专利名称：胃安素口服液的利记博彩app
技术领域：
本发明涉及的是一种用以治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡的药物-胃安素口服液；本发明也是CN92105643.5的后续专利。
在CN92105643.5中，我们已提出了大约在七十年代初期，Goldstein等人从小牛胸腺中分离出一组能调节免疫系统的多肽，生化分析表明，上述胸腺肽是具有活性的单一肽类，其分子量均小于15000道尔顿。七十年中期，Hooper等人在小牛胸腺肽的制备中第一次采用超滤技术截留分子量小于15000道尔顿的胸腺肽组份；在以后的几年中，许多学者对小牛胸腺肽的生物活性大量的工作，并从胸腺肽组织中分离的具有免疫活性成份的分子量如如77年Goldstein提出的分子量为3108道尔顿的制品α；79年Ahmed提出的分子量为2500道尔顿的制品α7；以及81年Low提出的分子量为4982道尔顿的制品α。
92年，我们提出了从乳猪胸腺中提取出一组中分子量水溶性胸腺蛋白，并对其进行促细胞增殖活性的研究。
对在先专利所述的中分子量水溶性胸腺蛋白的各种物化参数的进一步研究所得出的本发明所述的胃安素口服液为分子量5万以下的水溶性胸腺蛋白，其主要活性为3～5万的中分子量水溶性胸腺蛋白，本发明所述的胃安素口服液胃溃疡、十二指肠球部溃疡的治疗有非常明显的效果。
本发明的主要目的是提供一种用于治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡的药物-胃安素口服液，它是由主要活性为3～5万的中分子量水溶性胸腺蛋白，加上具有部分活性的3万以下的小分子量水溶性胸腺蛋白组成。
本发明所述的胃安素的制备方法简述如下选用40-60天健康乳猪(或其它幼龄脯乳动物)的胸腺，拔除胸腺上的脂肪组织，将胸腺低温高速捣碎，将捣碎后的匀浆在80-90℃之间保持10-30分钟，然后，离心分离去沉淀，留上清液，进行透析，截留分子量为5万以下的水溶性胸腺蛋白，再经过除菌、分装，冻干等常规处理，就得到了胃安素口服液。
图1是不同浓度的胃安素口服液对内皮细胞(EC)的增殖状况。
图2是不同浓度的胃安素口服液对小鼠3T3成纤维细胞(FC)的增殖状况。
图3是胃安素口服液、成猪胸腺蛋白(TP)、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)对内皮细胞的增殖效应。
图4是胃安素口服液、成猪胸腺蛋白(TP)、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)对成纤维细胞的增殖效应。
图3、图4中1是胃安素口服液、2是成猪胸腺蛋白(TF)、3是胸腺肽注射液(TF)、4是肝细胞生长素注射液(HGF)；方框中空白是试样，阴影为对照。
图5是本发明所述的胃安素口服液单独或和其它药物组合以及本发明所述的胃安素口服液不同剂量互相或和盐水对照下愈合率的比较；图6、7是胃安素口服液在不同条件下的高效液相色谱图；图8是胃安素的紫外扫描图谱，由中山医科大学分析测试中心测试；将上述方法制备的胃安素口服液进行各项试验，具体内容如下。
样品包括胃安素口服液；胸腺肽注射液(TF)，由广东省生物制品研究所提供；促肝细胞生长素注射液，由广东省阳江制药厂提供。内皮细胞(EC)的制备与在先专利相同。
传代培养时，用D-Hanks'液轻洗细胞单层2-3遍。用0.06%胰蛋白酶在室温下消化1-2分钟，弃消化液，加入内皮细胞培养液，用吸管吹打20-30次，制成细胞悬液。以12-3比率传代。用于实验的为2-3代细胞，经V因子相关抗原(VR.Ag)的抗体检测，确认为血管内皮细胞后方作为生物效应测定用细胞。
小鼠3T3成纤维细胞(FC)由第一军医大学珠江医院提供(培养基为1640培养基加20%小牛血清)。
本发明的胃安素口服液生物效应测定和CN92105643.5相同，即将各检测样品[胃安素口服液、成年猪胸腺蛋白、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)]，按不同浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml)分别加入3孔细胞中平行检测。每份样品设立3孔空白对照(与盐水做对照)。
不同浓度的胃安素口服液对内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖状况见图1.图2.
