用于治疗成胶质细胞瘤的组合疗法
【专利摘要】本发明关注治疗诊断有成胶质细胞瘤的患者的方法，包括对所述患者施用包含有效量的抗VEGF抗体和化疗剂的疗法。
【专利说明】用于治疗成胶质细胞瘤的组合疗法
[0001] 对相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求来自2012年8月7日提交的美国临时申请No. 61/680672,2012年 10月16日提交的美国临时申请No.61/714438,和2013年2月5日提交的美国临时申请 No. 61/760763的权益，其各自通过提述并入本文用于所有目的。 发明领域
[0003] 本发明一般关注用抗VEGF抗体治疗疾病和病理学状况。更具体地，本发明关注与 一种或多种别的抗肿瘤治疗剂组合使用抗VEGF抗体来治疗易感于或诊断有成胶质细胞瘤 的人患者。
[0004] 发明背景
[0005] 胶质瘤占据所有恶性脑和CNS肿瘤的81 %。成胶质细胞瘤-世界卫生组织（WHO) IV级星形细胞瘤-占据恶性胶质瘤的60 %至70%，且仍然是最具攻击性的胶质瘤亚型。它 大多发生在成人中（诊断时的中值年龄：64岁）且其发病率在美国估测为3. 05/100' 000， 而在欧洲低于2/100' 000。成胶质细胞瘤的预后仍然特别差，1年和5年总体存活分别为 29%和 3%(CentralBrainTumorRegistryoftheUnitedStates(2005)，（CBTRUS; http://www.cbtrus.org)〇
[0006] 尽管已在成胶质细胞瘤的治疗中取得了一些进展，但该疾病面临着高度未满足的 医疗需要和有限的治疗选项。具体地，贝伐单抗（bevacizumab)(Avastin?)，一种祀向促血 管生成性血管内皮生长因子（VEGF)的单克隆抗体，具有重要的治疗潜力。
[0007] 发明概述
[0008] 本发明提供用于治疗诊断有成胶质细胞瘤的患者，包括新诊断有成胶质细胞瘤的 患者的方法和试剂盒。
[0009] 本发明的一个实施方案提供治疗诊断有成胶质细胞瘤的患者的方法，包括对所述 患者施用包含有效量的抗VEGF抗体、有效量的化疗剂和放疗的疗法，其中与接受所述化疗 剂而没有抗VEGF抗体的成胶质细胞瘤患者相比，所述治疗延长所述患者的中值无进展存 活时间。在一个实施方案中，所述患者具有〈2的WHO体能状态（performancestatus)。在 一些实施方案中，所述化疗剂是替莫挫胺（temozolomide)。在一些实施方案中，有效量的替 莫唑胺是口服施用的mg/m2。在一些实施方案中，替莫唑胺的有效量是口服施用的200mg/ m2。在一些实施方案中，所述抗VEGF抗体结合A4. 6.1表位。在一些实施方案中，所述抗 VEGF抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述抗VEGF抗体包含可变重链（VH)和可变轻 链（礼），其中所述￥11具有5￡〇10勵:2的氨基酸序列且所述￥1具有5￡〇10勵 ：1的氨基 酸序列。在一些实施方案中，所述抗VEGF抗体的所述有效量是每两周静脉内10mg/kg，例如 最初在90分钟内静脉内施用，随后在60分钟内然后在30分钟内输注施用。在一些实施方 案中，所述抗VEGF抗体的所述有效量是每三周静脉内15mg/kg，例如最初在90分钟内静脉 内施用，随后在60分钟内，然后在30分钟内输注施用。在上文描述的方法中，所述抗VEGF 抗体在第一个周期首先对所述患者施用，然后所述抗VEGF抗体的随后施用在所述化疗剂 之前或之后。在另一个实施方案中，所述抗VEGF抗体与所述化疗剂和放疗同时施用。在一 些实施方案中，中断对患者施用类固醇。
[0010] 在上文描述的用于治疗诊断有成胶质细胞瘤的患者的方法中，与接受所述化疗剂 而未接受所述抗VEGF抗体的成胶质细胞瘤患者相比，所述中值无进展存活时间延长了约 4. 4个月，危害比（hazardratio,HR)等于0.64。在另一个实施方案中，与接受所述化疗剂 而未接受所述抗VEGF抗体的成胶质细胞瘤患者相比，所述中值无进展存活时间延长了至 少4个月或更长，危害比（HR)等于0.64。在另一个实施方案中，与接受所述化疗剂而未接 受所述抗VEGF抗体的成胶质细胞瘤患者相比，所述中值无进展存活时间延长了至少4个月 或更长，危害比（HR)为约0.55至约0.74。。在另一个实施方案中，与接受所述化疗剂而未 接受所述抗VEGF抗体的成胶质细胞瘤患者相比，所述中值无进展存活时间延长了约4. 4个 月，危害比（HR)为约0. 55至约0. 74。在上文所述方法的又一个实施方案中，患者低于65 岁龄。在上文所述方法的再一个实施方案中，患者等于或大于65岁龄。在上文所述方法的 一个实施方案中，患者具有约4周的无治疗间期（treatfreeinterval,TFI)。
[0011] 本发明的另一个实施方案提供包含基本结合表位A4. 6. 1的抗VEGF抗体、化疗剂 和包装插页或标签的试剂盒，所述包装插页或标签具有治疗诊断有成胶质细胞瘤的患者的 说明书，包括对所述患者施用有效量的抗VEGF抗体和化疗剂，其中与接受所述化疗剂而未 接受所述抗VEGF抗体的成胶质细胞瘤患者相比，所述治疗延长所述患者的中值无进展存 活时间。在上文所述试剂盒的另一个实施方案中，所述抗VEGF抗体是贝伐单抗且所述化疗 剂是替莫唑胺。
[0012] 附图简述
[0013] 图1显示双臂III期研宄设计治疗次序，如实施例1中更详细披露的。研宄治疗在 成胶质细胞瘤的减肿块手术（debulkingsurgery)或活组织检查后4周至7周之间开始， 且包括3个不同阶段：同时期（其中10mg/kg贝伐单抗或安慰剂与替莫唑胺和放疗组合每 两周施用，接着是28天的治疗间断），维持期（其中10mg/kg贝伐单抗或安慰剂与替莫唑胺 组合每两周施用），和单一疗法期（其中15mg/kg贝伐单抗或安慰剂每三周施用，直至疾病 进展）。
[0014] 图2显示来自III期AVAglio试验的PFS的KaplanMeier曲线。
[0015] 发明详述
[0016] 定义
[0017]"抗血管发生剂"或"血管发生抑制剂"指直接或是间接抑制血管发生 (angiogenesis)、血管生成（vasculogenesis)或不想要的血管通透性的小分子量物 质、多核苷酸、多肽、分离的蛋白质、重组蛋白、抗体或其偶联物或融合蛋白。应当理解， 抗血管发生剂包括那些结合并阻断血管发生因子或其受体的血管发生活性的药剂。例 如，抗血管发生剂是整篇说明书定义的或本领域已知的血管发生剂的抗体或其它拮抗 剂，例如但不限于VEGF-A的抗体、VEGF-A受体（例如KDR受体或Flt-1受体）的抗体、 VEGF-trap、抗FTOFR抑制剂诸如Gleevec?(ImatinibMesylate)。抗血管发生剂还包 括天然血管发生抑制剂，例如血管他丁（angiostatin)、内皮他丁（endostatin)等。参 见例如Klagsbrun和D'Amore，Annu.Rev.Physiol. 53:217-39(1991);Streit和Det mar, 0ncogene22:3172-3179 (2003)(例如列举恶性黑素瘤中抗血管发生疗法的表3); Ferrara&Alitalo,Nature Medicine 5(12):1359-1364(1999) ;Tonini等，Oncogene 22:6549-6556(2003)(例如列举已知抗血管发生因子的表2) ;Sato, Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206(2003)(例如列举临床试验中所使用的抗血管发生剂的表1)。
