一种抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白楤木提取物的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白楤木提取物的制备方法，将长白楤木干燥的芽或叶或根粉末加入8-10倍（V/W）量的70%（V/V）乙醇于60℃浸提2-3h，过滤，滤渣再分别用8倍（V/W）量与6倍（V/W）量的70%（V/V）乙醇于60℃浸提2h各一次，合并三次滤液，回收乙醇至无醇味，按上样液与树脂用量为2.5：1（V/V）的比例，以AB-8大孔吸附树脂进行吸附，先以3倍柱体积量的50%（V/V）乙醇洗脱除杂，然后以3倍柱体积量的70%（V/V）乙醇洗脱，收集70%（V/V）乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩经真空干燥，得到长白楤木提取物，该提取物具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性。
【专利说明】一种抑制C1-葡萄糖苷酶活性的长白锪木提取物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药产品研究开发【技术领域】，特别是涉及一种抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白惚木提取物的制备方法。
【背景技术】
[0002]长白樹JfAraliacon tinen talisKi tagawa又名草本龙芽、草本刺老鸦(朝语意译)，具有食用、保健及医药等众多功能，是稀有的高档珍贵野生植物。其春季长出的芽可以食用，具有很好的食味和独特的清香，介于刺老鸦和香椿芽之间。其根或根皮可入药，具祛风燥湿、解热镇痛、疏风活血、利尿解毒、镇惊补虚等功能，而其叶繁盛，可作观赏植物。
[0003]α -葡萄糖苷酶存在于小肠刷状缘膜的近腔上皮细胞内，主要作用是使淀粉、糊精、麦芽糖和蔗糖等降解为单糖。α-糖苷酶抑制剂是目前研究较多的糖尿病口服降糖药物，作用在小肠粘膜刷状缘，可通过延缓碳水化合物在肠道的消化和吸收，抑制餐后血糖水平的升高，同时在一定程度上能降低空腹血糖，对糖尿病特别是2型糖尿病的预防和治疗具有积极作用。研究表明，该酶抑制剂不仅可防治糖尿病、肥胖症，还具有抗肿瘤和AIDS病毒的作用，因此研究α -葡萄糖苷酶抑制作用，具有重要的临床意义。
[0004]筛选α -葡萄糖苷酶抑制剂大多以4-硝基苯-a _D_吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物，测定α-葡萄糖苷酶抑制活性。目前关于长白惚木对于α-葡萄糖苷酶的抑制活性及该提取物的制备工艺尚无报道，研制一种抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白惚木提取物，并以临床应用效果好的阿卡波糖(拜糖平，Acarbose)为对照，评价该提取物对α -葡萄糖苷酶的抑制活性，可为更好地开发利用长白惚木在防治糖尿病、肥胖症、抗肿瘤和AIDS病毒方面提供依据和广阔的应用前景。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白惚木提取物的制备方法，研制一种抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白惚木提取物，并以临床应用效果好的阿卡波糖(拜糖平，Acarbose)为对照，评价该提取物对α -葡萄糖苷酶的抑制活性，可为更好地开发利用长白惚木在防治糖尿病、肥胖症、抗肿瘤和AIDS病毒方面提供依据和广阔的应用前景。
[0006]本发明提供的抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白惚木提取物的制备方法如下:
(1)将长白惚木干燥的芽或叶或根的粉末加入8-10倍(V/W)量的70%(V/V)乙醇于60°C浸提2-3h，过滤，滤渣再分别用8倍(V/W)量与6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次滤液；
(2)将步骤(1)所得滤液回收乙醇至无醇味，按上样液与树脂用量为2.5:1 (V/V)的比例，以AB-8大孔吸附树脂进行吸附，以3倍柱体积量的50% (V/V)乙醇洗脱除杂，然后以3倍柱体积量的70% (V/V)乙醇洗脱，收集70% (V/V)乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩经真空干燥，得到长白惚木提取物。[0007]本发明的积极效果:提供了一种抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白惚木提取物，并以临床应用效果好的阿卡波糖(拜糖平，Acarbose)为对照，评价该提取物对α -葡萄糖苷酶的抑制活性，可为更好地开发利用长白惚木在防治糖尿病、肥胖症、抗肿瘤和AIDS病毒方面提供依据和广阔的应用前景。工艺操作简单、提取物活性高。
【具体实施方式】
