一种抑制肿瘤转移和治疗白血病的多肽和多肽复合物、其制备方法及其应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明涉及一种多肽及多肽-人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)复合物在抑制肿瘤转移和治疗白血病中的应用。具体而言，本发明涉及一种利用HSA提高多肽在盐溶液中溶解性的方法，本发明还提供了该多肽-HSA复合物的制备方法，以及该多肽及其与HSA相结合形成的多肽-HSA复合物在抑制肿瘤转移和治疗白血病中的应用。该多肽可抑制白血病细胞的迁移，并且大大延长了移植白血病细胞小鼠的生存期；该多肽-HSA复合物在盐溶液中具有较好的溶解性，并且在较低的浓度下可大大降低肿瘤细胞和白血病细胞的迁移率。本发明的多肽及该多肽-HSA复合物可以为抑制肿瘤转移和治疗白血病提供可行的方法和技术。
【专利说明】一种抑制肿瘤转移和治疗白血病的多肽和多肽复合物、其 制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药【技术领域】，具体涉及一种多肽和多肽复合物、其制备方法及 其应用，尤其是涉及一种多肽和可以提高多肽在盐溶液中溶解性的多肽-人血清白蛋白 (human serum albumin，HSA)复合物的制备方法及其在抑制肿瘤转移和治疗白血病方面的 应用。
【背景技术】
[0002] 血清白蛋白是血浆中最为丰富的蛋白质，其生物学功能包括结合及运输一系列内 源性和外源性的物质，维持血液正常的渗透压等等。近年来，人血清白蛋白（HSA)作为药物 载体受到了广泛的关注。HSA由585个氨基酸残基组成，分子量约为66kD，具有安全无毒、 生物相容性好等优点。
[0003] 白蛋白的载药方式主要有两种：一是药物和白蛋白间以分子链连接形成白蛋白药 物，即化学偶联白蛋白载药；二是依靠药物和白蛋白的相互作用实现包埋载药，即物理结合 白蛋白载药，这种结合方式可以提高药物的溶解性和稳定性。
[0004] 目前研究的HSA药物载体主要针对于抗肿瘤药物，HSA药物的物理包埋作用是通 过HSA的物理作用例如疏水、静电等相互作用包埋载药，可以提高药物的稳定性和靶向性， 并且具有缓释作用，因此HSA可以作为理想的药物载体用于多肽药物新型复合物中。
[0005] 肿瘤是严重危害人们身体健康的一类疾病，肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤，两者 的主要区别是恶性肿瘤具有转移（metastasis)和复发的特征。肿瘤转移是预后不良的征 兆，也是导致肿瘤病人死亡的主要原因。
[0006] 趋化因子（chemokines)是一类单链小分子蛋白质，通过与G蛋白偶联受体的相 互作用，引起靶细胞支架重排，牢固地黏附于内皮细胞并且定向迁移。近年来，国内外研究 均指出，基质细胞衍生因子（stromal cell-derived factor-1，SDF-1)，也就是趋化因子 CXCL12,及其特异性趋化因子受体CXCR4在多种肿瘤的器官特异性转移中发挥着重要的作 用。很多实体肿瘤细胞和白血病细胞表面高表达特异的趋化因子受体CXCR4,而趋化因子 CXCL12在骨髓、淋巴结和某些器官中高表达。
[0007] 高表达CXCR4的实体瘤细胞和白血病细胞在CXCL12的趋化下，逆浓度梯度转 移至作为趋化因子产生源的某些器官，例如肺、骨髓等，形成器官特异性转移（Balkwill F.，Semin Immunol, 2003, 15, 49-55)。因此，使用 CXCR4 拮抗剂靶向抑制 CXCL12/CXCL4 相 互作用可以阻断肿瘤细胞和白血病细胞与基质细胞黏附，增加肿瘤细胞和白血病细胞对化 疗药物的敏感性，防止肿瘤细胞和白血病细胞的转移和复发。
[0008] 由于多肽易于合成，在人体内易于代谢并且不会带来毒副作用和严重的免疫反 应，因此对于抑制肿瘤转移和治疗白血病，发展特异性靶向CXCR4受体的多肽具有非常重 要的意义。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于提供一种多肽和多肽复合物、其制备方法及应用，特别是一种 水溶性好、盐溶性差的多肽和能提高多肽在盐溶液中溶解性的多肽-HSA复合物、其制备方 法及其在抑制肿瘤转移和治疗白血病方面的应用。
[0010] 为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
