一种抗j亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗及其制备方法和应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及动物病毒学和免疫学领域，提供了一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗，该疫苗采用原核表达后筛选纯化的高活性的重组蛋白His-cENV联合弗氏佐剂制备而得，其中编码重组蛋白His-cENV的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示，利用该表位疫苗免疫7日龄种禽雏鸡可以产生1:128000的中和抗体，体外病毒中和实验、动物实验显示该表位疫苗可中和不同ALV-J分离毒株，有效保护鸡群抵抗ALV-J毒株感染，该表位疫苗基于env来源的多表位抗原基因序列，克服了ALV-J的病毒变异，开辟了ALV-J疫苗新时代，提供了抗ALV-J感染的新手段，为ALV-J的防控提供了技术支撑。
【专利说明】一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗及其制备方法 和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫学领域，具体提供了一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗 及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒（ALV-J)引起的一种肿瘤性传染病，临 床上主要以髓细胞性白血病多见，多以免疫抑制、生长抑制和多器官组织出现肿瘤等为其 主要特征。我国J亚群禽白血病的发生已相当普遍，临床病例从最初的商品肉鸡群发展到 商品蛋鸡、地方种鸡群及其他家禽,并伴随着致瘤性增强及肿瘤多样性的发生。研究显示， 我国的J亚群禽白血病毒呈现高感染率、高发病率，早期感染普遍、发病日龄明显提前，混 合感染多发/频发，宿主范围扩展、肿瘤谱扩大，病理变化复杂化等特点，给我国的养禽业 造成了巨大的损失。基于J亚群禽白血病毒囊膜蛋白的超变特性，加之自身的免疫逃避能 力及宿主的免疫选择压力，使得禽白血病病毒的抗原变动性极大，成为其传统灭活疫苗、弱 毒疫苗研制无法逾越的瓶颈。目前，临床上尚无相关药物及疫苗用于J亚群禽白血病的防 控。国外通过净化控制本病的发生，由于净化周期长、成本高，在我国目前还未能有效实施， 只能通过淘汰感染鸡只进行大群净化，无法控制ALV-J的感染，不断出现ALV-J大范围密集 感染的报道，我国的J亚群禽白血病防控形势严峻。国内外均有过对于J亚群禽白血病的 疫苗研发方法的报道，主要为传统的甲醛灭活疫苗、弱毒疫苗，基于SU的亚单位疫苗、核酸 疫苗，这些疫苗在一定程度上可以对机体提供保护，但都会造成毒力恢复以及散毒的可能， 免疫效果不稳定无法临床应用。基于以上现状，研制安全高效的表位疫苗对于J亚群禽白 血病病毒的防控具有重大现实意义。
[0003] 表位疫苗是近年发展起来成熟的新型疫苗，在人源病毒中研究深入。表位疫苗是 利用基因工程手段，体外表达或人工合成病原微生物的表位，继而开发出预防性或治疗性 疫苗。表位疫苗相对传统疫苗拥有较多优势,表位肽短小,免疫原性强,可以克服主要组织 相容性复合体（MHC)分子的遗传限制，本身安全、无毒、稳定，可以直接刺激机体产生特异 性免疫反应，其最大的优点就是可以克服传统疫苗造成的毒力恢复或散毒的可能，有着非 常广阔的发展前景。目前，已开发出有效的艾滋病病毒、乙肝病毒、人类疱疹病毒等表位 疫苗。ALV-J属于反转录病毒。病毒囊膜蛋白（env)可分为由gp85基因编码的表面蛋白 (surface protein, SU)和 gp37 基因编码的跨膜蛋白（transmembrane protein，TM),二者 在一起形成二聚体，病毒囊膜蛋白决定亚群的特异性。gp85是病毒囊膜蛋白表面的主要成 分，在ALV感染吸附宿主细胞并诱导机体产生特异性抗体中具有重要作用，含有众多的抗 原表位，负责识别靶细胞膜上的特异性受体，TM主要负责介导病毒与细胞的融合过程。