一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用的利记博彩app
【专利摘要】本发明提供一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用，所述天然多种形态砷的提取液组合物包括天然多种形态砷的提取液和以下至少一种的抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括：喜树碱、长春碱、长春新碱、紫杉醇、肿瘤坏死因子、白细胞介素、干扰素、转化生长因子-β、脂多糖、即佛波酯、腺苷酸环化酶激活剂和骨形态发生蛋白4，其中天然多种形态砷的提取液重量占所制成的药物总重量的0.001～99.9%，所述天然多种形态砷的提取液组合物可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物。本发明能够抑制乙肝和抗艾滋病等病毒，为天然砷剂的开发利用扩展了应用范围。
【专利说明】—种天然多种形态砷的提取液组合物的应用
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用。
【【背景技术】】 [0002]肿瘤是威胁人类健康的最常见恶性肿瘤，尽管放化疗和手术方法不断进展，但是病死率仍然较高。例如，作为常见类型非小细胞肺癌(non-small cell lungcancer, NSCLC)总的5年生存率仍不足15%。基于肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSC)学说认为，具有自我更新和无限增殖能力的肿癌干细胞是肿癌发生和复发的“根源”(公开文献为:杨明.纳米雄黄对肺癌和肝癌细胞及其肿瘤干细胞的凋亡诱导作用.[D].兰州大学博士学位论文:兰州.2010，PlO~15)。为此，针对抑制肿癌干细胞的药物筛选策略，将是目前肿癌治疗的一条新途径。
[0003]随着研究的深入，砷剂(包括As2O3和雄黄)又重新受到关注，一度因为毒性较大而不被重用As2O3，被发现可以通过降低癌蛋白PML水平来消除白血病干细胞LICs，其可能通过消除LICs治愈包括粒系统、淋巴系统的恶性肿瘤(公开文献为:Zhang Xff, Yan XJ, ZhouZR, et al.Arsenic Trioxide Controls the Fate of the PML-RAR Oncoprotein byDirectly Binding PML.Science[J], 2010, 328:240-243)，最近也发现，纳米雄黄可以有效诱导肺癌和肝癌干细胞发生凋亡。与As2O3相比，天然砷剂具有资源丰富、价格低廉、可以口服使用等特点，但是在多靶点、抑制肿瘤干细胞的效应、范围以及作用广度上，As2O3都表现出了更强的药物效应。这一差距，也引发国内有关学者，针对天然砷剂的药效物质是粗糙的原粉还是体内代谢砷的争论。现代分析证明:砷在动物体内的代谢产物，可能存在多种砷代谢物种，包括:148111、1々8￥、—￥、0麻￥等(公开文献如下:许琚辉，王洪玮，崔蓉等.雄黄及含雄黄中成药中砷的形态分析[J].药物分析杂志，2007，27 (3):395~396 ;张景红，李红玉.高效毛细管电泳法测定雄黄微生物炮制液中砷形态成分[J].时珍国医国药，2011.22
(2):409~410)，为此，利用现代生物技术，体外仿生代谢天然砷矿粉，产生多种与体内代谢相同或不同的形态的天然可溶解砷，组成组合物，代替价格昂贵，临床使用肝肾毒性加大，难以普及的三氧化二砷注射液，作为现有一线抗癌砷剂三氧化二砷的补充或替代品，将是天然砷剂研究的一个重要方向。