[0018] 术语"抗体"在本文中以最广义使用，且涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆 抗体、多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）、及抗体片段，只要它们展现出期望 的抗原结合活性。
[0019] 术语"腹水"或腹部腹水指在腹部中过量累积的流体。腹水流体经常含有自由漂 移的从癌性生长脱断的癌细胞。腹部腹水的呈现通常指示与没有腹部腹水的患者相比更具 症状性的疾病或更差的结果。
[0020] 术语"贝伐单抗"，又称为"rhuMAbVEGF"或"Avastin?"，是依照Presta等，Cancer Res. 57:4593-4599(1997)产生的重组人源化抗VEGF单克隆抗体。它涵盖突变的人IgGl框 架区和来自鼠抗人VEGF单克隆抗体A. 4. 6. 1 (其阻断人VEGF对其受体的结合）的抗原结 合互补决定区。贝伐单抗的大约93%的氨基酸序列（包括大部分框架区）衍生自人IgGl， 而大约7%的序列衍生自鼠抗体A4. 6.1。贝伐单抗与由杂交瘤ATCCHB10709产生的单克 隆抗VEGF抗体A4. 6. 1结合相同的表位。
[0021] 术语"癌症"和"癌性"指或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调控的生 理疾患。此定义中包括良性和恶性癌症以及休眠肿瘤（dormanttumor)或微转移。癌症 的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤（blastoma)、肉瘤、和白血病。此类癌症的更具 体例子包括但不限于，成胶质细胞瘤（GBM)，包括例如原神经（proneural)GBM、神经GBM、经 典GBM和间充质GBM。其他癌症包括，例如乳腺癌、鳞状细胞癌、肺癌（包括小细胞肺癌、非 小细胞肺癌、肺腺癌、和肺鳞癌）、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌（gastricorstomachcancer) (包括胃肠癌）、胰腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肝癌（livercancer)、膀胱癌、肝瘤（hepatoma)、 结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌（kidneyorrenalcancer)、肝 癌（livercancer)、前列腺癌、夕卜阴癌、甲状腺癌、肝癌（hepaticcarcinoma)、及各种类型 的头和颈癌，以及B细胞淋巴瘤（包括低级/滤泡性非何杰金（Hodgkin)氏淋巴瘤（NHL)、 小淋巴细胞性（SL)NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级 成淋巴细胞性NHL、高级小无核裂细胞性NHL、贮积病（bulkydisease)NHL、套细胞淋巴瘤、 AIDS相关淋巴瘤、和瓦尔登斯特伦氏（Waldenstrom)巨球蛋白血症）、慢性淋巴细胞性白血 病（CLL)、急性成淋巴细胞性白血病（ALL)、毛细胞性白血病、慢性成髓细胞性白血病、和移 植后淋巴增殖性病症（PTLD)、以及与瘢痣病（phakomatoses)、水肿（诸如与脑瘤有关的） 和梅格斯（Meigs)氏综合征有关的异常血管增殖。
[0022] "化疗剂"指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的例子包括可用于治疗癌 症的化学化合物。化疗剂的例子包括烧化剂类（alkylatingagents)，诸如替莫挫胺，烧 化剂达卡巴嘆（acarbazine)的咪挫四嘆衍生物。化疗剂的其他例子包括，例如帕利他 塞（paclitaxel)或托泊替康（topotecan)或聚乙二醇化的脂质体多柔比星（pegylated liposomaldoxorubicin) (PLD)。化疗剂的其他例子包括烧化剂类（alkylating agents)，诸如塞替派（thiotepa)和CYTOXAN? 环磷酰胺（cyclophosphamide);磺 酸烧基醋类（alkylsulfonates)，诸如白消安（busulfan)、英丙舒凡（improsulfan) 和哌泊舒凡（piposulfan);氮丙啶类（aziridines)，诸如苯佐替派（benzodepa)、 卡波醌（carboquone)、美妥替派（meturedepa)和乌瑞替派（uredepa);乙撑亚胺类 (ethylenimines)和甲基蜜胺类（methylamelamines)，包括六甲蜜胺（altretamine)、三 乙撑蜜胺（triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺（triethylenephosphoramide)、三乙撑 硫代磷酰胺（triethylenethiophosphoramide)和三轻甲蜜胺（trimethylolomelamine); 番蒸枝内醋类（acetogenins)(尤其是布拉他辛（bullatacin)和布拉他辛酮 (bullatacinone));喜树喊(camptothecin);苔藓抑素(bryostatin)；callystatin； CC_1065(包括其阿多来新（adozelesin)、卡折来新（carzelesin)和比折来新（bizelesin) 合成类似物）；隐藻素类（cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8);多拉司他 汀（dolastatin) ;duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1);艾權塞洛素 (eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;海绵抑素（spongistatin);氮芥类 (nitrogenmustards)，诸如苯丁酸氮芥（chlorambucil)、萘氮芥（chlornaphazine)、胆 磷酰胺（cholophosphamide)、雌莫司汀（estramustine)、异环磷酰胺（ifosfamide)、双氯 乙基甲胺（mechlorethamine)、盐酸氧氮芥（mechlorethamineoxidehydrochloride)、 美法仑（melphalan)、新氮芥（novembichin)、苯芥胆留醇（phenesterine)、泼尼莫 司汀（prednimustine)、曲磷胺（trofosfamide)、尿啼啶氮芥（uracilmustard);亚 硝脲类（nitrosoureas)，诸如卡莫司汀（carmustine)、氯脲菌素（chlorozotocin)、 福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀（lomustine)、尼莫司汀（nimustine)和雷莫司 