图1、图2提示，本发明的胃安素口服液对内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)均有明显的促增殖生物效应，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)，而且增殖效应与乳猪胸腺蛋白(TP)的最佳浓度有关(0.2mg-0.4mg/ml)。
各种不同检测样品对内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖效应的影响比较，结果见图3，图4。
图3、4表明本发明的胃安素口服液有明显促进内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖的作用；而成年猪胸腺蛋白、胸腺肽注射液(TF)、促肝细胞生长素注射液(HGF)三种被检样品均无明显促内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖活性，与对照组比较无明显差异(P＞0.05)；另外，促肝细胞生长素注射液(HGF)对内皮细胞(EC)虽然有低水平的刺激现象，但与胃安素口服液相比仍有显著性差异，与成年猪胸腺蛋白、胸腺肽注射液(TF)结果比较无明显意义。说明其中确存在着一组能提高内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖的活性组份。
正如图6、7以及相应的表1和表2中所给出的数据，本发明述的胃安素口服液经高效液相色谱分析共有6个组份峰、6条电泳带，这是在波长261nm的条件下测定的六个主要吸收峰；其具体测定值见表1、2，图谱见图6、7。
表1本发明的胃安素口服液高效液相色谱(图6)9310:30:23[261nmThreshold950]261nmNo.RTMatchArea[AU*min]LefttimeRighttimetime[%]PeakPurePeakPurePeakPure12.7133.560.3327710.1116831.972.634.792.7925.1475.210.0387920.0291754.794.986.075.2736.4583.290.0092980.0077446.106.236.956.6647.5958.500.0586970.0343376.957.469.147.75610.1399.940.0010070.0010079.789.8110.5310.53711.4310.280.0156310.00160610.5311.4111.6511.46811.8631.330.0375610.01176711.6511.8112.2911.89912.4734.720.0103920.00360812.2912.4512.8212.531012.9884.480.0365780.03090212.7712.9313.1713.111114.0593.250.2034580.18972913.2513.7014.6914.211216.2995.860.6255590.59963214.7115.4616.5516.501318.1870.120.0018030.00126417.7818.0518.3718.291418.9544.650.0050320.00224718.3718.8519.1719.171519.3860.270.0030610.00184519.1719.2219.8619.54
