3,7-二氨基-10h-吩噻嗪化合物的制备方法
【专利摘要】本发明总体上涉及吩噻嗪化合物领域；更具体地，本发明涉及经稳定还原的吩噻嗪化合物，特别是涉及具有如下结构式的特定3,7-二氨基-10H-吩噻嗪(DAPTZ)化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物。这些化合物用做药物，例如用作治疗τ蛋白病如阿尔茨海默氏病的药物，也可用作相应氧化锍药物(例如甲基锍氯化物，MTC)的前药。本发明还涉及DAPTZ化合物的制备方法。
【专利说明】3, 7-二氨基-1 OH-吩噻嗪化合物的制备方法
[0001] 本申请为中国发明专利申请（申请日为2007年3月28日、申请号为 200780020349. X(PCT 申请号为：PCT/GB2007/001103)、发明名称为 "3, 7-二氨基-10H-吩 噻嗪盐及其用途"）的分案申请。
[0002] 本申请与2006年3月29日提交的美国专利申请60/786, 690相关；在此整体引入 美国专利申请60/786, 690的内容，作为参考。
【技术领域】
[0003] 本发明总体上涉及吩噻嗪化合物领域；更具体地涉及一些经稳定还原的吩噻嗪化 合物，特别是涉及某些3, 7-二氨基-10H-吩噻嗪（DAPTZ)化合物，例如Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲 基-10Η-吩噻嗪-3, 7-二胺双（盐酸）化合物和Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基-10Η-吩噻嗪-3, 7-二 胺双（氢碘酸）化合物。这些化合物用作药物，例如用于治疗τ蛋白病（tauopathy)，如阿 尔茨海默氏病（Alzheimer's disease)，以及这些化合物也作为相应的氧化锍药物（例如， 甲基锍氯化物，MTC)的前药。
【背景技术】
[0004] 为了更详细地描述和充分公开本发明及本发明相关领域的现状，本申请引用了多 篇专利和出版物。各参考文献通过参考全文引入本说明书中，每篇参考文献应视为被单独 专门地引入作为参考。
[0005] 在整个说明书（包括随附权利要求书）中，除非另有说明，术语"包含（或包括）" 应理解为包括所指出的整数或步骤，或整数组或步骤组，同时也不排除任何其它整数或步 骤，或整数组或步骤组。
[0006] 必须指出的是，除非另有说明，否则说明书和随附权利要求书中出现的名词包括 其单数和复数形式。因此，"药物载体"包括两种或多种这种载体的混合物，依此类推。
[0007] 本文中的范围通常表达为从"约"一特定数值和/或至"约"另一数值。当用这样 的范围表达时，另一个实施方案包括从一特定值和/或至另一特定值。类似地，当数值前用 "约"表示其为近似值时，前缀"约"的使用应该理解为该具体数值形成了另一个实施方案。
[0008] 痴呆病的症状以蛋白结构（例如β-淀粉样蛋白斑和神经原纤维缠结（NFTs)) 在受感染的患者的脑中细胞内和/或细胞外沉淀物的进行性累积为特征。这些损伤 的出现大部分与病理性神经元纤维变性和脑萎缩有关，也和认知缺损有关（参见如 Mukaetova-Ladinska, Ε· B 等人，2000, Am. J. Pathol.，卷 157, No. 2, 623-636 页）。据披露， 甲基锍氯化物（MTC)和其它二氨基吩噻嗪类化合物在这类疾病中作为蛋白聚集抑制剂，所 述疾病即其中蛋白发生病理性聚集的疾病（参见，例如W096/30766和W002/055720)。
[0009] 甲基琉氯化物（MTC)目前用于治疗高铁血红蛋白血症（methemoglobinemia)(这 是一种当血液不能向身体需要氧的地方输送氧时发生的疾病）。MTC也用作医学染料（例 如，在手术前或手术过程中对身体特定部位进行染色）；用于诊断（例如用作指示染料检测 尿液中存在的特定化合物）；温和的泌尿器官抗菌剂；粘液表面刺激物；用于治疗和预防肾 结石；用于诊断和治疗黑素瘤。