基 于ALV-J的病毒特性，表位疫苗的研究成果为对抗ALV-J的超变特性，成功研制ALV-J疫苗 提供了科学基础和技术支撑。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术中的相关情况，发明人考虑将表位疫苗应用于抗禽J亚群禽白血病 病毒感染疫苗，进而经研究实验后提供了一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗，该 疫苗采用原核表达后筛选纯化的高活性的重组蛋白His-cENV联合弗氏佐剂制备而得，其 中编码重组蛋白His-cENV的核苷酸序列，如SEQ ID NO. 1所示，利用该表位疫苗免疫7日龄 种禽雏鸡可以产生1:128000的中和抗体，体外病毒中和实验、动物实验显示该表位疫苗可 中和不同ALV-J分离毒株，有效保护鸡群抵抗ALV-J毒株感染，该表位疫苗基于env来源的 多表位抗原基因序列，克服了 ALV-J的病毒变异，开辟了 ALV-J疫苗新时代，提供了抗ALV-J 感染的新手段，为ALV-J的防控提供了技术支撑。
[0005] 发明人经研究发现ALV-J在整个env都存在不同的抗原表位，通过筛选env上的 抗原表位可以开发有效的多表位疫苗。通过发明人前期对ALV-J的致病性进行了系统深入 的研究，在系统解析其免疫抑制机制、跨种传播机制和免疫逃避机制的基础上，结合多表位 可以传递广谱表位信息这一理念，最终制备了抗禽J亚群禽白血病病毒感染疫苗，可以避 免由于病毒变异而造成的免疫失败，有利于提供更完全和更有针对性的免疫保护，表位疫 苗的研究成果为的研制开辟了新的方向和重要的技术支撑。
[0006] 本发明的具体技术方案如下：
[0007] 通过分析获得NCBI上发表的ALV-J囊膜上的抗原表位，筛选出代表流行毒株的抗 原表位基因序列，通过采用编码甘氨酸、丝氨酸的密码子进行串联，最终确定人工合成基因 片段998bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，原核表达出重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示，联合弗氏佐剂制备表位疫苗，所获得的表位疫苗可以实现保护机体抵抗J亚 群禽白血病感染。
[0008] 其具体过程如下：
[0009] 查找NCBI上发表的ALV-J囊膜基因序列，结合国内外对ALV-J抗原表位及免疫逃 避机制的研究进展，运用DNAman软件分析获得来源于囊膜基因的22段抗原表位，筛选出代 表流行毒株囊膜抗原表位基因序列，采用编码甘氨酸、丝氨酸的密码子进行串联，获得重组 囊膜基因序列998bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。所述基因序列5'端含Nco I酶 切位点，3 '端含Xho I酶切位点。
[0010] 上述基因序列由上海生工生物工程有限公司合成，合成产物CENV连接至PUC57载 体。
[0011] 合成产物测序，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示；
[0012] 将该基因片段连接至pET30a载体，得到了重组载体pET30a_cENV，使用 1-1. 5mmol/L IPTG诱导表达得到带有HIS标签的重组蛋白His-cENV，进而利用该蛋白联合 弗氏佐剂制备表位疫苗。
[0013] 本发明的这种表位疫苗安全高效，成本低易于大规模批量生产，可抵抗45% ALV-J毒株的感染，二免后抗体维持时间达到11周，可以实现对种鸡开产前的保护，从而切 断病毒的垂直传播途径，对于我国J亚群禽白血病的防控净化具有重要意义，且特异性强 可以实现对禽J亚群禽白血病的保护；同时由于其含有广谱的表位信息，可以避免由于病 毒变异而造成的免疫失败，为J亚群禽白血病的防治提供更完全和更有针对性、更为高效 安全的疫苗保护。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 图1为重组质粒双酶切鉴定结果电泳图，