[0011] 第一方面，本发明提供了一种可抑制肿瘤细胞和白血病细胞转移的多肽，所述多 肽具有选自SEQ ID N0 :1?7任意一种所不的氨基酸序列，如表1所不。
[0012] 本发明的多肽可通过人工化学合成制得，具有水溶性好、盐溶性差的特点。
[0013] 作为优选技术方案，所述多肽为SEQ ID N0 :2或SEQ ID N0 :3所示的氨基酸序列， 对应表1中的名称为E4和E5。
[0014] 本发明的多肽能够抑制乳腺癌细胞的迁移，并能够杀死白血病细胞，延长移植白 血病细胞小鼠的生存期。
[0015] 第二方面，本发明还提供了一种提高上述本发明所述多肽在盐溶液中溶解性的方 法，所述方法包括：将所述多肽与人血清白蛋白相结合。
[0016] 优选地，所述多肽与人血清白蛋白的结合方式为物理结合。
[0017] 第三方面，本发明还提供了一种多肽-人血清白蛋白复合物，该复合物包含上述 本发明第一方面所述的多肽和人血清白蛋白。
[0018] 优选地，所述多肽与人血清白蛋白通过物理作用相结合。
[0019] 优选地，所述多肽和人血清白蛋白的摩尔比为4:1-1:4,例如可以是4:1、4:2、 4:3、1:1。
[0020] 第四方面，本发明还提供了如本发明第三方面所述多肽-人血清白蛋白复合物的 制备方法，包括以下步骤：
[0021] 1)配制溶液：将所述多肽分子配制成l-5mg/mL溶液，将人血清白蛋白分子配制成 125-250mg/mL 溶液；
[0022] 2)混匀：将人血清白蛋白分子溶液加入到多肽分子溶液中，充分混匀即可。
[0023] 优选地，在步骤1)中，所述多肽溶液和人血清白蛋白的溶剂均为无菌超纯水。
[0024] 优选地，在步骤2)中，所述溶液中多肽分子与人血清白蛋白分子的摩尔比为 4:1-1:4，例如可以是4:1、4:2、4:3、1:1。
[0025] 第五方面，本发明还提供了如本发明第一方面所述多肽或第三方面所述多肽-人 血清白蛋白复合物在制备用于抑制肿瘤细胞转移、抑制肿瘤转移相关疾病或治疗白血病药 物中的应用。
[0026] 作为优选技术方案，所述多肽或多肽-人血清白蛋白复合物在制备用于抑制肿瘤 细胞或白血病细胞的横向迁移和/或纵向迁移药物中的应用。
[0027] 作为优选技术方案，所述肿瘤转移相关疾病为趋化因子受体CXCR4高表达相关的 肿瘤；
[0028] 优选地，所述趋化因子受体CXCR4高表达相关的肿瘤为乳腺癌、白血病、淋巴瘤或 膀胱癌中的任意一种。
[0029] 优选地，所述趋化因子受体CXCR4高表达相关的肿瘤为乳腺癌和白血病。
[0030] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0031] 本发明所述的多肽-HSA复合物具有提高多肽在盐溶液中溶解性的能力，本发明 的多肽分子在磷酸缓冲液（PBS)溶液中Oh的粒径均在300nm以上，而多肽-HSA复合物在 PBS溶液中得到了很好的分散，Oh的粒径均在100nm左右，并且在72h内粒径没有发生很大 的改变；同时所得到的多肽和多肽-HSA复合物具有抑制肿瘤转移和治疗白血病的作用，该 多肽序列及多肽-HSA复合物可以为抑制肿瘤转移和治疗白血病提供可行的方法和技术。
【专利附图】
【附图说明】
[0032] 图la-lg为多肽分子和多肽-HSA复合物在PBS溶液中动态光散射实验结果图；
[0033] 图2为E4-HSA、E5-HSA复合物对SK-BR-3细胞活力影响的实验结果图；
[0034] 图3为E4-HSA、E5-HSA复合物对MDA-MB-231细胞活力影响的实验结果图；
[0035] 图4a-4b为E4-HSA复合物、E5-HSA复合物对CXCL12分子诱导SK-BR-3细胞横向 迁移的抑制作用结果图；
[0036] 图5a-5d为E4-HSA复合物、E5-HSA复合物对CXCL12分子诱导SK-BR-3细胞纵向 迁移的抑制作用结果图；
[0037] 图6a-6b为E4-HSA复合物、E5-HSA复合物对CXCL12分子诱导MDA-MB-231细胞 横向迁移的抑制作用结果图；
[0038] 图7a-7d为E4-HSA复合物、E5-HSA复合物对CXCL12分子诱导MDA-MB-231细胞 纵向迁移的抑制作用结果图；
[0039] 图8为E5对CXCL12分子诱导HL-60细胞纵向迁移的抑制作用结果图；
[0040] 图9为E5对CXCL12分子诱导U937细胞纵向迁移的抑制作用结果图；
