一种注射用复方荭草冻干粉生物活性测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种注射用复方荭草冻干粉生物活性测定方法，采用小鼠建立心肌缺氧模型，分别给予盐酸川芎嗪和不同剂量的注射用复方荭草冻干粉针，测定小鼠的存活时间，并对注射用复方荭草冻干粉针生物活性进行测定,本发明中方法学验证试验表明本方法精密度、重复性、适用性均较好,本实验结果表明该法操作简便、指标明确、灵敏度高、重现性好，可用于表征注射用复方荭草冻干粉针生物活性信息，以达到综合控制产品质量的目的,建议采用该法测定时结果为阳性即可判断为合格，若初试结果为阴性允许复试后合并计算。
【专利说明】一种注射用复方荭草冻干粉生物活性测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种注射用复方荭草冻干粉生物活性测定方法，属于生物医药检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002]IE草为寥科植物红寥P O I y g ο n U m oriental eL.的全草,是贵州省黔南、黔东南苗族布依族自治州及遵义地区民间常用的治疗胸痹心痛的中药材，注射用复方荭草冻干粉针是在贵州民族用药的基础上采用现代制备工艺研制而成的新中药，具有化瘀通络、活血止痛功能，临床用于冠心病心绞痛心血瘀阻证，然现有技术中还没有测定复方荭草冻干粉生物活性科学方法。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是:提供一种注射用复方荭草冻干粉生物活性测定方法，该方法测定法准确、可靠，可通过小鼠耐缺氧测定法有效控制注射用复方荭草冻干粉针的质量，以克服现有技术的不足。
[0004]本发明的技术方案
一种注射用复方荭草冻干粉生物活性测定方法，采用小鼠建立心肌缺氧模型，分别给予盐酸川芎嗪和不同剂量的注射用复方荭草冻干粉针，测定小鼠的存活时间，并对注射用复方荭草冻干粉针生物活性进行测定。
[0005]前述的一种开喉剑喷雾剂中岩白菜素的含量测定方法中，所述小鼠心肌缺氧模型的具体过程为将小鼠随机分为正常对照组、盐酸异丙肾上腺素组、盐酸川芎嗪组及注射用复方荭草冻干粉针高、中、低剂量组，每组I O只，除对照组外，其余各组小鼠均皮下注射盐酸异丙肾上腺素建立心肌缺氧模型。
[0006]由于采用上述技术方案，与现有技术相比，本发明前期研究建立了反相高效液相色谱法测定注射用复方荭草冻干粉针异荭草素、荭草素含量的质量标准，但与其有效性间的关系尚难确定，因此，用生物活性测定方法来评价本品的有效性可以作为理化测定方法的补充，因此选择了与本品功能主治相关的缺氧耐受能力对其生物活性测定方法行了研究，实验结果显示，与盐酸异丙肾上腺素组比较，注射用复方荭草冻干粉针中、高剂量对小鼠耐缺氧存活时间均有显著的延长作用。为了增加方法的可靠性，保证其重复性，选用剂量13.5 g / k g (相当于人临床日用量的3 O倍)作为限值剂量，方法学验证试验表明本方法精密度、重复性、适用性均较好，本实验结果表明该法操作简便、指标明确、灵敏度高、重现性好，可用于表征注射用复方荭草冻干粉针生物活性信息，以达到综合控制产品质量的目的，建议采用该法测定时结果为阳性即可判断为合格，若初试结果为阴性允许复试后合并计算。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]附图1为不同剂量的盐酸异丙肾上腺素对小鼠的影响统计图；
附图2为不同性别对盐酸异丙肾上腺素引起的心肌缺氧小鼠存活时间的影响统计图； 附图3为不同剂量注射用复方荭草冻干粉针对小鼠耐缺氧能力的影响(η = I O)统计图；