[0010] MTC已经用来治疗疟疾，用于单独治疗（参见如Guttmann，P.和 Ehrlich, P. , 1891, "Uber die wirkung des methylenblau bei malaria,，'Berl. Klin. Woschenr.，第28卷，第953-956页）或与氯喹联合用于治疗疟疾（参见如Schirmer，H. 等人，2003，"Methylene blue as an antimalarial agent, ''Redox Report,第 8 卷，第 272-275 页；Rengelshausen, J.等人，2004，"Pharmacokinetic interaction ofchloroquine and methylene bluecombination against malaria, ''European Journal of Clinical Pharmacology,第60卷，第709-715页）。人类患有的痕疾是由如下痕原虫 属的四种原生动物中的一种导致的：恶性疟原虫（P. falciparum)、间日疟原虫（P.vivax)、 卵形疟原虫（P. ovale)或三日疟原虫（P.malariae)。所有种类疾病都是通过受感染的雌 性阿诺菲力滋蚊（Anopheles mosquito)的叮咬传播的。偶尔会通过血液传播、器官移植传 播、针头共用传播或先天地由母亲传染给胎儿。世界范围内有300-500百万疟疾感染者，每 年约有1百万人死于该疾病。然而，耐药性是主要的因素，并且对于恶性疟原虫来说耐药性 尤其显著，恶性疟原虫是导致几乎所有疟疾-相关死亡的主要疟原虫种类。目前推荐使用 的、用于预防疟疾的药物或药物联合包括氯喹/盐酸氯胍、甲氟喹、多西环素和伯氨喹。
[0011] MTC(商品名 Virostat?，Bioenvision Inc.，New York)具有强效的体外杀病毒活 性。具体地，Virostat?.在实验室级测试中能有效抗病毒如HIV和西尼罗河病毒（West Nile Virus)。西尼罗河病毒感染（WNV)是感染中枢神经系统的潜在严重疾病。大部分感染者没 有呈现出明显的症状或轻度流感样症状如发热或头痛。150人中约有1人会发展成严重症 状包括震颤、惊厥、肌无力、视觉丧失、麻木、瘫痪或昏迷。通常，WNV是由感染蚊子叮咬传播 的，但也可通过输血传播、器官移植传播、母乳喂养传播或妊辰期间由母亲传染给孩子。
[0012] Virostat?目前也出于临床试验阶段，用于治疗慢性丙型肝炎Ofepatitis C)。慢 性丙型肝炎是肝脏的病毒感染。HCV病毒是急性肝炎和慢性肝病的主要病因，所述肝病包 括肝硬化和肝癌。HCV主要是通过与人血液直接接触传播的。全世界范围内的HCV感染的 主要病因是未经筛选的输血、没有经充分灭菌的针头和注射器的重复使用。世界卫生组织 已经声明丙型肝炎是全球健康问题，世界人口的约3%感染了 HCV，并且因地域的不同而发 生显著变化。据估计，该疾病在美国的发病率为1.3%或约350万人患有该疾病。埃及约 有6200万人口，是世界上丙型肝炎发病率最高的国家，据估计该国家的约6200万人中超过 20 %感染了该疾病。
[0013] 当MTC与光联合使用时，MTC能阻止核酸（DNA或RNA)的复制。血浆、血小板和红 细胞不含有核DNA或RNA。当将MTC引入到血液成分中时，其穿过细菌细胞壁或病毒膜到 达核酸结构的内部。经光活化后，该化合物随之与病毒或细菌病原体的核酸结合，从而阻止 DNA或RNA的复制。由于MTC可使病原体灭活，因此其具有减少试验仍然检测不出来的病原 体传播带来的危险的潜力。
[0014] MTC的口服和非肠道制剂可在美国通过商业渠道获得，商品名通常为 Urolene Blue?。
【发明内容】
