桑黄作为治疗肿瘤药物的应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了桑黄作为治疗肿瘤药物的应用，所制备的药物对肝癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、白血病、淋巴癌、人骨肉瘤、前列腺癌、胃肠间质瘤等肿瘤具有较好的疗效，不仅为桑黄在制备抗肿瘤药物中的应用及其临床推广提供了理论依据，而且对桑黄资源的综合利用和产业化发展具有重要意义，具有重要的经济效益和社会效益。
【专利说明】桑黄作为治疗肿瘤药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及桑黄作为治疗肿瘤药物的应用，属药品【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是一类常见病和多发病，是机体组织细胞在内外各种致瘤因素长期作用下， 发生基因突变失去对其生长和分化的正常调控，引起克隆性异常增生和分化所形成的新生 物或赘生物。肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤，恶性肿瘤又细分为来源于上皮组织的癌、来源 于间叶组织的肉瘤和癌肉瘤三类。通常人们所说的"癌症"是泛指所有的恶性肿瘤。
[0003] 恶性肿瘤是威胁人类健康最主要的恶性疾病之一，是目前全球人口的第一死因， 最新数据统计，2007年，全球有约790万人死于各类癌症，占死亡总数的13%，有超过1200 万个肿瘤病例被确诊，其中72%以上肿瘤患者和致死病例都发生在不发达国家，且呈不断 上升的趋势，预计2015年，全球肿瘤致死人数将增至900万人，2030年将超过1200万人； 目前，我国每年癌症发病人数约280万，死亡人数超过40万人，位列我国各类疾病致死原因 之首，并呈不断上升趋势。随着社会生活节奏加快，竞争压力增大，以及人类的生活方式和 环境的改变，肿瘤发病率和死亡人数正逐年增长，已成为现代社会的常见病和高发病，不仅 严重影响患者的生活质量，而且给家庭和社会带来沉重的经济和精神负担，也是困扰全球 的重大社会问题，癌症的治疗和预防始终是全球范围类最为迫切的问题之一。目前，化学药 物治疗是抗击肿瘤的主要手段，虽然有较好的疗效，但是常引起骨髓抑制、免疫功能低下等 副反应，使患者难以坚持治疗，并且化疗药物在治疗过程中出现的耐药性已成为目前临床 治疗中的难题之一。近年来，全球抗肿瘤药物市场呈快速增长态势，据美国FDA统计数据， 全球抗癌药物市场销售总额由2004年的240亿美元，激增至2007年的396亿美元。虽然 全球每年都不断有新型抗肿瘤药物问世，但至今人类仍然没有一种有效的手段战胜癌症， 同时不断发现新的癌症种类，以及肿瘤抗/耐药性的产生和增强，使得对发现新型有效抗 癌药物的需要显得尤为迫切。纵观全球1981至2002年期间所开发的抗癌药物，约60%直 接或间接来自于天然产物，充分表明自然界是人类获取抗肿瘤药物的最重要的源泉。植物 中广泛存在着具有抗肿瘤作用的活性成分，喜树碱、长春新碱和紫杉醇等的先后被发现，标 志着天然抗癌药物研宄所取得的重大进展，我国中药资源丰富，从传统的药用资源中寻找 抗肿瘤药物是完全可行的。
[0004] 桑黄，基原为多孔菌科针层孔菌的子实体，拉丁学名：phellinus igniarius(L. ex Fr. )Quel。又名：火木层孔菌，子实体无柄，菌盖扁半球形或马蹄形。现代研宄证实桑黄含 有酚类、黄酮、多糖等有效成分，具有免疫调节、抗肿瘤等多方面的药理活性，因此，桑黄作 为抗肿瘤药物是可行的。
[0005] 发明人所在的研宄团队于去年申报了中国发明专利一桑黄提取物在制备治疗肝 癌、子宫颈癌、乳腺癌药物中的应用（发明专利号201410023184. 3,已经进入实质审查阶 段），公开了桑黄子实体的乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位抗肝癌、子宫颈癌、乳腺癌药物 中的应用。研宄组继续对桑黄抗肿瘤作用进一步研宄，体外对肝癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、 宫颈癌、乳腺癌、白血病、淋巴癌、人骨肉瘤、前列腺癌、胃肠间质瘤等43种肿瘤细胞株进 行高通量筛选，发现桑黄对肺癌细胞系H460、H526,结肠癌细胞系C0L0205,宫颈癌细胞系 Hela，前列腺癌细胞系DU145,人骨肉瘤细胞U20S，肝癌细胞系H印G2,淋巴癌细胞系TMD8、 NAMLWA、Z-138,乳腺癌细胞系MCF-7,膀胱癌EJ，急性髓性白血病细胞系NOMO-I、SKM-I、 NB4、HEL、Raji，胃肠间质瘤细胞GIST-T1，抑制效果较为明显，在药物测试浓度为150yg/ ml时，抑制率均大于80% (见表1);研宄组从上述肿瘤中随机抽取三种，即肺癌、白血病、 淋巴癌，在整体动物模型上进行验证，研宄发现桑黄对肺癌、白血病、淋巴癌的老鼠有明显 的治疗作用。