表2BASELINE(C)1987DynamioSolution.DivisionofMilliporeBASELINE810PEAKINTEGRATIONREPOSAMPLE:KV-61Type:UNKN#1inMethod:DEMOMETHOD1Instrument:Instrument1RATE:2.0points/secFilename:KV-61Duration:28.000minutesIndex:DiskInjectionVolume:5.0DETECTOR:detector1PK#ID#PeakStartPeakEndRetentionTypePeakAreaPeakHei(min)(min)(min)(microvolt-sec)(microvolt)(ComponentName175.7926.8086.475BP240111.276765.12801.371.96P7D126.8087.2336.950PP189439.135714.89400.801.65387.2338.9427.567PP441108.907094.86092.522.05P8D148.94210.9339.900PP4105228.2132086.6523.4338.21510.93313.15811.308PP2583546.623773.19614.756.88613.15813.89213.650PP632159.1615103.7003.6104.37713.89216.25815.108PP2399322.426578.78713.697.69816.25819.04217.358PP3252509.740426.25918.5611.70919.04220.32519.575PP331481.696614.68581.891.911020.32522.91721.117PP2943270.068682.56016.8019.871122.91723.74223.425PP67105.1561714.01230.380.511223.74224.50024.167PP114374.273274.32190.650.951324.50025.45824.875PP194417.635611.89721.111.621425.45826.70025.758PP64365.5171819.96840.370.531526.70027.73327.417PB11581.512349.283260.070.10TOTAL17520021345643.20胃安素口服液紫外扫描在波长297.7nm中有一主要吸收峰，此结果是委托中山医科大学分析测试中心测试得出的；CN92105643中所述的中分子蛋白在波长280nm有一主要吸收峰，而本发明所述的胃安素口服液是一组中小分子的混和蛋白；具体的图谱见图8。
本发明所述的胃安素口服液提取方法简便，性质稳定，成本低；从提取胃安素口服液的材料、工艺和物质分子量结果分析推测，本发明的胃安素口服液与目前国内外报道的小分子(分子量＜1.8万)多肽类物质，内皮细胞生长因子(EGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，胸腺肽注射液(TF)，促肝细胞生长素注射液(HGF)差异较大，而本发明图3，图4结果也表明，胃安素口服液与成年猪胸腺蛋白(TP)、胸腺肽注射液(TF)、促肝细胞生长素注射液(HGF)的作用效应不同。
胃安素表现出良好的抗感染和明显促进肉芽组织生长效果。研究初步表明本发明胃安素口服液在实验室促内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖效应与临床外用治疗促进伤口愈合的结果相吻合。
研究结果还表明，胃安素口服液的剂量与疗效也存在一定的关系(可参见图5)，经实验和临床试验得出胃安素口服液的剂量以10mg(蛋白)/kg/日为宜。大剂量的胃安素口服液(50mg/kg/日)治疗反而对溃疡面的愈和造成不良的影响，在细胞培养实验中发现，高浓度的胃安素口服液对于内皮细胞或成纤细胞的增值起着抑制作用。
我们认为胃安素口服液主要是通过营养局部受损粘膜并促进内表皮细胞、成纤细胞增生而达到治疗目的，因此，它适应范围广，为解决目前抑酸药所造成的胃酸过低的不良反应等问题起到积极作用。
为了进一步反应本发明所述的胃安素口服液与现有的治疗胃溃疡的药物的效果比较。
表3胃安素口服液治疗10天大鼠胃溃疡面积的变化及其与盐水对照组的比较组别剂量(mg/kg/n)动物数n溃疡面积(mm2)X±SDNS0.5ml105.23±3.59TP1 10 10 1.56±1.36a-TP2 15 10 .40±1.47b-与对照组比较,aP<0.01,bP<0.05。