[0015] 本发明一方面涉及特定化合物，特别是涉及特定3，7-二氨基-10Η-吩噻嗪 (DAPTZ)化合物。
[0016] 本发明另一方面涉及含有本申请所述DAPTZ化合物和可药用载体或稀释剂的组 合物。
[0017] 本发明另一方面涉及含有本申请所述DAPTZ化合物和可药用载体或稀释剂的药 物组合物。
[0018] 本发明另一方面涉及制备药物组合物的方法，包括将本申请所述的DAPTZ和可药 用载体或稀释剂混合。
[0019] 本发明另一方面涉及逆转和/或抑制蛋白聚集（aggregation of protein)的方 法（如τ蛋白、突触核蛋白等），例如，逆转和/或抑制与神经变性疾病和/或临床痴呆有 关的蛋白聚集，所述方法包括将所述蛋白与有效量的本申请所述DAPTZ化合物接触。所述 方法可在体内进行在或体外进行。
[0020] 本发明另一方面涉及治疗或预防受试者的疾病的方法，包括向受试者给药预防有 效量的或治疗有效量的本申请所述DAPTZ化合物，优选采用药物组合物形式。
[0021] 本发明另一方面涉及本申请所述的DAPTZ化合物在通过治疗而用于治疗或预防 人体或动物体（例如疾病症状）的方法中的用途。
[0022] 本发明另一方面涉及本申请所述的DAPTZ化合物在制备用于治疗或预防疾病的 药物中的用途。
[0023] 在一个实施方案中，所述疾病为蛋白聚集疾病（disease of protein aggregation)〇
[0024] 在一个实施方案中，所述疾病为τ蛋白病，如神经病变性τ蛋白病，如阿尔茨海 默氏病。
[0025] 在一个实施方案中，所述疾病为皮肤癌如黑素瘤。
[0026] 在一个实施方案中，所述疾病为病毒、细菌或原生动物疾病症状，如丙型肝炎、 HIV、西尼罗河病毒（WNV)或疟疾。
[0027] 本发明另一方面涉及使样品（如血液或血浆样品）中的病原体灭活的方法，包括 如下步骤：将本发明所述的DAPTZ化合物加到所述样品中，然后将所述样品暴露到光下。
[0028] 本发明另一方面涉及试剂盒，该试剂盒含有（a)置于合适的容器和/或合适的包 装中的本申请所述的DAPTZ化合物，优选为药物组合物；和（b)使用说明书，例如指示如何 给药所述化合物的书面说明书。
[0029] 本领域技术人员能够理解的是，本发明某一方面涉及的特征和优选实施方案也与 本发明另一方面相关。
【专利附图】
【附图说明】
[0030] 图1是如下三种化合物各自的还原形式的百分比（％)对时间（分钟）的曲线图， 所述三种化合物为：B1 (MTC)、B3 (Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基-10H-吩噻嗪-3, 7-二胺双（盐酸）） 和Β6 (Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基-10Η-吩噻嗪-3, 7-二胺双（氢碘酸）），利用665nm处的吸光度 来测定。
[0031] 图2为三种化合物B1、B3和B6各自的还原形式的百分比（％ )对时间（分钟）的 曲线图，利用610nm处的吸光度来测定。
[0032] 图3A显示了 20分钟后三种化合物各自水溶液样品的紫外/可见光吸收波谱，所 述化合物为：B1 (空心圆点（opencircles)，最大在605nm)、B3(空心方块（open squares), 最大在660nm处）和B6 (空心三角形（open triangles)，最大在660nm处）。
[0033] 图3B显示了 3个小时后三种化合物各自水溶液样品的紫外/可见光吸收波谱，所 述化合物为：B1 (空心圆点，最大在605nm处）、B3 (空心方块，最大在605nm处）和B6 (空 心三角形，最大在605nm处）。
[0034] 图3C显示了 28个小时后三种化合物各自水溶液样品的紫外/可见光吸收波谱， 所述化合物为：B1 (空心圆点，最大在605nm处）、B3 (空心方块，最大在605nm处）和B6 (空 心三角形，最大在605nm处）。