说明不仅桑黄提取物有抗癌作用，桑黄也具有较好的抗癌作用；桑黄不仅对肝 癌、子宫颈癌、乳腺癌有疗效，而且对其它肿瘤也有较好的治疗作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种桑黄作为治疗肿瘤药物的应用。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] 桑黄作为治疗肿瘤药物的应用。
[0009] 所述药物中以桑黄为唯一活性成分。
[0010] 所述药物是在现有技术的基础上，采用中药制剂常规方法制备成任何可药用的制 剂。
[0011] 所述肿瘤是肝癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、白血病、淋巴癌、人骨肉 瘤、前列腺癌、胃肠间质瘤。
[0012] 本发明的有益效果：
[0013] 本发明证明了桑黄具有较好的抗肿瘤作用，尤其对肝癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫 颈癌、乳腺癌、白血病、淋巴癌、人骨肉瘤、前列腺癌、胃肠间质瘤等肿瘤具有较好的疗效，不 仅为桑黄在制备抗肿瘤药物中的应用及其临床推广提供了理论依据，而且对桑黄资源的综 合利用和产业化发展具有重要意义，具有重要的经济效益和社会效益。
[0014] 为了更好地理解本发明，下面以桑黄治疗肿瘤的主要药效学试验进一步说明。试 验效果旨在进一步说明本发明的作用，而非本发明的限制。
[0015] -、桑黄体外抗肿瘤活性评价
[0016] ( -）实验材料
[0017] 1、细胞株
[0018] 肝癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、人骨肉瘤、前列腺癌、胃肠间质瘤等 45种细胞株；安徽医科大学药学院和中国科学院合肥物质研宄院提供。
[0019] 2、药物与试剂
[0020] DMEM培养粉：购自美国Gibco公司；
[0021] 胎牛血清：购自杭州四季青生物材料研宄所。置于_20°C冰箱保存，4°C冰箱过夜 融化，在56°C水浴30min灭活后使用；
[0022] 氟尿嘧啶：购自齐鲁制药有限公司；
[0023] 青霉素：购自哈药集团制药总厂；
[0024] 链霉素：购自深圳华南南方制药有限公司；
[0025] 二甲基亚讽（DMSO):购自Sigma公司；
[0026] 噻挫蓝（MTT):购自Sigma公司；
[0027] 50mm2细胞培养瓶，96孔板：购自康宁公司
[0028] 3、主要溶液配制
[0029] DMEM细胞培养液：DMEM粉末一包，丙酮酸钠0. llg，谷氨酰胺0. 58g，碳酸氢钠 2. 0g，加入三蒸水定容至1000ml，0. 22 μ m过滤除菌，分装后置于-20°C保存备用。临用前 37°C水浴融化，后加入105IU/L青霉素，100mg/L链霉素，10%小牛血清（10%胎牛血清用于 培养乳腺癌细胞）。
[0030] 磷酸盐缓冲液（PBS) :8.0g NaCl，0.2g KCl，2.9g Na2HP0412H20,0.2gKH2P0 4;溶解 于适量三蒸水，调节PH值至7. 2,定容至1L，过滤分装，高压灭菌后，-20°C保存备用。
[0031 ] MTT溶液：MTT粉剂溶于PH为7. 4的PBS溶液中，浓度5mg/ml，避光、超声助溶，过 滤除菌，现配现用，4°C保存。
[0032] 4、仪器与设备
[0033] 4°C，_20°C低温冰箱：日本三洋公司；
[0034] MDF-U40865型-80°C超低温冰箱：日本三洋公司；
[0035] SB25-12DTD型超声波清洗机：宁波新芝公司；
[0036] DHG-9243BS- III型电热恒温鼓风干燥箱：上海新苗；
[0037] DK-8D三孔电热恒温水槽：合肥科隆公司；
[0038] 3-16K型冷冻离心机：Sigma公司；
[0039] TGL高速冷冻离心机：长沙湘智离心仪器有限公司；
[0040] 2306-Z型CO2培养箱：美国Shellab公司；
[0041] 立式压力蒸汽灭菌器：
[0042] SW-CJ-IF型净化工作台：苏州净化公司产品；
[0043] Rios83olPE超纯水机：美国密理博公司产品；