[0004]本发明人课题组的研究发现，海洋微生物代谢并溶解的各种形态砷，其在动物组织中砷蓄积毒性大幅度降低，在动物体内几乎没有分布(公开文献如下:张景红，樊秦，李红玉.雄黄及微生物炮制液砷形态和毒性分析[J].中药材，2010，11(5):283-285)。与此同时，体内外药理活性试验表明，海洋微生物多形态代砷化合物，不仅可以诱导多药耐药白血病细胞凋亡，而且可以下调MDRl/P-gp耐药基因，达到其逆转多药耐药的作用(公开文献如下:张景红，李红玉.雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞P-pg蛋白和MDRI基因表达的影响[J].中国临床药理学与治疗学，2009，14(8):855~861)。而且更重要的是，其诱导效应强于同类砷剂亚砷酸。所以，亚砷酸(As2O3在水中溶解的主要形式)并非是逆转肿瘤多药耐药作用的唯一活性物质，从天然矿物资源中开发多种形态的代谢砷作为As2O3的重要补充，将是极有应用前景的药物开发方向。
[0005]在我国虽有天然砷例如，雄黄矿(As2S3)、雌黄(As2S3)和雄黄矿(As2O3、鸡冠石)等含量丰富，而且已经作为临床药物在治疗肿瘤、寄生虫、疱疹病毒等方面取得显著的疗效。但是现代报道的制剂工艺包括水飞+醋制、纳米化和微粉化等方法，得到仅仅是混悬液，无法满足现在药物制剂的要求，本发明课题组公开中国发明200610200067.5专利，也成功利用多种冶金用嗜酸性硫杆菌，提取雄黄产生含有包含砷酸(III，V)、甲基MMA (V)和大量的辅助元素(铁和铁的化和物)的混合提取液(公开文献如下:李红玉，张景红，支德娟.矿物药中的重金属去除方法.中国专利[P]:200610200067.5,2006-1-02.)，这些方法虽然可以得到含有部分形态砷的混合液，但是由于混合有部分其他成分，目前无法确定其确切的活性成分，无法和其他药物或者辅料组成复合物，加之其体外抑制肺癌和肝癌等肿瘤细胞的作用，明显低于As2O3，而且更重要的是，目前尚未见到其可以同时抑制肿瘤干细胞、乙肝和艾滋病病毒的类似作用。
[0006]为了得到多种天然多种形态、可溶解砷的组合物， 申请人:在申请号为201010580193.4的中国发明专利公开了一种海洋微生物提取天然、多形态、抑制肿瘤的含砷化合物提取液的制备方法及其应用，其中利用 申请人:自主分离的多种海洋微生物，代谢雄黄矿(As203、As4S4)和或者雌黄矿(As2S3)得到含砷酸(AsII1、AsV)、亚砷酸(V)、一甲基砷酸MMA (II1、V)、二甲基砷酸DMA (II1、V) (DMA)、一甲基一硫代砷酸MMTA、二甲基二硫代砷酸DMDTA、三甲基胂氧(TMAO)、砷硼烧(AsB, arsenobetaine)和砷胆碱(AsC)等的多种天然多形态砷的提取液。 【
【发明内容】
】
[0007]本发明要解决的技术问题，在于提供一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用，能够抑制乙肝和抗艾滋病等病毒，为天然砷剂的开发利用扩展了应用范围。
[0008]本发明是这样实现的:
[0009]一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用，所述天然多种形态砷的提取液组合物包括天然多种形态砷的提取液和以下至少一种的抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括:喜树碱、长春碱、长春新碱、紫杉醇、肿瘤坏死因子、白细胞介素、干扰素、转化生长因子、月旨多糖、即佛波酯、腺苷酸环化酶激活剂和骨形态发生蛋白4，其中天然多种形态砷的提取液重量占所制成的药物总重量的0.001~99.9%，所述天然多种形态砷的提取液组合物可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物。
[0010]进一步地，所述天然多种形态砷的提取液组合物中含有砷酸(AsIII)、砷酸(AsV)和或一甲基砷酸MMA (III)—甲基砷酸MMA (V)和或二甲基砷酸DMA (III)、二甲基砷酸DMA (V)和或一甲基一硫代砷酸MMTA和或二甲基二硫代砷酸DMDTA和或三甲基胂氧(TMAO)和或砷硼烷(AsB)和或砷胆碱(AsC);且上述化合物的重量之和占药物总重量的0.001~99.9%。
