisease，AllenK，Liss，NewYork，1988，pp.537-42)，而至少有一半急性HCV感染的病人发展成慢性肝炎(相当于非甲非乙型肝炎(NANB)病人的90%)，并且这一类病人中至少有20%发展成肝硬化。因此，每年在美国约3百万接受输血的人中，有15万将感染急性丙型肝炎，其中至少7.5万人发展成慢性丙型肝炎，而他们中发展成肝硬化的将超过1.5万人。在输血的肝炎患者中，高达约90%的人是HCV抗体呈阳性(Dauis等人，NewEnglandJournalofMedicine3211501-6(1989))。散发性NANB肝炎(非特异性危险因子)患者也很可能有抗-HCV抗体(Kuo等人，1989，见上述文献)。感染丙型肝炎的大多数病人将只有亚临床症状或轻度发病，而有约50%将发展成慢性病状态，慢性病状态的特征是起伏不定的血清转氨酶不正常性以及肝活组织检查出现炎症损伤。经估计，这类病人有高达20%的人转变成肝硬化(Koretz，R.L.等人，Gastroenterology，881251-4(1985))。
就停止或减缓HCV引起疾病的发展来看，近几年已对各种药品进行过评估。无环乌苷或皮质甾类(它们对自体免疫性慢性活动性肝炎有效)都是无效的(Pappas，S.C.J.Med.Virol.，151-9(1985);Stokes，P.等人，Gastroenterology，921783alostract(1987))。到目前为止，α-干扰素(IPA)看来是最有前途的候选药物，但这不一定是最后结论。参见Hoofnagle，J.H.，etal.，inViralHepatitis1981InternationalSympoaium，Philadelphia，FranklinInstitutePress，1982，pp.573-83;Hoofnagle，J.H.，etal.，NewEnglandJournalofMedicine，3151575-8(1986);Thomson，J.，Lancet，1539-41(1987);Kiyosawa，K.，etal.，inZuckerman，A.，ed.，ViralHepatitisandLiverDisease，AllenK.Liss，NewYork，1983，pp.895-7。Hoofnagle，J.H.，etal.，SemLiverDis.，9259-263(1985)。干扰素是针对病毒感染以及其它抗原刺激所产生的宿主蛋白质。根据其原始细胞以及其抗原性将其进行分类。α干扰素由成淋巴细胞样细胞产生，β干扰素由成纤维细胞产生，而γ干扰素由T细胞产生。各类中的亚型则以抗原/结构特征为基础。有关各类的重组形式已开发利用，且可从市场购得。使用IFA对10个具有输血后NANB肝炎典型特征的病人进行了试验性研究，于1986年由Hoofnagle等人报道过(Hoofnagle，J.H.等人，NewEnglandJournalofMedicine，3151575-8(1986))。在这项试验中，开始治疗的一个月中，10个患者中有8人其血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平得到改善。IFA治疗包括患者中七人日剂量5百万单位(MU)，而其余3人日剂量1MU。在所有受试者中、剂量均逐渐减至每日1MU，并且最终改为隔一天或每三天给药。对三个病人进行了治疗后肝活体检查、其样品显示肝的发炎程度及主质肝细胞坏死的减少都得到明显改善。付作用一般于5MU/天剂量时出现，而于1MU/天则消失。
现已对有完整病案记载的慢性HCV感染患者进行过重组人干扰素α效果的预期、随机、双盲，安慰对照诸实验(DiBisceglie，A.M.等人，NewEnglandJournalofMedicine，3211506-10(1989))。该实验包括41个患者，其中37人较晚发现有抗HCV抗体。21个病人每星期经皮下注射干扰素α(2MU)三次，持续6个月。20个病人只给与安慰剂。以干扰素治疗的病人其平均血清ALT及肝的组织学特征均显著改善，而给以安慰剂的病人无改善。用干扰素治疗的10个病人(48%)有完全反应(其定义为治疗期间平均血清ACT降至正常范围);其它3人平均ALT降低超过50%。然而治疗结束以后，血清ALT通常回复到治疗前水平;干扰素治疗中止以后6-12个月，仅仅只有2个病人(10%)仍然保持正常值。作者得出结论，α干扰素治疗对降低慢性丙型肝炎的病症活性是有效的，但该有效反应通常是暂时的，付作用则很明显。