[0015] 图中M为DLlOOOOMarker，1为使用限制性内切酶EcoR I、Xho I双酶切pUC57-cENV 后获得的基因片段；
[0016] 图2为重组表达菌表达结果及蛋白纯化前后SDS-PAGE分析结果，
[0017] 图中M为170KD Protein Ladder ;1为诱导表达菌液沉淀，2为上清，3为大量表达 蛋白沉淀，4为大量表达蛋白纯化后结果；
[0018] 图3为Western Blot法检测重组蛋白，
[0019] 图中A使用HRl多抗，B使用HR2多抗，C使用His标签抗体，D使用鸡抗SU多抗， E使用鼠抗gp85多抗，验证结果。
【具体实施方式】
[0020] 本实施例中所采用的具体试剂和仪器为：
[0021] (1)主要试剂
[0022] HRP酶标二抗为博奥森生物有限公司产品；
[0023] TMB单组份底物显色溶液，DAB显色试剂盒，PCR产物胶回收试剂盒为天根公司产 品；
[0024] 蛋白预染Marker, Taq聚合酶，限制性内切酶EcoR I、Xho I为Thermo公司产品；
[0025] T4连接酶、pMD18-T载体、DNA Marker为大连宝生物有限公司产品；
[0026] 质粒抽提试剂盒为OMEGA公司产品；
[0027] His标签抗体为北京全式金生物技术有限公司产品；
[0028] 胰蛋白胨（Tryptone)及酵母抽提物（Yeast Extract)为Oxiod公司产品；
[0029] 其余试剂为国产分析纯试剂。
[0030] (2)主要仪器
[0031] 移液器、分光光度计为Eppendorf公司产品；
[0032] 低温高速离心机为湖北湘仪公司产品；
[0033] 凝胶成像系统为北京君意公司产品；
[0034] 酶标仪为Thermo公司产品；
[0035] 恒温摇床为上海申能博彩公司产品；
[0036] 恒温培养箱、超净工作台为上海博迅公司产品；
[0037] 电泳仪、SDS-PAGE电泳槽、Western-blot膜转印装置为北京六一公司产品；
[0038] 细胞超声波粉碎机为宁波新芝生物有限公司产品。
[0039] 除上述列出内容外，本发明未提及的部分均采用现有技术。
[0040] 实施例IALV-J多表位基因的筛选合成
[0041] 查找NCBI上发表的ALV-J囊膜基因序列，运用生物信息学方法分析获得囊膜抗原 表位22段，筛选出代表近几年中国流行毒株囊膜抗原表位基因序列，采用编码甘氨酸、丝 氨酸密码子进行串联，获得重组囊膜基因序列998bp，其基因序列如SEQ ID NO. 1所示。所 述基因序列5'端含Nco I酶切位点，3'端含Xho I酶切位点。
[0042] 上述基因序列由上海生工生物工程有限公司合成，并由其进一步将合成产物cENV 利用常规工艺连接至PUC57载体。
[0043] 合成产物测序，其基因序列如SEQ ID NO. 1所示；
[0044] 将pET30a和上述连接了目的基因的pUC-57克隆载体分别用限制性内切酶Nco I 和Xho I在37°C水浴条件下进行双酶切60min，用1 %琼脂糖凝胶电泳后按照胶回收试剂 盒说明书的要求分别回收大片段和目的基因片段；
[0045] 双酶切结果如图1，
[0046] 将上述获得的目标物22 °C过夜连接，其中连接体系为：pET30a载体0.5 μ 1， cENV 基因片段 1 μ 1，ddH2020 μ 1，T4DNA 连接酶 1 μ 1，IOXGreen Buffer2. 5 μ 1，总体积共 25 μ 1，获得连接产物pET30a-cENV重组质粒。
[0047] 将连接产物pET30a_cENV重组质粒按照常规方法转入0· 1 % CaC12制备的感受态 细菌BL21中，涂布于含有卡那霉素的LB平板中，37°C过夜培养，次日挑取单菌落，摇菌，提 取质粒进行双酶切鉴定后送去测序，确认其中具有如SEQ ID NO. 1所示的序列，可见获得的 重组囊膜基因998bp的片段已经成功克隆入pET30a-cENV重组质粒中。
[0048] 实施例2重组囊膜蛋白的表达和纯化
