一种治疗动物子宫内膜炎的药物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开一种治疗动物子宫内膜炎的药物，该药物的药物活性成分为牛至。通过将牛至用水蒸气蒸馏，得到牛至挥发油，再加入药物辅料得到。本发明所用药材来源于植物，其种植及加工对环境影响很小，对环境友好，制得的药物在使用中对动物毒副作用小，无刺激性，避免了动物食品中抗生素的残留，保证了食品安全。采用本发明的药物治疗奶牛子宫内膜炎，能抑杀子宫内膜炎致病菌，促进奶牛子宫机能的恢复，治疗效果好，治愈率达86%以上，对母猪子宫内膜炎的治愈率达88%以上。
【专利说明】一种治疗动物子宫内膜炎的药物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于兽药领域，具体涉及一种治疗动物子宫内膜炎的药物及其制备方法。【背景技术】
[0002]子宫内膜炎是导致奶牛、母猪繁殖障碍的主要疾病之一，在我国奶牛、母猪中极为常见多发，发病率牛为10%~30%、猪为30%~60%，因奶牛子宫内膜炎引起的奶牛不孕症占生殖系统疾病的68.34%，患子宫内膜炎的奶牛不能正常发情、配种、受孕、产犊，从而延长胎间距，胎间距每延长一天，导致少产鲜奶和犊牛损失约合人民币20多元(未计入饲养管理、饲草料、人工、医药等费用)，全国每年因奶牛子宫内膜炎少产鲜奶损失超过2亿元，少产犊牛49.5万头，直接经济损失约10亿元。母猪因子宫内膜炎导致的损失就更加严重。目前用于治疗子宫内膜炎药物主要为抗菌药物，临床长期大剂量的子宫灌注或静脉、肌肉注射导致致病菌耐药性产生，使用剂量愈来愈大，临床疗效愈来愈低，同时还导致鲜奶中抗生素和药物残留严重超标，引起食品安全和公共卫生问题，各国研究机构都在探索新的防治药物和治疗方法。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是解决现有技术的上述缺陷，提供一种疗效好的治疗动物子宫内膜炎的植物源药物及其制备方法。
[0004]本发明实现上述目的所采用的技术方案如下:
一种治疗动物子宫内膜炎的药物，所述药物的药物活性成分为牛至。
[0005]进一步，所述牛至为牛至的挥发油部位。
[0006]进一步，所述药物的`剂型为灌注剂、软胶囊、栓剂或泡腾片。
[0007]进一步,所述动物为奶牛或母猪。
[0008]进一步，所述治疗动物子宫内膜炎的药物的制备方法:牛至用水蒸气蒸馏，得到牛至挥发油，再加入药用辅料。
[0009]本发明所用药材来源于植物，其种植及加工对环境影响很小，对环境友好，制得的药物在使用中对动物毒副作用小，无刺激性，避免了动物食品中抗生素的残留，保证了食品安全。采用本发明的药物治疗奶牛子宫内膜炎，能抑杀子宫内膜炎致病菌，促进奶牛子宫机能的恢复，治疗效果好，治愈率达86%以上，对母猪子宫内膜炎的治愈率达88%以上。
【具体实施方式】
[0010]以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。
[0011]实施例1
将牛至切成5cm左右的段，置于烧瓶中，用水蒸气蒸馏制得挥发油，将制得的挥发油按每100ml挥发油加入0.5g无水硫酸钠，静置24小时，过滤，弃去硫酸钠，将挥发油加入药用麻油中，至体积1000ml (2mg牛至挥发油/ml)，分装，灭菌，即得牛至灌注液。[0012]实施例2
按比例取明胶-甘油-水(I: 0.3: 1)，明胶用35°C水浸泡1.5小时，升温至50°〇，真空脱气30分钟，再将料液升温至62°C左右，保温2小时，加入甘油，充分搅拌后，真空脱气30分钟，胶液过滤待用。将依实施例1的方法制得的牛至挥发油2000mg加入麻油中，使其浓度为2mg/ml。将滤好的胶液压入制囊机中，调节油轴和鼓轮，使压制成的胶带厚度为