[0011]进一步地，所述天然多种形态砷的提取液组合物可以添加药学上可以接受的辅料制备成软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、颗粒剂、注射剂或者粉针剂、口服液、微囊剂、滴丸剂、气雾剂和栓剂制剂，经口服、注射或直肠方式给药。
[0012]本发明具有如下优点:[0013](I)本发明利用具有仿生代谢能力的特殊海洋微生物对天然药物含砷矿物进行微生物提取，从而得到多种与体内代谢相同或者不同的，具有减毒、增效的多种天然形态砷组合的提取液，再加上喜树碱(camptothecin)、长春碱(VLB)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(Taxol )、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(interleukin, IL-6)、干扰素(IFN)、转化生长因子-β (TGF-β)、脂多糖(LPS)、即佛波酯(TPA)、腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)和骨形态发生蛋白4 (ΒΜΡ-4)等配伍组成组合物，该组合物显示了强效的抑制肺癌干细胞、乙肝和艾滋病病毒的药物作用，其药物效应明显高于阳性药物As2O3溶液，这一优势，为筛选新型的、可以替代As2O3的高效、低毒的砷剂提供了很好的基础。
[0014](2)本发明提取液组合物可以同时含有含砷酸(AsII1、AsV)、亚砷酸(V)和或一甲基砷酸MMA (II1、V)和或二甲基砷酸DMA (III, V) (DMA)和或一甲基一硫代砷酸MMTA和或二甲基二硫代砷酸DMDTA和或三甲基胂氧(TMAO)和或砷硼烷(AsB，arsenobetaine)和或砷胆碱(AsC)等多种可溶性砷形态成分，与纳米雄黄和采用多种冶金用嗜酸性硫杆菌制得雄黄微生物混合浸出液相比，其具有独特的抑制肿癌干细胞效应，而且本发明提取液在抑制肿瘤干细胞的同时，又具有良好的抑制乙肝和艾滋病的作用，显示了良好的药物开发前景。
【【具体实施方式】】
[0015]本发明涉及一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用，所述天然多种形态砷的提取液组合物包括天然多种形态砷的提取液和以下至少一种的抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括:喜树碱、长春碱、长春新碱、紫杉醇、肿瘤坏死因子、白细胞介素、干扰素、转化生长因子_β、脂多糖、即佛波酯、腺苷酸环化酶激活剂和骨形态发生蛋白4，其中天然多种形态砷的提取液重量占所制成的药物总重量的0.001~99.9%，所述天然多种形态砷的提取液组合物可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物。
[0016]所述天然多种形态砷的提取液组合物中含有砷酸(AsIII)、砷酸(AsV)和或一甲基砷酸MMA (III)—甲基砷酸MMA (V)和或二甲基砷酸DMA (III)、二甲基砷酸DMA (V)和或一甲基一硫代砷酸MMTA和或二甲基二硫代砷酸DMDTA和或三甲基胂氧(TMAO)和或砷硼烷(AsB)和或砷胆碱(AsC);且上述化`合物的重量之和占药物总重量的0.001~99.9%。
[0017]所述天然多种形态砷的提取液组合物可以添加药学上可以接受的辅料制备成软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、颗粒剂、注射剂或者粉针剂、口服液、微囊剂、滴丸剂、气雾剂和栓剂制剂，经口服、注射或直肠方式给药。
[0018]以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0019]实施例一、制备天然多种形态砷的提取液
[0020]按照申请号为201010580193.4，