[0049] 将测序后含有重组质粒的阳性BL21菌接种于含卡那霉素（终浓度为10 μ g/ml) 的LB液体培养基中（市购常规培养基，其中含有1% (w/v)Tryptone，0. 5% (w/v)Yeast Extract，l% (w/v)NaCl，0.1mg/ml KanamycirOdT11C振荡（200rpm)，培养至 0D600 = 1.0， 加入浓度为500mMol的IPTG至整个培养基中IPTG的终浓度为lmmol/L，37°C继续培养4h， 同时设未诱导的重组质粒转化BL21菌作为对照。
[0050] 经SDS-PAGE分析显示，检测步骤如下：收集培养的工程菌菌液，5000rpm，离心 5min，弃上清，沉淀利用标准的PBS重悬获得重悬液；按照IOOml初始培养基加入标准 PBS3ml的比例，向沉淀中加入标准的PBS获得重悬液。重悬后分装与5ml离心管中每管 3ml。将离心管置于冰水混合物的烧杯内，用超声破碎仪超声破菌，120W，工作ls，间歇2s， 超声90个循环，重复一次；将超声破菌液转入50ml离心管中，配平，放入高速冷却离心机 中，8000rpm，4°C，离心lOmin，然后用SDS-PAGE电泳检测；结果上清中无蛋白（未显示），蛋 白存在于沉淀中，说明重组蛋白His-cENV以包涵体形式表达，如图2所示，目的蛋白大小约 为 33KD。
[0051] 重组蛋白的纯化步骤如下：
[0052] 将上述离心获得的沉淀用9倍体积的洗涤液I重悬沉淀，静置5min后，8000rpm， 4°C，15min，弃上清。用9倍体积的洗涤液II重悬沉淀，静置5min后，8000rpm，4°C，15min 弃上清，保留沉淀。用9倍体积的洗涤液III重悬沉淀，静置5min后，8000rpm，4°C，15min， 弃上清，保留沉淀。按IOOml菌液加4-10ml溶解液，4°C过夜。8000rpm，4°C，15min。取上 清，即为纯化蛋白。
[0053] 包涵体纯化所述试剂配制方法：
[0054] (1)细菌重悬液（250ml) : PBS (NaC12g, KC10. 05g, Na2HPO4O. 36gKH2P040 . 06g)，Immo 1/L EDTA.
[0055] (3)溶液 I(500ml) :500mmol/L Tris-Cl(pH = 6. 0)，50mmol/L NaCl，50mmol/L EDTA
[0056] (3)溶液 II (250ml):溶液 I，IM 尿素
[0057] (4)溶液 III(25Oml):溶液 I，2M 尿素
[0058] (5)包涵体溶解液（250ml):溶液I，8M尿素
[0059] SDS-PAGE法与Western Blot法检测纯化后的蛋白（图2和3所示）。得到的蛋 白经过Bradford法测定蛋白含量，2ml离心管分装-80°C保存备用。
[0060] 上述使用的SDS-PAGE法为常规方法，未提及的试剂为常规方法规定使用的试剂， 其具体操作步骤如下：
[0061] 1)将玻璃板洗干净，用夹子固定，垂直放置，配置12%分离胶，快速注入到两玻璃 板之间，胶上部加蒸馏水封口，以保持胶面平整。待分离胶凝固后，倒去分离胶表面的蒸馏 水，用滤纸吸去残留水。注入浓缩胶，快速插入梳子，并注意防止气泡的产生。
[0062] 2)取纯化后的重组蛋白加入15-20 μ 14X SDS上样buffer，煮沸lOmin。
[0063] 3)往电泳槽加入I XTris-甘氨酸缓冲液，待浓缩胶凝固，小心拔掉梳子，用缓冲 液冲洗加样孔，用微量进样器上样，20 μ 1/孔，正确连接电泳槽正负极，打开电源。120V电 压电泳，电泳至溴酚蓝到达胶的底部时停止电泳。
[0064] 4)染色：取下凝胶，用蒸馏水冲洗，放入考马斯亮蓝染色液中，染色4h以上。
[0065] 5)脱色：将凝胶放入脱色液中，置于摇床上脱色，期间更换3次以上脱色液，待凝 胶蓝色背景全部脱去停止，将凝胶放入蒸馏水中终止脱色。拍照保存，如图2所示，出现了 大小约为33KD的目的重组蛋白条带。
[0066] 6)剪一张与Western Blot凝胶大小相同的NC膜，用去离子水浸透，同时将与凝胶 大小相同的两张滤纸及纤维垫用转印缓冲液浸透。