0.3_，在供料系统将牛至油麻油混合液通过喷体完成注料的同时，滚模旋压完成胶囊的封囊，制成椭圆形、粒重为Ig的软胶囊。
[0013]实施例3
取可可豆脂约130g置蒸发皿内，移置水浴上加热，至可可豆脂约2/3熔融时，加入20g牛至挥发油，搅拌均匀，取下蒸发皿，搅拌使全部熔融，注入涂过肥皂水的栓模中，凝固后整理启模，取出栓剂，每粒重1.5g。
[0014]实施例4
将羟丙甲纤维素溶于60%乙醇中，丙烯酸树酯II号溶于85%乙醇中，二者按1:1混合，将十六醇加热熔融后加入到上述混合液中，随加随搅拌，最后加吐温-80，制成混合黏合剂；取牛至挥发油、碳酸氢钠、微晶纤维素、乳糖，粉碎、过筛、混合，加混合黏合剂制粒，干燥，整粒，制成碱颗粒；取富马酸粉碎，过筛，加混合黏合剂制粒，干燥，整粒，制成酸颗粒；取酸碱颗粒按比例混匀，加硬酯酸镁压片，每片含牛至挥发油50mg的泡腾片。
[0015]一、药理、毒性试验
一)试验用药物为本发明的牛至灌注液。
[0016]二)半数致死量测定
1.预实验
小白鼠:体重18±2 g，雌雄各半，10只为一组，分为10组，分别按照不同剂量灌胃本发明的药液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%和100%死亡率剂量的所在范围。
[0017]2.正式实验
在预实验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用5个剂量(相邻剂量间呈1:0.8等比数列)；
小白鼠:体重18±2 g，雌雄各半，10只为一组，分为5组，灌胃，观察给药后动物的死亡情况，记录实验结果。应用简化几率单位换算法计算LD5tlt5
[0018]LD50 = 1.628g / kg
LD50 的 95% 可信限=1.317 ~1.939 (g / kg)
依据毒性分级标准，本制剂为低毒。
[0019]三)刺激性实验
1)兔点眼法
兔10只，每只左眼给药，右眼对照。将实验药物0.05ml滴入左眼结膜囊内，右眼滴生理盐水做对照。观察24小时，观察角膜有无红肿、充血、流泪能否恢复等情况。
[0020]兔点眼法结果:实验组和对照组相比无明显分泌增加现象，实验组眼结膜未见明显的充血、流泪、红肿等症状。 [0021 ] 2 )小白鼠腹腔注射法
小白鼠20只，雌雄各半，平均分为两组，实验组每只腹腔注射0.1~03ml受试药物，对照组每只注射同等量生理盐水，观察小白鼠有无扭体反应(腹部抵触台面，躯体向一侧歪扭)出现。
[0022]小白鼠腹腔注射法结果:实验组和对照组均未见扭体反应出现。
[0023]二、治疗母猪子宫内膜炎临床实验
收治兰州猪场患子宫内膜炎母猪76例，每次一粒依实施例3制得的牛至油栓剂，隔日一次，连用两次。最后一次用药后的第10天观察治疗效果，治愈67例，用药后炎症消失，子宫内无炎性分泌物和脓液排出，子宫恢复正常；有效6例，用药后子宫炎症明显缓解，子宫分泌物基本接近正常；无效3例，用药后炎症未见缓解，子宫分泌物没有减少。
[0024]三、治疗奶牛子宫内膜炎临床实验 I试验材料
1.1试验动物
患临床型子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛40头，分别来自兰州市城关奶牛场和花庄奶牛场。试验前均未给任何药物。试验前对奶牛进行临床检查，包括体温、脉搏、呼吸以及营养状况等，并对其胎次、病程和治疗次数进行统计。将病牛随机分配到各试验组中。
[0025]1.2试验药品
供试品:本发明的牛至灌注液。
[0026]对照药物:青霉素G钠，成都维尔京元亨药业有限公司生产。批号:20131018。
[0027]2试验方法
2.1试验分组