【公开日】为2011-04-20的发明专利公开的一种海洋微生物提取天然、多形态、抑制肿瘤的含砷化合物提取液的制备方法及其应用中所述的制备方法处理雄黄矿(As2O3，含量36%、As4S4，含量62%)和或者雌黄矿(As2S3, 72%，AsC，25%)矿粉，实施方案具体包括如下步骤:
[0021]步骤1:将砷化矿粉20g，粉碎至200目后，按照1:100(重量和混合液体积比)加入lmol/L的硫酸和15%三氯化铁的组成的混合液(体积比8:2)中，然后在转速为180r/min、温度为30°C的恒温摇床中培养15d，得到提取液；将提取液用孔径为0.45 μ m的滤膜过滤，得到滤液；所述滤液在温度为20°C、磁力搅拌转速为800~lOOOr/min的条件下进行反应沉淀，2min后过滤，得到沉淀物；然后沉淀物用去离子水洗涤后，在60°C温度下干燥，即得用微生物代谢超微粉体细粉。
[0022]步骤2:称取步骤I所得超细粉0.1g,于灭菌后的250mL锥形瓶中，加入LA液体培养基90mL，接种体积分数为20%的组合优选海洋微生物菌种，然后在30°C、pH为5.0振荡速度为180r/min时摇瓶浸出15d ;定时进行处理液中含砷酸(AsII1、AsV)、亚砷酸(V)、一甲基砷酸MMA (II1、V)、二甲基砷酸DMA (II1、V) (DMA)、一甲基一硫代砷酸丽TA、二甲基二硫代砷酸DMDTA、三甲基胂氧(ΤΜΑ0)、砷硼烧(AsB, arsenobetaine)和砷胆碱(AsC)等检测，当上述多种成分的总含量达到要求后停止震荡培养，13000r/min离心后取上清液，再过滤除菌后，所得上清液就是含有天然多种形态砷的提取液。
[0023]所述的含量检测方法为:毛细管电泳分离法:条件为:BGE:PDC/1Ommo1.L—1和CTAOH/Immo1.L-1、电压25KV、温度25°C、pHll.0、紫外检测波长设定在216nm。
[0024]所述的天然多种形态砷的提取液A:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为:砷酸(V) 15%;亚砷酸(III) 3.5%;甲基砷酸(III) 1.5%,甲基砷酸(V) 12.5%;二甲基砷酸(DMA) 3 %;三甲基胂氧(TMAO) 7.5 %;砷硼烷砷硼烷(AsB ) 2 %;砷胆碱(AsC) 5 %。其制备方法按照实施例1制备，采用的砷化矿粉为雄黄矿(As2O3，含量36%、As4S4，含量62%)，优选海洋微生物组合为:A (海水产碱菌):0 (黄色短杆菌):B(粪产碱杆菌)为5:2:3 (体积比)。
[0025]所述的天然多种形态砷的提取液B:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为:砷酸(V) 7.5% ;亚砷酸(III) 3.5% ;甲基砷酸(III) 1.5%,甲基砷酸(V) 12.5% ;一甲基一硫代砷酸MMTA3.5% ;二甲基二硫代砷酸DMDTA4% ;二甲基砷酸(DMA) 3% ;三甲基胂氧(TMAO) 7.5% ;砷硼烷砷硼烷(AsB) 2% ;砷胆碱(AsC) 5%。其制备方法按照实施例1制备，采用的砷化矿粉为雄黄矿(As2O3,含量36%、As4S4,含量62%)，优选海洋微生物组合为:A(海水产碱菌):0 (黄色短杆菌):B(小克银汉霉)为8:3:5 (体积比)。
[0026]所述的天然多种形态砷的提取液C:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为:砷酸(V) 25% ；;亚砷酸(III) 12.5% ;甲基砷酸(III) 12.5%,甲基砷酸(V) 20% ；二甲基砷酸(DMA) 10% ;三甲基胂氧(TMAO) 5% ;砷硼烷砷硼烷(AsB) 5 % ;砷胆碱(AsC)
9.99%。其制备方法按照实施例1制备，采用的砷化矿粉为雄黄矿(As2O3,含量36%、As4S4,含量62%)，优选海洋微生物组合为:A (海水产碱菌):0 (黄色短杆菌):B (新月柄杆菌)为7:1:6 (体积比)。
[0027]实施例二:制备天然多种形态砷的提取液组合物