汀（ranimustine);抗生素类，诸如稀二炔类（enediyne)抗生素（例如加利车霉素 (calicheamicin)，尤其是加利车霉素yll和加利车霉素〇11(参见例如Agnew(1994) Chem.Intl.Ed.Engl.33:183_186);蒽环类抗生素（dynemicin)，包括dynemicinA;二麟 酸盐类（bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐（clodronate);埃斯波霉素（esperamicin); 以及新制癌素（neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白稀二炔类抗生素发色团）、阿 克拉霉素（aclacinomycin)、放线菌素（actinomycin)、氨茴霉素（anthramycin)、偶氮 丝氨酸（azaserine)、博来霉素（bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、 洋红霉素（carminomycin)、嗜癌霉素（carzinophilin)、色霉素（chromomycin)、方文线 菌素D(dactinomycin)、柔红霉素（daunorubicin)、地托比星（detorubicin)、6_ 二 氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN?多柔比星（doxorubicin)(包括吗啉代多柔比 星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星）、表柔比星（epirubicin)、 依索比星（esorubicin)、伊达比星（idarubicin)、麻西罗霉素（marcellomycin)、丝裂霉素 类（mitomycins)诸如丝裂霉素C、霉酷酸（mycophenolicacid)、诺拉霉素（nogalamycin)、 橄榄霉素（olivomycin)、培洛霉素（peplomycin)、泊非霉素（potfiromycin)、卩票呤 霉素（puromycin)、三铁阿霉素（quelamycin)、罗多比星（rodorubicin)、链黑菌 素（streptonigrin)、链佐星（streptozocin)、杀结核菌素（tubercidin)、乌苯美司 (ubenimex)、净司他丁（zinostatin)、佐柔比星（zorubicin);抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤 (methotrexate)和5-氟尿啼啶（5-FU);叶酸类似物，诸如二甲叶酸（denopterin)、甲氨 蝶呤（methotrexate)、蝶罗呤（pteropterin)、三甲曲沙（trimetrexate);卩票呤类似物，诸 如氟达拉滨（fludarabine)、6_ 疏基卩票呤（mercaptopurine)、硫咪卩票呤（thiamiprine)、 硫鸟卩票呤（thioguanine);啼啶类似物，诸如安西他滨（ancitabine)、阿扎胞苷 (azacitidine)、6_ 氮尿苷（azauridine)、卡莫氟（carmofur)、阿糖胞苷（cytarabine)、 双脱氧尿苷（dideoxyuridine)、去氧氟尿苷（doxifluridine)、依诺他滨（enocitabine)、 氟尿苷（floxuridine);雄激素类，诸如卡鲁睾酮（calusterone)、丙酸屈他雄酮 (dromostanolonepropionate)、表硫雄酉享（epitiostanol)、美雄焼（mepitiostane)、 睾内醋（testolactone);抗肾上腺类，诸如氨鲁米特（aminoglutethimide)、米托坦 (mitotane)、曲洛司坦（trilostane);叶酸补充剂，诸如亚叶酸（folinicacid);醋葡 醛内醋（aceglatone);醛磷酰胺糖苷（aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酸 (aminolevulinicacid);恩尿啼啶（eniluracil);安 口丫啶（amsacrine);bestrabucil; 比生群（bisantrene);依达曲沙（edatraxate);地磷酰胺（defosfamide);地美可辛 (demecolcine);地口丫酉昆（diaziquone);elformithine;依利醋鞍（elliptiniumacetate)； 埃坡霉素（epothilone);依托格鲁（etoglucid);硝酸镓；轻脲（hydroxyurea);香 蒴多糖（lentinan);氯尼达明（lonidamine);美登木素生物碱类（maytansinoids)， 诸如美登素（maytansine)和安丝菌素（ansamitocin);米托胍腙（mitoguazone); 米托蒽醌（mitoxantrone);莫呢达醇（mopidamol);二胺硝卩丫啶（nitracrine);喷 司他丁（pentostatin);蛋氨氮芥（phenamet);卩比柔比星（pirarubicin);洛索蒽醌 (losoxantrone);鬼白酸（podophyllinicacid) ;2_ 乙基酰餅（ethylhydrazide);丙卡 巴餅（procarbazine) ;PSK(K多糖复合物（JHSNaturalProducts，Eugene，Oreg.);雷 佐生（razoxane);根霉素（rhizoxin);西佐喃（sizofuran);螺方定锗（spirogermanium); 细交链孢菌酮酸（tenuazonicacid);三亚胺醌（triaziquone) ;2,2'，2"-三氯三乙 胺；单端孢菌素类（trichothecenes)(尤其是T-2毒素、琉孢菌素（verrucarin)A、杆孢 菌素（roridin)A和蛇行菌素（anguidin));乌拉坦（urethan);长春地辛（vindesine); 达卡巴嗪（dacarbazine);甘露莫司汀（mannomustine);二溴甘露醇（mitobronitol);二 溴卫矛醇（mitolactol);呢泊溴焼（pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷（arabinoside) ("Ara-C"）；环磷酰胺（cyclophosphamide);塞替派（thiotepa);类紫杉醇类（taxoids)， 例如TAXOL? 帕利他塞（paclitaxel) (Bristol-MyersSquibbOncology，Princeton，N. J.)、ABRAXANE?不含克列莫佛（Cremophor)、清蛋白改造纳米颗粒剂型帕利他塞 (AmericanPharmaceuticalPartners，Schaumberg，Illinois)和TAXOTERE? 多西他 M(doxetaxel) (Rhone"PoulencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥（chlorambucil)； GEMZAR?