在另一较广泛研究中，将166个慢性丙型肝炎(NANB肝炎)患者，每星期三次，以重组人α-IFA3MU或1MU的剂量治疗，持续24星期或者不治疗。对3MU干扰素治疗有反应的26个病人中的22个(85%)其血清ALT水平变得完全正常，而对1MU治疗有反应的16个病人中的9个(56%)其血清ALT水平变得完全正常。接受3MU干扰素的患者，因为小叶和门静脉周的炎症消退，从而从组织学上得到改善。然而治疗完成以后6个月中，以3MU干扰素治疗的病人有51%，以1MU治疗的病人有44%出现旧病复发现象(Davis，G.L.等人，NewEnglandJournalofMedicine3211501-06(1989))。这些研究者得出结论，24星期疗程的干扰素治疗，对控制许多丙型肝炎病人的病症发作是有效的，但停止治疗后旧病复发都是普遍的。
对慢性NANB肝炎病人进行的多中心随机对照实验最近已有所报道(Marcellin，P.等人，Hepatology，(3393-97(1991))。病人被随机指定为不治疗或给予1-3MUα干扰素治疗每星期三次、持续24星期。45个患者(75%)是抗HCV抗体呈阳性。在24星期治疗期间，在两个治疗组中平均血清ALT水平均降低，但只有3MU组，其降低有统计学意义。但在第24星期，正常ALT水平的病人比较在3MU组(39%)和1MU组(45%)是相似的，两组都比对照组(0%)高得多。重复肝活体检查样品表明，就组织学变化的严重程度而言，高剂量组有明显降低，而不是低剂量组或对照组。然而治疗以后在两个治疗组平均ALT水平升高。正常ALT水平的病人比例，在第48星期时，3MU组是28%，1MU组是20%。研究者得出结论，每周给药三次，持续24周时，在诱导血清ALT水平的改善和肝组织学检查方面，3MU剂量α干扰素优于1MU剂量。但是当停止给与干扰素后，得有约一半的反应者会旧病复发。对α干扰素的反应与干扰素来源或病人血清中是否存在抗-HCV抗体效价无关。
因此很清楚，α干扰素对HCV感染病程具有有效影响，但这种效果往往仅是暂时的。从而为了永远根除C型肝炎病毒对患者的影响，需要则立新的治疗方式。
另一类来自胸腺的多肽免疫修饰因子，胸腺素表明能启动淋巴细胞的成熟作用，增进T细胞功能以及促使免疫缺陷得到重建(Low，T.L.K.等人“Thymosins;Structure，Function和TherapeuticApplication”，Thymus，627-42(1984))。
由Goldstein等人(Proc.Natl Acad.Sci.(USA)，691800-1803(1972))最初介绍的胸腺素等第五级分(TF-5)系牛胸腺的部分提纯提取物，含至少40种肽成分、其中20种提纯至均一或接近均一状态，它含约0.6%胸腺素α-1(THNα1)(Low，1984见上面)。
THNα1，最早从TF-5分离出来，已被定序并进行化学合成(Wetzel，R.等人Biochemistry，196096-6104(1980))。该序列在鼠，牛和人中都是同源的。THNα1是28个氨基酸的多肽，分子量为3100，在调节免疫系统方面，其活性相似于TF-5(Low，T.L.K.等人，J.Biol.Chem.，254981-6(1979))。THNα1具有有效的免疫学活性，包括刺激α和γ干扰素生成，提高巨噬细胞迁移抑制因子产生，诱导T细胞标志物表达，包括IL-α受体，以及提高T细胞辅助细胞活性(Schulof，R.S.等人，in The Lymphocyte，Allen J.Liss Inc.