[0028]取药物包括:喜树碱(camptothecin,3umol/L)、长春碱(VLB,0.2ug/mL)、长春新 M (VCR, 0.16ug/mL)、紫杉 II (TaxoI, lumol/L)、肿瘤坏死因子(TNF, 25ng/ml)、白细胞介素(interleukin, IL-6, 10ng/ml)、干扰素(IFN, 10ng/ml)、转化生长因子-β (TGF-β，2.5ng/ml)、脂多糖(LPS，lug/mL)、即佛波酯(TPA, 20ng/ml)、腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin, 20ng/ml)和骨形态发生蛋白4 (BMP-4,10ng/ml)等中的任意一种药物溶液lOOul，加入0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(Tris-HCL)至lmL，80°C水浴煮I个小时后，离心过滤后，按照药物提取液:天然多种形态砷的提取液(1:2，体积比)，加入实施例1中所制的天然多种形态砷的提取液A或者B或者C，滤液加入裂解酶50ul (浓度为0.0167u/mL)，37°C，酶促反应2小时，收集滤液用0.45um的滤膜滤过，即得含有天然多种形态砷的提取液的组合物。
[0029]其中所述裂解酶为:B-葡萄糖苷酶、P450酶(CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4 和 CYP3A5)、谷胱甘肽 S —转移酶(GST)、N —乙酰化转移酶(NAT)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)、环氧化物水解酶(EH)、硫酸转移酶、乙酰转移酶和甲基转移酶、儿茶酚氧位甲基转移酶、酯酶、羟化酶黄素单加氧酶(FMO)、单胺氧化酶(MAO)和酮还原酶的任意一种。
[0030]其中，当天然多种形态砷的提取液组合物含有提取液A时，采用的裂解酶为B-葡萄糖苷酶，组合物中砷酸(V) 15%;亚砷酸(111)3.5%;甲基砷酸(III) 1.5%,甲基砷酸(V)12.5% ;二甲基砷酸(DMA) 3% ;三甲基胂氧(TMAO) 7.5% ;砷硼烷砷硼烷(AsB) 2% ;砷胆碱(AsC) 5%。其含砷化合物总量占提取液组合物中药物总量的50% (重量百分比)。其中，当天然多种形态砷的提取液组合物含有提取液B时，采用的裂解酶为B-葡萄糖苷酶和〇￥?3六4，组合物中含有砷酸(￥)7.5%;亚砷酸(III) 3.5%;甲基砷酸(III) 1.5%,甲基砷酸(V) 12.5%;—甲基一硫代砷酸MMTA3.5% ;二甲基二硫代砷酸DMDTA4% ;二甲基砷酸(DMA)3% ;三甲基胂氧(TMAO) 7.5% ;砷硼烷砷硼烷(AsB) 2% ;砷胆碱(AsC) 5%。其含砷化合物总量占提取液组合物中药物总量的的50% (重量百分比)。 (重量百分比)。
[0031]其中，当天然多种形态砷的提取液组合物含有提取液C时，采用的裂解酶为B-葡萄糖苷酶和CYP3A4，组合物中含有砷酸(V) 25% ;亚砷酸(III) 12.5% ;甲基砷酸(III)
12.5%,甲基砷酸(V) 20% ; 二甲基砷酸(DMA) 10% ;三甲基胂氧(TMAO) 5 % ;砷硼烷砷硼烷(AsB) 5% ;砷胆碱(AsC) 9.99%。其含砷化合物总量占提取液组合物中药物总量的的99.99% (重量百分比)。(重量百分比)。
[0032]实施例三、天然多形态砷的提取液组合物药效学评价实验例
[0033]1、以下实验例中，受试样品:含有提取液B的天然多种形态砷的提取液组合物:
[0034]组合物1:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为:砷酸(V，1.5nM)；亚砷酸(ΙΙΙ，0.7nM);甲基砷酸(ΙΙΙ，0.3nM)，甲基砷酸(V，2.5nM); 一甲基一硫代砷酸(0.7nM) ;二甲基二硫代砷酸DMDTA (0.8nM) ;二甲基砷酸(DMA，(λ 6M);三甲基胂氧(ΤΜΑ0，1.5nM);砷硼烷(AsB，0.4nM);砷胆碱(AsC，InM);每单位制剂中其他药物的含量组成经检测得到为:肿瘤坏死因子(TNF，25ng/ml)，其他药物和含砷化合物组合比为1:1;