表4不同剂量的胃安素口服液、西咪替叮及盐水喂药20天，大鼠胃溃疡完全愈和率比较组别剂量(mg/kg/n)动物数n愈合例数(%)NS0.5ml203(15.00)TP1 10 20 15(75.00)aTP2 15 18 9(50.00)bTP350201(5.00)Cimet. 500 20 11(55.00)c
Cimet.+TP1 500/10 19 18(94.47)d与对照组比较,aP<0.01,>bP<0.05,cP<0.05,dP<0.005。
进行该实验时所用的胃安素口服液是本发明所述的胃安素口服液，所述的西咪替叮是广州市桥制药厂出口；胃溃疡的模型是参照Okabe等设计和董秀云的改良法，即，用50%的乙酸涂胃壁以造成溃疡模型。
喂药处理术后第一天即开始经口灌入胃内，每天二次(上午9时，下午3时，)共给药10天及20天，大鼠分为6组，第一组为对照组(30只)，给生理盐水；第二组(30只)为TP1组(10mg/kg/日)；第三组(30只)为TP2组(15mg/kg/日)；第四组(20只)为TP3组(50mg/kg/日)；第五组(20只)为Cimetidine组(500mg/kg/日)；第六组(20只)为二联组(即Cimetidine500mg/kg/日+TP10mg/kg/日)。观察药物对溃疡对愈合的影响如下给药材10天后将第一、第二、第三组的各10只动物处死以1%的福尔马林固定胃壁沿大剪开，测量溃疡面积并进行比较；给药20天后同样处理并于病变部位做组织学切片观察大鼠的胃溃疡愈和情况统计结果如表3所示。
对胃安素口服液的进一部的分析表明，本发明所述的胃安素口服液还含有一定量的微量元素和十七种氨基酸，所述的微量元素和氨基酸的命称和含量，由表5和表6列出表5胃安素口服液微量元素分析检测仪器HITACHI180-70AAS检验结果(单位mg/L)胃安素胸腺肽Zn14.10.24Cu0.230.04K398188Na1262376Mn0.150.02Fe0.140.14Mg21.611.1Ca27.114.6Co0.040.03
Se<0.01<0.01表6氨基酸检验样品处理游离氨基酸用5%磺基水杨酸法处理分析方法高压液相色谱检验结果含量单位(mg/g)天冬氨酸(Asp.)1.82苏氨酸(Thr.)12.43丝氨酸(Ser.)7.22谷氨酸(Glu.)16.23脯氨酸(Pro.)4.12甘氨酸(Gly.)2.32丙氨酸(Ala.)5.69胱氨酸(Cys.)/颉氨酸(Vsl.)6.36蛋氨酸(Mer.)2.75异亮氨酸(Ileu.)4.58亮氨酸(Leu.)13.97酪氨酸(Tyr.)7.23苯丙氨酸(Phe.)7.59赖氨酸(Lys.)14.85组氨酸(His.)4.19精氨酸(Arg.)10.34总含量121.71表5、6的检测结果可能会因原料来源及其它条件的变化而有所误差，误差率约为±10%。
上述内容都是对动物、或在实验室的试验或检验结果，具体用于临床的效果究竟如何？自1992年10月至1993年5月，我们进行胃安素治疗消化性溃疡的临床验证工作，共观察消化性溃疡41例，全部病例均经纤维胃镜检查确诊为胃、十二指肠球部溃疡(活动期)，疗程结束后再经纤维胃镜检查评价治疗效果。
在总数为41例的病人中，男36例，女5例；年龄最小为18岁，最大为70岁，其中20岁以下3例，20-30岁17例，31-40岁5例，41-50岁12例，51岁以上为4例，平均年龄为36.4岁，病程最短1个月，最长30年，平均为3.78年；41例中有胃溃疡4例，十二指肠球部溃疡35例，复合溃疡2例；41例患者共57个溃疡，其中仅1个溃疡者32例，2个溃疡者4例，3个溃疡者4例，5个溃疡者1例(其中球内有2个溃疡，胃内有3个溃疡)。全部病例无幽门梗阻，癌变并发症，其中10例合并有小量出血。
治疗方法-凡附合观察病例条件者可住院或门诊治疗。41例均服胃安素每次6ml，每日2次，15天为一个疗程，服胃安素期间不得使用其他治疗消化性溃疡的药物，全部病例均观察一个疗程的治疗效果。