，New York，1981，pp.191-215;Low，T.L.K.等人，in“Thymosins;Structure，Function and Therapeutic Applications”，Thymus，627-43(1984);Koutab，N.M.等人，Immunopharm.，1697-105(1988))。以小鼠进行研究证明THNα1和干扰素对免疫抑制小鼠中的天然杀伤细胞活性有协同作用(Favill，C.等人，Cancer Immunol.Immunother.，20189-92(1985))。TF-5和THNα1可影响免疫调节T细胞功能，促使人淋巴细胞产生干扰素α，干扰素γ以及白细胞介素2，并增加白细胞介素2受体的表达Mershall，G.K.，et al.，J Immunol.，126741-4(1981);Mutchnick，M.G.，et al.，Clin.Immunol.Immunopathol.，23626-33(1982);Sztein，M.B.，etal.，Proc.Nat1Acad.Sci.(USA)，836107-6111(1986);Serrate，S.A.，etal.，J.Immunol.，19392338-43(1987);Baxevanis，C.N.，etal.，Immunopharm.，13133-41(1987);and，Svedersky，L.P.，Eur.J.Immunol.，12244-7(1982)。
以TF-5和THNα1对免疫缺陷或癌症患者进行主要治疗或辅助治疗的临床试验表明这些药剂能增加免疫反应性和提高特异性淋巴细胞功能。TF-5和纯化THNα1的临床试验已进行了很多年，早期对免疫缺陷和癌症病人的试验是令人鼓舞的，虽然并不肯定。参见Goldstein，A.L.et al.，Transp.Proc.，91141(1977);Barrett，D.J.，et al.，J.Pediatr.，9761(1980);and Cohen，M.H.，et al.，J.Amer.Med.Assoc.，2411813-5(1979)。在对患非小细胞肺癌病人的随机实验中已介绍过THNα1的使用，病人被以9000μg/m2以剂量用THNα1皮下注射治疗，每周二次，或者每天一次持续二周，然后完成放射治疗疗程后每周注射2次。仅有的付作用是有三个病人在注射点有轻度灼伤。这是只是由于药品的缘故也可能由于载体制剂引起的。两组THNα1治疗组中无复发存活率及总存活率都比安慰剂组要高，放射性抑制免疫功能的某种程度的恢复也很明显。没有同时增加T细胞数量(Schulof，R.S.等人J.Biol.Respones Modifiers 4147-58(1985))。
最近在老年人中进行过双盲、随机的胸腺素试验，以试图提高对流感疫苗的反应(Gravenstein，S.等人JAGS，371-8(1989))在开始给与流感疫苗时，给病人皮下注射合成THNα1每周两次。接种后第六星期，随机接受该药物的那些病人抗流感抗体水平高于对照病人。这种差别在高龄者(77-99)岁)中较为突出。在被施药者中未观察到临床或生物化学毒性。
最初的报道称胸腺素可以有效地抗HCV以外的肝炎病毒引起的感染。在病毒肝炎的动物模式中，即受土拔鼠肝炎病毒感染的土拔鼠，THNα1抑制病毒DNA复制，但对于临床各项指标没有改善(Korba，B.E.等人，Hepatology 12Abs 880(1990))。在对由B型肝炎病毒(HBV)引起的慢性活性B型肝炎病人进行的小规模临床试验中，用THNα1(5个病人)治疗一年的病人或用TF-5(2个病人)治疗一年的病人表现出血清ALT明显降低;该7个病人中的6个也表现出血清HBV DNA水平降低，而6个血清B型肝炎表面抗原(HB5Ag)最初呈阳性的病人中有5个随后除去了这些抗原(Mutchnick，M.C.等人，Hepatology，10Abs.575(1989))。在这些文摘中没有指出胸腺素对任何其它肝炎病毒都有效。
因此，在本技术领域中便遗留下一个必需解决的主要问题、即找到治疗哺乳动物HCV感染的新方式，该新方式公开如下。