将临床诊断为患临床型子宫内膜炎的奶牛40头，随机分为药物治疗组(试验动物30头)和青霉素对照药物组(试验动物10头)。
[0028]2.1.1 “牛至灌注液”组
设高、中(推荐剂量)、低3个试验组，每组试验动物10头。
[0029]2.1.2药物对照组
青霉素G钠对照药物组，试验动物10头。
[0030]2.2用法用量
将药液温浴至接近体温温度，通过直肠把握法，用输精器将药液注入子宫。2次为一个疗程，经2次未治愈者改用其他药物治疗。
[0031]2.2.1 “牛至灌注液”治疗组
高、中(推荐剂量)、低3个试验组每次分别子宫灌注150ml/次、100 ml/次和50 ml/次，隔日一次，连用2次，两次为一个疗程。
[0032]2.2.2青霉素药物对照组
青霉素G钠，子宫灌注。I次/日，每次800万单位，注射用水溶解，连用2次。
[0033]2.3奶牛子宫内膜炎的诊断
2.3.1奶牛子宫内膜炎的临床诊断
患临床型子宫内膜炎奶牛临床表现为:患病奶牛从阴门中排出粘性或粘脓性炎性分泌物，拱背、努责和屡做排尿姿势，尾根及会阴部污秽不洁，趴卧时排出量增多。有时虽未见到排出炎性分泌物，但发情时粘液 中混有脓汁、脓块或脓絮。有时患病奶牛不发情或发情周期不规律。严重者患病奶牛体温升高，精神沉郁，食欲不振，反刍减弱，奶产量降低等表现。[0034]直肠检查:子宫收缩反应减弱，子宫角、子宫体不同程度增大，子宫壁厚薄不均且质地软硬程度不一致。
[0035]阴道检查:用开膣器进行阴道检查，阴道、膣部及子宫颈口可见炎性分泌物；取出开膣器时有时粘附有脓性炎性分泌物；非发情时，可见子宫颈口不同程度的开张及不同程度的充血。
[0036]2.3.2微生物学检查
对收治的患临床型子宫内I吴炎的奶牛进彳丁治疗如后的微生物学检查，治疗如在临床检查时采集病料，治疗后最后一次用药后的第10天采集病料。
[0037](I)病料采集
按以下方法采集病料:采样前先用浓度为0.2%的新洁尔灭溶液清洗患病奶牛外阴部，然后将灭菌输精管按人工授精术式送入子宫颈，采取分泌物广3 ml注入灭菌的空青霉素瓶内，封盖，贴标签，置4°C冰箱保存待检。
[0038](2)病料初步鉴定
将被检材料进行涂片，革兰氏染色，镜检。
[0039](3)培养基制备
营养肉汤、血清肉汤、普通营养琼脂、血清琼脂、鲜血琼脂、麦康凯琼脂、伊红美兰琼月旨、三糖铁琼脂、蛋白胨水和枸橼酸盐培养基等均按李健强等编写的《兽医微生物学实验实习指导》中的方法制备。
[0040](4)细菌的分离培养
将所采集的病料接种于适宜的培养基平板上，37 V培养24~48 h，从中选出单个菌落，经染色涂片检查与初次组织染色镜检观察到的菌体形态和染色特性一致的单一菌，再挑选单个菌落接种于固体琼脂斜面或鲜血琼脂斜面2管和液体培养基2管，37 °C培养24h，取出即为纯培养物。
[0041](5)鉴定
根据形态学观察结果，进行细菌生化鉴定。将上述斜面培养物接种于各种不同的生理生化试验培养基上，37 V孵育24~48 h，甚至可延长至72~96 h，观察和记录各项试验结果，对分离菌做出鉴定。
[0042]2.3.3血液学检查
对收治的患子宫内膜炎奶牛治疗前后进行红细胞(RBC)计数、白细胞(WBC)计数和红细胞压积(PCV)测定。治疗前在临床检查时采集血样，治疗后最后一次用药后的第10天采集血样。
[0043]2.4奶牛子宫内膜炎的疗效判定标准
对确诊为患临床型子宫内膜炎的奶牛按2.2的方法给药后，最后一次用药后的第10天观察治疗效果，在“以临床检查结果为准，结合实验室检查指标”的原则下，按以下疗效判定标准进行治疗效果评定。