附图4为不同批次注射用复方荭草冻干粉小鼠耐缺氧生物活性的测定(η = I O)的统计图。
【具体实施方式】
[0008]下面结合附图对本发明作进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。
[0009]本发明的实施例:
I材料和方法
1.1 试药与试剂
注射用盐酸川芎嗪(规格4 O mg，批号O 9 I I O 3 A 3，哈尔滨三联药业有限公司)，盐酸异丙肾上腺素注射液(规格2 m I: lmg，批号O 9 110 2，上海和丰制药有限公司)，钠石灰(规格5 O O g，批号2 0 0 8 1 0 0 6，上海钠辉干燥试剂厂)，注射用复方荭草冻干粉针(规格I O Omg，批号2 OlOOlO 5，由贵阳医学院贵州省药物制剂重点实验室制备)。
[0010]1.2 实验动物
健康昆明种小鼠，体重I 8?2 2 g，雌雄各半，由贵阳医学院实验动物中心提供。
[0011]1.3 方法及分组
1.3.1小鼠心肌缺氧模型的建立
昆明种小鼠5 O只，雌雄各半，体重I 8?2 2 g，随机分为对照组及盐酸异丙肾上腺素5、I O、I 5、2 O m g / k g组，每组I O只，除对照组皮下注射等体积的生理盐水夕卜，其余各组分别皮下注射盐酸异丙肾上腺素，于注射后3 Omi n，测定小鼠存活时间，并计算延长率。
[0012]1.3.2 不同性别心肌缺氧小鼠存活时间的影响
昆明种小鼠4 O只，雌雄各半，体重I 8?2 2 g。随机分成4组，第1、2组为对照组(雌雄各一组)，给予等量的生理盐水，第3、4组为盐酸异丙肾上腺素组(雌雄各一组)，分别皮下注射盐酸异丙肾上腺素I 5 m g / k g，于注射后3 O m i η，测定小鼠存活时间并计算延长率。
[0013]1.3.3 注射用复方荭草冻干粉针对心肌缺氧小鼠存活时间的影响昆明种小鼠6 O只，雌雄各半，体重I 8?2 2 g，随即分为对照组、盐酸异丙肾上腺素组(I 5mg / k g)、盐酸川弯嗪组(4 O m g / k g )、注射用复方IE草冻干粉针高、中、低剂量组(13.5,6.8,3.4 g / k g)，每组I O只，各组小鼠每天均自尾静脉注射给药I次，连续3 d，于末次注射后2 Omi η，除对照组注射等体积的生理盐水外、其余各组小鼠均皮下注射I 5mg / k g盐酸异丙肾上腺素，于注射后I 5 m i η,分别测定6组小鼠的存活时间并计算延长率。
[0014]1.4 统计方法
结果用均数土标准差(X 土 s )表示，所有数据采用SPS S I 3.0版软件进行t检验，P < 0.Q 5有统计学意义。
[0015]2 结果
2.1 心肌缺氧小鼠模型的建立
附图1结果表明，皮下注射10、15、20mg/k g盐酸异丙肾上腺素均可显著降低小鼠的存活时间，而盐酸异丙肾上腺素剂量为I 5mg / k g时，降低缺氧小鼠的存活时间既显著又不太严重，故选择剂量盐酸异丙肾上腺素I 5mg / k g用于试验。
[0016]2.2 不同性别心肌缺氧小鼠存活时间的影响
附图2结果表明，同组不同性别小鼠存活时间没有统计学差异，雌雄小鼠对盐酸异丙肾上腺素引起的心肌缺氧敏感程度一致，故选择雌雄各半小鼠供试验。
[0017]2.3注射用复方荭草冻干粉针对心肌缺氧小鼠存活时间的影响
附图3结果表明，注射用复方荭草冻干粉针剂量为6.8g/kg、13.5g/kg连续3次给药可明显延长小鼠的存活时间，与盐酸异丙肾上腺素组比较有统计学差异(P<0.0 5)，为了增加可靠性和保证重复性，选用剂量I 3.5 g / k g (相当于人临床日用量的3 O倍)作为限值剂量，连续给药3 d进行试验(经预实验，各剂量组单次给药作用不显著)。