[0067] 7)按三明治法安装转印装置，即负极夹-纤维垫-滤纸-凝胶-NC膜-滤纸-纤 维垫-正极夹，使NC膜位于转印的正极面，凝胶位于负极面，其间无任何气泡间隙。将转印 装置放入转移电泳仪中，加入转移缓冲液，140mA电泳2h。
[0068] 8)转印结束后，将转移后的NC膜用去离子水漂洗一遍，将NC膜浸泡于封闭液中， 4°C封闭过夜。
[0069] 9)用PBST洗涤NC膜三遍，每次lOmin。
[0070] 10)使用His标签抗体为一抗，NC膜与一抗37°C反应lh，用PBST洗膜三次，IOmin/ 次。
[0071] 11) NC膜置于HRP标记的羊抗鼠 IgG中，37 °C反应lh，用PBST洗膜三次，IOmin/ 次。
[0072] 12)使用DAB显色试剂盒避光显色；此时应密切观察显色过程，并在较浅本底且达 到适当显色强度时流水终止显色。拍照保存，如图3所示，出现了大小约为33KD的目的重 组蛋白条带。
[0073] 实施例3重组蛋白的活性检测
[0074] 使用上述纯化得到的His-cENV蛋白包被ELISA板，使用酶联免疫吸附试验检测该 蛋白的生物学活性。以gp85蛋白免疫鼠阳性血清、HRl多肽、HR2多肽免疫鸡阳性血清以及 IDEXX检测试剂盒检测为阳性的鸡血清为阳性对照，健康SPF鸡血清为阴性对照，HRP标记 羊抗鼠 IgG、羊抗鸡IgG酶标二抗按说明书使用。结果显示阳性对照与阴性对照的OD值比 值大于2. 1，说明该蛋白有良好的生物学活性和抗原性。
[0075] ELISA具体步骤如下：
[0076] 1)包被：取纯化的重组蛋白，以生理盐水稀释至最佳浓度，包被反应板，100 μ 1/ 孔，4°C过夜。
[0077] 2)洗涤：甩去酶标板中的包被液，用PBST (PBS，0. 05% Tween-20)加满各孔，摇床 震荡3min，弃去PBST，洗涤3次，3min/次，拍干。
[0078] 3)封闭：各孔加入封闭液（3%脱脂乳），35(^1/孔，置371：培养箱孵育0.511，洗 漆3次，3min/次，拍干。
[0079] 4)加样：将待待检血清按梯度稀释后加入包被板，100 μ 1/孔，同时设立阴阳性血 清对照。置37°C培养箱孵育lh，洗涤3次，3min/次，拍干。
[0080] 5)用封闭液将HRP标记羊抗鼠 IgG、羊抗鸡IgG酶标二抗按1:5000稀释，100 μ 1/ 孔，置37°C培养箱孵育lh，洗涤3次，3min/次，拍干。
[0081] 6)显色：使用TMB单组份显色试剂盒（TIANGEN公司产品）按100 μ 1/孔加入包 被板，37°C条件下避光显色20min加终止液，2Μ H2S04终止显色。
[0082] 7)用酶联免疫检测仪测其在波长450nm检测各个孔的OD值，阴性对照0D450值为 N，阳性对照0D450值为P。若P/N>2. 1判为阳性。
[0083] 实施例4抗J亚群禽白血病病毒感染表位疫苗的制备
[0084] 1)从东岳种禽有限公司购买1日龄海兰褐雏鸡50只，隔离罩条件下分组饲养，分 别采集血清及棉拭子，使用IDEXX试剂盒检测ALV-J抗体和ALV抗原均为阴性；
[0085] 其中所述的分组为空白对照组一0组10只，免疫His-cENV组一 1组20只，免疫 His-cENV+弗氏佐剂组一 2组20只。
[0086] 2)将上述获得的纯化蛋白进行浓度测定，当测定浓度达到7. 6mg/ml后，即可使用 PBS将其稀释至lmg/ml，将稀释后的蛋白溶液与弗氏佐剂按照体积比1:1的比例配制，在振 荡器上混匀后用Iml的注射器分装，每管0. 2ml ;
[0087] 其中所述的lmg/ml的重组蛋白溶液用pH为7. 4,1 XPBS缓冲液稀释获得的；
[0088] 7日龄通过肌肉注射的方式对腿肌进行多点免疫，免疫组每只鸡免疫蛋白0. lg， 对照组注射相同剂量灭菌PBS，两周后加强免疫一次。
[0089] 3)抗体消长规律监测，首次免疫后10天、二免10天后每周采集血清测定抗体效 价；
[0090] 其中所述的抗体效价测定，主要将待检血清以10倍倍比稀释，其他操作步骤同 ELISA检测重组蛋白活性过程。
[0091] 实施例5体外病毒中和效果检测
[0092] 病毒中和试验例1