吉西他滨（gemcitabine) ;6-硫鸟卩票呤（thioguanine);疏基卩票呤 (mercaptopurine);甲氨蝶呤（methotrexate);钼类似物，诸如顺钼（cisplatin)、奥沙利 销（oxaliplatin)和卡销（carboplatin);长春喊（vinblastine);销（platinum);依托 泊苷（etoposide)(VP_16);异环磷酰胺（ifosfamide);米托蒽醌（mitoxantrone);长春 新碱（vincristine) ;TsfAVELBINE? 长春瑞滨（vinorelbine);能灭瘤（novantrone); 替尼泊苷（teniposide);依达曲沙（edatrexate);道诺霉素（daunomycin);氨基蝶呤 (aminopterin);希罗达（xeloda);伊本麟酸盐（ibandronate);伊立替康（irinotecan) (Camptosa^CPT-ll)(包括伊立替康及5-FU和亚叶酸的治疗方案）；拓扑异构酶抑制 剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸（DMF0);类视黄酸类（retinoids)，诸如视黄酸（retinoic acid);卡培他滨（capecitabine);考布他汀（combretastatin);亚叶酸（leucovorin) (LV);奥沙利铂（oxaliplatin)，包括奥沙利铂治疗方案（FOLFOX) ;lapatinib(Tykerb?)、 PKC-a、Raf、H-Ras、EGFR(例如erlotinib(Tarceva?))和VEGF-A的抑制齐I」，其降低细胞 增殖；及任何上述物质的药学可接受的盐、酸或衍生物。
[0023] 术语"同时（concurrently) "在本文中用于指施用两种或更多种治疗剂，其中所述 施用至少部分在时间上重叠。因而，同时施用包括如下的剂量给药方案，一种或多种药剂的 施用中断后继续施用一种或多种其它药剂。
[0024] 术语"有效量"指在哺乳动物中有效治疗疾病或病症的药物量。在癌症的情况中， 药物的治疗有效量可减少癌细胞数；缩小肿瘤大小；抑制（即一定程度减缓，优选停止）癌 细胞浸润到周围器官中；抑制（即一定程度减缓，优选停止）肿瘤转移；一定程度抑制肿瘤 生长；和/或一定程度减轻与癌症有关的一种或多种症状。就药物可预防现有的癌细胞生 长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是细胞抑制的和/或细胞毒性的。对于癌症 治疗，可例如通过评估存活持续时间、无进展存活（PFS)持续时间、响应率（RR)、响应持续 时间和/或生活质量来测量体内功效。
[0025] "表位A4. 6. 1"指由抗VEGF抗体贝伐单抗(AVASTIN?)识别的表位（见Muller Y等，Structure15September1998,6:1153 - 1167)。在本发明的某些实施方案中，所述抗 VEGF抗体包括但不限于，与由杂交瘤ATCCHB10709产生的抗VEGF抗体A4. 6. 1结合相同 表位的单克隆抗体；根据Presta等（1997)CancerRes. 57:4593-4599生成的重组人源化抗 VEGF单克隆抗体。
[0026] "人抗体"指拥有与由人或人细胞生成的或利用人抗体全集或其它人抗体编码序 列自非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排 除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
[0027] "人源化"抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌 合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含至少一个，通常两个基本上整个可变域，其 中所有或基本上所有HVR(例如，⑶R)对应于非人抗体的那些，且所有或基本上所有FR对 应于人抗体的那些。任选地，人源化抗体可以至少包含自人抗体衍生的抗体恒定区的一部 分。抗体，例如非人抗体的"人源化形式"指已经经历人源化的抗体。
[0028] 在用于本文时，术语"高变区"或"HVR"指抗体可变域中在序列上高变的和/或 形成结构上限定的环（"高变环"）的每个区。一般地，天然的4链抗体包含6个HVR;三 个在VH中（Hl、H2、H3)，且三个在VL中（Ll、L2、L3)。HVR-般包含来自高变环和/或 来自"互补决定区"（CDR)的氨基酸残基，后一种是最高序列变异性的和/或牵涉抗原 识别。例示性高变环存在于氨基酸残基26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、 53-55 (H2)和 96-101 (H3)。（Chothia和Lesk，J.Mol.Biol. 196:901-917 (1987))。例示性 CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2 和CDR-H3)存在于L1 的氨基酸残基 24-34、 L2 的 50-56、L3 的 89-97、Hl的 31-35B、H2 的 50-65、和H3 的 95-102(Kabat等，Sequences ofProteinsofImmunologicalInterest, 5thEd.PublicHealthService,National InstitutesofHealth,Bethesda，MD(1991))。除了VH中的CDR1 外，CDR-般包含形成高 变环的氨基酸残基。⑶R还包含"特异性决定残基"，或"SDR"，其是接触抗原的残基。SDR 包含在称作缩短的-⑶R，或a-⑶R的⑶R区内。例示性的a-⑶R(a-⑶R-L1、a-⑶R-L2、 &-〇?-13、&-〇)1?-111、&-〇)1?-112、和&-〇)1?-113)存在于11的氨基酸残基31-34、12的5〇-55、 L3 的 89-96、H1 的 31-35B、H2 的 50-58、和H3 的 95-102 (见Almagro*Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633(2008))。除非另有指示，可变域中的HVR残基和其它残基（例如，FR 残基）在本文中依照Kabat等，见上文编号。
[0029] "个体"或"受试者"是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物（例如，牛、 绵羊、猫、犬、和马）、灵长类（例如，人和非人灵长类诸如猴）、家兔、和啮齿类（例如，小鼠 和大鼠）。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
[0030] 对于本发明的方法，术语"指导"受试者意味着通过任何手段，但是优选书面地，诸 如以包装插页或其它书面推广材料的形式提供关于可应用疗法、药物、治疗、治疗方案等等 的指导。
[0031] 术语"静脉内输注"指以在超过约5分钟，优选约30-90分钟的一段时间内，将药 物导入动物或人受试者的静脉，尽管依照本发明，静脉内输注或可施用10小时或更短。
[0032] 术语"静脉内推注"或"静脉内推进（intravenouspush) "指在约15分钟内或更 短，优选5分钟或更短，将药物施用到动物或人的静脉中使得身体接受药物。
