原儿茶醛在制备防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面的应用的利记博彩app
【专利摘要】吸烟造成肺损害已经是公认的事实，保护或减轻长期吸烟者的肺损害，是预防肺癌等吸烟并发症的一个重要的保健措施，本研究组发现原儿茶醛对吸烟导致的肺损伤有明显的保护作用，据此，本发明提出用原儿茶醛制备为一种可供临床作为防护吸烟导致肺损伤的保健食品或药品应用，这种应用是指原儿茶醛可以制备为胶囊，软胶囊，片剂，颗粒剂，冲剂，口服液，喷雾剂，注射剂，供临床作为防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面的应用。
【专利说明】原儿茶醛在制备防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面 的应用
[0001]
【技术领域】原儿茶醛是中药丹参的主要活性成分之一，本发明涉及原儿茶醛在制 备防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面的应用。
[0002] 研究背景吸烟有害健康，但全球仍有11亿人在吸烟，占世界人口的1/6。世界卫 生组织估计，与吸烟相关的疾病每年导致大约500万人过早死亡，其中有大约60万非吸烟 者死于二手烟的危害。而我国的肺癌发病率和死亡率一直呈显著上升趋势，预计2025年每 年死于肺癌的人数将接近100万，其中90%肺癌的发生与吸烟有关。长期吸烟可引起机体 的氧化应激和炎症反应，而氧化损伤和慢性炎症正好是肺部疾病发生的重要因素。针对吸 烟诱导肺损伤的毒性作用及机制，本课题一直在寻找对吸烟致肺损伤有保护作用的物质， 通过大量的动物实验，发现了原儿茶醛对吸烟导致的肺损伤具有十分明显的保护作用。
[0003] 原儿茶醒（Protocatechuic aldehyde, PCA)，化学名为3,4_二轻基苯甲醒，是丹 参水溶性成分丹酚酸B降解的主要产物之一，也可从四季青叶、鼠尾草等活血化瘀药物中 提取，常作为质量检测指标控制丹参相关制剂的质量。由于原儿茶醛的抗氧化活性来自其 邻二酚的母核，因此它具有多种生理活性，如扩张动脉、降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集、 抗脂质过氧化和清除自由基等作用。目前对原儿茶醛的药理学研究主要有如下几个方面：
[0004] 1.原儿茶醛保护心肌细胞作用：原儿茶醛对心肌的保护作用，有如下观点：
[0005] (1)原儿茶醛可以减轻钙超载，保护心肌：心肌缺血及缺血再灌注损伤所造成的 心肌细胞损伤均与细胞内Ca2+超载有关。心肌细胞的电生理研究表明：缺血后细胞内的无 氧代谢导致细胞内pH降低而引发的细胞内Na+超载，进一步引起的Ca2+超载，在心肌的缺 血性以及再灌注性损伤中均占有重要的地位。采用荧光探针Fura-2定量分析法，分别测定 丹参注射液及其活性成分丹参素、PCA对离体健康成人红细胞胞浆Ca2+浓度的影响，结果 显示丹参素和PCA均具有降低成人红细胞胞浆Ca2+浓度的作用，并呈剂量依赖性，二者合 并用药，药效相加，作用与丹参注射液相似；而且PCA的钙拮抗作用强于丹参素，红细胞胞 浆ca浓度最大抑制率可达80%以上，且无钟形曲线特点（沈玲红，等，2004)。
[0006] (2)原儿茶醛能够心肌损伤特异性的酶活性：最近有报道原儿茶醛对大鼠心肌缺 血/再灌注损伤有明显的保护作用，研究发现原儿茶醛能够显著降低该动物模型的心肌 梗塞面积，对心肌损伤特异性的酶CK-MB，cTnl和LDH有明显的降低作用，这些酶是细胞 内重要的能量代谢酶，是急性心肌损伤的血清标志物，心肌缺血/再灌注损伤大鼠血清中 的CK-MB，cTnl，LDH含量均明显升高，应用原儿茶醛能够降低大鼠血清中的CK-MB. cTnl和 LDH水平，提示原儿茶醛对心肌的保护作用可能是与降低这些酶的活性有关（袁晓峰，等， 2013)。