[0044] MULISKAN MK3 酶标仪：Thermo forma 仪器有限公司；
[0045] 移液器：法国PIPETMA公司；
[0046] XD-202倒置显微镜：合肥科隆；
[0047] (二）实验方法
[0048] 2. 1细胞培养
[0049] 本实验所用的肝癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、人骨肉瘤、前列腺癌、 胃肠间质瘤等45种细胞均为贴壁生长的细胞株，用含10%的胎牛血清DMEM培养液，并加 入青霉素10IU/mL和链霉素100 μ g/mL的培养体系培养。培养环境为37°C，5%的CO2培养 箱，每2天更换培养液一次，细胞长满培养瓶时消化传代，（细胞种类不同，传代比例不同）， 取处于对数生长期的细胞进行实验。
[0050] 2. 2MTT法检测细胞增殖情况
[0051] 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶 甲臜（Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO)能溶解细胞中 的甲臜，用酶标仪在492nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的 量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值A，来判断活细胞数量，A值越大，细胞活性越强。
[0052] 细胞以5X IO5个/ml的浓度接种于96孔培养板中，每孔接种量为100 μ L。待细 胞贴壁后，分为空白对照组，溶剂对照组（I % DMSO)，阳性对照5-Fu组，每组设5个复孔组， 每孔总体积为200 μ L，分别于48h、72h后，弃去孔内液体，用PBS清洗2便，之后加入180 μ L 无血清培养液，并加入MTT (浓度为5mg/mL) 20 μ L，继续在培养箱培养4h后，弃上清，每孔加 入150 yL的DMS0,震荡摇匀，使甲瓒颗粒充分溶解。于酶联免疫检测仪上，以波长492nm， 试剂对照组调零，测吸光度（A492)值，重复3次，取其平均值。按照下列公式计算细胞生长 抑制率：
[0053] 细胞生长抑制率=〔（对照组平均A492值-空白组平均A 492值）-实验组平均A 492 值-空白组平均A492值）/对照组平均A 492值-空白组平均A 492值〕X 100 % 〇
[0054] (三）实验结果
[0055] 经过对肝癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、人骨肉瘤、前列腺癌、胃肠间 质瘤等45种细胞进行的高通量筛选结果显示：
[0056] 1、桑黄对仓鼠正常细胞CHL、CHO均无明显抑制作用，显示：桑黄对正常细胞无毒 副作用；
[0057] 2、桑黄对肺癌细胞系H460、H526,结肠癌细胞系C0L0205,宫颈癌细胞系Hela，前 列腺癌细胞系DU145,人骨肉瘤细胞U20S，肝癌细胞系H印G2,淋巴癌细胞系TMD8、NAMLWA、 Z-138,乳腺癌细胞系MCF-7,膀胱癌EJ，急性髓性白血病细胞系N0M0-1、SKM-I、NB4、HEL、 Raji，胃肠间质瘤细胞GIST-Tl，抑制效果较为明显，在药物测试浓度为150 μ g/ml时，抑制 率均大于80% (见表1)，并显示出较好的选择性。
[0058] 3、桑黄对其余肿瘤细胞株均无明显抑制作。
[0059] 表1桑黄对43个肿瘤细胞的抑制作用
[0060]
【权利要求】
1. 桑黄作为治疗肿瘤药物的应用。
2. 根据权利要求1所述的桑黄作为治疗肿瘤药物的应用，其特征在于：所述药物中以 桑黄为唯一活性成分。
3. 根据权利要求1或2所述的桑黄作为治疗肿瘤药物的应用，其特征在于：所述药物 是在现有技术的基础上，采用中药制剂常规方法制备成任何可药用的制剂。
4. 根据权利要求1所述的桑黄作为治疗肿瘤药物的应用，其特征在于：所述肿瘤是肝 癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、白血病、淋巴癌、人骨肉瘤、前列腺癌、胃肠间质 瘤。
【文档编号】A61K36/07GK104490942SQ201410788390
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月17日 优先权日:2014年12月17日
【发明者】李宁, 王开金, 余春富, 尹维龙, 陈刚 申请人:安徽省康美来大别山生物科技有限公司, 安徽医科大学