[0033] "分离的"抗体是已经自其天然环境的成分分开的抗体。在一些实施方案中，抗体 纯化至大于95%或99%的纯度，如通过例如电泳（例如，SDS-PAGE、等电聚焦（IEF)、毛细 管电泳）或层析（例如，离子交换或反相HPLC)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的 综述，见例如Flatman等，J.Chromatogr.B848:79-87 (2007) 〇
[0034] "维持"(maintenance)剂量在本文中指在治疗期间或之后施用于受试者的一个或 多个剂量的治疗剂。通常，维持剂量以隔开的治疗间隔施用，例如以大约每周，大约每两周， 大约每三周，或大约每四周的间隔施用。
[0035] "维持疗法"意指为了降低疾病复发或进展的可能性而给予的治疗方案。维持疗法 可提供任意长度的时间，包括长至受试者终身的延长的时段。维持疗法可在初始疗法之后 或与初始或别的疗法联合提供。用于维持疗法的剂量可变化，而且可包括与其它类型的疗 法使用的剂量相比降低的剂量。亦见本文中的"维持"。
[0036] 术语"销售"在本文中用于描述产品（例如药物）的宣传、出售或分发。销售具体 包括包装、登广告、和任何目的在于使产品商业化的商业活动。
[0037] "转移"或"转移性"指癌自其原发部位传播至身体中的其它位置。癌细胞能脱离 原发性肿瘤，渗透入淋巴管和血管，经由血流而循环，和在身体中其它地方的正常组织中的 远端病灶中生长（转移）。转移可以是局部的或远端的。转移是一个连续过程，视肿瘤细胞 自原发性肿瘤脱落、经由血流而传播、并在远端部位停止而定。在新的部位，该细胞建立血 供且能生长至形成危及生命的团块。肿瘤细胞内的刺激性和抑制性分子途径两者调节这种 行为，而且肿瘤细胞与远端部位中的宿主细胞之间的相互作用也是重要的。
[0038] "单一疗法"意指如下的治疗方案，其在治疗期的过程期间只包括单一治疗剂来治 疗癌症或肿瘤。使用VEGF特异性拮抗剂的单一疗法意味着在治疗期期间在没有别的抗癌 疗法的情况中施用所述VEGF特异性拮抗剂。
[0039] 术语"单克隆抗体"在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成 群体的各抗体个体是相同的和/或结合相同表位，除了可能的变体抗体，例如含有天然存 在的突变或在单克隆抗体制备物的产生期间出现，这类变体一般以少量存在。与典型的包 含针对不同决定簇（表位）的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每 种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此，修饰语"单克隆"指示抗体自一群基本上同 质的抗体获得的特性，而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可以通过多 种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、 噬菌体展示方法、和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文 中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其它例示性方法。
[0040]术语"药物配制剂"指处于如下的形式，使得容许其中含有的活性成分的生物学 活性是有效的，且不含对会接受配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的别的组分的制 剂。
[0041] "药学可接受载体"指药物配制剂中与活性成分不同的，且对受试者无毒的成分。 药学可接受载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂、或防腐剂。
[0042] 对于本发明的方法，术语"宣传（promoting)"意味着通过任何手段，包括书面地， 诸如以包装插页的形式提供、登广告、出售、或描述具体药物、药物组合、或治疗模态。宣传 在本文中指治疗剂，诸如VEGF拮抗剂，例如抗VEGF抗体或化疗剂用于适应证，诸如乳腺癌 治疗的宣传，而此类宣传得到食品和药品管理局（FDA)批准，认为已证明与受试者群体中 统计上显著的治疗功效和可接受的安全性有关。
[0043] "无进展存活（Progressionfreesurvival) (PFS) "指自治疗（或随机化）至第一 次疾病进展或死亡的时间。例如，它是患者自治疗启动或自初始诊断起，限定的一段时期， 例如诸如约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个 月、约9个月、约1年、约2年、约3年等仍然活着且没有癌症回返（return)的时间。在本 发明的一个方面，可以通过MacDonald响应标准评估PFS，如记载于MacDonald等，JClin Oncol1990 ;8:1277-80)的。
[0044]受试者"群体"指一组癌症受试者，诸如临床试验中的，或对特定适应证诸如乳腺 癌疗法的FDA批准之后肿瘤学家看到的。
[0045] "受试者"指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，诸如牛、马、犬、绵羊、或 猫。优选地，受试者指人。在本文中，患者也是受试者。
[0046] "存活"指患者保持存活，包括无进展存活（PFS)和总体存活（overallsurvival) (〇S)。存活可通过Kaplan-Meier法来评估，而且存活的任何差异可使用分层时序检验 (stratifiedlog-ranktest)来计算。
[0047] "总体存活"指患者自治疗启动或自初始诊断起保持一定时期活着，诸如约1年、约 2年、约3年、约4年、约5年、约10年等。在本发明根本的研宄中，用于存活分析的事件是 任何原因的死亡。
[0048] "总体响应率"或"客观响应率"（0RR) -在最少量时间经历癌症大小（或对于血癌 为量）降低的人的百分数；0RR是完全和部分响应率的和。
[0049] "延长存活（extendingsurvival) "或"提高存活可能性"意味着使接受治疗的患 者的PFS和/或0S相对于未接受治疗的患者（即相对于未用VEGF抗体治疗的患者）或 相对于对照治疗方案（诸如只用化疗剂的治疗，诸如成胶质细胞瘤的医护标准中使用的那 些，如例如替莫唑胺且有或无放疗）有延长或提高。存活在治疗启动之后或在初始诊断之 后监测至少约1个月、约2个月、约4个月、约6个月、约9个月、或至少约1年、或至少约2 年、或至少约3年、或至少约4年、或至少约5年、或至少约10年、等。
[0050]危害比（HR)是事件比率的统计定义。为了本发明的目的，危害比定义为代表任何 特定时间点时实验臂中的事件概率除以对照臂中的事件概率。无进展存活分析中的"危害 比"是两条无进展存活曲线之间的差异的汇总，代表随访期里与对照相比治疗的死亡风险 降低。
[0051] 如本文中使用的，"治疗/处理"（及其语法变体）指试图改变治疗个体中的自然 进程，并且可以是为了预防或在临床病理学的过程期间实施的临床干预。治疗的期望效果 包括但不限于预防疾病的发生或复发、缓解症状、降低疾病的任何直接或间接病理学后果、 预防转移、减缓疾病进展率、改善或减轻疾病状态、及消退或改善的预后。在一些实施方案 中，本发明的抗体用于延迟疾病的形成或延缓病症的进展。