[0044]治愈:从阴门无粘性或粘脓性分泌物排出。用开膣器打开阴道检查，阴道、膣部及子宫颈口处均无炎性分泌物，非发情时，子宫颈口关闭，呈粉红色(无充血)；直肠检查，子宫的收缩、大小及质地恢复正常；停止治疗后30天内恢复正常发情，且粘液正常，可进行人工受精。各种实验室检查均无异常。[0045]显效:从阴门无粘性或粘脓性分泌物排出。用开膣器打开阴道检查，阴道、膣部及子宫颈口处均无炎性分泌物，非发情时，子宫颈口关闭，呈粉红色(无充血)。直肠检查，子宫的收缩、大小及质地基本恢复正常；停止治疗后30天内，未恢复正常发情，或虽然恢复发情但粘液仍不正常(混有脓絮或不够清亮或韧性差)，不能进行人工受精。实验室检查，各种指标接近正常。
[0046]有效:临床症状明显改善。阴门仍有炎性分泌物排出，但排出量明显减少，且脓性分泌物比例降低。用开膣器打开阴道检查，阴道、子宫颈口仍可见少量炎性分泌物存在；非发情时，子宫颈口仍开张且充血；直肠检查，子宫的收缩反应增加、子宫体和子宫角变小，质地改善。实验室检查，大多数指标接近正常。
[0047]无效:各项检查及临床症状未见好转或有所加重。实验室检查，各种指标无明显变化。
[0048]2.5统计学处理方法
各项检测数据均用SPSS软件(SPSSV12.0版)进行统计学处理。
[0049]3、结果与分析
3.1患子宫内膜炎奶牛临床检查情况
收治和确诊的40头患临床型子宫内膜炎奶牛，经临床检查，心跳、呼吸基本正常，心跳为50~80次/min，呼吸为15~28次/min ;体温基本正常(37.8~39.5°C )，其中3头奶牛达到41°C。外观营养状况中等。
[0050]在受试的40头奶牛中，年龄为3~10岁；头胎经产奶牛11头，2~4胎经产奶牛17头；5胎以上经产12奶牛头；病程最短25天，最长的可达55天，平均为40天。
[0051]3.2细菌的分离鉴定和抑`菌效果观察
治疗前后，对40头患临床型子宫内膜炎奶牛采集的病料进行细菌分离和鉴定，并对感染情况进行统计，结果分别见表1和表2。
[0052]由表1可见，大肠杆菌的感染率为92.5%、链球菌为82.5%、葡萄球菌为率72.5%、棒状杆菌为40%、未鉴定菌为45%。大肠杆菌、链球菌和葡萄球菌仍是引起奶牛子宫内膜炎的主要病原菌。本试验所分离的未鉴定菌是否具有致病性有待于进一步研究。
[0053]由表2可见，患病奶牛经本试验药物和对照药物治疗后，细菌感染百分率显著降低(差异极显著，/X0.01)。进一步统计分析显示，高剂量组与中剂量组无显著差异Gd>0.05)，高剂量组与低剂量组和对照组之间有极显著差异(/X0.01);中剂量组与低剂量组有极显著差异Gd〈0.01)，与对照组之间差异极显著Od〈0.01);低剂量组与对照组之间无显著差异0° >0.05)。
[0054]表1治疗前患临床型子宫内膜炎奶牛感染情况统计
【权利要求】
1.一种治疗动物子宫内膜炎的药物，其特征在于，所述药物的药物活性成分为牛至。
2.根据权利要求1所述治疗动物子宫内膜炎的药物，其特征在于，所述牛至为牛至的挥发油部位。
3.根据权利要求1所述治疗动物子宫内膜炎的药物，其特征在于，所述药物的剂型为灌注剂、软胶囊、栓剂或泡腾片。
4.根据权利要求1所述治疗动物子宫内膜炎的药物，其特征在于，所述动物为奶牛或母猪。
5.权利要求1所述治疗动物子宫内膜炎的药物的制备方法，其特征在于，牛至用水蒸气蒸馏，得到牛 至挥发油，再加入药用辅料。
【文档编号】A61K36/00GK103768104SQ201410051075
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年2月14日 优先权日:2014年2月14日
【发明者】苗小楼, 潘虎, 尚小飞, 王瑜, 陈化琦, 王学智 申请人:中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所, 中国农业科学院中兽医研究所药厂