已设计出治疗HCV感染的新方式，包括给哺乳动物施以能提高免疫系统效能剂量的一种或多种胸腺素，以胸腺素单独给药或与干扰素结合治疗。
因此本说明书的一个目的是公开治疗哺乳动物急性或慢性HCV感染的组合物及方法，该治疗是以生物学响应修饰因子的胸腺素家族的一种或多种成员来进行的。
本发明书的另一目的是公开治疗哺乳动物慢性和急性HCV感染的组合物和方法，包括用一种或多种胸腺素与一种或多种干扰素结合治疗。
参考本说明书及所附权利要求书以上目的以及其它目的将变得很明显。
已设计出治疗哺乳动物HCV感染的新方式，包括以能大大提高免疫应答的剂量给这些哺乳动物单独或者与抗病毒剂量的一种或多种干扰素结合施用一种或多种胸腺素。
所谓“胸腺素”，意指任何或所有能提高免疫系统效能的多肽，于胸腺中天然出现的或用化学或重组手段生产的均可，或者指上述任何多肽衍生的片段。所谓“哺乳动物”意指任何哺乳纲的受试者，包括人和动物患者，需为其治疗丙型肝炎感染。“哺乳动物”和“受试者”可互换使用。
适于治疗HCV感染的胸腺素制剂包括TF-S-THNα1及其片段，例如C末端4-28和15-28，及N末端1-8，1-14和1-20片段，这些可以从Alpha-1 Biomedicals Inc.，Foster City，California获得。
受试者，例如人类患者以适当的间隔时间持续一段适当的时期可通过皮下注射或输注接受胸腺素。以有利于或者能促使丙型肝炎病毒体内失活的量给丙型肝炎病毒感染的哺乳动物施用胸腺素。胸腺素，例如TF-5的能提高免疫系统效能量的药物学剂量单位可以是于药物学上可接受载体中的约900-1200mg/m2体表面积。胸腺素，如THNα1或其能提高免疫系统效能的片段的可提高免疫系统效能量的药物学剂量单位可以为于药物学可接受载体中的900-1200μg/m2体表面积。将含甘露糖醇和磷酸缓冲液的胸腺素或片段的冻干制剂，于配药前溶于稀释液中。当贮存于冰箱中时，稀释液中的胸腺素应当至少6个内保持稳定。在1ml剂量小瓶中配制胸腺溶液甚为方便。某些患者每月约需8小瓶。
对于一般人类患者，按每周两次(例如星期一和星期四)皮下注射约1500至约1700μg THNα1或其片断的给药方式是很方便的。治疗的剂量和时间长短有灵活性，可由受试者对胸腺素的临床反应来决定。
可通过临床检查及实验发现来探索病程及其对药物治疗的反应。因为已知血清丙氨酸转氨酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST)升高出现于失控的丙型肝炎中，并且因为一般将对治疗完全反应定义为以上血清酶达到正常水平，特别是ALT(Davis，G.L.等人NewEnglandJournalofMedicine，3211501-6(1989))，因此进行这些项目鉴别试验(例如在一种连续多项分析仪上)，便可很容易观察到用胸腺素治疗的进展情况。
另一评价具抗HCV抗体的受试者(不是所有患丙型肝炎的受试者具可检测出的抗HCV抗体-Weiner，A.J.等人，Lancet，3351-3(1990)的方法是周期性地测试受试者血清的这些抗体的效价。抗HCV抗体可通过时下能购买到C100-3试剂(Kuo，G.等人，Science，244362-4(1989))，通过Elisa检测(OrthoDiagnosticSystems，Raritan，N.J.)或通过重组检测(RIB-A-1和RIBA-2，ChironCorporation，Emeryille，CA)来检验，任何适当的检测均可采用。
为了观察在对药物治疗反应中，受试者体内HCV复制的过程，可在血清样品中，例如通过使用两套来自HCV基因组的NS3和NS4非结构基因区的引物的套装聚合酶链反应检测法来测量HCVRNA(Parci，P.等人，NewEnglandJournalofMedicine，32598-104(1991);Ulrich，p.p.等人，J.Clin.Invest.，861609-14(1990))。