[0052] 术语"可变区"或"可变域"指抗体重或轻链中牵涉抗体结合抗原的域。天然抗体的 重链和轻链可变域（分别为VH和VL) -般具有类似的结构，其中每个域包含4个保守的框 架区（FR)和 3 个高变区（HVR)。（见例如Kindt等KubyImmunology,第 6 版，W.H.Freeman andCo.，第91页（2007))。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分 别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域筛选互补VL或VH域的文库来分离结合特定抗 原的抗体。见例如，Portolano等，J.Immunol. 150:880-887 (1993);Clarkson等，Nature 352:624-628(1991)。
[0053] 术语"VEGF"或"VEGF-A"用于指165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子及相 关的121个、145个、189个和206个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如例如Leung等 Science, 246:1306(1989);及Houck等Mol.Endocrin.，5:1806(1991)所述，及其天然存 在的等位基因形式和加工形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F 和P1GF在内的基因家族的一部分。VEGF-A主要结合两种高亲和力受体酪氨酸激酶，即 VEGFR-1 (Flt-1)和VEGFR-2 (Flk-1/KDR)，后者是VEGF-A血管内皮细胞促有丝分裂信号的 主要递质。另外，神经毡蛋白-1已经被鉴定为肝素结合VEGF-A同等型（isoform)的受体， 而且可在血管发育中发挥作用。术语"VEGF"或"VEGF-A"还指来自非人物种诸如小鼠、大 鼠或灵长类动物的VEGF。有时，来自特定物种的VEGF以诸如表示人VEGF的hVEGF或表示 鼠VEGF的mVEGF等术语表示。通常，VEGF指人VEGF。术语"VEGF"还用于指包含165个氨 基酸的人血管内皮细胞生长因子的氨基酸第8-109位或第1-109位的多肽的截短形式或片 段。本申请中可通过例如"VEGF(8-109) "、"VEGF(1-109) "或"VEGF165"来鉴别任何此类形 式VEGF。"截短的"天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示编号。例如，截短的天 然VEGF中的第17位氨基酸（甲硫氨酸）也是天然VEGF中的第17位（甲硫氨酸）。截短 的天然VEGF具有与天然VEGF相当的对KDR和Flt-1受体的结合亲和力。
[0054] "抗VEGF抗体"指以足够亲和力和特异性结合VEGF的抗体。所选择的抗体通 常会具有对VEGF的结合亲和力，例如，该抗体可以以介于100nM-lpM之间的Kd值结合 hVEGF。抗体亲和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法（诸如PCT申请公开文本 NO.W02005/012359中所记载的BIAcore测定法）；酶联免疫吸附测定法（ELISA);和竞争测 定法（例如RIA)来测定。在某些实施方案中，本发明的抗VEGF抗体可用作治疗剂，用于 靶向和干扰其中涉及VEGF活性的疾病或疾患。还有，可对该抗体进行其它生物学活性测 定法，例如以评估其作为治疗剂的有效性。此类测定法是本领域已知的，而且取决于靶抗 原和抗体的预定用途。例子包括HUVEC抑制测定法；肿瘤细胞生长抑制测定法（如例如W0 89/06692中所记载的）；抗体依赖性细胞的细胞毒性（ADCC)和补体介导的细胞毒性（CDC) 测定法（美国专利5, 500, 362);及激动活性或造血测定法（参见W0 95/27062)。抗VEGF 抗体通常不会结合其它VEGF同源物，诸如VEGF-B或VEGF-C，也不会结合其它生长因子，诸 如P1GF、PDGF或bFGF。
[0055] "VEGF拮抗剂"指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF活性（包括其与一 种或多种VEGF受体的结合）的分子。VEGF拮抗剂包括抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特 异性结合VEGF由此隔绝其与一种或多种受体结合的受体分子及衍生物、抗VEGF受体抗体 和VEGF受体拮抗剂诸如VEGFR酪氨酸激酶的小分子抑制剂。
[0056] "嵌合VEGF受体蛋白"指具有衍生自至少两种不同蛋白质（其中至少一种是VEGF 受体蛋白）的氨基酸序列的VEGF受体分子。在某些实施方案中，嵌合VEGF受体蛋白能够 结合VEGF并抑制VEGF的生物学活性。
[0057] 嵌合的和人源化的抗体
[0058] 在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美 国专利No. 4, 816, 567;及Morrison等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。 在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区（例如，自小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、或非人灵长类， 诸如猴衍生的可变区）和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是"类转换的"抗体，其中 类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
[0059] 在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人 的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多 个可变域，其中HVR，例如CDR(或其部分）自非人抗体衍生，而FR(或其部分）自人抗体序 列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源 化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体（例如衍生HVR残基的抗体）的相应残基替代，例 如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
[0060] 人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro*Fransson，Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)，并且进一步记载于例如Riechmann等，Nature 332:323-329(1988);Queen等，Proc.Nat' 1Acad.Sci.USA86:10029-10033(1989); 美国专利No. 5, 821，337, 7, 527, 791，6, 982, 321 和 7, 087, 409;Kashmiri等，Methods 36:25-34(2005)(描述了SDR(a-CDR)嫁接）；Padlan,Mol.Immunol. 28:489-498(1991)(描 述了"重修表面"）；Dall'Acqua等，Methods36:43-60(2005)(描述了"FR改组"）；及 Osbourn等，Methods36:61-68(2005)和Klimka等，Br.J.Cancer, 83:252-260(2000)(描 述了FR改组的"引导选择"方法）。