[0007] (3)原儿茶醛有抗氧化作用，原儿茶醛具有邻二酚的母核结构，该药效基团是其显 著抗氧化活性的物质基础。有人利用体外抗氧化模型，定量比较丹参药材的代表成分丹参 素、原儿茶醛、咖啡酸和丹酚酸B的体外抗氧化能力的强弱，4种酚性化合物清除· OH的Ic 值大小顺序为：丹参素>咖啡酸>原儿茶醛>丹酚酸B，表明丹酚酸B的作用最强，原儿茶 醛的作用次于丹酚酸B，这些成分可能是丹参通过清除氧自由基治疗心血管疾病的重要活 性成分（刘梅，等，2009)。
[0008] 2原儿茶醛抗动脉粥样硬化的作用：动脉粥样硬化是常见的心血管疾病，近年来 被认为是一种慢性炎症反应。血管内皮细胞的炎性损伤是动脉粥样硬化的始动因素，许多 炎性刺激因子如脂多糖、肿瘤坏死因子等都可以造成血管内皮的炎性损伤；血管内皮细胞 损伤、凋亡会导致内皮失去其完整性，是动脉粥样硬化的危险因素之一，已证明原儿茶醛可 抑制某些炎症因子及介导炎症反应的细胞信号，从而抑制血管内皮的炎症反应；原儿茶醛 还有抑制细胞凋亡作用，可通过增加 NO, NOS的分泌来保护内皮细胞免受氧化修饰低密度 脂蛋白降低NO介导的血管损伤，导致血管内皮细胞功能紊乱、凋亡和坏死。
[0009] 3原儿茶醛抗血栓形成的作用：原儿茶醛体内、体外给药对家兔和大鼠血小板用 ADP或凝血酶诱导的聚集以及5-HT释放，均有明显的抑制作用，并能降低血小板TXA，所以 原儿茶醛抑制血小板聚集可能与抑制血小板PGs代谢、减少TXA，生成有关，可能是通过抑 制PGs代谢系统环氧化酶的活性等作用所致。原儿茶醛还有促进微循环的作用。
[0010] 还有报道原儿茶醛对神经细胞的有保护作用，抗肝纤维化作用，抗败血症、抗病 毒、神经保护等作用。但关于原儿茶醛对吸烟诱导肺损伤的保护研究尚未发现。本项目组 利用已经建立起来的吸烟导致肺损伤的动物模型，对原儿茶醛是否对吸烟诱导的肺损伤具 有保护作用进行了探讨，结果证明原儿茶醛对吸烟造成的肺损伤具有明显的保护作用。
【发明内容】
[0011] 本研究组发现原儿茶醛对吸烟导致的肺损伤有明显的保护作用，据此， 本发明提出用原儿茶醛制备为一种口腔含片，供临床作为防护吸烟致肺损伤的保健食品及 药品方面的应用，同时，原儿茶醛还可以制备为胶囊，软胶囊，片剂，颗粒剂，冲剂，口服液， 喷雾剂，注射剂，供临床作为防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面的应用。
[0012] 进一步的研究证明原儿茶醛作为临床作为防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品 时，当制备成含片，胶囊，软胶囊，片剂时，每粒含原儿茶醛60?150mg为佳，较佳的剂量为 66. 5mg或133mg ;制备为颗粒剂，冲剂时，每包含原儿茶醛60?150mg为佳，较佳的剂量为 66. 5mg或133mg ;制备为口服液时，每瓶含原儿茶60?150mg为佳，较佳的剂量为66. 5mg 或 133mg。
【具体实施方式】：
[0013] 为证明原儿茶醛对吸烟导致的肺损伤有保护作用，本研究采用C57BL/6小鼠进行 建模研究，C57BL/6小鼠是目前国内外最常用于吸烟诱导肺损伤的实验动物之一，本课题组 预实验发现将C57BL/6小鼠的吸烟量设为每天Sg烟丝，暴露20d，能导致小鼠肺损伤，本实 验拟通过C57BL/6小鼠暴露于烟草烟雾中，建立吸烟诱导的肺损伤模型，探索原儿茶醛干 预后吸烟诱导肺损伤的氧化应激和炎症反应的变化及病程中的组织病理学的改变，进一步 研究原儿茶醛作为抗氧化剂对吸烟诱导的肺损伤的保护作用及其机制。