[0035] 图4显示了 Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基-10H-吩噻嗪-3, 7-二胺双（氢溴酸）的晶体结 构。
[0036] 图5显示了 Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基-10Η-吩噻嗪-3, 7-二胺双（氢溴酸）的侧面视 图。
[0037] 图6显示了晶体中Ν，Ν，Ν'，Ν' -四甲基-10Η-吩噻嗪-3, 7-二胺双（氢溴酸）分 子的一个螺旋柱（helical column)部分。
【具体实施方式】
[0038] 甲基锍氯化物（MTC)(也已知称作次甲蓝（Methylene blue, MB);美蓝 (methylthionine chloride);四甲基硫堇氯化物(tetramethylthionine chloride)； 3, 7-双（二甲基氨基）吩噻嗪-5-铕氯化物；C. I.碱性蓝9 ;四甲基硫堇氯化物；3, 7-双 (二甲基氨基）吩噻嗪铕氯化物；亚甲蓝（Swiss blue) ;C. 1.52015 ;C. I.亚甲蓝8(C. I. Solvent Blue8);苯胺紫（aniline violet);和 Urolene Blue?)，其为具有如下结构式 的低分子量（319. 86)、水溶性、三环有机化合物：
[0039]
【权利要求】
1. 制备具有如下结构式的3, 7-二氨基-10H-吩噻嗪（DAPTZ)化合物的方法： 其中：
R1和R9各自独立地选自：-H、Ch烷基、C2_4烯基和卤代(V 4烷基； r3NA和r3NB各自独立地选自：_H、Ci4烷基、烯基和卤代c i4烷基； R?A和R?B各自独立地选自：-H、(V4烷基、C2_ 4烯基和卤代Ch烷基；以及 HX1和HX2各自独立地为质子酸； 所述方法按照下列顺序包括如下步骤： 环上的氨基脱保护（DP);和 形成盐（SF)。
2. 权利要求1所述的方法，所述方法按照下列顺序包括如下步骤： 胺取代（AS)， 环上的氨基脱保护（DP)，和 形成盐（SF)。
3. 权利要求1所述的方法，所述方法按照下列顺序包括如下步骤： 硝基还原（NR)， 胺取代（AS)， 环上的氨基脱保护（DP)，和 形成盐（SF)。
4. 权利要求1所述的方法，所述方法按照下列顺序包括如下步骤： 环上的氨基保护（AP)， 硝基还原（NR)， 胺取代（AS)， 环上的氨基脱保护（DP)，和 形成盐（SF)。
5. 权利要求1所述的方法，所述方法按照下列顺序包括如下步骤： 硝化（NO)， 环上的氨基保护（AP)， 硝基还原（NR)， 胺取代（AS)， 环上的氨基脱保护（DP)，和 形成盐（SF)。
6. 权利要求5所述的方法，其中在所述硝化（NO)步骤中，将10H-吩噻嗪转化成3, 7-二 硝基-10H-吩噻嗪：
7. 权利要求6所述的方法，其中硝化是利用亚硝酸盐进行的。
8. 权利要求4所述的方法，其中在所述环上的氨基保护（AP)步骤中，将3, 7-二硝 基-10H-吩噻嗪的环上的氨基（-NH-)转化为经保护的环上的氨基（_NRisi"):
9. 权利要求8所述的方法，其中在环上的氨基保护（AP)步骤中，环上的氨基保护采用 醋酸酯进行保护。
10. 权利要求9所述的方法，其中环上的氨基保护利用醋酸酐进行保护。
11. 权利要求3所述的方法，其中在所述硝基还原（NR)步骤中，将经保护的3, 7-二硝 基-10H-吩噻嗪的每一个硝基（-N02)转化为氨基（-NH2):
12. 权利要求11所述的方法，其中硝基还原利用二氯化锡（II)进行。
13. 权利要求2所述的方法，其中在所述胺取代（AS)步骤中，将经保护的3, 7-二氨 基-10H-吩噻嗪中的氨基（-NH2)转化为二取代的氨基：