[0035]组合物2:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为:砷酸(V，1.5nM)；亚砷酸(ΙΙΙ，0.7nM);甲基砷酸(ΙΙΙ，0.3nM)，甲基砷酸(V，2.5nM); 一甲基一硫代砷酸(0.7nM) ;二甲基二硫代砷酸DMDTA (0.8nM) ;二甲基砷酸(DMA，(λ 6M);三甲基胂氧(ΤΜΑ0，1.5nM);砷硼烷(AsB，0.4nM);砷胆碱(AsC，InM);每单位制剂中其他药物的含量组成经检测得到为:白细胞介素(interleukin, IL-6, 10ng/ml),其他药物和含砷化合物组合比为1:1;
[0036]组合物3:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为:砷酸(V，1.5nM)；亚砷酸(ΙΙΙ，0.7nM);甲基砷酸(ΙΙΙ，0.3nM)，甲基砷酸(V，2.5nM);—甲基一硫代砷酸(0.7nM) ;二甲基二硫代砷酸DMDTA (0.8nM) ;二甲基砷酸(DMA，(λ 6M);三甲基胂氧(ΤΜΑ0，
1.5nM);砷硼烷(AsB，0.4nM);砷胆碱(AsC，InM);每单位制剂中其他药物的含量组成经检测得到为:喜树碱(camptothecin, 3umol/L),其他药物和含砷化合物组合比为1:1;
[0037]阳性对照组合物I’:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为=As2O3(砷酸V, 5nM);每单位制剂中其他药物的含量组成经检测得到为:肿瘤坏死因子(TNF，25ng/ml),其他药物和含砷化合物组合比为1:1;
[0038]阳性对照组合物2’:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为=As2O3 (砷酸V, 5nM);每单位制剂中其他药物的含量组成经检测得到为:白细胞介素(interleukin,IL-6, 10ng/ml)，其他药物和含砷化合物组合比为1:1;
[0039]阳性对照组合物3’ =As2O3 (砷酸V，5nM);每单位制剂中其他药物的含量组成经检测得到为:喜树碱(camptothecin, 3umol/L),其他药物和含砷化合物组合比为1:1;
[0040]单独的提取液B组:每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为:砷酸(V, 1.5nM);亚砷酸(ΙΙΙ，0.7nM);甲基砷酸(ΙΙΙ，0.3nM),甲基砷酸(V，2.5nM);一甲基一硫代砷酸(0.7nM) ;二甲基二硫代砷酸DMDTA (0.8nM) ;二甲基砷酸(DMA，0.6M);三甲基胂氧(ΤΜΑ0,1.5nM);砷硼烷(AsB，0.4nM);砷胆碱(AsC，InM)；
[0041]1.1、含有提取液B的天然多形态砷的提取液组合物对体外培养的人肺癌细胞A549细胞的生长抑制作用
[0042]a.普通A549细胞培养:将普通A549细胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基中，在37°C，5%C02培养箱内饱和湿度条件下培养至对数生长期。
[0043]b.A549细胞球的肿瘤干细胞培养:将普通对数生长期的A549细胞消化细胞后，转化成含有201/ml B27,20ng/ml EGF, 20ng/ml bFGF的DMEM/F12培养基继续培养至对数生长期后再消化细胞，并将其制成单细胞悬液以20000个/孔的密度种植6孔板中，每孔2ml培养液，每隔2~3d半量换液，在37°C，5%C02条件下培养4_5天后，显微镜下观察细胞成球情况和形态，连续传代3次，取第3代细胞球，运用RT-PCR检测A549细胞球的肿瘤干细胞中干细胞转录因子Sox2和0ct4表达情况，筛选Sox2和0ct4表达较高的A549细胞球的肿瘤干细胞进入细胞增殖实验。