[0093] 发明人采用加强免疫制备的高效价血清进行病毒中和实验；
[0094] ALV-J NX0101毒株是2001年从我国宁夏地区肉鸡中分离到的一株纯的J亚群禽 白血病毒株，背景清晰；
[0095] 实验前将血清样品56°C，30min灭活，除去非特异性物质，将ALV-J NX0101病 毒液用无菌的 DMEM 培养液稀释至 1TCID50/0. Iml、10TCID50/0. Iml、100TCID50/0. Iml， 取250 μ 1稀释的病毒液与等量的灭活血清充分混匀后37°C孵育1小时，接种于长满单 层DF-I细胞的24孔板中，每孔200 μ 1，并设立只加病毒液和只加血清的对照，接种1小 时后换含I %肽牛血清的DMEN培养液维持7天，取细胞上清用ALV抗原检测试剂盒检测 上清中病毒含量，结果显示100TCID50/0. Iml组、病毒液对照组为阳性，其余为阴性，并且 100TCID50/0. Iml组阳性值明显低于病毒液对照组，说明重组蛋白His-cENV联合弗氏佐剂 制备的表位疫苗诱导机体产生的抗体能够在体外条件下与ALV-JNX0101毒株发生中和反 应，且效果显著，证明本发明所提供的表位疫苗能够保护鸡群抵抗J亚群禽白血病的感染。
[0096] 病毒中和试验例2
[0097] ALV-J WS0705毒株是2007年从山东蛋鸡分离到的一株纯的J亚群禽白血病毒株， 背景清晰；
[0098] 发明人采用试验例1相同方法进行病毒中和实验，操作过程一致，结果显示 100TCID50/0. Iml组、病毒液对照组为阳性，其余为阴性，并且100TCID50/0. Iml组阳性值 明显低于病毒液对照组，说明明重组蛋白His-cENV联合弗氏佐剂制备的表位疫苗诱导机 体产生的抗体能够在体外条件下与ALV-J WS0705毒株发生中和反应，且效果显著，证明本 发明所提供的表位疫苗能够保护鸡群抵抗J亚群禽白血病的感染。
[0099] 病毒中和试验例3
[0100] ALV-J DZ1022毒株是2011年从山东蛋鸡分离到的一株纯的J亚群禽白血病毒株， 背景清晰；
[0101] 发明人采用试验例1相同方法进行病毒中和实验，操作过程一致，结果显示 100TCID50/0. Iml组、病毒液对照组为阳性，其余为阴性，并且100TCID50/0. Iml组阳性值 明显低于病毒液对照组，说明明重组蛋白His-cENV联合弗氏佐剂制备的表位疫苗诱导机 体产生的抗体能够在体外条件下与ALV-J DZ1022毒株发生中和反应，且效果显著，证明本 发明所提供的表位疫苗能够保护鸡群抵抗J亚群禽白血病的感染。
[0102] 实施例6体内试验检测
[0103] 重组蛋白联合弗氏佐剂免疫7日龄种禽雏鸡，19日龄加强免疫一次，10天后进行 攻毒观察免疫保护效果，同时设ALV-J感染阳性对照组及阴性对照组。
[0104] 饲养至14周龄，全部剖杀，期间每周进行血液学、组织病理学观察以及病原学检 测抗病毒效果；
[0105] 结果显示免疫保护组鸡群生长良好，血液各项指标未见明显变化，ALV抗原检测阴 性，无排毒现象，病理组织学检测未见组织损伤及炎症反应。而ALV-J阳性对照组出现严重 的病毒血症，肝脏及肾脏等重要脏器出现明显的损伤和炎症。实验证明该表位疫苗可以保 护鸡群抵抗ALV-J的感染。
【权利要求】
1. 一种抗J亚群禽白血病病毒感染的表位疫苗，其特征在于：该疫苗米用原核表达 后筛选纯化的高活性的重组蛋白His-cENV联合弗氏佐剂制备而得，其中编码重组蛋白 His-cENV的核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，原核表达出重组蛋白，其氨基 酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
2. 权利要求1所述的表位疫苗作为ALV-J疫苗的应用。
【文档编号】A61P31/14GK104306995SQ201410593612
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月29日 优先权日:2014年10月29日
【发明者】成子强, 侯敏博, 张利 申请人:山东农业大学