疗效判断标准-治疗结果分为痊愈、显效、有效、无效4个组，经胃安素治疗15天后溃疡完全愈合或转为红色瘢痕期为治愈；溃疡面积较治疗前缩小50%以上者为显效；溃疡面有缩小，但缩小不到50%者为有效；溃疡面无缩小或增大或出现新的溃疡者为无效。
临床症状-胃安素口服液能有效改善消化性溃疡的临床症状，特别是能较快缓解上腹痛症状，最快者服药1-2天腹痛消失，一周内腹痛消失率为97.36%(34例/38例)，改善反酸，嗳气症状次之，反酸消失率64.21%(18例/28例)，嗳气消失率为65.48%(17例/26例)；10例伴有黑便者亦多在一周内大例转黄，出血停止。
溃疡愈合率-痊愈为65.85%(27例/41例)，显效24.39%(10例/41例)，有效2例占4.89%，无效2例4.89%。总有效率为95.12%。
对胃酸度的影响-本组部分病例观察了服用胃安素后对胃液游离酸，PH值的影响，结果表明胃安素对胃内酸环境影响不大。
付作用-全部观察病例均对比观察了胃安素治疗前后患者肝功能、肾功能、血常规、尿常规、粪常规的改变，故本药在治疗范围内无毒付作用，安全可靠。
本文观察了单用胃安素治疗消化性溃疡41例，其中胃溃疡4例，十二指肠球部溃疡35例，复合性溃疡2例，多数为一个溃疡面，少数为多发性溃疡，最多达5个溃疡。服胃安素治疗15天，治愈率为65.48%，总有效率为95.12%，疗效满意，其疗效类似于H2受体阻滞剂类药物。但本药具有疗程短，缓解症状快，无任何毒付作用的特点，深受患者欢迎。因此胃安素不失为一种新开辟的较好的治疗溃疡病新药物，值得大力推广使用。
异常毒性试验经口急性毒性试验的动物最大耐受量为20000mg/kg(即LD50＞20000mg)。
兔皮肤、眼结膜刺激试验本品对试验动物的皮肤、眼结腊无刺激作用。
权利要求
1.一种胃安素口服液，它是从乳猪(或其它哺乳动物)胸腺中提取出的一组分子量5万以下的水溶性胸腺混合蛋白，它是由主要活性为3～5万的中分子量水溶性胸腺蛋白，配合具有部分活性的3万以下的小分子量水溶性胸腺蛋白组成；另外，胃安素口服液还含有多种微量元素和17种氨基酸，本发明所述的胃安素口服液经高效液相色谱在波长261nm的条件下分析共有6个主要吸收(组份)峰、6条电泳带；胃安素口服液在波长297.7nm的紫外扫描中有一主要吸收峰；其使用剂量为5～15mg(蛋白)/kg/日。
2.权利要求1所述的一种胃安素口服液，它包括如下的微量元素(单位mg/L)Zn14.1Cu0.23K398Na126Mn0.15Fe0.14Mg21.6Ca27.1Co0.04Se＜0.01
3.权利要求1所述的一种胃安素口服液，它还包括如下氨基酸(含量单位mg/g)天冬氨酸(Asp.)1.82苏氨酸(Thr.)12.43丝氨酸(Ser.)7.22谷氨酸(Glu.)16.23脯氨酸(Pro.)4.12甘氨酸(Gly.)2.32丙氨酸(Ala.)5.69胱氨酸(Cys.)/颉氨酸(Vsl.)6.36蛋氨酸(Mer.)2.75异亮氨酸(Ileu.)4.58亮氨酸(Leu.)13.97酪氨酸(Tyr.)7.23苯丙氨酸(Phe.)7.59赖氨酸(Lys.)14.85组氨酸(His.)4.19精氨酸(Arg.)10.34总含量121.71
4.权利要求2或3所述的一种胃安素口服液，其氨基酸和微量元素的含量的误差率约为±10%。
5.权利要求1所述的一种胃安素口服液，其优选使用剂量是10mg(蛋白)/kg/日。
全文摘要
本发明涉及的是一种用以治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡的药物——胃安素口服液，它是从乳猪胸腺中提取出一组分子量5万以下的水溶性胸腺混合蛋白，它是由主要活性为3～5万的中分子量水溶性胸腺蛋白，加上具有部分活性的3万以下的小分子量水溶性胸腺蛋白组成，另外还含有多种微量元素和17种氨基酸，本发明所述的胃安素口服液对胃溃疡、十二指肠球部溃汤的治疗有非常明显的效果。
文档编号A61K35/26GK1101834SQ9311933
公开日1995年4月26日 申请日期1993年10月22日 优先权日1993年10月22日
发明者陈光明, 谢汝锦, 杨富强, 王东晓, 张宜俊, 黄英, 邵岩 申请人:中国人民解放军空军广州医院