[0061] 可以用于人源化的人框架区包括但不限于：使用"最佳拟合（best-fit)"方 法选择的框架区（见例如Sims等J.Immunol. 151:2296 (1993));自轻或重链可变 区的特定亚组的人抗体的共有序列衍生的框架区（见例如Carter等Proc.Natl. Acad.Sci.USA, 89:4285 (1992);及Presta等J.Immunol. ,151:2623 (1993));人成熟 的（体细胞突变的）框架区或人种系框架区（见例如Almagro和Fransson,Front. Biosci. 13:1619-1633(2008));和通过筛选FR文库衍生的框架区（见例如Baca等，J. Biol.Chem. 272:10678-10684 (1997)及Rosok等，J.Biol.Chem. 271:22611-22618 (1996))。
[0062] 人抗体
[0063] 在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多 种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于vanDijk和vandeWinkel,Curr.Opin. Pharmacol. 5:368-74(2001)及Lonberg，Curr.Opin.Immunol. 20:450-459(2008)〇
[0064] 可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响 应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部 分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整 合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于 自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见Lonberg，Nat.Biotech. 23:1117-1125(2005)。 还可见例如美国专利No. 6, 075, 181和6, 150, 584,其描述了XEN0M0USE?技术；美 国专利No. 5, 770, 429,其描述了HUMAB?技术；美国专利No. 7, 041，870,其描述 了K-MMOUSE?技术，和美国专利申请公开文本No.US2007/0061900,其描述了 VELOCIMOUSE?技术）。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动 物生成的完整抗体的人可变区。
[0065] 也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体 的人骨髓瘤和小鼠-人异骨髓瘤细胞系（见例如KozborJ.Immunol. ,133:3001 (1984); Brodeur等,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications, 第 51-63 页（MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987);及Boerner等，了. Immunol. , 147:86 (1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li 等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 103:3557-3562 (2006)。其它方法包括那些例如记载 于美国专利No. 7, 189, 826(其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人IgM抗体）和 Ni，XiandaiMianyixue，26(4):265-268(2006)(其描述了人-人杂交瘤）的。人杂交 瘤技术（Trioma技术）也记载于Vollmers和Brandlein,HistologyandHistopath ology, 20(3):927-937 (2005)及Vollmers和Brandlein,MethodsandFindingsin ExperimentalandClinicalPharmacology, 27(3):185-91 (2005)〇
[0066] 也可以通过分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变域序列生成人抗 体。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人 抗体的技术。
[0067] f库衍牛的抗体
[0068] 可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗 体。例如，用于生成噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种 方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等于MethodsinMolecular Biology178:1-37(0'Brien等编，HumanPress,Totowa,NJ, 2001)，并且进一步记载于 例如McCafferty等，Nature348:552-554;Clackson等，Nature352:624-628(1991); Marks等，J.Mol.Biol.222:581-597 (1992);Marks和Bradbury,于Methodsin MolecularBiology248:161-175(Lo编，HumanPress,Totowa,NJ, 2003);Sidhu等，J. Mol.Biol. 338(2) :299-310(2004);Lee等，J.Mol.Biol. 340(5): 1073-1093(2004); Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101 (34) : 12467-12472 (2004);及Lee等，了.1臟1111〇1. Methods284(1-2):119-132(2004)。