[0014] 1研究目的
[0015] I. 1吸烟致肺损伤的小鼠模型建立及发病机制的探讨
[0016] 参考国内外有关吸烟致肺损伤的文献，结合本实验的基本条件，确定吸烟致肺损 伤的各个因素，如每次使用的烟丝重量，每天吸烟的时间，每天吸烟的次数以及造模的天数 等。通过模型组肺部的氧化应激、炎症反应和纤维化情况，判断造模是否成功。
[0017] 1. 2观察三个剂量的PCA对吸烟小鼠肺损伤的影响
[0018] 观察原儿茶醛治疗吸烟致肺损伤的量效关系，并比较原儿茶醛与维生素 C治疗肺 损伤的效果。通过观察各个实验组小鼠肺部组织病理学变化，肺羟脯氨酸含量及Masson 纤维化染色情况，评价原儿茶醛对肺损伤的保护作用，同时，通过观察抗氧化酶SOD、MDA、 GSH-PX活性的影响，评价探讨推测原儿茶醛对吸烟致小鼠肺损伤的药理作用及作用机制。
[0019] 2材料与方法
[0020] 2. 1实验材料
[0021] 实验动物：本实验使用8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠，共60只，体重为（20 ±2) g，由广东省医学实验动物中心提供，广东省实验动物质量合格证：SCXK (粤）2008-0002
[0022] 饲养条件：饲养于清洁动物房，室温保持24°C?28°C，湿度在50%?60%之内，每 天12h光照，自由饮水与摄食（广东医学院动物中心提供的标准饲料），每周称重一次。
[0023] 实验药物原儿茶醒的配制：准确称取60mg，120mg，180mg原儿茶醒分别溶于60ml 双蒸水（配药时按比例缩减，按需要量配制），充分振荡溶解，配成溶液，4°C保存备用。
[0024] 2. 2实验方法
[0025] 2. 2. 1设计与分组
[0026] 60只8周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠，由广东省实验动物中心提供。动物适应性 喂养1周后按体重随机分成6组，分别为正常组（Control组）、模型组（TS组）、原儿茶醛 低剂量组（PCA-L组）、原儿茶醛中剂量组（PCA-M组）、原儿茶醛高剂量组（PCA-H组）和维 生素 C阳性对照组（VC组）。小鼠进行为期30d的吸烟诱导肺损伤观察，吸烟即烟草烟雾暴 露方法如下：每天烟草的用量为8g，每天进行烟雾暴露4次，每次完全燃烧2g烟丝，每次暴 露15min，每次吸烟完毕后中途间隔5min再继续进行下一次吸烟。每天吸烟前一小时分别 对小鼠进行灌胃给药，给药量均按照小鼠体重〇. Iml · IOg' TS组给予生理盐水，PCA-L组 给予原儿茶醒IOmg · kg< · (Γ1，PCA-M组给予原儿茶醒20mg · kg< · (Γ1，PCA-H组给予原儿 茶醛30mg · kg4 · cf1，VC组给予维生素 ClOOmg · kg4 · cf1。最后一次给药完毕24h后，取左 肺进行超氧化歧化酶（SOD)，过氧化氢酶（CAT)，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX)和过氧化物 髓化酶（MPO)的活力检测，以及丙二醛（MDA)水平检测，提取蛋白进行相关炎症、凋亡和氧 化因子检测。右肺去部分组织做病理切片，进行HE、MASSON、粘液染色和免疫组化检测。
[0027] 2. 2. 2造模方法