观察治疗过程的其它适当实验室试验列于下述实施例1中。
也可与干扰素治疗相结合使用胸腺素治疗，由此将胸腺素增强免疫系统效能的作用与干扰素的抗病毒作用相结合。以目前使用的干扰素剂量改善反应速度是有利的，特别是从剂量限制这些蛋白在较高剂量的付作用的观点来看更是如此。这一概念的另一方面是，干扰素加胸腺素采用比单独使用干扰素所要求的更低剂量时，能达到相当高的效力。
在该结合治疗方式中，可将一种或多种干扰素(例如，重组干扰素α-2b，即Intron-A，Schering-Plough，Kenilworth，New Jersey)经皮下注射对受试者(如人类患者)给药，其剂量范围是约1MU和3MU与一种或多种胸腺素(优选包括THNα1)同时给药或胸腺素随后给药，胸腺素的剂量为约900-1200μg/m2体表面积。
虽然上例指所谓重组干扰素α-2b，但其它重组的或天然存在的抗HCV有效的干扰素，例如α-，β-和γ-干扰素均可有利地使用于本发明中。
该结合剂量方式是有灵活性的，取决于患者的临床症状。如果受试者对于采用优选剂量水平是难以控制的话，那么剂量可在不希望的付作用所允许的限度内增加。一般是每周注射5次，且连接注射直至达到受试者可接受的反应程度为止。
测定该结合治疗的效力试验可与上述单独使用胸腺素治疗所作试验相同。此外，肝活检样品的组织学检查可以作为评价的第二个主要指标。Knodell，R.G.等人，Hepatology1431-5(1981)，其HistologicalActiuityIndex(肝门炎病，片状或桥状坏死(Piecemealorbridgingnecrosis)小叶损伤及纤维变性)提供了对病症活性的评级方法。
提供下述实施例仅为说明本发明，并不如本说明书及权利要求书那样以任何方式构成对本发明范围的限制。
实施例1可注射制剂的配制每1ml药物学剂量单位由下表所示成分配制表1活性成分每ml用量胸腺素α-10.0016g非活性成分甘露糖醇,U.S.P.0.050g磷酸氢钠七水合物U.S.P.0.002g磷酸二氢钠单水合物U.S.P.0.0005g磷酸氢钠2mg/ml溶液磷酸二氢钠0.5mg/ml溶液注射用水U.S.P.
实施例2用胸腺素和干扰素治疗人类患者丙型肝炎感染将患慢性活性丙型肝炎(CAHC)的成年病人随机分配于四个研究组(每组由约40个患者组成)之一组中。选择标准为(1)病人为成年人(至少18岁);(2)血清ALT至少治疗前升高已六个月，并且至少一项值高于实验室做实验的正常人上限的二倍;(3)在二次必要实验和一次确信实验中患者HCV抗体实验均为阳性;(4)在治疗的三个月中，肝活检表现出一直有慢性活性肝炎病变。
要排除的标准包括(1)目前使用其它抗病毒或免疫抑制药物;(2)血友病，怀孕或HIV感染或其它可能阻碍完成治疗过程的严重疾病;(3)必须没有其它形式的肝病，包括甲型或乙型肝炎，α-1抗胰蛋白酶缺陷，Wilson氏病，以及血色素沉着症;(4)必须不存在自体免疫标志物(ANA，ASMA，AMA，抗-LKMI)，假如存在，其效价应当＜1∶40;(5)白细胞缺陷(＜3，000);(6)绝对中性白细胞数很低(＜1，000);(7)血小板低(＜75，000);(8)Hb低(＜11g/dL);(9)胆红素高(＞4mg/dL);(10)血清白蛋白低(3g/dL)。
四个随机分配组的第一组接受干扰素、优选干扰素α-2b，星期一，三，五经皮下注射(SQ)3百万单位(MU)剂量，而星期二和六接受安慰剂。第二组所用干扰素剂量和日程均同上，但在星期二和六加上胸腺素(优选THNα1)，其剂量为900μg/m2SQ。第三组只用胸腺素剂量和日程同上。第四组最初接受安慰剂，但随后可随机分别采用三个治疗组的方案，干扰素和胸腺素可以再组合。
病人可在住院后约一星期开始治疗，在此期间监测副作用。
门诊病人的随访最初二星期的时候每间隔一星期一次，然后二个月中间隔二星期一次，剩下的治疗期间则每日一次。每次随访进行下述试验CBC，血小板数，差值以及ESR，ALT，AST、GGT，碱性磷酸酶，胆红素、总胆红素/白蛋白及HCV抗体。在按月间隔随访时检测γ-球蛋白、TSH、ANA及ASMA。