[0041] 图10a-10b为E4-HSA复合物、E5-HSA复合物对CXCL12分子诱导HL-60细胞纵向 迁移的抑制作用结果图
[0042] 图lla-llb为E5影响HL-60、U937细胞凋亡的检测实验结果图；
[0043] 图12a_12b为E5延长移植白血病细胞小鼠生存期的体内实验结果图。
【具体实施方式】
[0044] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。实施例中未注明具体技术 或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂 或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
[0045] 除非特别指明，以下实施例中所用的乳腺癌细胞系SK-BR-3、MDA-MB-231和白血 病细胞系HL-60、U937均购自中国医学科学院。
[0046] 除非特别指明，以下实施例中所用水溶液的溶剂均为无菌超纯水溶液。
[0047] 除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均为分析纯试剂。
[0048] 除非特别指明，以下实施例中所用的PBS溶液均为IXPBS溶液。
[0049] 实施例1 :多肽的合成
[0050] 按照表1所示的序列合成多肽（由上海科肽生物科技有限公司合成，纯度为 98% )，实验前配制成合适浓度的母液。
[0051] 表 1
[0052]
【权利要求】
1. 一种抑制肿瘤细胞转移和治疗白血病的多肽，其特征在于，所述多肽具有选自SEQ ID NO :1?7任意一种所示的氨基酸序列。
2. 根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽为SEQ ID NO :2或SEQ ID NO : 3所示的氨基酸序列。
3. 根据权利要求1或2所述的多肽，其特征在于，所述多肽能够抑制乳腺癌细胞的迁 移，并能够杀死白血病细胞，延长移植白血病细胞小鼠的生存期。
4. 一种提高权利要求1-3任一项所述多肽在盐溶液中溶解性的方法，其特征在于，所 述方法包括：将所述多肽与人血清白蛋白相结合； 优选地，所述多肽与人血清白蛋白的结合方式为物理结合。
5. -种抑制肿瘤细胞转移和治疗白血病的多肽-人血清白蛋白复合物，其特征在于， 所述复合物由权利要求1-3任一项所述的多肽与人血清白蛋白相结合形成。
6. 根据权利要求5所述多肽-人血清白蛋白复合物的制备方法，其特征在于，将所述的 多肽与人血清白蛋白通过物理作用相结合； 优选地，所述多肽和人血清白蛋白的摩尔比为4:1-1:4。
7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 配制溶液：将所述多肽分子配制成l_5mg/mL溶液，将人血清白蛋白分子配制成 125-250mg/mL 溶液； 2) 混匀：将人血清白蛋白分子溶液加入到多肽分子溶液中，充分混匀即可。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述多肽溶液的溶剂为无菌 超纯水；优选地，所述人血清白蛋白溶液的溶剂为无菌超纯水； 优选地，在步骤2)中，所述溶液中多肽分子与人血清白蛋白分子的摩尔比为4:1-1:4。
9. 根据权利要求1-3或5任一项所述的多肽或多肽-人血清白蛋白复合物在制备用于 抑制肿瘤细胞转移、抑制肿瘤转移相关疾病或治疗白血病药物中的应用。
10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述多肽或多肽-人血清白蛋白复合物 在制备用于抑制肿瘤细胞或白血病细胞横向迁移和/或纵向迁移药物中的应用； 优选地，所述肿瘤转移相关疾病为趋化因子受体CXCR4高表达相关的肿瘤；优选地，所 述CXCR4高表达相关的肿瘤为乳腺癌、白血病、淋巴瘤或膀胱癌中的任意一种，进一步优选 地，所述CXCR4高表达相关的肿瘤为乳腺癌或白血病。
【文档编号】A61P35/02GK104231050SQ201410497974
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月25日 优先权日:2014年9月25日
【发明者】王琛, 段鸿洋, 杨延莲, 许海燕, 李潇瑾, 郭花, 谢含仪, 于越 申请人:国家纳米科学中心, 中国医学科学院基础医学研究所