[0028] 动物被放置于吸烟箱（由透明有机玻璃制成，长48cm，宽36cm，高30cm)，吸烟箱 盖为可活动门，该门有两个Icm的圆形排气孔，并装有一个小型抽风机。抽风机进风口处连 接一个IL的塑料储藏室，其上方放置着一个15ml圆柱形的金属烟丝槽。开始实验时，烟丝 被放置于烟丝槽中，点燃烟丝，启动小型抽风机，烟雾被吸到塑料储藏室与空气混匀，然后 匀速排进吸烟室内。每天小鼠吸烟4次，每次15min，每次吸烟结束后，打开吸烟箱盖驱走 箱内烟雾，间隔5min再继续下一次吸烟。每天烟丝使用量8g，每次燃烧2g烟丝，2g烟丝约 2min会燃烧殆尽，小鼠总吸烟时间为60min。
[0029] 2. 2. 3小鼠肺组织的处理
[0030] 取小鼠肺组织放置于0°C生理盐水中漂洗，出去血液，滤纸拭干，称重，放入玻璃匀 浆器内。用移液枪量取预冷的〇. 9%生理盐水（生理盐的体积总量为组织块重量的9倍）， 用移液管取总量1/2的生理盐水于玻璃匀浆器圆颈壁中，用眼科剪将肺组织快速剪碎，然 后在玻璃匀浆管中快速研磨，匀浆器的下端插入盛有碎冰的器皿中，充分研碎后，将匀浆液 分装到2ml的离心管内。剩余的1/2冷生理盐水冲洗残留在匀浆器中的匀浆液，然后倒入 对应的离心管。将制备好的10%匀浆，用低温离心机在4°C环境中以2500r/min转速，离心 15min，用移液枪分离上清液，分装后放入-80°C超低温冰箱储藏备用。
[0031] 2. 2. 4小鼠肺组织SOD，CAT，GSH-PX和MPO活性检测
[0032] 小鼠肺组织SOD活性采用WST-I法测定；小鼠肺组织CAT活性采用钥酸铵法测 定，肺组织GSH-PX活性检测用谷胱甘肽过氧化物酶的酶促反应速度法测定。小鼠肺组织 MPO(髓过氧化物酶）活性检测采用邻连茴香胺供氢法测定。
[0033] 2. 2. 5小鼠肺组织羟脯氨酸含量检测
[0034] 小鼠肺组织羟脯氨酸含量测定根据羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产 物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色的原理，用相关的试剂盒进行测定。
[0035] 2. 2. 6小鼠肺组织病理评分
[0036] 每张切片采用盲法评估。通过400倍的显微镜下观察300个肺泡进行评分，每一 个视野按照下表的标准进行评分。所有的得分累加并根据重要性进行加权计算，最终得分 按照以下公式进行：肺损伤分数=[肺泡出血得分/视野数+2X (肺泡浸润得分/视野 数）+3 X (纤维沉积得分/视野数）+ (肺泡壁充血/视野数）]/总肺泡数。见表2. 1 :
[0037] 表2. 1肺组织病理评分表
[0038]
【权利要求】
1. 原儿茶醛在制备防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面的应用。
2. 如权利要求1所述的原儿茶醛在制备防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面的 应用，其特征是指原儿茶醛可以制备为胶囊，软胶囊，片剂，颗粒剂，冲剂，口服液，喷雾剂， 注射剂，供临床应用。
3. 如权利要求1所述的原儿茶醛在制备防护吸烟致肺损伤的保健食品及药品方面 的应用，其特征是指原儿茶醛制备为含片，胶囊，软胶囊，片剂时，每粒含原儿茶醛60? 150mg，制备为颗粒剂，冲剂时，每包含原儿茶醛60?150mg，制备为口服液时，每瓶含原儿 茶醒60?150mg。
【文档编号】A61P11/00GK104288132SQ201410327516
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年7月1日 优先权日:2014年7月1日
【发明者】吴铁, 郑志明, 崔燎, 邹丽宜, 张新乐 申请人:广东医学院