[0018]2.4 方法学验证
2.4.1重复性实验取同一批号注射用复方荭草冻干粉针，进行6次平行测定试验(I 3.5 g / k g), 6次试验均可显著延长小鼠的存活时间，延长率在I 6.43%?2 0.7 2%，与盐酸异丙肾上腺素组比较有统计学差异(P<0.0 5)，表明本方法重复性较好。
[0019]2.4.2 精密度实验
同实验室不同实验人员采用13.5 g / k g的注射用复方荭草冻干粉针尾静脉注射给药连续3 d后进行测定，使小鼠存活时间延长I 3.5 O %以上，与盐酸异丙肾上腺素组比较有统计学差异(P < 0.0 5 )，表明本方法精密度较好.2.4.3 方法适用性考察
对不同批号的I O批注射用复方荭草冻干粉针进行测定，与盐酸异丙肾上腺素组比较有统计学差异(P< 0.0 5)，使小鼠存活时间延长I 3.5 9 %以上，不同批号产品之间无统计学差异，表明本方法适用性较好，见附图4。
[0020]3 讨论
中药注射剂具有成分复杂多变、活性成分和未知成分多、功能和主治面广、作用部位和作用靶点多等特点，为了使中药的质量标准能更好地保证每批药品的临床实用安全有效，有必要在现有含量测定的基础上增加生物活性测定以综合评价药品质量，《中国药典》
2O I O版中已增加了中药生物活性测定的指导原则，“鼓励应用生物活性测定的方法探索中药质量控制”，以便“更好地保证每批药品的临床使用的安全有效”，生物活性测定法已成为中药质量控制发展的一个重要方向。
[0021]IE 草主要成分含异 IE 草素(i s O r i e n t i n)、|￡ 草素(o f i e n t i η)等黄酮类和儿茶素(c a t e c h i 11)、原儿茶酸(？ rotoeatechui cac
id)等酚酸类化合物，本课题组前期研究建立了反相高效液相色谱法测定注射用复方荭草冻干粉针异荭草素、荭草素含量的质量标准，但与其有效性间的关系尚难确定，因此，用生物活性测定方法来评价本品的有效性可以作为理化测定方法的补充，因此选择了与本品功能主治相关的缺氧耐受能力对其生物活性测定方法进行了研究，实验结果显示，与盐酸异丙肾上腺素组比较，注射用复方荭草冻干粉针中、高剂量对小鼠耐缺氧存活时间均有显著的延长作用，为了增加方法的可靠性，保证其重复性，选用剂量I 3 K 5 g / k g (相当于人临床日用量的3 O倍)作为限值剂量。方法学验证试验表明本方法精密度、重复性、适用性均较好，本实验结果表明该法操作简便、指标明确、灵敏度高、重现性好，可用于表征注射用复方荭草冻干粉针生物活性信息，以达到综合控制产品质量的目的。建议采用该法测定时结果为阳性即可判断为合格，若初试结果为阴性允许复试后合并计算。
【权利要求】
1.一种注射用复方荭草冻干粉生物活性测定方法，其特征在于:采用小鼠建立心肌缺氧模型，分别给予盐酸川芎嗪和不同剂量的注射用复方荭草冻干粉针，测定小鼠的存活时间，并对注射用复方荭草冻干粉针生物活性进行测定。
2.根据权利要求1所述的一种开喉剑喷雾剂中岩白菜素的含量测定方法，其特征在于:所述小鼠心肌缺氧模型的具体过程为将小鼠随机分为正常对照组、盐酸异丙肾上腺素组、盐酸川芎嗪组及注射用复方荭草冻干粉针高、中、低剂量组，每组I Q只，除对照组外，其余各组小鼠均皮下注射盐酸异丙肾上腺素建立心肌缺氧模型。
【文档编号】A61P9/10GK104435146SQ201410739935
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月8日 优先权日:2014年12月8日
【发明者】敖云霞 申请人:敖云霞