[0069] 在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全集分别通过聚合酶链式反应（PCR) 克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记 载于Winter等，Ann.Rev.Immunol.，12:433-455 (1994)的。菌体通常以单链Fv(scFv) 片段或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗 体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以（例如自人）克隆天然全集以在没有任何免疫的情 况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由Griffiths等，EMBO J，12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用 含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文 库，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.，227:381-388(1992)所描述的。描述人抗体 噬菌体文库的专利公开文本包括例如：美国专利No. 5, 750, 373、和美国专利公开文本No. 2 005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764， 2007/0292936 和 2009/0002360。
[0070] 认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。
[0071] 抗VEGF抗体和拮抗剂
[0072] 要用于生成VEGF抗体的VEGF抗原可以是例如VEGF165分子以及VEGF的其它同等 型或其含有期望表位的片段。在一个实施方案中，期望的表位是由贝伐单抗识别的表位，贝 伐单抗与由杂交瘤ATCCHB10709产生的单克隆抗VEGF抗体A4. 6.1结合相同的表位（称 为本文中定义的"表位A. 4. 6. 1"）。可用于生成本发明的抗VEGF抗体的其它形式的VEGF 对于本领域技术人员会是显而易见的。
[0073] 人VEGF首先是使用牛VEGFcDNA作为杂交探针筛选自人细胞制备的cDNA文库而 获得的。Leung等（1989)Science，246:1306。一种由此鉴定出的cDNA编码一种165个氨 基酸的蛋白质，其与牛VEGF具有超过95%的同源性；此165个氨基酸的蛋白质通常称作人 VEGF(hVEGF)或VEGF165。人VEGF的促有丝分裂活性通过在哺乳动物宿主细胞中表达人 VEGF得到了验证。由经人VEGFcDNA转染的细胞条件化的培养基促进毛细血管内皮细胞增 殖，而对照细胞不然。Leung等（1989)Science，见上文。进行进一步努力来经重组DNA技 术克隆和表达VEGF。（参见例如Ferrara，LaboratoryInvestigation72:615-618(1995) 及其中引用的参考文献）。
[0074] 源自可变RNA剪接，VEGF在多种组织中作为多种同二聚体形式（每个单体121、 145、165、189、和206个氨基酸）表达。VEGF121是一种可溶性丝裂原，不结合肝素；更长 形式的VEGF以越来越高的亲和力结合肝素。肝素结合形式的VEGF可以在羧基末端被纤 溶酶切割以释放可扩散形式的VEGF。纤溶酶切割后鉴定出的羧基末端肽的氨基酸测序是 Arg11Q-Alam。作为同二聚体分离到的氨基末端"核心"蛋白VEGF(l-llO)以与完整VEGF165 同二聚体相比相似的亲和力结合中和性单克隆抗体（诸如称作4. 6. 1和3. 2E3. 1. 1的抗 体）和可溶性形式的VEGF受体。
[0075] 最近还鉴定出数种在结构上与VEGF有关的分子，包括胎盘生长因子（PIGF)、 VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和VEGF-E。Ferrara和Davis-Smyth(1987)Endocr.Rev.，见 上文；Ogawa等J.BiologicalChem. 273:31273-31281 (1998);Meyer等EMBOJ.，18: 363-374(1999)。受体酪氨酸激酶Flt-4(VEGFR-3)鉴定为VEGF-C和VEGF-D的受体。Joukov 等已]\?0.了.15:1751(1996);1^6等？1'〇。.恥七1.六。&(1.5(^.旧六93:1988-1992(1996)洫。11611 等（1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95:548-553。VEGF-C显示出涉及对淋巴管发生的调 节。Jeltsch等Science276:1423-1425(1997)。
[0076] 已经鉴定出两种VEGF受体，即Flt-1 (也称作VEGFR-1)和KDR(也称作VEGFR-2)。 Shibuya等（1990)Oncogene8:519-527;deVries等（1992)Science255:989-991;Terman等（1992)Biochem.Biophys.Res.Commun. 187 :1579_1586。神经毯蛋白 _1 显不为选 择性VEGF受体，能够结合肝素结合性VEGF同等型（Soker等（1998)Cell92 :735-45)。
[0077] 在本发明的方法中有用的抗VEGF抗体包括任何抗体或其抗原结合片段，它们以 足够亲和力和特异性结合VEGF且能降低或抑制VEGF的生物学活性。抗VEGF抗体通常不会 结合其它VEGF同源物，诸如VEGF-B或VEGF-C，也不会结合其它生长因子，诸如P1GF、PDGF、 或bFGF。
[0078] 在本发明的某些实施方案中，抗VEGF抗体包括但不限于与由杂交瘤ATCCHB 10709生成的单克隆抗VEGF抗体A4. 6. 1结合相同表位的单克隆抗体；依照Presta等 (1997)CancerRes. 57 :4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体。在一个实施方案 中，抗VEGF抗体是"贝伐单抗（BV) "，也称作"rhuMAbVEGF"或"AVASTIN?"。它包含经过 突变的人IgGl框架区和来自阻断人VEGF结合其受体的小鼠抗hVEGF单克隆抗体A. 4. 6. 1 的抗原结合互补决定区。贝伐单抗的大约93%的氨基酸序列（包括大部分框架区）是自人 IgGl衍生，而且约7%的序列是自小鼠抗体A4. 6. 1衍生的。
[0079]贝伐单抗(AVASTIN?)是第一种得到FDA批准的抗血管发生疗法，而且被批准用 于治疗转移性结肠直肠癌（与静脉内基于5-FU的化疗组合的一线和二线治疗），晚期非鳞 状、非小细胞肺癌（NSCLC)(与卡铂和帕利他赛组合对不能切除的、局部晚期、复发性或转 移性NSCLC的一线治疗）和转移性HER2阴性乳腺癌（先前未治疗过的转移性HER2阴性乳 腺癌，与帕利他赛组合）。
[0080] 贝伐单抗和其它人源化抗VEGF抗体进一步记载于2005年2月26日公告的美国 专利No. 6, 884, 879。别的抗体包括G6或B20系列抗体（例如G6-31、B20-4. 1)，如记载于 PCT
【发明者】A.达斯, A.M.A.吉贾罗, L.阿布里, J.加西亚, M.希尔顿, Y.克洛冈, N.穆尔 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司