鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉的利记博彩app
【专利摘要】本发明公开了一种鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉，发明人从马尾藻中制备了马尾藻多糖可溶性粉。试验证明，本发明马尾藻多糖可溶性粉对人工感染鸡大肠杆菌病有预防和治疗作用：在易发病的时间针对性使用，可起到预防作用；在疾病发生时使用，可达到治疗效果。用法用量：马尾藻多糖可溶性粉按100～400mg/kg体重饮水给药，1次/d，连续给药5天。本发明可作为一种防治鸡大肠杆菌病的中药制剂，具有纯天然提取、低残留、无毒副作用、防治效果良好等优点。
【专利说明】鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉
【技术领域】
[0001]本发明属于中药提取物【技术领域】，尤其涉及一种鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉。
【背景技术】
[0002]禽大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌(E.Coli)引起禽类不同类型疾病的总称，包括急性败血症、肉芽肿、囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、眼球炎、关节炎、肠炎以及肺炎等，最常见的是急性败血症和卵黄性腹膜炎。近年来，随着我国集约化养鸡业的不断发展，饲养密度增加，大肠杆菌病的发生呈上升趋势，特别是雏鸡的发病率和病死率均较高，常常因败血症而急性死亡，给养鸡业带来巨大的经济损失。因大肠杆菌的血清型很多，菌苗的免疫效果尚不理想，药物防治仍然是控制该病的主要手段。目前，临床常用抗生素和其他化学抗菌药进行治疗，但病原产生耐药性日趋严重，药物残留亦带来食品安全问题，中草药提取物多糖因其作为纯天然提取药物，低残留，低耐药，无毒副作用，防治效果良好而越来越受到人们的关注，可作为未来畜禽疾病防治的一个重点研究方向。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种纯天然提取、低残留、低耐药、无毒副作用、防治效果良好的鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案:鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉，按以下方法制备:将马尾藻多糖用蒸馏水配成质量浓度5%的溶液，置沸水浴中水浴20min ;取出冷却后，2000r/min离心10min，收集上清液；按质量比1:20在离心后残渣中加入蒸馏水，继续在沸水浴中水浴20min，冷却，2000r/min离心10min，收集上清液；合并两次上清液，过滤，充分溶解后使用喷雾干燥仪进行干燥，即得马尾藻多糖可溶性粉。
`[0005]马尾藻多糖采用水煎醇沉法制备。
[0006]水提醇沉法按以下操作进行:称取马尾藻粉末，加20倍蒸馏水拌匀，浸泡过夜，于60~90°C水浴加热6~9h,提取液经3000r/min离心10min,所得上清液用真空旋转蒸发仪浓缩到1/4体积,加入3倍量体积95%乙醇,沉淀过夜,3000r/min离心10min,弃上清液，
沉淀物真空冷冻干燥即得马尾藻多糖。
[0007]上述马尾藻多糖可溶性粉在制备防治鸡大肠杆菌病药物方面的应用。
[0008]针对鸡大肠杆菌病缺乏安全有效药物的问题，发明人从马尾藻中制备了马尾藻多糖可溶性粉。纸层析证明，其中含有吡喃多糖、木聚糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖等；红外线光谱显示马尾藻多糖主要为吡喃多糖，其多糖分子结构中存在β-2糖苷键，还存在a-D-半乳吡喃糖的特征吸收峰。试验证明，本发明马尾藻多糖可溶性粉对人工感染鸡大肠杆菌病有预防和治疗作用:在易发病的时间针对性使用，可起到预防作用；在疾病发生时使用，可达到治疗效果。用法用量:马尾藻多糖可溶性粉按100~400mg/kg体重饮水给药，I次/d，连续给药5天。本发明可作为一种防治鸡大肠杆菌病的中药制剂，具有纯天然提取、低残留、无毒副作用、防治效果良好等优点。