用临床参数实验室参数，根据不断发展的情况来监测药品毒性。
在完成最初六个月治疗的一个月中，根据上述Knodell等人的方法，对病人进行肝活体病理学检查。该体系以无征状CAH提供患者的组织学活性的数字评级体系。
在此时，将对照组病人随机分入三组，接受三种治疗方案之一种，假设在随访肝活检中他们仍有CAH，并假定该研究的一个方面在6个月时进行分析不显示较高明显阳性或阴性结果。
随后对各治疗组病人根据ALT水平的升高来评估疾病复发率。给在最初6个月治疗期间表现出有反应，但此后旧病复发的病人提供其它治疗。
假如可能可进行其它血清和组织试验评估抗干扰素和胸腺素的抗体、由聚合酶链反应扩增肝活检样品中丙型肝炎基因组的片断以及定量测量丙型肝炎抗血清效价。
实施例3此治疗方案照实施例2，不同的是干扰素用2MU，而胸腺素为1050μg/m2。
实施例4此治疗方案照实施例3，不同的是用1MU干扰素，而胸腺素用1200μg/m2。
实施例5数据分析有二个评价对治疗反应的基本标准治疗期结束ALT水平达到正常(将降低为最初ALT的50%定义为有部分反应)、而组织学改善则按Knodell等人的上述HistologicalActivityIndex(HAI)所介绍的来测定。
该分析提供的初级评级范围为每个样品从1到22。成对数据使用Wilcoxon成对样品试验来分析。此外，可将样品分类为轻微，适中或逆转CAH，并且使用Chi-平方统计分析法来估价改善情况。
以生存表分析来评估就ALT水平正常化来评估已消除病症状态和旧病复发状态。其它连续可变指标使用Student试验来分析。若适当的话，有分岐的数据经由CHi平方或Fisher精确试验来处理。
采用乘方分析法来决定为显示出预料的差别所需的每试验组的病人数。乘方分析用于ANOVA使用0.80次方同时α＝0.05，结合前面平均ALT水平以及其差异的研究，估计为显示平均ALT之差为15IU/L时，每试验组的病人数需21-52个。因为有3-5%的病人预计将退出试验，并且考虑6个月后对照组的病人要加入治疗组，因此每组病人达到40个。
实施例6胸腺素α-1治疗丙型肝炎的效力，由两个先前对α干扰素无反应的丙型肝炎病人显示出来。该两病人以胸腺素α-1由皮下注射1mg治疗，每周二次，其间并给以α-IFN2百万单位每周三次。以胸腺素α-1治疗6个月后，两病人血清丙氨酸转氨酶(ALT)降低50%，由此证明了胸腺素α-1的效力。6个其它的丙型肝炎患者按上法治疗6个月以后表现出“完全反应”，其血清ALT水平降至正常水平。另外3个丙型肝炎患者按上法治疗六个月后ALT水平降低50%，另外六个丙型肝炎患者按上法治疗6个月之后无足够反应达到血清ALT降低50%这一临界值。
权利要求
1.治疗对仅以干扰素治疗无反应的哺乳动物丙型肝炎所使用的组合物，包含能增强免疫系统效能剂量的至少一种胸腺素或能增强免疫系统效能的胸腺素片断，其剂量对单以干扰素治疗无反应的哺乳动物的丙型肝炎感染治疗有效。
2.权利要求1的组合物，其中胸腺素选自由胸腺素级分5，胸腺素α-1及其片断所组成的这类胸腺素。
3.权利要求2的组合物，其中所说的哺乳动物是人，所说的胸腺素级分5剂量为约900-约1200mg/m2哺乳动物体表面积。
4.权利要求3的组合物，其中所说的哺乳动物是人，所说的胸腺素α-1或其片断剂量为约900-约1200μg/m2哺乳动物体表面积。
5.权利要求1的组合物，其中所说的哺乳动物是人，所说胸腺素是胸腺素α-1，所说剂量是约1500-1700μg所说胸腺素α-1。
全文摘要
通过施以增强免疫系统效能剂量的至少一种胸腺素或增强免疫系统效能的胸腺素片断，给受丙型肝炎病毒感染的哺乳动物，该哺乳动物的丙型肝炎感染对单以干扰素治疗无反应。
文档编号A61K38/00GK1092322SQ9311934
公开日1994年9月21日 申请日期1993年9月27日 优先权日1993年3月5日
发明者P·B·克雷蒂恩, M·穆奇尼克 申请人:阿尔法-1生物医药品有限公司, 米尔顿·穆奇尼克