[0008]实施例1
(1)将长白惚木芽或叶或根自然阴干，粉碎后过40目筛，取100g粉末加入10倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h，过滤，滤渣再分别用8倍(V/W)量与6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次滤液； (2)将步骤(1)所得滤液回收乙醇至无醇味，按上样液与树脂用量为2.5:1 (V/V)的比例，吸附流速为lmL.min-1,以AB-8大孔吸附树脂进行吸附；以3倍柱体积量的50% (V/V)乙醇洗脱除杂，然后以3倍柱体积量的70% (V/V)乙醇洗脱，收集70% (V/V)乙醇洗脱液，洗脱流速均设置为lmLiirT1 ;将70% (V/V)乙醇洗脱液回收乙醇并浓缩经真空干燥，得到长白惚木提取物。
[0009]实施例2
(1)将长白惚木芽或叶或根自然阴干，粉碎后过40目筛，取100g粉末加入8倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提3h，过滤，滤渣再分别用8倍(V/W)量与6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次滤液；
(2)将步骤(1)所得滤液回收乙醇至无醇味，按上样液与树脂用量为2.5:1 (V/V)的比例，吸附流速为lmL.min-1,以AB-8大孔吸附树脂进行吸附；以3倍柱体积量的50% (V/V)乙醇洗脱除杂，然后以3倍柱体积量的70% (V/V)乙醇洗脱，收集70% (V/V)乙醇洗脱液，洗脱流速均设置为lmL -min-1 ;将70% (V/V)乙醇洗脱液回收乙醇并浓缩经真空干燥，得到长白惚木提取物。
[0010]长白惚木提取物抑制α -葡萄糖苷酶活性的测定
1.实验材料与试剂
长白惚木，沈阳农业大学园艺学院实验基地提供。
[0011]对-硝基苯酚(ΡΝΡ，购自上海国药化学试剂公司)；4_硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)、阿卡波糖(Acarbose)、α -葡萄糖苷酶均购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司；其他均为国产分析纯，水为双蒸水。
[0012]2.α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法
2.1标准曲线的制作
用 0.lmol.1 磷酸缓冲液(pH 6.8)配置 150 μ mol.L_1PNP,稀释成 100，75，50，30，15,0 μ mol.I71。分别取7种不同浓度的ΡΝΡ溶液各lmL,加入lmol.L_1Na2C03溶液2mL,混匀，在400nm下测定吸光度A，绘制标准曲线。
[0013]2.2酶标准活性的测定
反应体系[磷酸缓冲液(pH 6.8) ,0.lmol ?L'0.5mL ；PNPG, 5 mmol *^,0.4mL ;酶液，
0.lmL]在37°C温育20min后，加入lmol溶液2mL终止反应，混匀，以不加酶液为
空白(缓冲液体积相应增加)，在400nm下测定吸光度A。[0014]2.3长白惚木提取物对α _葡萄糖苷酶抑制活性的测定
除反应体系中分别加入不同浓度的长白惚木提取物溶液和Acarbose溶液0.lmL外(缓冲液体积相应减少)，其他按照2.2项下进行，测定400 nm下吸光度A。
[0015]2.4酶活性抑制率的计算
1个α-葡萄糖苷酶活力单位(U)定义为:ρΗ 6.8，37°〇时1 min释放1 μ mol ΡΝΡ的酶量。则酶活性抑制率(%)为:
[酶标准活性(U)-抑制剂作用下酶活性(U) ]/酶标准活性(U) X 100 %
3.长白惚木提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性测定结果表1长白惚木提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性的测定结果
【权利要求】
1.一种抑制α-葡萄糖苷酶活性的长白惚木提取物的制备方法，其特征在于步骤如下:(1)将长白惚木干燥的芽或叶或根粉末加入8-10倍(V/W)量的70%(V/V)乙醇于60°C浸提2-3h，过滤，滤渣再分别用8倍(V/W)量与6倍(V/W)量的70% (V/V)乙醇于60°C浸提2h各一次，合并三次滤液；(2)将步骤(1)所得滤液回收乙醇至无醇味，按上样液与树脂用量为2.5:1 (V/V)的比例，以AB-8大孔吸附树脂进行吸附，以3倍柱体积量的50% (V/V)乙醇洗脱除杂，然后以3倍柱体积量的70% (V/V)乙醇洗脱，收集70% (V/V)乙醇洗脱液，回收乙醇并浓缩经真空干燥，得到长白惚木提取物。
【文档编号】A61P35/00GK103720732SQ201410002931
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2014年1月6日 优先权日:2014年1月6日
【发明者】冯颖, 李斌, 林丽丽, 张彬 申请人:沈阳农业大学