【具体实施方式】
[0009]实施例1
[0010]〈1>制备马尾藻多糖
[0011]称取马尾藻粉末，加20倍蒸馏水拌匀，浸泡过夜，于80°C水浴加热8h，提取液经3000r/min离心10min,所得上清液用真空旋转蒸发仪浓缩到1/4体积,加入3倍量体积95%乙醇，沉淀过夜，3000r/min离心10min,弃上清液,沉淀物真空冷冻干燥即得马尾藻多糖。
[0012]〈2>制备马尾藻多糖可溶性粉
[0013]将步骤〈1>制得的马尾藻多糖用蒸馏水配成质量浓度5%的溶液，置沸水浴中水浴20min ;取出冷却后，2000r/min离心10min，收集上清液；按质量比1:20在离心后残渣中加入蒸馏水，继续在沸水浴中水浴20min，冷却，2000r/min离心10min，收集上清液；合并两次上清液，过滤，充分溶解后使用喷雾干燥仪进行干燥，即得马尾藻多糖可溶性粉。
[0014]实施例2
[0015]基本同实施例1，仅步骤〈1>中于70°C水浴加热9h。
[0016]实施例3
[0017]基本同实施例1，仅步骤〈1>中于90°C水浴加热6h。
[0018]实施例4`[0019]基本同实施例1，仅步骤〈1>中于75 °C水浴加热8h。
[0020]将实施例1至4所得马尾藻多糖可溶性粉分别按100、200、300、400mg/kg体重饮水给药，I次/d,连续给药5天。结果:400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg组对人工感染鸡大肠杆菌肉鸡的保护率分别为80.0%、60%、50% ;预防高、中、低三组的存活率依次为86.7%、70.0%、56.7%，与感染对照组相比，存活率和保护率均明显高于感染对照组的33.3%。雏鸡于攻毒发病后按400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg体重的剂量,饮水给药，I次/d,连续5天,可使病情得到控制，并逐渐趋于缓解，48h后病鸡临床症状基本消失，食欲逐渐恢复正常，活动增加。3个剂量的治疗组对人工感染鸡大肠杆菌肉鸡的治愈率分别为86.7%,76.7%,66.7%，极显著优于感染对照组。
[0021]马尾藻多糖可溶性粉对人工感染鸡大肠杆菌肉鸡的防治试验
[0022]1.材料与方法
[0023]1.1 材料
[0024]1.1.1马尾藻多糖可溶性粉，由广西大学和广西北斗星动物保健品有限公司研制(按实施例1制备)，广西北斗星动物保健品有限公司中试生产，经广西壮族自治区兽药监察所检验符合规定。主要成分:马尾藻多糖。批号:2011011601。规格:100g/包。
[0025]1.1.2氧氟沙星可溶性粉，由河北新世纪药业有限公司生产，批准文号:兽药字(2007)030292633 ;生产日期:2012年2月13日(有效期2年)，批号:12021301，规格:100g,含氧氟沙星5g/瓶。
[0026]1.1.3菌株及标准血清
[0027]鸡大肠杆菌02株(CVCC251)与大肠杆菌“O”抗原定型血清，购自中国兽药监察所。
[0028]1.1.4其它试剂[0029]细菌微量生化反应管，购自杭州微生物试剂有限公司。普通琼脂、麦康凯琼脂、营养肉汤培养基，购自广东环凯微生物科技有限公司。鲜血琼脂平板，购自兰州麦迪生物科技公司。
[0030]1.1.5试验鸡种
[0031]未经鸡大肠杆菌疫苗免疫的I日龄健康岭南黄雏鸡300羽，雌雄兼有，由兰州华陇农牧生态科技有限公司提供。在中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所大洼山动物实验场饲养观察12d，确认鸡群无任何大肠杆菌病症状和其它病症后用于试验。
[0032]1.1.6饲料及饲养管理
[0033]饲料为不含任何抗生素的肉用仔鸡全价可溶性粉料，购自兰州正大有限公司。实验鸡按常规饲养，自由采食、饮水，鸡舍保持通风。
[0034]1.2 方法
[0035]1.2.1大肠杆菌02株复壮
[0036]将冻存的大肠杆菌02开启后接种于营养肉汤，经37°C培养20h后，取3只健康雏鸡，胸肌注射肉汤培养物1.0ml/只。无菌采集临床症状和病理变化典型的死亡鸡只的肝脏和心脏血，分别接种于普通琼脂、麦康凯琼脂和伊红-美兰琼脂上，经37°C培养20h后，观察培养的细菌菌落形态，对具有特征性的单个菌落进行革兰氏染色、镜检，最后将分离纯化的大肠杆菌接种于血斜面，37°C培养20h后作为母菌种，4°C冰箱保存备用。