`[0044]c.本发明天然多形态砷的提取液组合物抑制A549细胞球的肿瘤干细胞增殖作用评价:
[0045]不同提取液抑制A549细胞及细胞球增殖能力检测:将A549细胞和A549细胞球制成单细胞悬液按I X IO4/孔的密度分别加入96孔板，每孔IOOul，分别加入提取液B、含有提取液B组合物1、2和3以及含有As2O3溶液的阳性组合物I’、2’和3’，对照组只加培养基在37°C，5%C02条件下培养72h后，加90uL基础培养基和MTTIOuL (5mg/ml)，37°C，4h，除去培养液，每孔加入150ul DMS0，摇晃IOmin酶标仪测定光密度值[D (490)]，采用1git法计算组合物半数抑制浓度IC50，结果判定标准:有效IC50〈10nM，有效，IC50>10nM，无效，IC50结果见表1所示:
[0046]结果:本发明含有提取液B的天然多形态砷的提取液组合物中，组合物1、2和3都能够对体外培养的人肺癌细胞A549和A549细胞球的肿瘤干细胞的生长，具有良好的抑制增殖作用，而且在含砷总量相同的条件下，与阳性As2O3对照组合物1’、2’和3’组相比，组合物1、2和3其抑制作用强于阳性对照组合物组。而在另一方面，与单独的提取液B组相t匕，虽然组合物1、2和3组，其含砷总量降低了 50%，但是其药物效应却高于单独的提取液B组，据此说明，提取液B和其他药物组合后，形成的本发明组合物，含砷量降低，而其抑制肿瘤干细胞的药物效应则更佳，明显高于单一的天然多形态砷的提取液，具体结果表1:
[0047]表1含有提取液B的天然多形态砷的提取液组合物对人肺癌[0048]A549细胞和A549细胞球的肿瘤干细胞的生长抑制作用
【权利要求】
1.一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用，其特征在于:所述天然多种形态砷的提取液组合物包括天然多种形态砷的提取液和以下至少一种的抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括:喜树碱、长春碱、长春新碱、紫杉醇、肿瘤坏死因子、白细胞介素、干扰素、转化生长因子-β、脂多糖、即佛波酯、腺苷酸环化酶激活剂和骨形态发生蛋白4，其中天然多种形态砷的提取液重量占所制成的药物总重量的0.0Ol~99.9%，所述天然多种形态砷的提取液组合物可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物。
2.如权利要求1所述的一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用，其特征在于:所述天然多种形态砷的提取液组合物中含有砷酸(AsIII)、砷酸(AsV)和或一甲基砷酸MMA(III) 一甲基砷酸MMA (V)和或二甲基砷酸DMA (III)、二甲基砷酸DMA (V)和或一甲基一硫代砷酸MMTA和或二甲基二硫代砷酸DMDTA和或三甲基胂氧(TMAO)和或砷硼烷(AsB)和或砷胆碱(AsC);且上述化合物的重量之和占药物总重量的0.001~99.9%。
3.如权利要求1所述的一种天然多种形态砷的提取液组合物的应用，其特征在于:所述天然多种形态砷的提取液组合物可以添加药学上可以接受的辅料制备成软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、颗粒剂、注射剂或者粉针剂、口服液、微囊剂、滴丸剂、气雾剂和栓剂制剂，经口服、注射或直肠方式给药。`
【文档编号】A61P31/20GK103768583SQ201410003136
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年1月2日 优先权日:2014年1月2日
【发明者】张景红, 杨礼 申请人:华侨大学