14. 权利要求13所述的方法，其中胺取代是利用烷基卤化物进行的。
15. 权利要求1所述的方法，所述方法按照下列顺序包括如下步骤： 环上的氨基保护（AP)， 环上的氨基脱保护（DP)，和 形成盐（SF)。
16. 权利要求1所述的方法，所述方法按照下列顺序包括如下步骤： 还原（RED)， 环上的氨基保护（AP)， 环上的氨基脱保护（DP)，和 形成盐（SF)。
17. 权利要求16所述的方法，其中还原（RED)步骤和环上的氨基保护（AP)步骤同时进 行。
18. 权利要求17所述的方法，其中还原（RED)步骤和环上的氨基保护（AP)步骤的结合 如下：将3, 7-二（二取代的氨基）-锍盐还原得到相应的3, 7-二（二取代的氨基）-10H-吩 噻嗪，将3,7_二（二取代的氨基）-10H-吩噻嗪的环上的氨基（-NH-)转化为经保护的氨基 (-R isi")，得到相应经保护的3, 7-二（二取代的氨基）-10H-吩噻嗪：
〇
19. 权利要求18所述的方法，其中还原（RED)步骤和环上的氨基保护（AP)步骤的结合 是利用苯肼和醋酸酐进行的。
20. 权利要求1所述的方法，其中在所述环上的氨基脱保护（DP)步骤中，将保护基团R 从经保护的3, 7-二（二取代的氨基吩噻嗪的经保护的环上的氨基（-NR1#)上 脱除：
21. 权利要求20所述的方法，其中Risi"为醋酸酯。
22. 权利要求1所述的方法，其中在所述形成盐（SF)步骤中，从3, 7-二（二取代的氨 基）-10H-吩噻嗪化合物形成相应的盐：
23. 权利要求22所述的方法，其中形成盐利用酸进行。
24. 权利要求23所述的方法，其中所述酸为浓盐酸水溶液。
25. 权利要求1所述的方法，其中环上的氨基脱保护（DP)步骤和形成盐（SF)步骤同时 进行。
26. 权利要求25所述的方法，其中环上的氨基脱保护（DP)步骤和形成盐（SF)步骤的 结合如下：将经保护的3, 7-二（二取代的氨基吩噻嗪的保护基团脱除，得到3, 7-二 (二取代的氨基）-l〇H_吩噻嗪并形成相应的盐：
27. 权利要求1所述的方法，其中R1和R9各自独立地为-H、-Me或-Et。
28. 权利要求27所述的方法，其中R1和R9各自为-Η。
29. 权利要求1所述的方法，其中-N(R3NA) (R3NB)基团和-N(R?A) (R?B)基团相同，并选 自：-NMe2 和-NEt2。
30. 权利要求1所述的方法，其中-N(R3NA) (R3NB)基团和-N(R?A) (R7NB)基团各自 为：-NMe2。
31. 权利要求1所述的方法，其中HX1和HX2各自独立地为单质子酸。
32. 权利要求1所述的方法，其中HX1和HX2各自独立地为无机酸。
33. 权利要求1所述的方法，其中HX1和HX22各自独立地选自HC1、HBr、HI、ΗΝ0 3和H2S04。
34. 权利要求1所述的方法，其中HX1和HX2各自独立地为有机酸。
35. 权利要求1所述的方法，其中所述DAPTZ化合物以基本纯化形式提供。
36. -种制备药物组合物的方法，包括将根据权利要求1的方法获得的DAPTZ化合物与 可药用载体或稀释剂混合。
37. 权利要求36所述的方法，其中所述药物组合物为包含20至300mgDAPTZ化合物的 剂量单位。
38. 权利要求37所述的方法，其中所述剂量单位为片剂或胶囊。
39. 由权利要求1所述的方法获得的DAPTZ化合物。
【文档编号】A61P33/06GK104119294SQ201410269784
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2007年3月28日 优先权日:2006年3月29日
【发明者】克劳德.M.维希克, 珍妮特.E.里卡德, 查尔斯.R.哈林顿, 戴维.霍斯利, 约翰.M.D.斯托雷, 科林.马歇尔, 詹姆斯.P.辛克莱, 托马斯.C.巴德利 申请人:维斯塔实验室有限公司