[0037]1.2.2生化鉴定
[0038]将具有特征性形态和革兰氏染色阴性的菌落接种于营养肉汤，进行12项生化指标的鉴定。
[0039]1.2.3凝集试验
[0040]按照中国兽医药品监察所大肠杆菌O抗原定型血清使用说明书制备抗原和稀释血清进行凝集试验操作，明显凝集者记为阳性反应，以菌液与0.5石炭酸生理盐水混合物作对照，观察有无自凝现象。将鉴定正确的大肠杆菌02株接种于血斜面，37°C培养20h后，置4°C冰箱保存备用。
[0041]1.3鸡大肠杆菌感染模型的建立
[0042]1.3.1 预攻毒
[0043]调取斜面保存的大肠杆菌02株，接种于营养肉汤，37°C培养20h，菌液浓度调整为 5X108cfu/ml、lX108cfu/ml、0.2X108cfu/ml 和 0.04X 108cfu/ml4 个攻毒剂量组，每组10只雏鸡，胸肌注射攻毒菌液1.0ml0攻毒6h后，雏鸡开始出现精神不振、缩颈扎堆症状，12h开始有鸡只死亡，具体如下:5X108cfu/ml剂量组(12h死亡3只，24h全部死亡)、
IX 108cfu/ml (12h 死亡 2 只，24h 全部死亡)、(λ 2X 108cfu/ml (12h 死亡 I 只，24h 死亡 5只，存活4只，72h全部死亡)，0.04X 108cfu/ml (24h死亡2只，存活8只，其中濒死2只；48h存活8只，其中濒死5只； 72h死亡3只，存活5只，其中濒死2只)。
[0044]1.3.2最佳攻菌量确定
[0045]将0.2X108cfu/ml至0.04X 108cfu/ml之间的菌液浓度调整为5个浓度组，分别为 15X106cfu/ml、12.5 X 106cfu/ml UOX 106cfu/ml,7.5 X 106cfu/ml,5 X 106cfu/ml,每组10只雏鸡，胸肌注射攻毒菌液1.0ml0攻毒12h后，雏鸡开始出现精神不振、缩颈扎堆症状，100%发病，根据每组肉鸡发病和死亡情况确定最佳感染量，以O~72h内死亡率60-70%为最佳感染量，并将其作为判定标准。其次，结合生产实际中鸡大肠杆菌的死亡率，最终选择
5.2X106cfu/ml作为建立鸡大肠杆菌感染模型的攻毒剂量。
[0046]1.4正式试验分组及方法
[0047]试验鸡除正常接种疫苗(大肠杆菌病疫苗除外)，未用任何药物。在试验鸡舍饲养至7日龄，期间剔除弱雏，选择300羽健康供试鸡随机分为10组，每组30只，分组及处理方法见表1。
[0048]表1试验动物分组及处理方法
[0049]
【权利要求】
1.一种鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉，其特征在于按以下方法制备:将马尾藻多糖用蒸馏水配成质量浓度5%的溶液，置沸水浴中水浴20min ;取出冷却后，2000r/min离心10min，收集上清液；按质量比1:20在离心后残渣中加入蒸馏水，继续在沸水浴中水浴20min，冷却，2000r/min离心10min，收集上清液；合并两次上清液，过滤，充分溶解后使用喷雾干燥仪进行干燥，即得马尾藻多糖可溶性粉。
2.根据权利要求1所述鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉，其特征在于:所述马尾藻多糖采用水煎醇沉法制备。
3.根据权利要求2所述鸡用防治大肠杆菌病的马尾藻多糖可溶性粉，其特征在于所述水提醇沉法按以下操作进行:称取马尾藻粉末，加20倍蒸馏水拌匀，浸泡过夜，于60~90°C水浴加热6~9h,提取液经3000r/min离心10min,所得上清液用真空旋转蒸发仪浓缩到1/4体积,加入3倍量体积95%乙醇,沉淀过夜,3000r/min离心10min,弃上清液,沉淀物真空冷冻干燥即得马尾藻多糖。
4.权利要求1所述马尾`藻多糖可溶性粉在制备防治鸡大肠杆菌病药物方面的应用。
【文档编号】A61K31/715GK103860477SQ201410088169
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月11日 优先权日:2014年3月11日
【发明者】胡庭俊, 崔月明, 韦现色 申请人:广西大学